SVETOZAR MARKOVI GIMNZIUM SZABADKA

RETTSGI HZIDOLGOZAT KMIBL A VR BIOKMIAI ANALZISE

Mentor: prof. Nikoli Ibolya

Tanul: Mrton Kinga __________________ (alrs) 2009. mjus, Szabadka

1

Minden shajtsnak elzmnye van, a sejtek, a vr, az izmok, a knnyek, a verejtk mind a llek szolglatban llnak.

/Schffer Erzsbet/

TARTALOMJEGYZK

Tartalomjegyzk ...................................................................................................... 1. Bevezet .................................................................................................................. 2. A vr ........................................................................................................................ 3. Na+, K+ s Cl- szerepe s mennyisgnek meghatrozsa ........................................ 4. Ntrium ....................................................................................................... 4. Klium ........................................................................................................ 4. Klr ............................................................................................................. 5. Aktv transzport ............................................................................................ 5. Na+ s K+ szintjnek meghatrozsa............................................................. 6. Cl- szintjnek meghatrozsa........................................................................ 8. A glkz vagy vrcukor szerepe s mennyisgnek meghatrozsa......................... 8. A sznhidrtok anyagcserje ........................................................................ 8. Glikolzis ...................................................................................................... 9. Citrtkr ..................................................................................................... 11. Terminlis oxidci .................................................................................... 13. A vrcukorszint meghatrozsa .................................................................. 13. Koleszterin szerepe s mennyisgnek meghatrozsa .......................................... 15. Koleszterin a vrben ................................................................................... 16. A koleszterinszint meghatrozsa ............................................................... 17. Hemoglobin szerepe s mennyisgnek meghatrozsa ......................................... 18. A hm......................................................................................................... 19. Oxi- s deoxi-hemoglobin .......................................................................... 20. A hemoglobinszint meghatrozsa ............................................................. 20. Mirt is fontosak ezek a mrsek? Milyen betegsgek elzhetek meg, ismerhetek fel idben a vizsglatokkal? ........................................................................................ 21. Felhasznlt irodalom .............................................................................................. 23.

Bevezet Fontosnak tartom, hogy az emberek ismerjk szervezetket. gy ltet szvetnk, a vr sszettelt is. Legjobban szerettem volna bemutatni a vr teljes sszetevit, de belttam, hogy nem lenne hozz sem elegend idm, sem pedig elegend tudsom. Ezrt kivlasztottam nhny fontosabb anyagot, mely vrnkben tallhat. Ezek kimutatsi mdszereit, eljrsait s a hozzjuk fzd betegsgeket fogom bemutatni ebben a munkban. A kivlasztsa a vizsglt anyagoknak fknt vletlen volt, de szerepet jtszott kivlasztsukban az is, hogy mennyire fontosak a szervezetben, illetve, hogy mennyire ismert jelenltk a vrben az tlagemberek szmra. Hiszen nhny anyag koncentrcijnak a vltozsa komoly betegsgekre utalhat. Ezzel a munkval szeretnm felhvni a figyelmet a vrvizsglat fontossgra. Segtsgemre voltak munkmban a Szabadkai Krhz klinikaikmiai laboratriumnak biokmikusai, akik bevezettek a laboratrium munkjba s beavattak a biokmiai analiztorok mkdsbe, hiszen ma mr leginkbb gpek vgzik az analziseket. Egy gpet n magam is kiprblhattam, elvgezhettem a ntrium s klium koncentrcijnak lngfotometris meghatrozst. Mivel a legtbb gphez komoly szaktuds szksges, azoknak a mkdst elmondtk s megfigyelhettem, hogyan vgzik rajtuk a szakemberek a klnfle analziseket.

A vr Folykony sejtkztti llomny ktszvet. A vrtrfogat jelents rszt a vz s a fehrjk alkotjk. Trfogata megkzeltleg 5 liter egy felntt embernl. Alakos elemei a vrsvrtestek, a fehrvrsejtek s a vrlemezkk. Az alakos elemek trfogata kzel fele a vrtrfogatnak. A vrsvrtestek vagy eritrocitk tartalmazzk a hemoglobint, a vrs vrfestket. A hemoglobin egy szllt protein, ami az O2 szlltst vgzi a tdtl a sejtekig, illetve CO2 szlltst a sejtektl a tdig. A fehrvrsejteknek vagy leukocitknak vd szerepk van. A vrlemezkk vagy trombocitk apr testecskk, melyek rsztvesznek a vralvads folyamatban. A sejtkztti llomny a vrplazma.

1. bra: A vr sszetevi A vrplazma a vr 55-56%-t adja. Ennek 90%-a vz, 2%-t klnfle ionok (Na+, K+, Ca2+, Mg2+, Cl-, HCO3 -, ...) alkotjk. A mardk 8%-a pedig fehrjkbl ll (albuminok, globulinok, fibrinogn, stb.). Lehetnek egyb anyagok is a vrben, mint pldul glkz, szabad zsrsavak, aminosavak, szteroidok, hgysav, karbamid, stb. A vrplazma csak akkor vizsglhat, ha specifikus anyagokkal a vralvadst magakadlyozzuk. Ha a plazmt (vagy a teljes vrt) hagyjuk megalvadni, s csak ezutn centrifugljuk, akkor kapjuk a szrumot, amely a plazmtl csak annyiban klnbzik, hogy a fibrinognt mr nem tartalmazza.

Na+, K+ s Cl- szerepe s mennyisgnek meghatrozsa Nrtium Az lvilg, gy az ember szmra is ltfontossg msodlagos elem a ntrium. Naponta a tpllkkal nagyjbl 100-250 mmol ntriumot visznk be a szervezetnkbe ntrium-klorid formjban. Ez teljesen fedi a napi szksgleteinket. A ntrium-klorid szinte teljes mrtkben felszvdik az emszts sorn, mindssze csak 2% tvozik a szklettel. Szabad kationknt van jelen a sejtekben, a vrplazmban s az extracellulris trben, ahol a kliumionnal egytt nagyon jelents szerepk van. Az extracellulris tr f kationja. Rszt vesz az ideg- s izomsejtek ingerletvezetsi folyamataiban, a negatv tlts fehrjemolekulk tltsnek kompenzlsban. Fontos szerepe van az extracellulris tr ozmolalitsnak fenntartsban s a volumen regulcijban. A ntrium kivlasztsa legnagyobbrszt vizelet tjn trtnik, de a knny, a verejtk s a szklet is tartalmaz ntriumot. A glomerulusokban naponta krlbell 1000 g (kb. 17 mol) ntrium vlasztdik ki az elsdleges vizeletbe. Ennek legnagyob rsze, 80-85 %-a visszaszvdik a kzelebbi tubulusokon, s valamennyi a tvolabbi tubulusokon. A msodlagos vizeletbe mindssze csak 1% kerl. A ntrium visszaszvdst egy hormon szablyozza, az aldoszteron. Klium Szintn minden llny szmra fontos msodlagos biogn elem. Az llati s emberi szvetek egyik legfontosabb kationja. Naponta tlagban 50-100 mmol kliumot visznk be a szervezetnkbe a tpllkkal. Ez a mennyisg kielgti napi szksgletnket. A vkonyblben szvdik fel. Kivlasztsa 90%-ban a vizelettel, mg 10%-a a szklettel trtnik. F kation az intracellulris trben. Fontos szerepe van a az ideg- s izomsejtek ingerletvezetsi folyamataiban, illetve a negatv fehrjemolekulk semlegestsben. Hatssal van a szvizom aktivitsra. A vrsvrtestekben nagyjbl hsszor tbb klium van, mint a szrumban, ezrt vrvtelkor vigyzni kel, hogy a vrsvrtestek ne srljenek (ne kerljn sor hemolzisre, a vrsvrtestek felolddsra). Ugyanis a kiraml intracellulris klium emeli a szrum klium szintjt. Valamint a szrumot minnl hamarabb el kell vlasztani az alakos elemektl, mert a vr llsval, klnsen hts esetn, a klium diffundl a sejtekbl a szrumba, a ntrium pedig a szrumbl a sejtekbe.

Amikor a vrrel egytt a klium thalad a vesken, akkor az kivlasztdik az elsdleges vizeletbe, de onnan a kzelebbi tubulusokban 90% flszvdik. A tvolabbi tubulusokban rszben jra kivlasztdik, azaz tcserldik ntriumionra. A klium kivlasztst a mineralkortikoszteroidok (aldoszteron) szablyozzk, de csak kzvetett ton. Klr Szintn msodlagos biogn elem, mely az emberi szervezetben jelents. A gerincesek szervezetben az egyik legfontosabb sejten belli s sejten kvli anion. Naponta a tpllkkal 140-260 mmol klrt visznk be konyhas formjban, ami kielgti szervezetnk napi szksglett. Teljes mrtkben felszvdik a vkonyblben. Kivlasztsa a fknt vizelet tjn trtnik, illetve kisebb mrtkben verejtkezssel. Szabad anionknt van jelen, fknt az extracellulris trben. Az intracellulris trben csak nagyon kis mennyisgben van jelen, csupn 1 mmol/l. A vrsvrtestek tartalmazzk nagyobb mennyisgben, nagyjbl 50-54 mmol/l. De mg ez is alacsonyabb, mint a szrumbeli szintje. A gyomorsav egyik sszetevje, szablyozza a vrsvrtestek szn-dioxidtranszportfolyamatait, valamint fontos szerepe van az ingerlsi folyamatokban. A ntriumhoz hasonlan a klr is kivlasztdik az elsdleges vizeletbe, m a kzelebbi tubulusokban passzvan visszaszvdik. Aktv transzport (Na+ K+-pumpa) Az aktv transzport a sejtek membrnjn keresztl megvalsul transzport folyamat. Ez fehrjkbl ll rendszerek segtsgvel valsulhat meg, m a szlltmolekula mozgsa s a szlltott molekula leadsa a sejtben energiafelhasznlssal jr a sejt rszrl. A folyamat sorn a szlltfehrjk vagy carrierek az energiaszksgletket az ATP-moleklk hidrolzisbl nyerik. A szlltfehrjk a transzportot vgz enzimek, melyek segtsgvel mindig egy irnyba, akr magasabb koncentrci fel is szlltdhatnak molekulk. Klnbz anyagok szlltdhatnak ilyen mdon, pldul a vkonyblben a glkz felszvsa vagy az ideg- s izomsejtek ingerlsi folyamataiban a ntrium- s a kliumionok. A Na+-K+-pumpa az ingerelhet sejtek memrnjban tallhat. Ilyenek az ideg- s izomsejtek. Ezek membrnjn kvl, az extracellulris trben magas a ntriumionok koncentrcija, mg az inracellulris trben a kliumionok koncentrcija magasabb. A membrn a kliumionnal szemben permeabilis, vagyis tjrhat, mg a ntriumionnal szemben szinte teljesen inpermeabilis, vagyis tjrhatatlan. Tudjuk, hogy a ntriumion tmege kisebb, mint a kliumion, de hidratlt llapotban van a ntriumion, ezrt jelentsen megnvekszik nagysga
7

s lnyegesen nehezebben tud tjutni a membrnon. Mgsem ez a magyarzat a koncentrci egyenltlen eloszlsra, mivel ha a sejt elhal, elveszti kliumion tartalmt s a nrtiumionok koncentrcija is kiegyenltdik az extra- s az intracellulris trben. Ezrt kell, hogy legyen egy mechanizmus, mely ltrehozza ezt a koncentrci klnbsget s szablyozza is azt. Ezt a mechanizmust nevezzk Na+-K+-pumpnak. Ez egy idben tvoltja el az l sejt belsejbl a ntriumionokat s vesz fel a krnyezetbl kliumionokat. A intracellulris folyadkban az effektv kliumion-koncentrci 35-szr magasabb, a ntriumion-koncentrcija pedig 20szor kisebb, mint az extracellulris rszben. A szlltfehrje itt a Na+-K+-ATPz. Mivel ez a folyamat energia ignyes, ezrt a tpllkkal felvett energia nagyrsze, amit az ATP trol, itt hasznldik fel (kb. 20-30%-a az aktv transzport folyamatokra hasznldik). Ez a folyamat primr aktv transzport, mivel az ATPz energija kzvetlenl a transzport mechanizmusra hasznldik fel.

2. bra: Na+-K+-pumpa mechanizmusa A Na+ s K+ szintjnek meghatrozsa A ntrium- s kliumionok ktfle mdszerrel mutathatak ki a szrumban: 1. Emisszis lngfotometris eljrssal: Ennl a mdszernl azt hasznljuk ki, hogy ezek az alklifmek megfestik a szntelen lngot. A ntrium srgra, a klium pedig lilra. A mintt propn s leveg keverknek lngjba porlasztjuk. A gerjesztett ionok ltal kibocstott fny thalad a megfelel filtereken, s
8

elektromos energiv alakul a fotocellban. A keletkezett elektromos ramot egy galvanomter mri. A kisugrzott fnyerssg fgg a ionok koncentrcijtl a vizsglt mintban. Az adott felttelek mellett trtnik az ismert (standard) koncentrcij ntrium s klium oldatok mrse. A kapott rtkek szksgesek a minta ntrium s klium koncentrcijnak kiszmtshoz.

1. kp: Lngfotomter IL 463 2. Ionszelektv elektrdkkal: Ma az elektrolitok szintjt, gy a ntriumt s a kliumt is potenciometris eljrsokkal mrik. Meghatrozhat az elektrokmiai potencil klnbsg az vegmembrnos elektrdk s a referencilis elektrdk kztt, amely vltozik a ionok koncentrcijtl fggen a szrumban. Ezen az elven mkdik tbb berendezs is, melyek a ntrium- s kliumionok meghatrozsra szolglnak. Az ilyen analiztoroknl pontosan be kell tartani a gyrt ltal adott utastsokat, hogy a mrsek pontosak legyenek.

2. kp: Olympus AU400 biokmiai analiztor

A Cl- szintjnek meghatrozsa A modern biokmiai analiztorokban a klr meghatrozsa ionszelektv elektrdkkal trtnik. Az eljrs ugyangy zajlik, mint a ntrium- s a kliumionoknl. Azzal a klnbsggel, hogy itt negatv ionrl beszlnk. A mrs az elektrdk kztti potencil klnbsgen alapszik, melybl kvetkeztetni lehet a szrum kloridion koncentrcijra. A glkz vagy vrcukor szerepe s mennyisgnek meghatrozsa A glkz egy monoszacharid. Egszen pontosan egy aldohexz. A glkz egy biolgiailag nagyon fontos vegylet az llnyek szmra. Az l szervezetek energiaforrsknt hasznostjk. Mint a sznhidrtok mindegyiknek, a glkznak is van nylt s zrt sznlnc alakja. A gyrs formban legstabilabb a hattag szk konformcij piranzgyrs alakja. Ilyenkor a molekult glkopiranznak nevezzk. Ezzel a bels reakcival flacetlok kpzdnek. Az 1es sznatomhoz kapcsold hidroxid csoport ktfle helyzetet vehet fel a gyrhz viszonytva. Ezzel ktfle anomer keletkezhet. gy megklnbztetnk - s -glkopiranzt.

3. bra: - s -glkopiranz A sznhidrtok anyagcserje Az sszetett sznhidrtok (poli- s diszacharidok) az emszts folyamn glkzra bomlanak le, s gy szvdnak fel az emsztcsatornbl a vrbe, mely a sejtekhez szlltja a felszvott a glkzt. A glkz lebontsa a citoplazmban jtszdik le. Els szakasza a glikolzis. Ez mg anaerob, majd a biolgiai oxidci kvetkeztben belp a folyamatba az oxign s a keletkezett termk enzim segtsgvel a Krebs-ciklusba kerl, ahol szn-dioxidra s hidrognre bomlik. Majd a hidrogn a terminlis oxidciban vzz oxidldik. A tdbe visszakerlve, a szn-dioxid s a vz killegzsre kerl. Az a nagy mennyisg energia, ami felszabadul s bepl az ATP-be, az az letfolyamatok fenntarsra hasznldik majd el.

10

A fel nem hasznlt glkzt a szervezetnk trolni is tudja glikogn formjban. Ez hasonlt a kemnythz s a funkcija is ugyanaz, tartalk sznhidrt csak pp az llati s az emberi szervezetben. Emiatt llati kemnytnek is szoktk nevezni. Fknt az izmokban illetve a mjban troldik. A glkznak glikognn val talaktst a szervezetben glikogenezisnek nevezzk. Ezt a tartalk tpanyagot hasonlan bontja le szervezetnk, mint a glkzt. A glikognnek elszr le kell bomlania glkz molekulkra ahhoz, hogy belphessen a glkz lebontsi folyamatba. A glkz molekulk egyesvel vlnak le a lncrl, s ez nem ignyel energit, mert azonnal felvesznek egy foszftcsoportot. gy glkz-1-foszft keletkezik, ami enzim hatsra glkz-6-foszftt alakul. Ez mr kpes belpni a lebontsi folyamataba. Glikolzis A glikolzist Louis Pasteur, francia vegysz vizsglta elszr. Ksbb tbb kutatcsoport is foglalkozott ezzel a tmaval. Az 1940-es vekre mr teljesen letisztztk ezt a folyamatot. A folyamat sorn egy molekula glkzbl kt molekula piroszlsav keletkezik oxidci sorn. Ngy hidrognatom vlik ki, melyek kzvetlenl a hidrognszllt koenzimre kerlnek, a NAD+-ra, mely NADH-v redukldik. Oxign jelenltben a piroszlsav tovbb oxidldik, s acetil-koenzim-A keletkezik a folyamat vgn. Az oxidci sorn levlasztott hidrognek ismt a NAD+-ra kerlnek. A sznatom pedig szn-dioxid formjban kilp a folyamatbl. A folyamat kmiai lpsei: 1. a glkz egy molekula ATP felhasznlsval glkz-6-fosztt alakul (hexokinz) 2. a glkz-6-foszftbl fruktz-6-foszft keletkezik (glkz-fruktz-izomerz) 3. a fruktz-6-foszft egy molekula ATP felhasznlsval fruktz-1,6-difoszftt alakul (fruktz-foszft-kinz) 4. a fruktz-1,6-difoszft felbomlik dihidroxi-aceton-foszftra s glicerinaldehid-3foszftra (aldolz) 5. a dihidroxi-aceton-foszft glicerin-aldehid-foszftt alakul (triz-foszft-izomerz)

11

4.1. bra: A glikolzis folyamata I. 6. a glicerin-aldehid-foszft foszforsav felvtele s NAD+ redukcija kzben glicerinsav-1,3-difoszftt oxidldik s NADH keletkezik (glicerinaldehid-3dehidrogenz) 7. a glicerinsav-1,3-difoszft lead egy foszft csoportot s ATP s glicerinsav-3-foszft keletkezik (foszfo-glicert-kinz) 8. a glicerinsav-3-foszft foszftcsoportja thelyezdik s glicerinsav-2-foszft keletkezik (foszfo-glicert-mutz) 9. a glicerinsav-2-foszft veszt egy molekula vizet s foszfo-enol-piroszlsavv alakul (enolz) 10. a foszfo-enol-piroszlsav leadja foszft csoportjt s piroszlsav s ATP keletkezik (piruvt-kinz) Ezt kveti a piroszlsav oxidcija oxign jelenltben:
piruvtdehidrogenz piroszlsav + NAD + KoA
+

acetil-KoA + NADH + H+ + CO2

12

4.2. bra: A glikolzis folyamata II. Citrtkr A citrtkrt tbben is kutattk. Szent-Gyrgyi Albert magyar biokmikus 1937-ben a biolgiai oxidci mechanizmusnak kutatsrt s elrt eredmnyeirt orvosi Nobel-djat kapott. Valamint Hans Albert Krebs nmet szrmazs angol biokmikus az intermedier anyagcsere-kutatsairt 1953-ban Nobel-djat kapott. Ezrt tiszteletkre Szent-GyrgyiKrebs-ciklus nven is nevezik. A glikolzis folyamn keletkezett piroszlsavat a koenzim-A szlltja acetil-KoA-knt a citrtkrbe. Az acetilcsoport levlik a koenzim-A-molekulrl s egy oxlecetsav molekulhoz kapcsoldik. gy citromsav jn ltre. A citromsav tbb lpsen keresztl rszlegesen oxidldik. A levl hidrognatomok a NAD+ illetve FAD molekulkhoz kapcsoldnak, a kt sznatom pedig szn-dioxid formjban tvozik a folyamatbl. A keletkezett ngy sznatomos vegylet jra oxlecetsavv alakul, s indul a folyamat ellrl. A folyamat biokmiai lpsei: 1. az acetil-koenzim-A oxlecetsavval reagl s citromsav keletkezik 2. a citromsav a cisz-akonitsavon keresztl izocitromsavv alakul
13

3. az izocitromsav kt hidrogn leadsval elszr oxlborostynksavv, majd egy molekula szn-dioxid kilpsvel -ketoglutrsavv alakul 4. az -ketoglutrsav szukcinil-koenzim-A-v alakul s szn-dioxid szabadul fel 5. a szukcinil-koenzim-A borostynksavv alakul 6. a borostynksav fumrsavv alakul t, dehidratldik 7. a fumrsav vzfelvtellel almasavv alakul 8. az almasav oxlecetsavv alakul, oxidldik A folyamat lnyege: acetil-KoA + 3NAD+ + FAD + H3PO4 + 2H2O 2CO2 + 3NADH + FADH2 + GTP + KoA

5. bra: A citrtkrben lezalj reakcik

14

Terminlis oxidci A XX. szzadban f szerepet jtszott a biolgiai oxidci folyamatainak tanulmnyozsa a biokmiai kutatsaban. 1910-ben Heinrich Otto Wieland felttelezte, hogy a biolgiai oxidci a hidrognatomok dehidrogenz enzimek ltal trtn aktivlsa. Az ATP kzponti szerept a 30-as vekben fedeztk fel. 1948-ban rjttek, hogy a terminlis oxidci s a hozz kapcsold ATP-szintzis a mitokondriumokban jtszdik le. A reduklt koenzimek, mint szubsztrtok oxidlst egy soklpcss reakcisor vgzi. A dehidrogenz enzimek a szubsztrttl hidrognt vesznek el s redukldnak, az oxidz enzimek pedig a redukldott dehidrogenzok hidrognjeit a lgkri oxignnel vzz alaktjk, mikzben visszaoxidldnak. A folyamatok a mitokondriumok bels nagyfellet membrnjn jtszdnak, s egysges rendszert alkotnak. Fontos szerepe van mg az elektronszllt citokrm enzimlncnak is, melyek a dehidrogenzok s az oxidzok kztt tallhatak. A vrcukorszint meghatrozsa Ma hromfle enzimatikus eljrssal tudjuk meghatrozni a vr cukorszintjt. Ebbl kettt emltek, melyeket ma is alkalmaznak: 1. Glkz-oxidz enzimmel: Ez az eljrs azon alapul, hogy a glkz-oxidz oxidlja a glkzt glkonsavv s kzben hidrogn-peroxid (H2O2) keletkezik: D-glkz + O2 + H2O
GOD

D-glkonsav + H2O2

A keletkezett hidrogn-peroxid a peroxidz mellett valamely elekrton akceptorral oxidlja a szntelen kromognt egy sznes vegylett. A keletkezett sznintemzitst fotometrisan mrik ismert koncentrcij glkz oldathoz viszonytva 550 nm-es hollmhosszon. Ebben az eljrsban a glkz oxidcija specifikus, de a kromogn oxidcija mr nem. Interferlhat az aszkorbinsavval, hgysavval, adrenalinnal, stb., melyek a kromogn helyett oxidldnak, s az eredmnynk alacsonyabb lesz. A vrben ez az interferencia kevsb kifejezett. Viszont vannak ms olyan oxidl szerek, mint a hipoklorit, melyek kpesek oxidlni a kromognt, s sokkal magasabb eredmnyt elidzni.

15

Ezen a fotometris eljrson kvl figyelemmel kvethetjk a glkz oxidcijt mg az oxidcihoz elhasznlt oxign mrsvel specifikus oxign-elektrdk segtsgvel. A keletkezett hidrogn-peroxidot el kell tvoltani a keverkbl. Ezt katalz s etanol, majd molibdt s jodid hozzadsval tudjuk elrni: H2O2 + C2H5OH
+

katalz
-

CH3CHO + 2H2O I2 + 2H2O

H2O2 + 2H + 2I 2. Hexokinz enzimmel:

molibdt

Ez egy ktlpcss mdszer. A f vagy primris reakciban a glkz foszforilldik ATP segtsgvel. Az indiktor reakciban a glkz-6-foszft enzim (hexokinz) segtsgvel oxidldik, mikzben az NAD koenzim redukldik. A 340 nm-es hollmhosszon abszorbci vltozs trtnik, melynek mrtke arnyos a glkz koncentrcijval. D-glkz + ATP hexokinz D-glkz-6-foszft + ADP 6-foszfoglkont + NADH

glkz-6-foszft + NAD G-6-P DH

Ez az eljrs ersen specifikus, mert a reakci a hexokinzzal s a foszforilci is lejtszdhat ms hexzzal is, m a glkz-6-foszft-dehidtogenz csak a glkz-6-foszftot kpes oxidlni. Ezrt ezt az eljrst veszik referencilis eljrsnak a glkz koncentrcijnak meghatrozsra. Ez emellett nagyon rzkeny eljrs. Viszont pontos, gyors, s nagyon szles skln mrhet a koncentrci, a nagyon alacsonytl a nagyon magasig. Nmely gygyszerek, mint a Baralgin, nincsenek kihatssal az eredmnyekre, mg a glkz-oxidzzal trtn reakcikat befolysoljk.

3. kp: Arhitect C8000 biokmiai analiztor

16

Koleszterin szerepe s mennyisgnek meghatrozsa A koleszterin a sztern vzas vegyletek csoportjba tartozik. Az egyszer lipidekhez sorolhat, pontosabban a szteroidokhoz. A szteroidokon bell pedig a szterolok csoportjba tartozik. A sztern vzat ngy gyr alkotja, melyeket A, B, C s D betkkel jellnk. Tartalmaz mg egy nyolc sznatombl ll oldallncot is. sszesen huszonht sznatombl ll.

6. bra: A koleszterin szerkezete Az ember a koleszterint llati eredet tpllk tjn viszi be a szervezetbe, mert a nvnyek nem tartalmazzk. m ezen kvl az ember szervezetn bell is kpes szintetizlni a koleszterint acettbl. A bioszintzis fknt a mjban trtnik (napi 1,5 g), de kisebb mennyisgben (napi 0,5 g) trtnhet pldul a brben, a blfalban, az aorta falban, stb. Az enzimek, melyek rszt vesznek a szintzisben, vzben oldd citoplazmatikus s mikroszomlis enzimek. Szervezetnk szmra nagyon jelents szerves molekula. A sejtfal s a sejtszervecskk membrnjnak szerkezeti eleme. Nagyon fontos az j sejtek keletkezshez, majd az elhalt sejtek ptlshoz. Ezen kvl a szervezetnkben hormonok, szteroid hormonok is kpzdnek a koleszterinbl. Ilyen hormonok pldul az sztrognek, az andrognek, a kortizol s az aldoszteron. A hormonokon kvl a D3-vitamin valamin s az epesavak keletkezsnek kiindul molekulja.

17

7. bra: A koleszterinbl kpzd vegyletek szervezetnkben Koleszterin a vrben A keringsben nagyjbl 60-80% koleszrein van szter formjban. A vrben a koleszterin kapcsoldik a lipoproteinekhez, legtbbszr a -lipoproteinekhez. Koncentrcija a szrumbn tbb tnyeztl is fgg. Az sztrogn hormonok felerstik a koleszterin szintzist, de ugyanakkor elsegti a kivlasztst, gy cskkenti a koleszterin koncentrcijt a szrumban. Ez az oka annak, hogy a nknl tlagban alacsonyabb a koleszterin szint a menopauzig. A tiroxin az ltalnos hatsval a metabolizmusra cskkenti a koleszterin szintjt. Ezrt a tiroxin s a koleszterin koncentrcija fordtott arnyban van. Megklnbztetnk ktfle koleszterint a szervezetben. gymond rossz koleszterin az LDL-koleszterin, a j koleszterin pedig a HDL-koleszterin. Mg az LDL-koleszterin kros a szervezetre, mert rszkletet okoz lerakdva az erek falra, addig a HDL-koleszterin pp az ellenkezje. Vdi az erek falt a lerakd zsrrtegtl megszabadtja, s visszajuttatja a mjba. Ezrt fontos, hogy a HDL-szint magas legyen s az LDL-szint minnl alacsonyabb. A szrumban lv koleszterinbl nagyjbl 20% a HDL-koleszterin.

18

8. bra: Az LDL- s HDL-koleszterin j arnya s munkja A koleszterinszint mehatrozsa A koleszterinszint meghatrozsra enzimes eljrst alkalmaznak, mely els zben 1972-ben adott pontos kpet a koleszterinszint mrsnek problmjban. Elszr a koleszterin szterei hidrolizlnak s a koleszterin oxidldik koleszterin-oxidz vagy dehidrogenz enzim segtsgvel. Ksbb az eljrs az koleszterin szter hidrolzisn alapszik, melyben szabad koleszterin s zsrsav keletkezik. gy az sszes koleszterin szabad llaptba kerl. A koleszterin tovbb reagl oxignnel egy enzimatikus reakciban, melyet a koleszterol-oxidz katalizl s -4-kolesztern-3-on s hidrogn-peroxid keletkezik:

koleszterinszterz
+ H2O
O R-CO HO

+ R-CCOH

koleszterin szter

koleszterin

zsrsav

koleszterinoxidz
+O2
HO O

+H2O2

koleszterin

-4-kolesztern-3-on

19

A fent lert reakcik minden enzimatikus eljrsnl azonosak, a klnbsg az egyes eljrsoknl csak a keletkezett termkek fotometris mrsi mdjban van. Tbbflekpp mrhetjk a keletkezett anyagok koncentrcijt, s kvetkeztethetnk a koleszterin koncentrcijra. A leginkbb alkalmazott eljrsban peroxidz enzimet hasznlnak, hogy a hidrogn-peroxid oxidlja a 4-aminofenazont a fenollal, s 4-fenazon kelezkezik:
OH

H2O2

+
H3 C N H3 C N O

peroxidz

+
H3 C N N O

3H 2O

NH2

H3 C

4-aminofenazon

fenol

4-fenazon

A inkubci 15 percig tart s a reakci lineris egszen 13 mmol/l koleszterin koncentrciig. Az abszorbcit 500-550 nm kztt mrik. Hasonlan, mint a glkznl az aszkorbinsav zavarja a reakcit, s cskkenti a koncentrci rtkt. Hemoglobin szerepe s mennyisgnek meghatrozsa A hemoglobin a gerincesek vrben tallhat vas tartalm metalloprotein. Az embernl a hemoglobin ngy alegysgbl ll. Mind a ngyet egy globulris fehrjersz s egy nemfehrjersz, a vastartalm hem alkotja. Ez a molekula szlltja az oxignt tdnktl a sejtekig, illetve a szn-dioxidot a sejtektl a tdnkig. Attl fggen, hogy oxign vagy szn-dioxid kapcsoldik hozz, megklnbztetnk oxi- s deoxi-hemoglobint. A hemoglobin az eritrocitkban tallhat elraktrozva. A vrsvrtestek szrazanyagtartalmnak krlbell 97%-t teszi ki. Az emberi szervezetben legelterjedtebb a hemoglobinA. Ez kt s kt alegysget tartalmaz. Az alegysgek 141 s 146 aminosavbl plnek fel. sszettele 22. A lncokat ionos ktsek, hidrognhidak s hidrofb klcsnhatsok tartjk ssze. A lncok molekulatmege kln kln 17000 dalton krli. A tetramer ssz molekulatmege pedig 68000 dalton krli.

20

9. bra: A hemoglobin a vrsvrtestekben; Felptse A hem A hem a hemoglobin festkanyaga. A ktrtk vasionoktl kapja jellegzetes piros sznt. A hem molekult ngy pirolgyr alkotja, amelyek metenil-hidakkal kapcsoldnak egymshoz. gy alakul ki a porfirin vz. Ezrt nevezzk mg a hemet ferro-protoporfirinnek is. A pirolgyrk nitrognatomjaihoz kapcsoldik a ktrtk vas. Kettvel kovalens ktst alakt ki. Ha globin kapcsoldik hozz, akkor ltrehozzk a hemoglobint. A hem szintzisre kpes minden sejt, m nagy mennyisgben a vrscsontvel s a mj lltja el. A szintzis a sejt mitokondriumban kezddik a szukcinil-koenzim-A s a glicin kondenzcijval. gy -aminolevulinsav keletkezik. Ez a vegylet tovbbalakul porfobilinognn. Innentl a szintzis mr a citoplazmban folytatdik. Ngy molekula porfobilinognbl lineris tetrapirrol jn ltre. Enzimek segtsgvel zrdik a molekula, s oxidcikkal protoporfirin keletkezik. Ebbe enzim pti be a ktrtk vasiont. Ez a zrlps ismt a mitokondriumokban jtszdik le.

21

10. bra: A hem szerkezete Oxi- s deoxi-hemoglobin A vrben ktfle hemoglobint klnbztethetnk meg. Azt amelyik oxignt szllt s amelyik mr leadta a sejteknek oxignjt. Az oxignt szllt hemoglobin lnkpiros szn, s az artrikban tallhat. A tdben veszi fel az oxignt s ott adja le, ahol a sejteknek szksgk van r. Ekkor deoxi-hemoglobinn vlik. Ez stt vrs szn, s a vnkban tallhat. jra a tdbe jutva, felveszi az oxignt s oxi-hemoglobinn alakul.

11. bra: Oxign felhasznls; Az oxi-hemoglobin szerkezete A hemoglobinszint meghatrozsa A hemoglobin koncentrcijnak kimutatsra cinmethemoglobinos eljrst alkalmaznak. A mdszer alapelve, hogy a klium-ferricianid oxidlja a hemoglobint hemiglobinn, ami a klium-cianiddal hemiglobin-cianidot alkot. A keletkezett szn intenzitst fotometrisan mrik 546 nm-es hullmhosszon. Ezt az rtket hasonltjk egy ismert koncentrcij standardhoz viszonytva.

22

Ma a hemoglobin koncentrci meghatrozsa automata sejtszmllkban trtnik. Elszr a gp elvgzi a hemolzist a megfelel reagenssel, amely feoldja a vrsvrtesteket. gy felszabadul a hemoglobin, melynek mrse cinmethemoglobinos eljrssal trtnik a fent lert mdon.

4. kp: Sejtszmll berendezs CELL DYN 1700 Mirt is fontosak ezek a mrsek? Milyen betegsgek elzhetek meg, s ismerhetek fel idben a vizsglatokkal? A vr vizsglatnak fontossga sokak szmra mg nem elgg jelents. Sok ember hiszi azt, hogy csak a klnfle bakterilis s vrusos fertzsek, a koleszterin, a vrcukor s a vrszegnysg kimutatsra alkalmas. Pedig ezekkel az anlzesekkel tbb betegsg megelzhet, idejben felismerhet, diagnosztizlhat s az alkalmazott terpia hatkonysga is kvethet. Nemcsak az kros szervezetnkre, ha egyes anyagok szintje tl magas, hanem az is, ha tl alacsony. A kvetkez tblzatban bemutatom, hogy az ltalam mrt paramterek alacsony vagy magas szintje mely betegsgekre utal. Illetve mellkletknt csatolok egy-egy vizsglati eredmnyt a referencia tertomnyban, az alatt s az felett minden ltalam vizsglt paramternl.

23

Vizsglt anyagok, vegyletek

Cskkent szint hyponartaemia: acidosis, Addison-kr, hypothermia, pneumonia, mjcyrrosis, stb. hypokalaemia: blelzrds, Cushingsyndroma, ACTH-adagols, hyperthyreosis, stb. hypochloraemia: hnys, izzads sbevitel nlkl, diabeteses ketosis, hypothermia, pneumonia, stb. hypoglykaemia: szigetsejttumorok, insulin tladagols, Dumpingsyndroma, Addison-kr, stb. hypocholesterinaemia: mj-cyrrhosis, mj-necrosis, slyos sepsis, Kwashior-kr, anaemik, stb. polyglobulia, polycythaemia, hypophysis hyperfunctio, stb.

Referencia tartomny(mmol/l)

Emelkedett szint hypernatraemia: dehidratci, cardinlis v. renalis oedema,, stb. hyperkalaemia: haemolysis, anuria, Crush-syndroma, Addison-kr, diabeteses ketosis, stb. hyperchloraemia: dehidratci, hypothalamus srls, hypochloraemis acidosis, stb. hyperglykaemia: Cushingsyndroma, gigantizmus, acromegalia, pancreatitis, B1vitamin hiny, shock, gsek, stb. hypercholesterinaemia: hepatitisek, epet elzrds, nephritis, pancreatitis utn, insulin hiny, stb. az anaemik minden fajtja

Ntrium

135-147

Klium

3,5-5,2

Klr

98-108

Glkz

3,9-6,1

Koleszterin

3,33-5,20

Hemoglobin

8,7-11,2 (ffi) 7,5-10,0 (n)*

*A hemoglobint ltalban g/l-ben szoks feltntetni. A tblzatban mmol/l-ben van. A mellkelt eredmnyek viszont g/l-ben. A referencia tartomnya teht: 130-170 g/l (ffi), 120-160 g/l (n).

24

Felhasznlt irodalom:

1. Boidar traus: Medicinska biokemija, JUMENA, Zagreb, 1988. 2. P. Karlson: Biokmia, Medicina Knyvkiad, Budapest, 1972. 3. Eldi Pl: Biokmia, Akadmiai Kiad, Budapest, 1981. 4. Goreneczky Lszl-Ss Jzsef: Klinikai kmiai-laboratriumi zsebknyv, Medicina Knyvkiad, Budapest, 1976. 5. Dr. Gyre gnes: Biokmia, Magyar Testnevelsi Egyetem, Budapest, 1992. 6. Dr. Hiller-Kolarov Valria-Wber Zita: Biokmia II., Atlantis, jvidk, 2000. 7. Fazekas Gyrgy-Szernyi Tibor: Biolgia I. molekulk, llnyek, letmkdsek, SCOLAR Kiad, Budapest, 2002. 8. Gl Bla: Biolgia 11. A sejt s az ember bilgija, MOZAIK Kiad, Szeged, 2004. 9. Vojislav Petrovi-Mira Pai-Ljubinka ulafi-Gordana Cviji: Biolgia a gimnziumok III. osztlya szmra, Zavod za udbenike i nastavna sredstva, Belgrd, 1998.

25