DIAGNOSTICO DE LA ENFERMEDAD DE CARRION

Tec.Lab: Placido Santos Falcn

COMPONENTES EPIDEMIOLOGICOS DE LA ENFERMEDAD DE CARRION

HISTORIA

PERSONAJEs EMBLEMATICOs

DANIEL ALCIDES CARRION 1885

DR. A. BARTON 1909

CARACTERISTICAS MICROBIOLOGICAS Bartonellabacilliformis

Bacilo Gram(-) pleomrfico 0.2-0.5 por 1-2um Aerbico, no fermentativo Mvil,unipolar 2-16 flagelos Intracelular de clulas endoteliales y eritrocitos. Coloracin grosella o violeta con Giemsa.

CARACTERISTICAS MICROBIOLOGICAS Bartonellabacilliformis

Aislamiento en medios slidos a partir de muestras clnicas. Requiere medios enriquecidos.
Crecimiento lento Temperatura ptima 28C No reactiva a pruebas bioqumicas

PATOGENESIS Y FISIOPATOLOGIA

A. Reacomodo Bacteriano-perodo asintomtico (4-5das) B.C. Inf. Cl endoteliales vasos capilares (Strong)-Siembra bact. al torrente sanguneo-colonizacin eritrocitos maduros (desencadenantes sist. inmunolgico, grado de invasividad) D. Depresin sit. inmune(sobre infecciones) -Hiperplasia del reticulocito endotelial, linfadenomegalia y hepatoesplenomegalia. Liberacin factor antignico, hiperproliferacin de clulas endoteliales ---formacin de verrugas

PRUEBAS DE DIAGNOSTI CO
ENFERMEDAD DE CARRION

DIAGNOSTICO DIRECTO MEDIANTE COLORACION GIEMSA

COLORACION GIEMSA
FUNDAMENTO:
Accin

combinada de azul de metileno y eosina(efecto Romanowsky) naturaleza cida o bsica de estructuras celulares determina afinidad por los componentes del colorante policromtico de Giemsa. cidos nucleicoscoloracin prpura(azul de metileno) Hemoglobina-coloracin rosada con eosina (cida) Otras estructuras se tien por combinacin de ambos (neutrfilos)

CRITERIOS PARA LA IDENTIFICACION DE FORMAS DE Bartonellabacilliformis

EN EXTENDIDOS SANGUINEOS COLOREADOS CON GIEMSA

Resultados de lecturas repetibles y reproducibles Coloracin grosella(rojo cereza

CRITERIOS PARA LA IDENTIFICACION DE FORMAS DE Bartonellabacilliformis EN EXTENDIDOS SANGUINEOS COLOREADOS CON GIEMSA

Microorganismos intracelulares

Posibilidades de error en gota gruesa

CRITERIOS PARA LA IDENTIFICACION DE FORMAS DE Bartonella bacilliformis

EN EXTENDIDOS SANGUINEOS COLOREADOS CON GIEMSA

Ubicacin dentro del eritrocito(central, bordes) Dimensiones y morfologa similar para cada forma bacteriana Cocos ligeramente ovalados individuales, pares o cadenas cortas Bacilos finos de bordes aguzados alargados, frecuentemente en V, individuales o grupos Cocobacilos cortos y gruesos Morfologa variable de acuerdo a la fase de la enfermedad

CRITERIOS PARA LA IDENTIFICACION DE FORMAS DE BartonellabacilliformisEN EXTENDIDOS SANGUINEOS COLOREADOS CON GIEMSA

Nmero de microorganismos por eritrcito: Formas cocoides de 1 a 15 Bacilares de 1 a 8

Diferenciacin con otras estructuras intraeritrocitarias

CRITERIOS PARA LA IDENTIFICACION DE FORMAS DE BartonellabacilliformisEN EXTENDIDOS SANGUINEOS COLOREADOS CON GIEMSA

Diferenciacin con otras estructuras intraeritrocitarias Aplicacin de criterios de identificacin

CRITERIOS PARA LA IDENTIFICACION DE FORMAS DE Bartonellabacilliformis EN EXTENDIDOS SANGUINEOS COLOREADOS CON GIEMSA

Ausencia de refringencia, formas bacterianas no presentan brillo metlico

LECTURA DE LAMINAS COLOREADAS

REPORTE DE RESULTADOS
Los resultados positivos deben expresar: Porcentaje de eritrocitos infectados. La forma del microorganismo observado (bacilos, cocobacilos o cocos)Ejemplo: 85% forma bacilar, 1% forma cocoide. Ayuda diagnstica importante Otros: presencia de punteado basfilo, granulaciones txicas, alteraciones eritrocticas.

Enfocar campos microscpicos de aprox.100 eritrocitos y contar el nmero de eritrocitos infectados. Elevado% de eritrocitos infectadoslectura de 50campos microscpicos.

Escaso % de eritrocitos infectados lectura de 200 a + campos microscpicos

Negativo, no se observan eritrocitos infectados en 200 campos observados

CAUSAS DE ERROR EN EL DIAGNOSTICO DIRECTO

Extendido sanguneo excesivamente grueso o muy fino
Inadecuada conservacin de extendidos sanguneos( luz, temperatura ,humedad ,polvo o insectos)
Tiempo de tincin insuficiente o muy prolongado. Empleo de solucin colorante excesivamente cida o alcalina. Presencia de precipitado, o utilizacin de colorante sin filtrar Alteracin de clulas sanguneas por accin del anticoagulante. Coloracin de extendidos sanguneos sin previa fijacin. Frotices sanguneos almacenados por perodos prolongados

EXAMEN DIRECTO VENTAJAS Y DESVENTAJAS

No se requieren equipos sofisticados Bajo costo Requerimiento mnimo de insumos y reactivos. Ejecucin rpida Procedimiento sencillo Resultados inmediatos

Sensibilidad baja (frotis negativo no descarta la enfermedad)Fase aguda 36%, fase crnica 10%Especificidad 96% Requiere personal capacitado. Posibilidades de errores en la lectura Falsos positivos Falsos negativos

DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO POR CULTIVO OBTENCION DE MUESTRA

CUANDO SOLICITAR UN CULTIVO?

Pacientes procedentes de zonas endmicas

con signos y sntomas compatibles. Un examen directo negativo no descarta la Enfermedad. Diagnstico diferencial. Paciente preferentemente sin tratamiento de antibiticos. Control de tratamiento antimicrobiano.

CULTIVO Bartonella bacilliformis

VENTAJAS
-Permite aislamiento agente etiolgico. -Mayor sensibilidad.

DESVENTAJAS
-Requiere personal entrenado. -Equipamiento. -Costo elevado.

-Posibilita identificacin

posterior por PCR.

-Resultados en 30 a 45 das.

OBTENCION DE OTRAS MUESTRAS CULTIVO

Material estril rotulado para toma de muestra. Desinfeccin minuciosa. Biopsias de lesiones verrucosas o tejidos LCR

Mdula sea
Otros fluidos orgnicos

MEDIO DE CULTIVO
Bartonellabacilliformis

Pesar cantidades exactas.

Control de esterilidad sangre desfibrinada de carnero. Control del pH de agua destilada y medio licuado.

Autoclavado.
Dispensar en cabina de bioseguridad. Enriquecido con sangre sales y aminocidos. Medio bifsico favorece crecimiento bacteriano. Utilizacin de placas para sub cultivos

MEDIO DE CULTIVO
Bartonella bacilliformis

Medio bifsico Fase slida: Agar Columbia 10% sangre carnero desfibrinada, ext. Levadura 0.25% Fase lquida: RPMI1640conLglutamina y bicarbonato de Na

Aplicacin de procedimientos de control de calidad interno: esterilidad y viabilidad 28C, numeracin lotes, etiquetado. Almacenamiento 4-8C.

MEDIO DE CULTIVO
Bartonellabacilliformis

Muestra de sangre total en tubos vacutainer con anticoagulante. Aplicacin de medidas de bioseguridad. Identificacin de muestras.

Homogenizar con el anticoagulante.

Mantener de 4-8C Procesar dentro de los 7-14 das.

MEDIO DE CULTIVO
Bartonellabacilliformis
Atemperar medios de cultivo bifsicos. Rotulacin. Inoculacin de 1cc de sangre total. Homogenizar. Incubar 28-30C. Revisin minuciosa cultivos en 72 hrs. Desarrollo contaminantes, repetir cultivo. Medidas bioseguridad.

CARACTERIZACION BACTERIOLOGICA Bartonella bacilliformis

Desarrollo bacteriano a partir de 5-7 das, hasta 15 das. Colonias no hemolticas, pequeas, translcidas, brillantes. Fase lquida no presenta turbidez Sub-cultivos en placas de agar sangre Desarrollo 3-4 das Colonias con las mismas caractersticas culturales. Sub-cultivos ciegos, aumentan sensibilidad. Cultivos negativos, observacin tiempo mximo 30 das

CARACTERIZACION BACTERIOLOGICA
Bartonella bacilliformis
Homogenizar colonias en SSF estril.
Coloracin de Gram modificada.

Lectura con objetivo de inmersin.

Bacilos finos gram negativos claramente visibles en cultivos jvenes. Pruebas moleculares confirmacin ( PCR ) Crio preservacin cepas confirmadas

RESULTADOS

AVANCES EN EL DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO DE Bartonella bacilliformis IMPLEMENTACION DE LA VIGILANCIA DE LA SUCEPTIBILIDAD ANTIMICROBIANA MEDIANTE TRES METODOS DE LABORATORIO

20% cepas Resistentes a Ciprofloxacina 2%cepas Resistentes a Cloranfenicol