Prof. Dr. Franciscleudo B.

Costa UATA/CCTA/UFCG

Aula 6 Enzimas
Universidade Federal de Campina Grande Centro de Cincias e Tecnologia Agroalimentar Unidade Acadmica de Tecnologia de Alimentos

Definio Importncia e aplicaes Classificao e nomenclatura

BIOQUMICA GERAL
FRANCISCLEUDO BEZERRA DA COSTA
PROFESSOR

Protenas Fibrosas Mecanismos de catlise Fatores da velocidade de reao enzimtica e atividade: Cintica enzimtica Inibio de enzimas

Campus Pombal Pombal - PB

Regulao da atividade

Definio
ENZIMAS so estruturas biocatalisadoras de

Enzimas
Catalisadores biolgicos; Longas cadeias de pequenas molculas chamadas aminocidos.

importante funo no ORGANISMO. Constitudas de duas partes independentes: a parte protica, APOENZIMA e a parte no proteca, COENZIMA. A combinao das duas estruturas forma a Holoenzima ou simplesmente ENZIMA.

Funo:
Viabilizar a atividade das clulas, quebrando molculas ou juntando-as para formar novos compostos. Com exceo de um pequeno grupo de molculas de RNA com propriedades catalticas, chamadas de RIBOZIMAS, todas as enzimas so PROTENAS.

Comparao das enzimas com catalisadores qumicos.

Caracterstica Especificidade ao substrato Natureza da estrutura Sensibilidade T e pH Condies de reao (T, P e pH) Custo de obteno (isolamento e purificao) Natureza do processo Consumo de energia Formao de subprodutos Separao catalisador/ produtos Atividade Cataltica (temperatura ambiente) Presena de cofatores Estabilidade do preparado Energia de Ativao Velocidade de reao Enzimas alta complexa alta suaves alto batelada baixo baixa difcil/cara alta sim baixa baixa alta Catalisadores Qumicos baixa simples baixa drstica (geralmente) moderado contnuo alto alta simples baixa no alta alta baixa

ENZIMAS PROTENA
Classificao protenas
Protenas globulares Protenas fibrosas

Estrutura das protenas

Primaria Secundaria Terciria Quaternria

ENZIMAS Protenas globulares Estrutura terciria

Protenas com alto peso molecular, maioria entre 15 a 1000 Kilo Daltons Unit (kD) Obs: 1 Dalton = 1 unidade de peso molecular (AMU)

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enzimas estrutura
Estrutura Enzimtica

Cofatores Enzimticos e Coenzimas

Cofatores: so pequenas molculas orgnicas (Coenzimas) ou inorgnicas (ons metlicos Zn, Cu, Mn, Fe entre outros) que podem ser necessrias para a funo de uma enzima. Estes cofatores no esto ligados permanentemente molcula da enzima mas, na ausncia deles, a enzima inativa.

Holoenzima Cofator
Pode ser: on inorgnico molcula orgnica

Protena Ribozimas Apoenzima ou Apoprotena RNA

A frao protica de uma enzima, na ausncia do seu cofator, chamada de apoenzima. Apoenzima + Cofator = Holoenzima
inativa inativo ativa

Coenzima Se covalente
Grupo Prosttico

Componentes da Reao Enzimtica

Componentes da Reao Enzimtica

E + S

ES

E + P

E - Enzima S - Substrato(s) ES - Complexo Enzima -Substrato P Produto(s)

Complexo quimiotripsina-substrato

Sitio ativo: ponto de encaixe entre o substrato e o centro ativo da enzima

Substrato

ligao do substrato ao centro ativo

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Caractersticas Gerais
Apresentam alto grau de especificidade; So produtos naturais biolgicos; Reaes baratas e seguras; So altamente eficientes, acelerando a velocidade das reaes (108 a 1011 + rpida); So econmicas, reduzindo a energia de ativao; No so txicas; Condies favorveis de pH, temperatura, polaridade do solvente e fora inica.

Nomenclatura e classificao das enzimas:

Existem diferentes maneiras de nomear as enzimas: Nome comum ou usual: consagrados pelo uso motivos histricos Ex.: Tripsina e pepsina proteases Catalase - quebra de H2O2 As enzimas so definidas pelo que fazem Nome recomendado: curto e conveniente para uso no dia a dia. - Adiciona-se sufixo ASE ao nome do substrato enzimas que hidrolisam: gorduras (lipo - grego) - LIPASE amido (amylon - grego) - AMILASE protenas - PROTEASE Outros ex.: Urease, Hexoquinase, Peptidase, etc.

Nomenclatura
1955 - Comisso de Enzimas (EC) da Unio Internacional de Bioqumica (IUB) nomear e classificar. Cada enzima cdigo com 4 dgitos que caracteriza o tipo de reao catalisada: 1 dgito - classe 2 dgito - subclasse 3 dgito - sub-subclasse 4 dgito - indica o substrato

Nome Sistemtico: Mais especfico, menos ambguo Nos d informaes precisas sobre a funo metablica da enzima. Ex: ATP-Glicose-Fosfo-Transferase O mais importante sistema de classificao e nomenclatura foi estabelecido pela Unio Internacional de Bioqumica (IUB), e baseada nas reaes que catalisam: Cada enzima recebe um cdigo com 4 dgitos que caracterizam o tipo de reao. Ex: E.C. 5.1.2.15 (E.C.= Enzyme Comission) 1 2 3 4 dgito - classe dgito - subclasse dgito - sub-subclasse dgito - indica o substrato

CLASSIFICAO
Classificao das enzimas segundo a Comisso de Enzimas.
1.

CLASSIFICAO
Classificao das enzimas segundo a Comisso de Enzimas.
4. Liases (catalisam a quebra de ligaes covalentes e a remoo de molculas de gua, amnia e gs carbnico) 4.1. =C=C= 4.2. =C=O 4.3. = C=N5. Isomerases (transferncia de grupos dentro da mesma molcula para formar ismeros) 5.1.racemases 6. Ligases (catalisam reaes de formao de novas molculas a partir da ligao entre duas pr-existentes, sempre s custas de energia) 6.1. C-O 6.2. C-S 6.3. C-N 6.4. C-C

Oxido-redutases (reaes
1.1.atuando 1.2.atuando 1.3.atuando 1.4.atuando 1.5.atuando 1.6.atuando em em em em em em

de oxidao-reduo ou transferncia de eltrons) CH-OH C=O C=OCH-NH2 CH-NHNADH, NADPH

2.Transferases (transferem grupos funcionais entre molculas) 2.1.grupos com um carbono 2.2.grupos aldedo ou cetona 2.3.grupos acil 2.4.grupos glicosil 2.7.grupos fosfatos 2.8.grupos contendo enxofre 3.

Hidrolases (reaes

de hidrlise) 3.1.steres 3.2.ligaes glicosdicas 3.4.ligaes peptdicas 3.5.outras ligaes C-N 3.6.anidridos cidos

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CLASSIFICAO
ATP + D-Glicose Subclasses

Nomenclatura
ADP + D-Glicose-6-fosfato

IUB - ATP:glicose fosfotransferase

Exemplos de Tipo de reao catalisada Subclasses Hidratases Adicionam H2O ligas duplas Quinases Transferem fosforilas do ATP Mutases Movem fosforilas dentro da mesma molcula Sintases Sntese independente de ATP Sintetases Sntese dependente de ATP

Classe Liases Transferase Isomerase Transferases Ligases

E.C. 2.7.1.1
2 - classe - Transferase 7 - subclasse - Fosfotransferases 1 - sub-subclasse - Fosfotransferase que utiliza grupo hidroxila como receptor 1 - indica ser a D-glicose o receptor do grupo fosfato

Nome trivial: Hexoquinase

CATALISADORES
Aceleram reaes qumicas
Catalase

CATALISADORES
No so consumidos na reao

H2O2
Ex: Decomposio do H2O2
Condies da Reao

H2O

O2
Velocidade Relativa
H2O2

Catalase

Energia livre de Ativao KJ/mol Kcal/mol

H2O

O2

Sem catalisador Platina Enzima Catalase

75,2 48,9 23,0

18,0 11,7 5,5

1
2,77 x 104 6,51 x 108

E+S

E+P

CATALISADORES
Atuam em pequenas concentraes
decompe 5 000 000 de molculas de H2O2 pH = 6,8 em 1 min

CATALISADORES
No alteram o estado de equilbrio Abaixam a energia de ativao; Keq no afetado pela enzima. No apresenta efeito termodinmico global G no afetada pela enzima.

1 molcula de Catalase

Energia de ativao sem enzima

Nmero de renovao = n

de molculas de substrato convertidas em produto por uma nica molcula de enzima em uma dada unidade de tempo.

Energia de ativao com enzima

Diferena entre a energia livre de S e P

S P Energia livre de ativao (D G): energia necessria para levar todas as molculas de 1 M de S ao estado de transio ou complexo ativado.

Caminho da Reao

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COMPONENTES DA REAO

ENZIMAS STIO ATIVO

Regio da molcula enzimtica que participa da reao com o substrato.

E+S

ES

P+E

Pode possuir componentes no proticos:cofatores. Possui aminocidos auxiliares e de contato.

Ativador:ons inorgnicos que condicionam a ao cataltica das enzimas. Fe+ Coenzima: molcula orgnica complexa.NAD+

Poro protica APOENZIMA

Cofator

Substrato se liga ao STIO ATIVO da enzima

HOLOENZIMA Grupamento prosttico

enzimas cofator
Algumas enzimas que contm ou necessitam de elementos inorgnicos como cofatores
ENZIMA PEROXIDASE CATALASE CITOCROMO OXIDASE LCOOL DESIDROGENASE HEXOQUINASE UREASE Cu+2 Zn+2 Mg+2 Ni+2 COFATOR Fe+2 ou Fe+3

ENZIMAS COENZIMAS
Maioria deriva de vitaminas hidrossolveis Classificam-se em: - transportadoras de hidrognio - transportadoras de grupos qumicos

Transportadoras de hidrognio Coenzima Abreviatura Reao Origem catalisada + Nicotinamida adenina NAD Oxi-reduo Niacina ou
dinucleotdio Nicotinamida adenina NADP+ dinucleotdio fosfato Flavina adenina FAD dinucleotdio Vitamina B3

Oxi-reduo Niacina ou
Vitamina B3

Oxi-reduo Riboflavina ou
Vitamina B2

ENZIMAS COENZIMAS
Transportadoras de grupos qumicos
Coenzima Coenzima A Biotina Piridoxal fosfato Metilcobalamina Tetrahidrofolato Tiamina pirofosfato THF TPP PyF Abrev. Reao catalisada Origem Pantotenato ou CoA-SH Transferncia de
grupo acil Transferncia de CO2 Transferncia de grupo amino Transferncia de unidades de carbono Transferncia de unidades de carbono Transferncia de grupo aldedo Vitamina B5 Biotina ou Vitamina H Piridoxina ou Vitamina B6 Cobalamina ou Vitamina B12 cido flico Tiamina ou Vitamina B1

LIGAO ENZIMA - SUBSTRATO

Emil Fischer (1894): alto grau de especificidade das enzimas
originou Chave-Fechadura , que considera que a enzima possui sitio ativo complementar ao substrato.

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LIGAO ENZIMA - SUBSTRATO

Koshland (1958): Encaixe Induzido , enzima e o o
substrato sofrem conformao para o encaixe. O substrato distorcido para conformao exata do estado de transio.

ATIVIDADE ENZIMTICA
Enzyme Commission: uma unidade (U) de atividade a quantidade de enzima que catalisa a transformao de 1 mmol de substrato a formao de 1 mmol de produto min.-1. Expressa: U = mmoles produto min.-1 Atividade especfica = U mg-1 de protena Enzima pura, condies que permita a velocidade da reao seja mxima o substrato [S] de modo a permitir que toda a enzima [E] [ES]. V = K[E] = K[ES]

Cintica Enzimtica
Victor Henri (1903): E + S ES

Cintica Enzimtica
Determinar as constantes de afinidade do S e dos I; Conhecer as condies timas da catlise;

1913 Leonor Michaelis - Enzimologista Maud Menten - Pediatra

K1 Kp

Ajuda a elucidar os mecanismos de reao; Determinar a funo de uma E numa rota metablica.

E+ S
K-1

ES

E+ P

Assim, a principal caracterstica do modelo de Michaelis-Menten para reaes enzimticas a formao do complexo ES. A [ES] baixa,

Etapa rpida

Etapa lenta

mas permanece inalterada durante a reao. O S convertido a P, que liberado da E. A E regenerada ao final da reao.

19 de abril de 2010

ATIVIDADE ENZIMTICA
Fatores que alteram a velocidade de reaes enzimticas: pH; temperatura;

Fatores que influenciam a ao enzimtica

Potencial Hidrogeninico, pH
A ionizao de AAs pode modificar a conformao da enzima. O substrato pode ser afetado.

1,5

7,7

concentrao de enzima; concentrao de substrato; presena de inibidores.

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Fatores que influenciam a ao enzimtica

Potencial Hidrogeninico, pH
A estabilidade de uma enzima ao pH depende:
temperatura; fora inica; natureza qumica do tampo; concentrao de ons metlicos contaminantes; concentrao de substratos ou cofatores da enzima; concentrao da enzima.

Fatores que influenciam a ao enzimtica

Temperatura
Com o aumento da temperatura dois efeitos ocorrem:
A taxa de reao aumenta; A estabilidade protica reduz devido a desativao trmica.

Fatores que influenciam a ao enzimtica

Concentrao da Enzima
A Vmx. da reao uma funo da quantidade de enzima disponvel (existindo substrato em excesso).

Fatores que influenciam a ao enzimtica

Concentrao da Enzima
Velocidade de transformao do S em P quantidade de E. Desvios da linearidade ocorrem: - Presena de inibidores na soluo de enzima; - Presena de substncias txicas; - Presena de um ativador que dissocia a enzima; - Limitaes impostas pelo mtodo de anlise. Recomenda-se: - Enzimas com alto grau de pureza; - Substratos puros; - Mtodos de anlise confivel.

[enzima] sobre a velocidade inicial (V0) com substrato em excesso.

Fatores que influenciam a ao enzimtica

Concentrao do Substrato

Fatores que influenciam a ao enzimtica

Concentrao do Substrato

A velocidade passa a ser constante porque no depende da [S]

Mistura 1 e 2 ordem

Cintica de 1 ordem Mistura 1 e 2 ordem

Cintica de 1 ordem

Inicialmente a velocidade da reao diretamente proporcional a [S].

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Fatores que influenciam a ao enzimtica

Concentrao do Substrato

Fatores que influenciam a ao enzimtica

Inibidores enzimticos
Inibidores

Mistura 1 e 2 ordem

A quantidade de reagente o suficiente grande para saturar todos os stios catalticos enzimas.

Substncias que reduzem a atividade de uma enzima de forma a influenciar a ligao do substrato.

Cintica de 1 ordem

Inibio enzimtica
Qualquer substncia que reduz a velocidade de uma reao enzimtica.

Inibio Irreversvel
O inibidor liga-se to fortemente enzima que a dissociao no ocorre. Podem destruir grupos funcionais que so essenciais para a atividade enzimtica.

INIBIDORES

REVERSVEIS

IRREVERSVEIS

A enzima no retoma a sua atividade normal. Ex.: Inseticidas organofosforados na acetilcolinesterase (enzima importante na transmisso dos impulsos nervosos).

COMPETITIVOS

NO COMPETITIVOS

INCOMPETITIVOS

Inibio Irreversvel
I se combina com um grupo funcional, na molcula da E, que essencial para sua atividade. Podem promover a destruio do grupo funcional Forma-se uma ligao COVALENTE entre o I e a E. Vmax parte da E completamente removida do sistema e Km permanece a mesma.
E+S + I
K1

Inibio Competitiva
Uma substncia que compete diretamente com o substrato pelo sitio de ligao de uma enzima. Inibidor normalmente semelhante ao substrato, de modo que se liga especificamente ao sitio ativo, mas difere do substrato por no poder reagir com ele. O inibidor liga-se enzima formando o complexo EI cataliticamente inativo.

ES

K2

E+P

EI

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Inibio Competitiva
O inibidor no competitivo pode ser uma molcula que no se assemelha com o substrato, mas apresenta uma grande afinidade com a enzima.

Inibio Competitiva
Inibidor competitivo concorre com o S pelo sitio ativo da E livre.
I anlogo no metabolizvel, derivado de um S verdadeiro, S substituto da E ou um P da reao.
I com estrutura similar ao S

afinidade da enzima pelo S

Esta ligao pode distorcer a enzima tornando o processo cataltico ineficiente.

[S] necessria para obter a mesma [ES]

Km aparente da enzima
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Inibio Competitiva

Inibio No-Competitiva
Inibidor no-competitivo se liga reversivelmente, aleatria e independentemente em um stio que lhe prprio.

I no tem semelhana estrutural com o S [substrato] no diminui a inibio Km da enzima NO se altera Vmax na presena do inibidor

1- sem inibidor 2- com inibidor na concentrao [I1] 3- com inibidor na concentrao [I2] > [I1]
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Inibio No-Competitiva

Inibio Incompetitiva
Inibidor incompetitivo se liga reversivelmente, em um stio prprio, ao complexo ES.
I no tem semelhana estrutural com o S

I favorece a formao do ESI

Km e Vmax da enzima

1- sem inibidor 2- com inibidor na concentrao [I1] 3- com inibidor na concentrao [I2] > [I1]
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Inibio Incompetitiva

1- sem inibidor. 2- com inibidor na concentrao [I1] 3- com inibidor na concentrao [I2] > [I1]

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