III. MIKROBA DAN KULTUR UNTUK PENGOLAHAN 1.SUMBER MIKROBA DAN ISOLAT 2.SELEKSI MIKROBA 3.

PEMILIHAHAN DAN PENYIMPANAN KULTUR KULTUR ADALAH MIKROBA-MIKROBA DAN DAPAT DIGUNAKAN JENIS KULTUR -KULTUR CAMPURAN -KULTUR MURNI

PANGAN

YANG DAPAT TUMBUH DENGAN DALAM VERMENTASI

BAIK

PENGUNAN KULTUR DALAM PENGOLAHAN PANGAN SEPERTI DALAM PEMBUATAN MAKANA N FERMENTASI, TERUTAMA DITUJUKAN UNTUK MENGUBAH BAHAN PANGAN ASAL MENJADI PRODUK BARU , YANG MEMPUNYAI KARAKTERISTIK BERBEDA DENGAN ASALNYA. KULTUR CAMPURAN TIDAK TERDIRI DARI SATU JENIS MIKROBA, TETAPI DARI BEBERAPA JENIS MIKROBA, INI BANYAK DIGUNAKAN PADA INDUSTRI MAKANAN DAN MINUMAN YANG DIBUAT SECARA FERMEMTASI TRADISIONAL CONTOH PENGGUNAAN KULTUR CAMPURAN; FERMENTASI YOGURT -STREPTOCOCCUS THERMOPHILUS -LACTOBACILLUS BULGARICUS CARA KERJA SAMANYA INTERAKSI SALING MENGUNTUNGKAN FERMENTASI TAPE CANDIDA ENDOMYCOPSIS HANSENULA AMYLOMYCES ASPERGILLUS FUSARIUM MUCOR RHIZOPUS KULTUR MURNI MENGGUNAKAN SATU JENIS MIKROBA , KEBANYAKAN INDUSTRI PENGOLAHAN DENGAN TEKNOLOGI TINGGI CONTOH PENGGUNAAN KULTUR MURNI PRODUK HASIL METABOLIK PRIMER -ALKOHOL -ASAM ORGANIK -ASAM AMINO -RIBOFLAVIN LB PRODUK HASIL METABOLIK SEKUNDER ANTIBIOTIK KOMPONEN FLAVOUR KMPONEN TOKSIN KEUNTUNGAN PENGGUNAAN KULTUR DIGUNAKAN OLEH

-DAPAT MENGAWETKAN DAN MENINGKATKAN KEAMANAN MAKANAN . PEMECAHAN SUBSTRA T MEMBENTUK ASAM, MENGAKIBATKAN PH TURUN JADI MIKROBA PEMBUSUK DAN PATOGEN TIDAK DAPAT TUMBUH DAN KULTUR TERSEBUT DAPAT MEMBENTUK SE NYAWA-SENYAWA ANTI MIKROBA LAIN.

-DAPAT MENINGKATKAN NILAI GIZI. . KARENA MIKROBA DAPAT MEMECAH K OMPONEN 2 MAKRO KE SENYAWA LEBIH SEDERHANA, SEHINGGA LEBIH MUDAH DICE RNA ATAU DIABSORPSI -MEMPERBAIKI CITA RASA. PADA PEMECAHAN SUBSTRAT JUGA TERBENTUK SENYAW A 2 YANG MEMPUNYAI CITA RASA. SUMBER MIKROBA DAN ISOLAT MIKROBA TERSEBAR LUAS DIALAM; -AIR -UDARA -FLORA -FAUNA -TANAH CONTOH -BAKTERI PEMBENTUK TANAH -BAKTERI ASAM SPORA BACILLUS, LAKTOBACILLUS BUAHAN ACETOBACTER ACETI PADA BUAH NANAS CLOSTRIDIUM PADA SUSU PADA KULIT J PADA

LAKTAT ASETAT PADA SARI BUAH

-BAKTERI ASAM ERUK DAN JUGA

ASPERGILLUS NIGER

-BAKTERI PEMBENTUK NATA MATANG

ISOLAT ADALAH BAHAN UNTUK MENDAPATKAN MIKROBA DARI SUMBER YANG DIPERLUKAM DALAM ISOLOSI MIKROBA UNTUK MENDAPATKAN KULTUR MURNI BIAKAN SATU MURNI ADALAH SEL TUNGGAL. BIAKAN YANG SEL-SELNYA BERASAL DARI PEMBELAHAN

KEBANYAKAN BAKTERI, KAPANG , KHAMIR DAPAT MEMBENTUK KOLONI PADA MED IUM PADAT , SEHINGGA MUDAH DIISOLASI DENGAN CARA MENEBARKAN SEL-S EL PADA CAWAN SEHINGGA TUMBUH KOLONI-KOLONI YANG TERPISAH. SESUNGGUHNYA ADA BEBERAPA CARA UNTUK MENDAPATKAN BIAKAN MURNI DARI BIAKAN CAMPURAN, DAN YANG PALING SERING DIGUNAKAN ADALAH; CAWAN GORES CAWAN TUANG. PERINSIPNYA SAMA YAITU MENGENCERKAN SEHINGGA DAPAT MEMISAHKAN INDIVIDU SPECIES DARI YANG LAIN. CAWAN GORES KEUNTUNGAN NYA , HEMAT BAHAN DAN WAKTU KESALAHAN BAGI PEMULA TIDAK MEMANFAATKAN PERMUKAAN MEDIUM DENGAN SEBAIK-BAIKNYA UNTUK ESKAN SEHINGGA PENGENCERAN MIKROBA MENJADI KURANG. CENDRUNG UNTUK MENGGUNAKAN INOKULUM TERLALU AN PEMISAHAN SEL-SEL YANG DIGORESKAN METODA BANYAK SEHINGGA

DIGOR

MENYULITK

SALAH SATUNYA ADALAH PENGGORESAN QUADRAN;

O ADALAH AWAL PETRI DIPUTAR I , II, III GORESAN HARUS SALING

TERPISAH

HARUS ADA MEDIA YANG TIDAK TERKENA GORESAN UNTUK MENAMPUNG PERTUMBUHAN KOLONI INI DISEBUT JUGA ISOLASI LANGSUNG METODA CAWAN LANGSUNG KEUNTUNGAN TIDAK PERLU KETRAMPILAN TINGGI KELEMAHAN BOROS BAHAN DAN WAKTU CARANYA; BUAT PENGENCERAN DENGAN MENGGUNAKAN TABUNG REAKSI DAN LUP. AMBIL 2 LUP INUKULUM MASUKKAN KE TABUNG REAKSI I, DAN BERIKUT SETELAH DIHOMOGENKAN AMBIL 2 LUP MASUKKAN KE TABUNG KE II DAN BEGITU SETER USNYA SESUAI PENGENCERAN YANG DIHARAPKAN. LALU INOKULASIKAN MASING-MASI NG PENGENCERAN PADA PETRI MENGGUNAKAN METODA TUANG. INKUBASIKAN SESUAI JENIS MIKROBA UMPAMANYA SUHU 30 O C SELAMA 48 JAM. ISOLASI CARA LAIN; MEDIUM CAIR: UKURAN SEL YANG BASAR DAN KEBANYAKAN PROTOZOA & GANG GANG CARA NYA METODA PENGENCERAN ISOLASI SEL TUNGGAL. UNTUK UKURAN BESAR & TIDAK DAPAT DIISOLASI D ENGAN METODA CAWAN ATAU PENGENCERAN. UKURAN 100 X ATAU KURANG PEMBE SARAN. MENGGUNAKAN PIPET KAPILER, DICUCI BEBERAPA KALI DENGAN MEDIUM STERIL. SELEKSI MIKROBA MEDIUM SELEKTIF DAPAT DIGUNAKAN UNTUK MENUMBUHKAN MIKROBA BA LAINNYA DIHAMBAT PERTUMBUHANNYA. TERTENTU , SEDANGKAN MIKRO BAIK DENGAN CAR

DAPAT DIGUNAKAN UNTUK MENSELEKSI MIKROBA DARI ALAM A ISOLASI LANGSUNG MAUPUN PENGKAYAAN KULTUR. PENGKAYAAN KEBANYAKAN

KULTUR DIGUNAKAN MEDIUM BASAL BAHAN UNTUK 1 L MEDIUM

K 2 H PO4 1 g Mg SO 4 . 7 H 2 O 0.2 g Fe SO 4 . 7 H 2 O 0.05 Ca Cl 2 0.02 g LARUTAN ELEMEN TERBATAS 0.1 ml LARUTAN ELEMEN TERBATAS. AL Cl 3 1g K J 0.5 g K Br 0.5 g Li Cl 0.5g Mn Cl 2 7 g dll

CONTOH UNTUK 3 L

MEDIUM BAHANNYA;

PERANGSANG PERTUMBUHAN B 12, COMPLET VITAMIN,

DAN

ASAM AMINO GRAM UNTUK MIKROBA;

MENCEGAH PERTUMBUHAN , CONTOHNYA ESCERICIA COLI ENTEROBAKTER AEROGENES BAKTERI GRAN ( + ) ADA DUA TAHAP SELEKSI; PRIMER DAPAT DIDETEKSI DAN DIISOLASI

MIKROBA

POTENSIAL YANG

DIGUNAKAN DALAM INDUSTRI. UJI-UJI UNTUK SELEKSI INI HARUS BERSIFAT; CEPAT, MURAH, MUDAH, SPE SIFIK DAN EFEKTIF CARA SUPAYA EFEKTIF DIKERJAKAN BERTAHAP MENGHILANGKAN MIKROBA YANG TIDAK DIPERLUKAN,MESKIPUN DALAM JUMLAH KE CIL. MENGGUNAKAN INDIKATOR; SKUNDER DAPAT DIKETAHUI KARAKTERISTIK PERTUMBUHAN DAN KEBUTUHAN LAIN DAPAT DIKETAHUI FAMILI ATAU JENIS YANG DIISOLASI, SEHINGGA DAPAT D IKETAHUI APAKAH MIKROBA YANG KITA SELEKSI GALUR BARU ATAU YANG SUDAH. PRODUKSI METABOLIK SEKUNDER DIPRUDUKSI PADA MEDIA CAIR ATAU PADAT DA N KONDISI YANG OPTIMAL. KARAKTERISASI DAN IDENTIFIKASI MIKROBA KARAKTERISASI ADALAH TAHAP PENDAHULUAN YANG PENTING SEBELUM IDENTIFIKASI. DASAR DALAM IDENTIFIKASI MIKROBA SECARA SISTEMATIK ADA 3 TAHAP; KLASIFIKASI : KEDALAM SATU GRUP NOMEMKLATUR : MENETAPKAN NAMA ILMIAH INTERNASIONAL DIBERI NAMA N BA

IDENTIFIKASI: PENETAPAN ORGANISME OMOR.

KEDALAM KLASIFIKASI DAN DAPAT

JADI KLASIFIKASI DAN IDENTIFIKASI TIDAK IK JIKA BELUM DILAKUKAN KARAKTERISASI.

DITETAPKAN DENGAN

TAHAP-TAHAP DALAM IDENTIFIKASI SUATU KULTUR -HARUS DIMURNIKAN TERLEBIH DAHULU -SESUAI PROSEDUR ISOLASI, TETAPKAN SIFAT-SIFAT MIKROBA CONTOH; O 2 AT AU an O 2 DAN LAIN-LAIN -PENGAMATAN MIKROSKOPIK , FASE KONTRAS, MORFOLOGI, ENDOSPORA, DAN E KSOSPORA. -PEWARNAAN GRAM -PENGAMATAN MOTILITAS : FLAGELLA -PENGAMATAN PIGMEN : WARNA KOLONI -PENGUJIAN KEBUTUHAN OGSIGEN -PENGGUNAAN KUNCI IDENTIFIKASI DALAM ; BERGEY.S MANUAL; -UJI SEKUNDER MEMBEDAKAN ANTARA JENIS -UJI LENGKAP MEMBEDAKAN ANTARA SPESIES PEMILIHAN DAN PEMELIHARAAN KULTUR KULTUR YANG AKAN DIPILIHARA

SYARAT-SYARAT DARI

-GALUR HARUS MEMPUNYAI SIFAT GENETIK YANG TETAP. -GALUR HARUS DAPAT DIPELIHARA DALAM WAKTU LAMA. -GALUR HARUS DAPAT SEGERA MEMPRODUKSI SEL VEGETATIF, SPORA ATAU U NIT REPRODUKSI LAIN. -GALUR HARUS DAPAT TUMBUH SECARA CEPAT DALAM UNIT FERMENTASI. -GALUR/KULTUR HARUS BEBAS DARI KONTAMINAN. -JIKA MUNGKIN GALUR MEMPUNYAI SISTIM PERLINDUNGAN DIRI TERHADAP KONTA MINAN. -GALUR TIDAK MUDAH MENGALAMI MUTASI. 3 METODA DASAR DALAM PEMELIHARAAN KULTUR -PENGERINGAN ORGANISME PADA TANAH ATAU BAHAN PADAT LAIN

-DALAM

KEADAAN

METABOLISME

TERBATAS DAN

RESPIRASI

TERTEKAN. LIOFILISASI DAN

-PENGHILANGAN AIR DARI SEL / SPORA DENGAN CARA PENYIMPANAN PRODUK KERING PADA KONDISI TERTENTU PENGERINGAN CARANYA PADA SILIKA GEL TANAH ATAU Ca CO 3 BERBENTUK KERING DISIMPAN PADA SUHU KAMAR ATAU 4 O C. METABOLISME DAN RESPIRASI TERBATAS 1.AGAR MIRING ( CARA SEDERHANA ) -DALAM FREZER ATAU DILAPISI MINYAK ES -BILA PADA SUHU 2 - 6 O C 15 HARI -SUHU BEKU ( - 20 O C ) 1 X 8 -DITUTUP PARAFIN CAIR STERIL TAHAN

BUBUK

DAN DISIMPAN PADA DIPINDAHKAN KEMEDIA

SUHU

LEMARI

BARU 1 X

- 16 MINGGU. LEBIH KURANG 1 TAHUN BUFFER STERIL PADA

2.SPORA DALAM AIR. SPORA FUNGI DALAM AIR DESTILASI ATAU SUHU LEMARI ES.

3.PENYIMPANAN SUHU BEKU . -SUHU - 30 OC SAMPAI - 70 O C PADA KEADAAN FASE STASIONER -NITROGEN CAIR - 196 O C MIKROBA BERUPA SUSPENSI DAN NUTRIEN C AIR + ZAT ANTI BEKU ( GLISEROL 10 % ) INI TAHAN LAMA TETAPI ADA RESIKO MIKROBA YANG MATI. -NITROGEN CAIR MAHAL, DAN MUDAH MELEDAK DENGAN ADA API. -UNTUK MENDAPATKAN SEL HIDUP DALAM JUMLAH TINGGI + KOMPONEN PELINDUNG ( KRIOPROTEKTAN ) KEDALAM SUSPENSI SEPERTI; MADU 10 %, GLUTAMAT 5 %, SUKROSA 5 % SERUM ALBUMIN 15 %. PEMBEKUAN LAMBAT SAMPAI SUHU - 30 O C PEMBEKUAN CEPAT SAMPAI SUHU DIBAWAH - 30 O C KECEPATAN THAWING TINGGI KANDUNGAN ELEKTROLIT SEKECIL MUNGKIN LIOFILISASI PERINSIP PENGAWETAN; 1.PENURUNAN SUHU DIBWAH TITIK BEKU UNTUK MENURUNKAN AKTIFITAS ENZIM. 2.PENGHILANGAN AIR SEL. DENGAN PENGERINGAN VAKUM UNTUK MENGHAMBAT METABO LISME. LIOFILISASI HARUS DILAKUKAN DENGAN HATI-HATI HINDARI STRES MKROBA YANG DAPAT MENGAKIBATKAN ; -KEHILANGAN VIABILITAS. -KEHILANGAN SIFAT GENETIK CARANYA; 1.KULTUR YANG PALING STABIL DARI FASE STASINER. JUMLAH SEL 10 10 10 11 SEL / ml. DALAM SUSPENSI SEPERTI SUSU SKIM ATAU SUKROSA. 2.BEKUKAN DENGAN PENGERINGAN BEKU; PADA AWAL SUHU DITURUNKAN SAMPAI DIBAWAH TITIK BEKU. KEMUDIAN TEKANAN DITURUNKAN SERENDAH MUNGKIN SEH INGGA AIR MENGALAMI SUBLIMASI. 3.BILA PENGERINGAN SUDAH SEMPURNA . BARU DISIMPAN PADA RUANG PENDING IN. 4.KETAHANAN LEBIH KURANG 10 THN SIFAT FISIOLOGIS TDK TURUN. CATAN. SEL YG MENGERUT AKAN TETAP HIDUP SELAMA PENCAIRAN INILAH YANG DIH ARAPKAN.