TCNICA HISTOLGICA PARA A VISUALIZAO DO TECIDO CONJUNTIVO VOLTADO PARA OS ENSINOS FUNDAMENTAL E MDIO

Nilza Cristina Buttow * , Maria Euride Carlos Cancino**

Buttow NC, Cancino MEC. Tcnica histolgica para a visualizao do tecido conjuntivo voltado para os Ensinos Fundamental e Mdio. Arq Mudi. 2007;11(2):36-40. RESUMO. O ensino das disciplinas de Cincias e Biologia tm sido praticados com a transmisso de informaes, na maioria das vezes, apenas de forma terica. Apesar da sua importncia, os contedos abordados nestas disciplinas tm sido conduzidos quase sempre de maneira desinteressante. A preocupao em desenvolver atividades prticas comea a aparecer como forma de alterar este quadro. Este trabalho objetiva abordar as aulas de tecido conjuntivo, demonstrando de maneira prtica e barata uma tcnica que pode ser utilizada para demonstrar alguns dos constituintes deste tecido. PALAVRAS-CHAVE: Histologia; aula prtica; tecido conjuntivo.

Buttow NC, Cancino MEC. Histological technique for the visualization of connective tissue, applicable to fundamental and medium school. Arq Mudi. 2007;11(2):36-40. ABSTRACT. The teaching of the disciplines of Sciences and Biology has been practiced as the transmission of information, most of the times only with theoretical approaches. Despite their importance, the contents encompassed by these disciplines have been conducted almost always in an uninteresting manner. The concern in developing practical activities begins to emerge as a form of altering this scenario. This work aims at approaching the classes about connective tissue, demonstrating a practical and inexpensive technique that can be used to visualize some constituents of this tissue. KEY WORDS: Histology; practice class; connective tissue.

INTRODUO Vivenciamos no mundo moderno uma avalanche de informaes que chegam facilmente aos jovens estudantes. A escola atual, por uma questo de sobrevivncia, deve desencadear processos de aprendizado capazes de deflagrar alternativas pedaggicas habilitadas ao confronto destas informaes. Como alternativa capaz de confrontar informaes no-formais, causando impacto e despertando o interesse por parte dos alunos, concebemos que as prticas de laboratrio podem gerar mecanismos pedaggicos capazes de contribuir na fixao dos contedos abordados nas aulas de Cincias. Dentre os assuntos abordados temos aqueles referentes reestruturao dos tecidos orgnicos que, na maioria das vezes, no ministrado com a devida nfase. Classicamente, o aprendizado de

histologia, no Ensino Mdio e Fundamental, consiste em aulas tericas abordadas, quase sempre, de maneira superficial. Este mtodo de ensino, em geral, leva os estudantes a participarem da relao ensino-aprendizagem de forma passiva. Dessa forma, os estudantes no participam na gerao do conhecimento, no so estimulados a desenvolverem tcnicas e hbitos de estudo, habilidade de observao analtica e raciocnio morfofuncional (Junqueira et al., 1998). A grande dificuldade encontrada pelos professores do Ensino Mdio e Fundamental a escassez de recursos e de material didtico, o que limita a realizao de aulas interessantes que cativem os alunos. As tcnicas geralmente utilizadas na preparao de lminas histolgicas consistem em cortes de amostras embebidas em parafina, as quais

*Docente do Departamento de Cincias Morfofisiolgicas da Universidade Estadual de Maring; **Tcnica de Laboratrio do Departamento de Cincias Morfofisiolgicas da Universidade Estadual de Maring. Av. Colombo, 5790, Maring-PR, CEP 87020-900. e-mail: ncbuttow@uem.br.

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requerem o uso de estufa e de micrtomo, um equipamento caro que no justifica sua aquisio pela escola. A necessidade deste equipamento baseia-se no preceito de que a visualizao de material histolgico ao microscpio ptico consiste na passagem de luz atravs do tecido. Como tecidos e rgos so, geralmente, espessos demais para permitir a passagem da luz, torna-se necessrio a realizao de cortes histolgicos para produzir camadas finas que permitem a passagem da luz (Junqueira e Carneiro, 2004). Aps o processamento este material corado, com substncias como a hematoxilina e eosina e mtodos tricrmicos, as quais so, igualmente, caras e necessitam de condies adequadas para seu preparo. Como alternativa, as escolas podem comprar lminas histolgicas permanentes para visualizao microscpica. Esta uma alternativa interessante, podendo ser utilizada. Contudo, acreditamos que a realizao de uma aula prtica onde o aluno inicia com a coleta do material biolgico e chega at sua preparao, poder despertar nos estudantes grande interesse pelo assunto abordado. Assim, sugerimos uma tcnica na qual os alunos participam da coleta do material biolgico e, aps a fixao deste material, da colorao para visualizao ao microscpio. Objetiva-se que o aluno possa observar a morfologia de diferentes tipos celulares presentes no tecido conjuntivo, alm de ponderar sobre protenas filamentosas e Substncia Fundamental Amorfa que esto entre as clulas, o que caracteriza o tecido conjuntivo (grande quantidade de matriz extracelular). Esta proposta dispensa a utilizao do micrtomo, uma vez que, alguns tecidos, apresentam camadas delgadas, de modo que podem ser observados ao microscpio sem a necessidade de corte, como o caso do mesentrio. Neste trabalho iremos orientar como o professor poder coletar, fixar e corar com azul de metileno o mesentrio de ratos para demonstrar a constituio deste tecido. Objetiva-se abordar, particularmente, as aulas de tecido conjuntivo, demonstrando de maneira prtica uma tcnica que pode ser utilizada para demonstrar alguns dos constituintes deste tecido. FUNDAMENTAO TERICA Consideraes sobre o tecido conjuntivo O tecido conjuntivo fornece uma estrutura de suporte e ligao para todos os outros tecidos do corpo. Sua principal caracterstica apresentar
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vrios tipos celulares e abundncia de matriz extracelular, alm de ser vascularizado. A matriz extracelular consiste de diferentes combinaes de protenas fibrosas e de substncia fundamental (Junqueira, Carneiro, 2004). Apresenta como funes: suporte corpreo, exercido pelas cartilagens, pelos ossos e pelo tecido conjuntivo propriamente dito; pode fazer a nutrio de alguns rgos; preenchimento de espaos, e suas clulas auxiliam na defesa do organismo. Matriz extracelular: composta por glicosaminoglicanas (GAGs) e protenas, as quais podem se associar formando as proteoglicanas. As protenas podem ser adesivas como as integrinas, as lamininas e as fibronectinas estando associadas ao fenmeno de migrao celular; ou podem ser estruturais como o colgeno e a elastina. A matriz organizada na forma de fibras possuindo ainda Substncia Fundamental Amorfa (SFA). Tem como funes: migrao celular; interao celular; serve de suporte a presses, e auxilia na distribuio de nutrientes. Fibras Apresenta dois sistemas: colgeno e elstico. O sistema colgeno constitudo por fibras colgenas e reticulares. Existem cerca 15 tipos de colgeno conhecidos. O colgeno constitudo por longas cadeias de prolina e glicina que formam uma rgida fita em tripla helicoidal. O colgeno do tipo I o mais abundante e formador de fibrilas (este se associa com o colgeno do tipo V para formar a pele, ossos, ligamentos, tendes, tecido conjuntivo frouxo, etc.). Os colgenos associados a fibrilas so os do tipo IX e XII, que fazem a ligao entre as fibrilas e outros componentes da matriz. O colgeno tipo IV considerado formador de rede e forma a lmina basal juntamente com o colgeno do tipo VII. As fibras reticulares so formadas por colgeno do tipo III e tm como caracterstica apresentar de 6-12% de acares. Esta caracterstica faz com que ele seja visualizado apenas pela impregnao argntica. O sistema elstico constitudo por fibras elsticas que so formadas por glicoprotenas e elastina as quais se organizam em uma trama irregular. Para sua visualizao, geralmente, utilizase a orcena. A denominao de fibras elsticas deve-se ao fato de que estas, quando submetidas a
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uma tenso, se esticam e depois retornam a sua forma original aps cessar as foras deformantes. Substncia Fundamental Amorfa. formada por GAGs (polissacardeos de repetio de uma nica cadeia de dissacardeos) sulfatadas e proteoglicanas. Trata-se de um gel altamente hidratado o qual funciona como barreira a penetrao de microorganismos. Ela localiza-se entre as clulas e fibras do conjuntivo. Clulas do tecido conjuntivo Existem as clulas que so transitrias ou temporrias (como os leuccitos) e as permanentes ou residentes (originam-se no tecido conjuntivo ou migram para o mesmo e l permanecem). Fibroblastos: so clulas grandes e com prolongamentos, ncleo eucromtico, e nuclolo evidente. responsvel pela produo de matriz extracelular. Quando apresentam em seu citoplasma grande quantidade de filamentos de actina, miosina e -actinina, passa a ser chamado de miofibroblasto, sendo responsvel pelo processo cicatricial (fechamento de feridas). Macrfagos: tm sua origem a partir dos moncitos do sangue. Apresentam morfologia variada. Seu ncleo , em geral, riniforme e pouco eucromtico. So clulas de defesa, que fagocitam corpos estranhos e restos celulares. Fazem parte do Sistema Mononuclear Fagocitrio, no qual esto includos as clulas precursoras dos moncitos, os prprios moncitos, a micrglia, os osteoclastos e os macrfagos em geral. Quando encontram um corpo estranho de grande tamanho so capazes de unirem-se para formar as clulas gigantes, clulas multinucleadas, as quais possuem capacidade, ainda maior, de defesa. Plasmcitos: So clulas importantes, pois sintetizam e secretam imunoglobulinas (anticorpos) com alta especificidade. A secreo de anticorpos serve para a nossa defesa imunolgica. Estas clulas so ovides, com citoplasma basfilo e cromatina compacta com aspecto de rodas de carroa. Mastcitos: so clulas grandes, contendo inmeros grnulos metacromticos (capazes de alterar a cor do corante) que armazenam substncias quimioativas (mediadores qumicos), responsveis pela resposta inflamatria. Os mastcitos apresentam grnulos contendo condroitim sulfato, quando presentes nas membranas mucosas, ou heparina, quando em
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outros locais; histamina que tem ao vasodilatadora, aumentando a permeabilidade vascular de importncia nos processos inflamatrios; proteases neutras, e fator quimiottico dos eosinfilos e neutrfilos (Junqueira, Carneiro, 2004). Os mastcitos so capazes de sintetizar, atravs de fosfolipdios da membrana plasmtica, os leucotrienos que promovem lentas contraes da musculatura lisa. A ao destas clulas consiste em: na primeira exposio ao antgeno (alrgeno), ocorre a produo de anticorpos (imunoglobulina E) que se prendem superfcie do mastcito; em uma segunda exposio, o antgeno se liga a estas imunoglobulinas promovendo a degranulao dos mastcitos. Em pessoas alrgicas a degranulao dos mastcitos pode ocasionar o choque anafiltico, onde a liberao da histamina provoca a contrao dos brnquios podendo ocasionar uma parada respiratria. Neutrfilos, eosinfilos e basfilos: so granulcitos originados do sangue, considerados como clulas transitrias. So responsveis pela defesa do organismo. Organizao do tecido conjuntivo: O tecido conjuntivo pode ser classificado como: 1. Tecido conjuntivo propriamente dito: podendo ser frouxo ou denso. O denso apresenta predomnio de fibras em sua constituio e pode ser ainda subdividido em modelado ou no modelado, de acordo com a organizao das fibras colgenas (exemplo: derme e tendo). O tecido conjuntivo frouxo rico em clulas, mole e cede facilmente presso (exemplo: mesentrio) (Geneser, 2003). 2. Tecido conjuntivo de propriedades especiais: fazem parte deste tecido o adiposo, elstico, reticular ou hematopoitico, e o mucoso. 3. Tecido Cartilaginoso 4. Tecido sseo. PROCEDIMENTOS Material Lminas e lamnulas de vidro; azul de metileno; conta-gotas; soluo salina 0,9%; gua destilada; gilete;
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formol 10%; ter etlico; pina; tesoura; arame; microscpio. Metodologia Primeiramente, deve-se anestesiar o animal com Tiopental (45 mg/Kg de peso corporal). Aps a anestesia do animal abra seu abdmen com a ajuda de pina e tesoura. Neste momento, possvel mostrar aos alunos os rgos abdominais, como intestinos (grosso e delgado), fgado, pncreas, rins, etc... Banhando a cavidade abdominal com um pouco de soluo salina 0,9 % (para um litro de gua acrescentar 9 gramas de cloreto de sdio (NaCl)) e, com o auxlio de uma pina, estimulando o intestino possvel observar alguns movimentos peristlticos. Isto se deve inervao prpria do intestino que conta com neurnios sensitivos, os quais, com o estmulo mecnico, promovero uma resposta o movimento das alas intestinais. Coloca-se, ento, um arame grosso encapado (4 ou 6 mm), com forma circular, no interior do intestino delgado (Fig. 1), de modo a distender o mesentrio, o que proporcionar uma melhor fixao, colorao e montagem. Segue-se a lavagem com soluo salina 0,9 % (soro fisiolgico) e fixao, por imerso, no fixador formol 10 %. O material deve permanecer mergulhado no fixador por, pelo menos, 3 horas. Decorrido este perodo, o material ser retirado do fixador e passado em gua destilada ou gua de torneira. Em seguida, coloca-se o tecido em um recipiente com azul de metileno, deixando mergulhado por 10 minutos. Aps este perodo deve-se proceder da seguinte forma: retirar o mesentrio do corante; escorrer; passar rapidamente na gua por 3 vezes; colocar diretamente sobre uma lmina; recortar com a ajuda de uma gilete, em um pequeno pedao; colocar uma gota de gua, e cobrir com a lamnula. Para esta ltima etapa, colocar a lamnula em um ngulo de cerca de 45o, encostando-a na gota de gua e deitando sobre o tecido lentamente; fazer uma leve presso para retirar as bolhas. Em seguida o material poder ser observado ao microscpio. Para visualizar os detalhes da morfologia celular, utilizar objetiva de maior aumento (40X).

Figura 1. Intestino delgado de rato distendido com o auxlio de um arame.

RESULTADOS E DISCUSSO Com esta tcnica, possvel observar alguns tipos celulares que constituem o tecido conjuntivo (Fig. 2), alm de fibras dos sistemas elstico e colgeno.

Figura 2. Desenho esquemtico dos componentes principais do tecido conjuntivo: clulas, fibras e matriz amorfa (Reproduzido de Geneser, 2003).

As clulas que se destacam so os mastcitos, os quais apresentam importante papel nas reaes alrgicas (Fig. 3). Sobre esta clula poder ser abordada a constituio de seus grnulos e sua importncia nas reaes inflamatrias

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Os plasmcitos que so visualizados aparecem com colorao mais forte devido a sua basofilia (afinidade por corantes bsicos) citoplasmtica (Fig. 3c), e so responsveis pela produo de anticorpos. Os macrfagos (Fig. 3d) so clulas fagocitrias, responsveis pela fagocitose de clulas mortas e bactrias. Os fibroblastos (Fig. 3e) so clulas responsveis pela sntese da matriz extracelular (Fig. 3f, g, h). As

fibras colgenas so constitudas por espessas fibras. J as fibras elsticas (Fig. 3f) so bem mais finas. possvel visualizar, no mesentrio, vasos sangneos (Fig. 3a). A utilizao de uma simples aula prtica poder despertar no aluno o interesse pela disciplina ministrada.

a d

h f

b g

Figura 3. Eletromicrografia de mesentrio de ratos corados com azul de metileno. As letras indicam: (a) vaso sangneo; (b) mastcito; (c) plasmcito; (d) macrfago; (e) fibroblasto; (f) fibra elstica; (g) fibra colgena; (h) matriz extracelular (glicosaminoglicanas). Barra corresponde a 20 m na primeira figura e a 10 m na segunda.

SUGESTO DE LEITURA Gartner LP, Hiatt JL. Tratado de histologia. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan; 2003. Geneser F. Histologia com bases biomoleculares. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan; 2003. Junqueira LC, Carneiro J. Histologia bsica. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan; 2004. Junqueira LCU, Vilela ASB, Kuchne B, Carvalho ETC, Arajo TH. Considerations on a formative and active method in the teaching of histology. Braz J Morphol Sci. 1998;15:117-23. Kierszenbaum AL. Histologia e biologia celular uma introduo Patologia. Rio de Janeiro: Elsevier Editora Ltda.; 2004.
Recebido em: 17.07.06 Aceito em: 20.10.07 Revista indexada no Periodica, ndice de revistas Latino Americanas em Cincias http://www.dgbiblio.unam.mx (ISSN 1980.959X). Continuao de: Arquivos da Apadec (ISSN 1414.7149)

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