LAPORAN PRAKTEK KERJA LAPANGAN

di RUANG MIKROBIOLOGI LABORATORIUM PATOLOGI KLINIK RSUD A. WAHAB SJAHRANIE SAMARINDA

Disusun oleh : Nama Bayu Heriyanto Tommy Akbar NIM 09.0213.17.03 09.0223.27.03

PROGRAM STUDI D-III ANALIS KESEHATAN SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN WIYATA HUSADA SAMARINDA 2012

KATA PENGANTAR

Segala puji syukur penulis panjatkan ke hadirat Allah SWT atas rahmat dan hidayah-Nya sehingga tugas penyusunan laporan praktek kerja lapangan ini yang membahas tentang pemeriksaan Mikrobiologi Laboratorium Patologi Klinik Rumah Sakit Umum Daerah A. Wahab Sjahranie Samarinda. dapat diselesaikan. Laporan praktek kerja lapangan ini terwujud atas bimbingan, pengarahan dan bantuan dari dr. Loly R.D. Siagian, M.Kes, Sp.PK selaku Wakil Kepala Laboratorium Patologi Klinik, dan Ibu Huzaimah,S.KM selaku Kapala Ruangan Unit Mikrobiologi yang telah membimbing dan membantu dalam penyusunan dan penyelesaian laporan praktek kerja lapangan. Berbagai pihak yang tidak dapat disebutkan satu persatu dan pada kesempatan ini penulis menyampaikan penghargaan dan terima kasih kepada: 1. dr Aji Syirafudin selaku Direktur RSUD Abdul Wahan Sjahranie Samarinda 2. dr. Lily Pertiwi Kalalo, Sp.PK selaku Kepala Laboratorium Patologi Klinik RSUD Abdul Wahan Sjahranie Samarinda 3. Bapak Agus Joko Praptomo, S.Si selaku sebagai Ketua Prodi Analis Kesehatan STIKES WHS 4. Seluruh staf Laboratorium Patologi Klinik RSUD Abdul Wahab Sjahranie Samarinda, yang telah terlibat dalam penyusunan dan penyelesaian laporan resmi Praktek Kerja Lapangan ini. 5. Seluruh staf dan Dosen STIKES Wiyata Husada Samarinda yang telah terlibat dalam penyusunan dan penyelesaian Karya Tulis ilmiah ini. 6. Orang Tua dan Keluarga tercinta yang telah memberikan bantuan berupa moral maupun materil. 7. Yang terakhir ucapan terima kasih penulis sampaikan kepada semua teman-teman yang telah membantu dan memberikan dukungan dalam menyusun dan menyelesaikan Karya Tulis ilmiah ini.

ii

Penulis menyadari bahwa laporan resmi Praktek Kerja Lapangan ini masih jauh dari sempurna sehingga kritik dan saran yang membangun sangat penulis harapkan demi kelanjutannya kedepan. Semoga usulan penelitian Karya Tulis ilmiah ini menjadi bahan pertimbangan untuk kelanjutannya.

Samarinda 20 April 2012

Penulis

iii

LEMBAR PENGESAHAN LAPORAN PRAKTEK KERJA LAPANGAN DI RSUD A.W SJAHRANIE SAMARINDA

Disusun oleh : Nama Bayu Heriyanto Tommy Akbar NIM 09.0213.17.03 09.0223.27.03

Telah disahkan pada tanggal 20 April 2012 Samarinda, 20 April 2012 Mengetahui, Dosen Pembimbing

dr. Loly R.D. Siagian,M.Kes,Sp.PK NIP. 19700621 200212 2 001 Kepala Ruangan Unit Mikrobiologi RSUD A.W Sjahranie Kepala Laboratorium Patologi Klinik RSUD A.W Sjahranie

Huzaimah, S.KM NIP. 19700727 199002 2 002

dr. Lily Pertiwi Kalalo, Sp.PK NIP. 19681028 200001 2 001

Ketua Program Studi Analis Kesehatan

Agus Joko Praptomo, S.Si

iv

NIDN. 113072 68 10 019 DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ............................................................................................. i HALAMAN PENGESAHAN ................................................................................. ii KATA PENGANTAR .......................................................................................... iii DAFTAR ISI ...................................................................................................... v DAFTAR TABEL ............................................................................................... vii DAFTAR GAMBAR ..........................................................................................viii DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................ ix DAFTAR SINGKATAN ........................................................................................ x BAB I PENDAHULUAN ...................................................................................... 1 1.1 Latar Belakang ...............................................................................1 1.2 Dasar Hukum .................................................................................2 1.3 Tujuan............................................................................................2 1.4 Manfaat .........................................................................................3 BAB II TINJAUAN PUSTAKA .............................................................................. 4 2.1 Profil RSUD A. Wahab Sjahranie .........................................................4 2.2.1 Fasilitas Pengolah Limbah .......................................................5 2.2.2 Visi dan Misi ............................................................................5 2.2.3 Motto ......................................................................................5 2.2.4 Laboratorium Palogi Klinik RSUD A. Wahab Sjahranie ...........6 2.2.5 Visi dan Misi ............................................................................6 2.2.6 Tujuan......................................................................................6 2.2.7 Karyawan Laboratorium Palogi Klinik RSUD A. Wahab Sjahranie .................................................................................6 2.3 Laboratorium Mikrobiologi ...............................................................7 2.4 Alur Pelayanan Pemeriksaan Pasien .................................................7 2.4.1 Rawat Jalan .............................................................................7 v

2.4.2 Rawat Inap ..............................................................................8

BAB III RUANG LINGKUP MIKROBIOLOGI .......................................................... 9 3.1 Definisi Mikrobiologi ...........................................................................9 3.2 Jenis Pemeriksaan ...............................................................................9 3.3 Alat dan Bahan ..................................................................................10 3.3.1 Alat-alat .................................................................................10 3.3.2 Bahan-bahan .........................................................................11 3.4 Cara Pengambilan Sampel Mikrobiologi ...........................................12 3.4.1 Urine ......................................................................................12 3.4.2 Darah .....................................................................................13 3.4.3 Feases ....................................................................................14 3.4.4 Cairan Lambung ....................................................................14 3.4.5 Spesimen Kulit dan Jaringan Ikat ..........................................15 3.4.6 Spesimen Uretra dan Penis ...................................................16 3.4.7 Spesimen Servik ....................................................................16 3.4.8 Spesimen Tenggorok .............................................................17 3.4.9 Cairan Otak............................................................................17 BAB IV METODE KERJA................................................................................... 19 4.1 Tempat dan Waktu.....................................................................................19 4.1.1 Tempat ...........................................................................................19 4.1.2 Waktu .............................................................................................19 4.2 Cara Kerja Menurut Standar Pelayanan Laboratorium Klinik RSUD A.

Wahab Sjahranie Samarinda ......................................................................19 4.2.1 Pewarnaan BTA (Bakteri Tahan Asam) ..........................................19 4.2.2 Pewarnaan Gram............................................................................21 4.2.3 Semen Analisa ................................................................................22 4.2.4 Pembuatan Media Citrat ................................................................24 vi

4.2.5 Pembuatan Media Gula-Gula Sakarosa, Glukosa, Maltosa, Laktosa, dan Mannosa..................................................................................25 4.2.6 Pembuatan Media KIA (Kigler Iron Agar) .......................................27 4.2.7 Pembuatan Media Lysin .................................................................28 4.2.8 Pembuatan Media MRVP (Metil red Vouges Pioskaner) ...............29 4.2.9 Pembuatan Media Urea .................................................................30 4.2.10 Pembuatan Media Salmonella Shigella Agar (GAAL) .....................31 4.2.11 Pembuatan Media BPA (Blood Plate Agar) ....................................32 4.2.12 Pembuatan Media Cled Agar .........................................................33 4.2.13 Pembuatan Media Anaerob Thioglycolate ....................................34 4.2.14 Pembuatan Media MH (Mueller Hinton) .......................................35 4.2.15 Pembuatan Media MC Conkey ......................................................36 4.2.16 Pembuatan Media EMB (Eosin Methylen Blue) .............................37 4.2.17 Pembuatan Media Pepton .............................................................38 4.2.18 Pembuatan Media BHI (Brain Heart Infusion) ..............................39 4.2.19 Kultur Gaal......................................................................................40 4.2.20 Kultur Darah ...................................................................................42 4.2.21 Kultur Urine ....................................................................................43 BAB V PEMBAHASAN ..................................................................................... 46 5.1 Pewarnaan Gram..................................................................................46 5.1.1 Tujuan.................................................................................46 5.1.2 Prinsip.................................................................................46 5.1.3 Dasar Teori .........................................................................47 5.2 Pewarnaan Ziehl Neelsen .....................................................................50 5.2.1 Tujuan.................................................................................50 5.2.2 Prinsip.................................................................................50 5.2.3 Dasar Teori .........................................................................51 5.3 Pewarnaan Neisser...............................................................................56 5.3.1 Tujuan.................................................................................56

vii

5.3.2 Prinsip.................................................................................56 5.3.3 Dasar Teori .........................................................................56 BAB VI PENUTUP ........................................................................................... 59 4.1 Kesimpulan ..........................................................................................59 4.2 Saran ....................................................................................................60 DAFTAR PUSTAKA LAMPIRA DAFTAR TABEL

Tabel 5.1 Komposisi Ziehl Neelsen, Kinyoun Gabbet dan Auramine Phenol Untuk pewarnaan Bakeri Tahan Asam ..................................................................53 Tabel 5.2 Nilai sensitivitas, spesifitas, prediksi positif dan prediksi negatif 3 macam pewarnaan basil tahan asam . ....................................................................54

viii

DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Alur pelayanan pemeriksaan pasien rawat jalan ..................................7 Gambar 2.2 Alur pelayanan pemeriksaan pasien rawat inap ...................................8 Gambar 5.1 Cara pewarnaan Gram ........................................................................48 Gambar 5.2 Interpretasi hasil pewarnaan Gram .....................................................48 Gambar 5.3 Interpretasi hasil pewarnaan Zeihl Neelsen .......................................54 Gambar 5.4 Interpretasi hasil pewarnaan Neisser ..................................................56 Gambar 5.5 Corynebacterium diphtheriae ............................................................57

ix

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1 Tata Tertib ..........................................................................................62 Lampiran 2 Struktur Organisasi ............................................................................63 Lampiran 3 Alur pelayanan pemeriksaan pasien rawat jalan.................................64 Lampiran 4 Alur pelayanan pemeriksaan pasien rawat jalan IGD/MCU ..............65 Lampiran 5 Alur pelayanan pemeriksaan pasien rawat inap .................................66

DAFTAR SINGKATAN

ISTILAH BAP BHI BPA BTA EMB KIA MH MRVP pH PKL : : : : : : : : : : Blood Agar Plate Brain Heart Infusion Blood Plate Agar Bakteri Tahan Asam Eosin Methylen Blue Kigler Iron Agar Mueller Hinton Metil Red Vouges Pioskaner Potensial Hidrogen Praktek Kerja Lapangan

SATUAN UKUR gr L : : :
o

Gram Liter Mikroliter Derajat Celcius Milliliter

: :

ml

xi

BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang Praktek Kerja Lapangan ini merupakan salah satu kurikulum wajib yang harus ditempuh mahasiswa Analis Kesehatan Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Wiyata Husada Samarinda, dimana salah satu point yang harus dijalani adalah praktek secara langsung pada sebuah instansi baik itu instansi pemerintah maupun swasta. Diharapkan pada saat mengikuti Praktek Kerja Lapangan ini mahasiswa mampu melihat secara langsung segala hal yang terjadi di dunia kerja secara nyata dan membandingkan dengan semua teori yang telah diterima di bangku perkuliahan Selama proses pelaksanaan Praktek Kerja Lapangan, siswa dituntut untuk mampu menyerap ilmu secara langsung dan menganalisa segala permasalahan dan kendala yang terjadi di tempat Praktek Kerja Lapangan. Diharapkan dengan adanya Praktek Kerja Lapangan ( PKL ) ini dapat meningkatkan potensi serta mempersiapkan diri untuk mampu berkompetisi dan lebih siap serta matang berperan sebagai tenaga analis kesehatan dengan menerapkan kode etik seorang analis kesehatan. Sebelumnya Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan (STIKES) Wiyata Husada telah melakukan Praktek Belajar Klinik (PBK) dibeberapa instansi yaitu Puskesmas pada PBK I dan Rumah Sakit tipe C pada PBK II. Pada PKL kali ini dilanjutkan pada Rumah Sakit Tipe B dan RSUD A. Wahab Sjahranie merupakan Rumah Sakit Tipe B. Dengan adanya kerja sama dengan pihak Rumah Sakit A. Wahab Sjahranie selaku penyedia sarana dan prasarana, yang telah mengijinkan mahasiswa atau memperbolehkan mahasiswa untuk melaksanakan Praktek Kerja Lapangan di Rumah Sakit A. Wahab Sjahranie, khusunya diinstalasi Patologi Klinik, dimana patologi klini di Rumah Sakit A. Wahab Sjahranie terbagi beberapa laboratorium yaitu (1) Hematologi, (2) Kimia Klinik, (3) Urinalisa, (4) Mikrobiologi, dan (5) Immunologi-serologi.

Praktek Kerja Lapangan yang dimulai pada tanggal 13 Februari 2012 sampai dengan 08 April 2012, dimana setiap mahasiswa sudah mendapatkan pembagian pokok pembahasan laboratorium yang dibahas yang sudah ditetapkan sebagai laporan resmi dari laboratorium dari intalasi patologi klinik. Pada laporan resmi ini, pokok pembahasannya tentang laboratorium Mikrobiologi.

1.2 Dasar Hukum 1. Surat Keputusan MenKes RI No. 0844/SJ/Diknakes/VII/1986 tanggal 18 Juni 1986, tentang pelaksanaan Praktek Kerja Lapangan Pendidikan Tenaga Kesehatan di Unit Pelayanan Kesehatan. 2. Surat Keputusan MenKes RI No. MK. 02.02.3.1.0467A tanggal 14 Februari 1997, tentang pedoman hukum penyelenggaraan Diploma III Kesehatan di Lingkungan Departemen Kesehatan RI. 3. Surat Keputusan MenKes RI No. MK. 00.06.1.1.A.582 tanggal 17 Februari 1998, tentang Kurikulum Nasional Pendidikan Diploma III Analis Kesehatan.

1.3 Tujuan 1.3.1 Tujuan Umum

Mendapatkan gambaran mengenai pelaksaanaan berbagai pemeriksaan yang tersedia Rumah Sakit A. Wahab Sjahranie Samarinda di unit Mikrobiologi. 1.3.2 Tujuan Khusus Memahami lebih jauh konsep-konsep dan pengetahuan ilmu

mikrobiologi, serta melatih ketrampilan klinik dan prosedur klinik, serta melatih kompetensi seorang analis kesehatan.

1.4 Manfaat 1.4.1 Manfaat Bagi Mahasiswa 1. Dapat memperoleh gambaran dunia kerja yang nantinya berguna bagi mahasiswa yang bersangkutan apabila telah menyelesaikan perkuliahannya, sehingga dapat menyesuaikan diri dengan dunia kerja. 2. Dapat mengaplikasikan ilmu dan keterampilan yang telah diperoleh pada masa kuliah dan menambah wawasan serta pengalaman. 1.4.2. Manfaat Bagi Akademik 1. Dapat meningkatkan kerjasama antara lembaga pendidikan khususnya Akademik dengan Instansi. 2. Dapat mempromosikan keberadaan akademik di tengah-tengah dunia kerja khususnya Rumah Sakit A. Wahab Sjahranie Samarinda sehingga dapat mengantisipasi kebutuhan dunia kerja akan tenaga kerja yang profesional dan kompeten di bidang masing-masing. 1.4.3. Manfaat Bagi Instansi 1. Dapat meningkatkan kerjasama antara akademik dengan

Instansi/Lembaga. 2. Membantu Instansi/Lembaga dalam menyelesaikan tugas seharihari selama Praktek Kerja Lapangan (PKL).

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Profil RSUD A. Wahab Sjahranie Rumah Sakit Umum Daerah A.Wahab Sjahranie terletak di jalan Palang Merah Indonesia , Kecamatan Samarinda Ulu & Rumah Sakit Umum Daerah A.Wahab Sjahranie sebagai TOP REFERAL, dan sebagai Rumah Sakit Kelas B berlangsung sejak tahun 1993 atas dasar SK.Menkes

No.116/Menkes/SK/XIII/1993 yang ditetapkan di Jakarta pada tanggal 15 Desember 1993 (Profil RSUD A.W Sjahranie, 2011). RSUD Abdul Wahab Sjahranie dibangun pada tahun 1933, kepunyaan Kerajaan Kutai ( Landschap = Kerajaan) sehingga diberi nama Landschap Hospital. Terletak di Jiliana atau Emma Straat ( Sekarang bernama Jl. Gurami ) (Profil RSUD A.W Sjahranie, 2011). Sesuai dengan tuntutan perkembangan kebutuhan RSU kemudian

dipindahkan dari Selili ke Jl. Dr. Soetomo dan diresmikan penggunaanya oleh Gubernur KDH Tk. I Propinsi Kalimantan Timur Bapak A.Wahab Sjahranie (alm) pada 12 Nopember 1977, untuk rawat jalan. RSU Segiri merupakan penyempurnaan dan pengembangan Rumah sakit Umum lama yang berlokasi di daerah Selili (saat ini menjadi Rumah Sakit Islam Samarinda). Nama Rumah sakit Umum Daerah A.Wahab Sjahranie diresmikan pada tahun 1987, untuk mengenang jasa Bapak A.Wahab Sjahranie (alm) Gubernur KDH Tk. I Propinsi Kalimantan Timur periode 1968 1975. Pada bulan 21 Juli 1984 seluruh pelayanan rawat inap dan rawat jalan dipindahkan di lokasi Rumah sakit Umum baru yang terletak saat ini Jl. Palang Merah Indonesia. Dari data yang dapat dihimpun para pemimpin rumah sakit sejak jaman penjajahan hingga sekarang adalah sebagai berikut (Profil RSUD A.W Sjahranie, 2011) 1. Dr. Gobler 1933 - 1935 2. Dr. Hoffan 1935 1938 3. Dr. R. Soewardji P. 1938 1942 4. Dr. Abdul Rivai 1948 1951

5. Dr. Avell Lemand 1951 1954 6. Dr. L. Indoff 1954 1957 7. Dr. Soemantoro 1957 1957 8. Dr. Chan Bun Liang 1960 -1966 9. Dr. Waluyanto Hadisusilo 1966 1971 10. Dr. H. Thamrinsyam 1971 1979 11. Dr. H. Sofyan Agus 1979 1985 12. Dr. H. Rawindra Soekardi, Sp. THT. 1985 1989 13. Dr. T.M. Sinaga, MPH. 1989 1995 14. Dr. H. Jusuf SK. 1995 1998 15. Dr. H. Jusuf Enany, Sp. JP 1998 2001 16. Dr. H. Awang Joenani 2001 - 2006 17. Dr. H. Ajie Syirafuddin M. MR. 2006 - Sekarang

2.1.1 Fasilitas Pengolah Limbah (Profil RSUD A.W Sjahranie, 2011). - Instalasi pengolah limbah cair - Incenerator (pembakar sampah padat) 2.1.2 Visi dan Misi (Profil RSUD A.W Sjahranie, 2011). A. Visi Menjadi Rumah Sakit Rujukan Pelayanan Kesehatan, Pendidikan dan Penelitian Terbaik di Kalimantan B. Misi Menyiapkan dan mengembangkan sumber daya manusia,

Melengkapi sarana dan prasarana, Memberikan pelayanan prima, Meningkatkan kesejahtraan pegawai. 2.1.3 Motto BAKTI (Bersih, Aman, Kualitas, Tertib, dan Informatif)

2.2 Laboratorium Patologi Klinik RSUD A. Wahab Sjahranie Laboratorium klinik atau laboratorium medis ialah laboratorium di mana berbagai macam tes dilakukan pada spesimen biologis untuk mendapatkan informasi tentang kesehatan pasien (SOP, 2009) 2.2.1 Visi dan Misi (SOP, 2009) A. Visi Pelayanan Instalasi Laboratorium Patologi Klinik RSUD.A.Wahab Sjahranie Samarinda adalah Bermutu, Bermanfaat dan Berdaya saing tinggi. B. Misi Instalasi Laboratorium Patologi Klinik RSUD.AWS Samarinda adalah Memberikan pelayanan laboratorium klinik secara

professional ; Meningkatkan pelayanan laboratorium sesuai dengan kemajuan Ilmu Pengetahuan & Tehnologi Kedokteran

(IPTEKDOK) bidang laboratorium. 2.2.2 Tujuan (SOP, 2009). Instalasi Laboratorium Patologi Klinik RSUD.A.Wahab Sjahranie Samarinda adalah Tujuan Umum Tujuan Khusus : : Meningkatkan mutu pemeriksaan laboratorium Meningkatkan kinerja sumber daya manusia di laboratorium ; Mengoptimalkan pemeriksaan secara efektif dan efisien ; Meningkatkan mutu peralatan laboratorium ; Membantu Menegakkan Diagnosa Klinisi.

2.2.3

Karyawan

Laboratorium

Patologi

Klinik

RSUD.A.Wahab

Sjahranie (SOP, 2009). Karyawan Laboratorium Patologi Klinik RSUD.A.Wahab Sjahranie berjumlah 37 orang, belum termasuk 2 orang dokter dan pegawai tambahan 8 orang dari laboratorium Bank Darah.

2.3 Laboratorium Mikrobiologi Mikrobiologi Klinik adalah suatu cabang Ilmu Kedokteran Medik yang memanfaatkan kompentensi di bidang Kedokteran Umum dan Mikrobiologi Kedokteran untuk bersama-sama klinisi terkait melaksanakan tindakan surveilans, pencegahan dan pengobatan penyakit infeksi serta secara aktif melaksanakan tindakan pengendalian infeksi di lingkungan rumah sakit, fasilitas pelayananan kesehatan lain maupun masyarakat (Wahjono, 2007).

2.4 Alur Pelayanan Pemeriksaan Pasien 2.4.1 Rawat Jalan

Alur pelayanan pemeriksaan pasien untuk pasien rawat jalan di RSUD.A.Wahab Sjahranie, yang tertera gambar 2.1 dibawah ini

Pasien Poli / RS Luar

1
Administrasi Laboratorium Rawat Jalan

2
Loket pembayaran

4
Ruang Sampling

5
Laboratorium Mikrobiologi

6
Pengeluaran Hasil Keterangan : : Tanda Masuk Tanda Kembali

Gambar 2.1 Alur pelayanan pemeriksaan pasien rawat jalan

2.4.2

Rawat Inap

Alur pelayanan pemeriksaan pasien untuk pasien rawat inap di RSUD.A.Wahab Sjahranie, yang tertera gambar 2.1 dibawah ini

Instalasi Laboratorium

1
Ruang Pasien Rawat Inap

Administrasi Laboratorium Rawat Inap

3 5
Laboratorium Mikrobiologi

4
Pengeluaran Hasil

Keterangan : : Tanda Masuk Tanda Kembali

Gambar 2.2 Alur pelayanan pemeriksaan pasien rawat inap

BAB III RUANG LINGKUP MIKROBIOLOGI

3.1 Definisi Mikrobiologi Mikrobiologi ialah ilmu pengetahuan tentang perikehidupan mahluk-mahluk kecil yang hanya kelihatan dengan mikroskop ( bahasa Yunani: mikros = kecil, bios= hidup, logos= kata atau ilmu). Mahluk-mahluk kecil itu disebut mikroba atau jasad renik (Wahjono, 2007). Mikrobiologi mencakup pengetahuan tentang virus (virology), pengetahuan tentang bakteri (bacteriology), dan pengetahuan tentang jamur (mycology). Pada beberapa abad yang lalu di tanah jawa dikenal istilah pageblug, yang berarti adanya suatu wabah penyakit yang melanda disuatu daerah yang disebabkan oleh mahluk-mahluk halus yang marah kepada penduduk sehingga banyak yang meninggal (Wahjono, 2007).

3.2 Jenis Pemeriksaan Jenis-jenis pelayanan yang dapat dilakukan di Instalasi Laboratorium Patologi Klinik, Unit Mikrobiologi menurut Standar Pelayanan Laboratorium Klinik RSUD A.W Sjahranie Samarinda Tahun 2009 A. Pewarnaan yang terdapat di unit Mikrobiologi yaitu : 1) Pewarnaan Gram 2) Pewarnaan Zeihl-Neelsen 3) Pewarnaan Neisser B. Pemeriksaan yang terdapat di unit Mikrobiologi yaitu: 1) Sediaan langsung (Pemeriksaan secara langsung yang tidak dilakukan perlakuan khusus) 2) Kultur (Darah, Pus, Cairan, Sekret, Urine) 3) Tes Kepekaan antibiotik C. Lain-lain 1) Sperma Analisa

10

3.3 Alat dan Bahan Alat dan bahan yang dipergunakan dalam pemeriksaan yang dilakukan Instalasi Laboratorium Patologi Klinik, Unit Mikrobiologi yaitu : 3.3.1 Alat-alat Laminar air flow cabinet Inkubator Bact/Alert 3D Analyzer (untuk mendeteksi ada tidaknya bakteri di botol penyubur) Mikroskop Pemanas Autoclave Oven Colony counter Lemari es Kompor gas Rak tabung Tabung reaksi Erlenmayer Beaker glas Gelas ukur Petri dish Objek glass Cover glass Ose Neraca digital dan plastik timbang Lampu spirtus Pinset Kertas saring Corong kaca Rak tabung Kassa

11

3.3.2

Spuit Masker Pisau bedah steril Kamar hitung Improved Neubeaur pH Meter Anaerob jar

Bahan-bahan Pewarnaan Gram Pewarnaan Zeihl-Nelsen Pewarnaan Neisser Eosin Blood agar Simon citrat KIA Urea Lysin Tinta cina Tinta India Thioglycolate Medium Mac Conkey Media Gall Lysol Media pemupuk Amies Media Selenita NaCl Clysenia Gram negative Broth, NaCl Broth Alkali peptone TCBS Eosin Methylen Blue Aquadest

12

Sakarosa Glukosa Maltosa Mannosa Cooked meat medium Metil red Vouges Pioskaner Cled Mueller Hinton Pepton Turk

3.4 Cara Pengambilan sampel Mikrobiologi 3.4.1 Urine A. Urine Kateter - ambil 10 ml urine dengan jarum suntik no. 21 & kapas alkohol 70 %. - Jepit kateter di bagian luar - Disenfeksi pada tempat pengambilan - Tusukkan jarum, sedot urine masukkan ke botol steril - Beri label pada urine tuliskan identitas pada botol tersebut B. Urine porsi tengah 1) Bahan yang di butuhkan : - Botol steril bertutup ulir - Sabun - Cara pengambilan : Penderita diberitahu lisan / tertulis (pengambilan spesimen). - Wanita yang harus diperhatikan Duduk di toilet buka kaki/lutut kesamping selebar mungkin, cuci daerah genital dari depan ke belakang bersihkan dan keringkan. Letakkan mulut botol di depan

13

genital dan jangan menyentuh tepi botol. Buang urine pertama keluar dan berikutnya ditampung. Laki-laki tarik kulit preputium ( foreskin untuk yang tidak dikhitan ) dan bersihkan glans penis cuci seperti pada wanita.

3.4.2

Darah A. Darah menggunakan Bact Alert - Tentukan vena tempat pengambilan darah - Bersihkan dengan kapas alkohol 70% dengan cara memutar dari tengah ke tepi luar - Gosok dengan kapas yodium dengan cara yang sama biarkan 30-60 detik agar yodium mengering - Ambil darah dengan spuid anak-anak 3 ml, dewasa 5 ml masukkan pada botol media penyubur (tutup botol kuning untuk anak berisi pediatric 20 ml), (tutup botol hijau untuk dewasa berisi aerobic 30 ml) - Sebelum dimasukkan bersihkan tutup botol Bact Alert dengan kapas alkohol 70% - Jangan dimasukkan dilemari es, biarkan suhu kamar - Segera bawa ke laboratorium mikrobiologi - Beri identitas yang lengkap pada botol dan jangan lupa lampirkan blangko permintaan pemeriksaan. B. Darah tanpa menggunakan Bact Alert (secara manual) Tentukan vena tempat pengambilan darah Bersihkan dengan kapas alkohol 70% dengan cara memutar dari tengah ke tepi luar Gosok dengan kapas yodium dengan cara yang sama biarkan 30-60 detik agar yodium mengering

14

Ambil darah dengan spuid anak-anak 3 ml, dewasa 5 ml tanpa antikoagulan, masukkan didalam Media Pemupuk/BHI(Brain Heart Infusion ) diinkubasikan selama 24 jam.

Jangan dimasukkan dilemari es, biarkan suhu kamar Segera bawa ke laboratorium mikrobiologi Beri identitas yang lengkap pada botol dan jangan lupa lampirkan blangko permintaan pemeriksaan.

3.4.3

Feases Pilihan utama adalah tinja atau cairan diare C. Tinja Menggunakan tempat steril minimal 2 gr masukkan tinja pada botol steril (media transport). D. Swab Rektum / anus Masukkan swab steril ke Rektum/anus, putar dan tarik segera masukkan ke media transport (stuart / amies) atau botol steril.

3.4.4

Cairan Lambung - Penderita duduk dan miring ke kiri dengan posisi kepala membentuk sudut 45 - Denagn dagu dinaikkan, kateter Levin dimasukkan ke arah posterior ke arah nasofaring dan esofagus - Nasofaring disemprot dengan anastesi lokal - Untuk inkubasi oral, kateter didinginkan untuk mengurangi mual - Penderita dianjurkan membuka mulut dan mengarahkan dagunya ke depan atas - Taruh ujung kateter di belakang lidah, hindari ovula dan dorong ke arah faring posterior. - Suruh penderita menutup mulut dan menelan dan bernafas melalui mulut selama kateter dimasukkan. Masukkan kateter kira-kira 55 cm dari mulut.

15

- Ikuti dengan fluoroskopi sampai ujung kateter sampai diantrum (jika penderita duduk) atau sampai kurvatura mayor (jika penderita berbaring pada sisi kiri). - Hisap cairan lambung menggunakan semprit. - Segera kirim ke laboratorium jika perlu waktu lama simpan di lemari es suhu (4-8 C).

3.4.5

Spesimen Kulit dan Jaringan Ikat (Luka, abses, luka bakar, Eksudat) A. Pemilihan spesimen : - Sebisa mungkin jangan hapusan (swab) - Untuk luka terbuka dekontaminasi dulu kotoran dipermukaan - Untuk luka kering tidak perlu kulture, kecuali ada eksudat - Pada abses ambil eksudat dari dinding abses - Untuk luka bakar, dilakukan setelah pembersihan dan debridemen. Dianjurkan spesimen biopsi. - Sebagai spesimen pilihan adalah tepi dasar luka dan bukan sekedar cairan exudat/ nanah. B. Pengambilan spesimen Bahan yang dibutuhkan : Desinfektan kulit, Swab steril, Semprit/jarum, media transport aerobik/anaerobic 1) Abses terutup - Jangan menggunakan swab - Desinfeksi kulit abses - Aspirasi cairan abses - Abses di eksisi dan dibersihkan secara aseptis, ambil dinding abses - Semua dimasukkan media transport anaerobik.

16

2) Abses Terbuka Dan Luka - Bersihkan permukaan luka/ eksudat dengan aquades steril - Buat hapusan pada dasar dan tepi luka - Masukkan dalam media transport aerobik - Jangan meminta biakan anaerobik pada luka atau abses terbuka. 3) Luka Bakar - Lakukan debbridemen dan desinfeksi luka - Jika ada exudat ambil dengan swab, minta biakan aerobik jangan anaerobik - Ambil juga jaringan biopsi dan kirim ke lab. Untuk biakan aerobik

3.4.6

Spesimen Uretra dan Penis Pemilihan spesimen : Laki-laki tersering spesimen biakan dari uretra. - Bersihkan flora disekitar lubang uretra luar - Spesimen pilihan : nanah yang keluar dari uretra, atau swab sampai masuk 2 cm ke dalam uretra. a. Bahan : swab urogenital, medium transport, gelas obyek untuk sediaan hapusan b. Cara pengambilan - Pijat batang penis sampai keluar exudat ambil dengan swab steril dan masukkan ke dalam media transport, ambil sekali lagi untuk hapusan. - Jika tidak ada exudat, masukkan swab sampai 2 cm masuk uretra putar dan keluarkan lagi, tanam segera ke media ambil satu swab lagi dan buat sediaan hapusan. - Segera kirim ke laboratorium jangan dimasukkan di suhu dingin.

17

3.4.7

Spesimen Servik - Lihat serviks bersihkan exudat/ sekret di lubang serviks - Tekanlah dinding serviks dengan tepi ujung spekulum, maka akan keluar eksudat dari lubang serviks - Ambil eksudat menggunakan swab. Bisa juga swab masukkan lubang serviks, biarkan beberapa saat lalu tarik keluar. - Tidak boleh pada anak-anak.

3.4.8

Spesimen Tenggorok Pemilihan Spesimen : Pilih tempat lesi atau radang tenggorok : Bakteri (+) di dinding belahan tenggorok dan tonsil. Pengambilan Spesimen :Bahan yang dibutuhkan: swab steril, spatula penekan lidah. Cara pengambilan : - Lidah ditekan spatel ke bawah, lihat di belakang tenggorok/ tonsil - Hapus pada daerah radang ditonsil & di belakang tenggorok - Tarik swab keluar jangan menyentu pipi atau gusi dan gigi - Sampel segera bawa ke lab - Untuk C. Diphteri buat hapusan pada objek glass dan fiksasi dengan jilatan api.

3.4.9

Cairan Otak (Cerebrospinal fluid) Pemilihan Spesimen : - Dibutuhkan bahan yang tidak bercampur darah - Tiap sampel sebanyak 1 ml - Jika jumlah cairan otak cukup banyak dianjurkan 3 spesimen masing-masing 1 ml - 1 ml untuk pemeriksaan mikrobioliogi - 1 ml untuk pemeriksaan kimia - 1 ml untuk pemeriksaan hitung sel

18

Pengambilan Spesimen 1) Umum - Pengambilan sangat aseptis - Penderita puasa sebelum diambil - Pengambilan ditempat antara tulang Lumbal 3-4 (L3-4) Dewasa dan L4-5 (anak) 2) Bahan yang dibutuhkan - Desinfektan kulit (alkohol 70%, yodium Tingtur) kain steril - Semprit dan jarum Novokain 0,5 1 % (anastesi lokal lain) - 2 buah jarum fungsi lumbal, no 20-22, 3 buah tabung kecil steril bertutup ulir. 3) Cara Pengambilan - Pastikan bahwa penderita terfiksasi (tidak bergerak-gerak) - Penderita posisi miring membongkok, sehingga kepala hampir menyentuh lutut - Desinfeksi kulit antara Krista Iliaka kanan dan kiri - Tusukkan jarum diantara tulang lumbal 3-4 - Saat cairan otak menetes berarti ujung jarum sudah sampai ruang subarakhnoid. - Tampung cairan otak pada tempat steril - Jangan dimasukkan di lemari es, bawa segera ke laboratorium

BAB IV METODE KERJA

4.1 Tempat dan Waktu 4.1.1 Tempat Kerja Lapangan dilaksanakan di Ruang Mikrobiologi

Praktek

Laboratorium Patologi Klinik Rumah Sakit Umum Daerah A. Wahab Sjahranie Samarinda. 4.1.2 Waktu

Praktek Kerja Lapangan mulai dilaksanakan pada tanggal 13 Februari hingga 08 April 2012. Waktu praktek adalah pukul 07.30 hingga pukul 14.30.

4.2 Cara Kerja Menurut Standar Pelayanan Laboratorium Klinik RSUD A.W Sjahranie Samarinda Tahun 2009 4.2.1 Pewarnaan BTA (Bakteri Tahan Asam) A. Alat - Ose - Lampu spritus - Rak pewarnaan - Mikroskop - Objek glass B. Reagen - Ziehl Nelsen A ( Karbon Fuchsin 0,3% / Kinyoun ) - Ziehl Nelsen B ( Asam Sulfat 5% ) - Ziehl Nelsen C (Alkohol 70% ) - Ziehl Nelsen D ( Methylen Blue 0,3% ) C. Bahan Pemeriksaan - Sputum (dahak)

19

20

D. Cat yang digunakan 1) Zeihl Nelsen A : 10 ml 3% Alkohol Fuchsin 90 ml 5% Phenol 2) Zeihl Nelsen B : 30 ml Asam Chlorida pekat 37% 97 ml Alkohol 95% 3) Zeihl Nelsen C : 0,1 gram Methylen Blue 100 Aquadest E. Cara Kerja - Dipakai alat pelindung diri sebelum pengerjaan - Pada obejek glass diberi kode sesuai sampel pengerjaan - Pengerjaan dilakukan di Laminar Air Flow Cabinet - Difiksasi jarum ose, diambil sputum, disapukan secara merata pada objek glass. - Dituangi preparat yang telah difiksasi dengan Zeihl Nelsen A, lalu dipanasi dengan nyala api spirtus hingga catnya menguap tetapi tidak boleh mendidih - Keadaan ini dipertahankan selama 5-10 menit lalu dibuang cat dan bilas dengan air mengalir. - Dimasukkan preparat didalam cat Zeihl Nelsen B selama 1-2 detik - Dimasukkan kembali preparat didalam Zeihl Nelsen C dan digoyang perlahan hingga cat Zeihl Nelsen B luntur - Dicuci dengan aquadest dan dikeringkan - Dipulaslah dengan Zeihl Nelsen D (Methylen Blue) selama 1 - 2 menit - Diperiksa dibawah mikroskop dengan perbesaran 1000x dan dilihat adanya kuman BTA positif atau negatif.

21

F. Interpretasi Hasil Penilaian menurut IUAT (International Union Againt

Tuberculosis) disebutkan jumlah kumannya : ditemukan 1-9 BTA/100 lapangan pandang Positif 1 (+) : Ditemukan 10-99 BTA/100 lapangan pandang Positif 2 (++) : Ditemukan pandang Positif 3 (+++) : Ditemukan lebih dari 10 BTA/lapangan pandang G. Pembahasan Pemeriksaan BTA adalah cara pewarnaan diferensial untuk mengetahui adanya bakteri tahan asam Mycobacterium tuberculosis dari sampel sputum, yang bertujuan untuk membantu mendiagnosa penyakit tuberculosis paru. 1-10 BTA/1 lapangan

4.2.2

Pewarnaan Gram A. Alat - Ose - Lampu spritus - Rak pewarnaan - Mikroskop - Objek glass B. Reagen - Gram A ( Carbol Gentian Violet) - Gram B (Lugol) - Gram C (Asam Alkohol) - Gram D ( Fuchsin 1%) C. Bahan Pemeriksaan - Sekret conjunctiva (mata) - Sekret vagina

22

- Sekret Uretrha - Cairan tubuh lainnya, dari koloni hasil perbenihan D. Cara Kerja - Dituangi preparat yang telah difiksasi dengan cat Gram A selama 3 menit dan dicuci dengan air mengalir - Dituangi dengan cat Gram B selama 1-2 menit dan dicuci dengan air mengalir - Dituangi dengan cat Gram C selama 30-60 detik dan dicuci dengan air mengalir - Dituangi dengan cat Gram D selama 1 menit dan dicuci dengan air mengalir - Dilihat dibawah mikroskop dengan perbesaran 1000x dan dilihat morfologi kuman gram positif atau gram negatif E. Interpretasi Hasil Kuman Gram Positif Kuman Gram Negatif F. Pembahasan Pewarnaan Gram adalah cara pengecatan spesimen atau hasil perbenihan dengan cat Gram dengan tujuan untuk mengidentifikasi bakteri Gram positif atau Negatif dengan membedakannya dari warna yang diserapnya pada pegecatan Gram. : : Warna ungu Warna merah

4.2.3

Semen Analisa A. Alat - Kertas pH - Gelas Ukur 10 ml - Mirkopipet 10 l - Kamar hitung Improved Neubeaur - Objek glass - Cover glass

23

- Mikropipet 200 l - Mikroskop B. Reagen - Larutan Turk C. Bahan Pemeriksaan - Cairan semen D. Cara Kerja 1) Makroskopis a. Potensial Hidrogen (pH) Dicelupakan kertas pH dan diabaca perubahan warna yang terjadi pada kertas pH Nilai normal : 7,0-7,8 b. Warna Dilihat warnanya secara visual c. Koagulan Setelah 20 menit dilihat secara visual ada tidaknya gumpalan d. Volume Dimasukkan seluruh sperma didalam gelas ukur dan dibaca volumenya Nilai normal : 2,5-5 ml 2) Mikroskopis a. Motilitas - Diteteskan semen yang telah mencair pada objek gelas - Ditutup dengan cover glass - Dilihat dibawah mikroskop dan dilihat adanya eritrosit, leukosit, ephitel, bentuk dan gerak sperma (Motilitas sperma Normal : dalam 1 jam : sperma mati + 70%).

24

b. Morfologi sperma Untuk mnegetahui morfologi sperma dibuat sediaan apusan dengan cara - Dibuat sediaan apusan, dibiarkan mengering diudara - Diwarnai dengan pewarnaan giemsa atau wright - Diperhatikan bentuk / morfologi sperma (kepala, ekor dan lain-lain) c. Hitung sel - Disiapkan botol berisi larutan Turk sebanyak 20 l - Dipipet semen cair sebanyak 10 l dan dimasukkan didalam larutan Turk tersebut - Dicampur sampai merata dan dimasukkan didalam kamar hitung Improved Neubeaur - Dihitung spermanya dibawah mirkoskop didalam 4 kotak besar - Jumlah sperma yang dihitung dikalikan dengan 200.000 Nilai normal : 70 juta sel. ml E. Pembahasan Pemriksaan Semen Analisa adalah cara menganalisis volume, jumlah, pH, warna semen, bentuk, gerak dan morfologi spermatozoa. Pemeriksaan ini bertujuan untuk mengevaluasi kelainan semen dan spermatozoa dalam membantu diagnosis dan penanganan gangguan sistem reproduksi pria.

4.2.4

Pembuatan Media Citrat A. Alat : - Timbangan & plastic timbang - Gelas ukur 1 liter - Beaker glas 200 ml - Autoclaf - Lemari es

25

- Lampu spritus Tabung reaksi bertutup steril

B. Reagen : - Aquadest - Simon citrat C. Cara Kerja - Ditimbang 2,25 gr reagen Simon citrat, dimasukkan dibeaker glas ditambahkan 100 ml aquadest . - Dipanaskan dikompor gas sampai mendidih, diaduk dengan batang pengaduk - Dimasukkan didalam tabung steril 3 ml, ditutup - Disterilkan media diautoklaf pada suhu 121C selama 15 menit - Dimatikan autoklaf dan dikeluarkan media dari autoklaf ,diletakkan media posisi miring tunggu suhu kamar. - Disimpan dilemari es suhu 8C D. Pembahasan Pembuatan media citrate adalah cara pembuatan media yang

mengandung citrate untuk reaksi biokimia. Dimana tujuannya untuk mendapatkan media yang mengandung citrate untuk media reaksi biokimia mengidentifikasi bakteri-bakteri yang menggunakan citrate sebagai satu-satunya sumber karbon untuk metabolisme dengan menghasilkan suatu basa.

4.2.5

Pembuatan Media Gula-Gula Sakarosa, Glukosa, Maltosa, Laktosa, dan Mannosa A. Alat : - Timbangan & plastic timbang - Gelas ukur 1 liter - Beaker glas 200 ml - Autoclaf - Lemari es

26

- Lampu spritus - Tabung reaksi bertutup steril B. Reagen : - Aquadest - Glukosa - Maltosa - Sakarosa - Laktosa - Mannosa C. Cara Kerja - Ditimbang 1 gr tiap gula-gula, dimasukkan di beaker glas, ditambahkan 100 ml cairan VL Broth - Dianaskan pada kompor gas sampai larut diaduk dengan pengaduk, ditambahkan larutan BTB 0,4% sebanyak 2 ml dicampur. - Dimasukkan didalam tabung steril 2,5 ml ditutup - Disterilkan media diautoklaf pada suhu 121C selama 15 menit - Dimatikan autoklaf dan dikeluarkan media dari autoklaf, diletakkan media pada suhu kamar. - Disimpan pada lemari es suhu 8C D. Pembahasan Pembuatan media gula-gula adalah cara pembuatan media yang mengandung sakarosa, glukosa, maltosa laktosa dan mannose, yang bertujuan untuk mendapatkan media yang mengandung gula-gula untuk media reaksi biokimia mengidentifikasi bakteri-bakteri yang memfermentasi karbohidrat dengan membentuk asam dengan gas yang dapat dilihat.

27

4.2.6

Pembuatan Media KIA (Kigler Iron Agar) A. Alat : - Timbangan & plastic timbang - Gelas ukur 1 liter - Beaker glas 200 ml - Autoclaf - Lemari es - Lampu spritus - Tabung reaksi bertutup steril B. Reagen : - Aquadest - Kigler Iron Agar C. Cara Kerja - Ditimbang 5,5 gr KIA dimasukkan dibeaker glas, ditambahkan 100 ml aquadest - Dipanaskan dikompor gas sampai mendidih diaduk dengan pengaduk - Dimasukkan didalam tabung steril 3 ml ditutup - Disterilkan media diautoklaf menit - Dimatikan autoklaf dan dikeluarkan media diautoklaf pada suhu 121C selama 15

diletakkan media posisi miring ditunggu suhu kamar. - Disimpan pada lemari es suhu 8C D. Pembahasan Pembuatan media Kia adalah cara pembuatan media Kigler Iron Agar, yang diamana untuk mendapatkan media KIA untuk media reaksi biokimia mengidentifikasi bakteri-bakteri yang menghasilkan gas H2S.

28

4.2.7

Pembuatan Media Lysin A. Alat : - Timbangan & plastic timbang - Gelas ukur 1 liter - Beaker glas 1000 ml - Autoclaf - Lemari es - Lampu spritus - Tabung reaksi bertutup steril B. Reagen : - Aquadest - Lysine Decarboxylase Broth C. Cara Kerja - Ditimbang 14 gr Lysine Decarboxylase Broth dimasukkan dibeaker glas, ditambahkan 1000 ml aquadest - Dipanaskan dikompor gas sampai mendidih diaduk dengan pengaduk - Dimasukkan didalam tabung steril 2,5 ml ditutup - Disterilkan media diautoklaf menit - Dimatikan autoklaf dan dikeluarkan media diautoklaf pada suhu 121C selama 15

diletakkan media posisi miring ditunggu suhu kamar. - Disimpan pada lemari es suhu 8C D. Pembahasan Pembuatan media Lysin adalah cara pembuatan media yang

mengandung Lysin, yang dimana untuk mendapatkan media Lysin sebagai media reaksi biokimia mengidentifikasi bakteri-bakteri yang membentuk amin dari asam amino dengan reaksi dekarbolassi.

29

4.2.8

Pembuatan Media MRVP (Metil red Vouges Pioskaner) A. Alat : - Timbangan & plastic timbang - Gelas ukur 1 liter - Beaker glas 200 ml - Autoclaf - Lemari es - Lampu spritus - Tabung reaksi bertutup steril B. Reagen : - Aquadest - MRVP C. Cara Kerja - Ditimbang 1,7 gr MRVP dimasukkan dibeaker glas,

ditambahkan 100 ml aquadest. - Dipanaskan dikompor gas sampai mendidih diaduk dengan pengaduk - Dimasukkan didalam tabung steril 2 ml ditutup - Disterilkan media diautoklaf menit - Dimatikan autoklaf dan dikeluarkan media diautoklaf pada suhu 121C selama 15

diletakkan media posisi miring ditunggu suhu kamar. - Disimpan pada lemari es suhu 8C D. Pembahasan Pembuatan media MRVP adalah cara pembuatan media MRVP, yang dimana bertujuan untuk mendapatkan media MRVP sebagai media reaksi biokimia mengidentifikasi bakteri-bakteri yang

menghasilkan dan mempertahankan hasil akhir asam yg stabil dari fermentasi glukosa.

30

4.2.9

Pembuatan Media Urea A. Alat : - Timbangan & plastic timbang - Gelas ukur 1 liter - Beaker glas 200 ml - Autoclaf - Lemari es - Lampu spritus - Tabung reaksi bertutup steril B. Reagen : - Aquadest - Urea C. Cara Kerja - Ditimbang 2,1 gr urea dimasukkan dibeaker glas, ditambahkan 100 ml aquadest. - Dipanaskan dikompor gas sampai mendidih diaduk dengan pengaduk - Dimasukkan didalam tabung steril 3 ml ditutup - Disterilkan media diautoklaf menit - Dimatikan autoklaf dan dikeluarkan media diautoklaf pada suhu 121C selama 15

diletakkan media posisi miring ditunggu suhu kamar. - Disimpan pada lemari es suhu 8C D. Pembahasan Pembuatan media Urea adalah cara pembuatan media yang

mengandung urea yagn dimana bertujuan untuk mendapatkan media Urea sebagai media reaksi biokimia mengidentifikasi bakteri-bakteri yang memecah urea , membentuk 2 molekul ammonia dengan

keaktifan enzim urease.

31

4.2.10 Pembuatan Media Salmonella Shigella Agar (GAAL) A. Alat : - Timbangan & plastic timbang - Gelas ukur 1 liter - Erlenmayer 1000 ml - Petri dish steril 10 mm - Autoclaf - Lemari es - Lampu spritus B. Reagen : - Aquadest - Salmonella Shigella Agar C. Cara Kerja - Ditimbang 88 gr Salmonella Shigella Agar dimasukkan di erlenmayer, ditambahkan 1000 ml aquadest. - Dipanaskan dikompor gas sampai mendidih diaduk dengan pengaduk - Ditutup erlenmayer dengan kapas yang dibungkus kasa steril - Disterilkan media diautoklaf menit - Dimatikan autoklaf dan dikeluarkan media diautoklaf ditunggu sampai suhu 80C lalu dituang di petri dish setebal 4 mm dan dibiarkan beku pada suhu kamar - Disimpan pada lemari es suhu 8C D. Pembahasan Pembuatan media SS agar-gaal adalah cara pembuatan media SS agar-gaal, yang diman bertujuan untuk mendapatkan media SS agar-gaal sebagai media selektif untuk perbenihan bakteri dan identifikasi Salmonella dan Shigella. pada suhu 121C selama 15

32

4.2.11 Pembuatan Media BPA (Blood Plate Agar) A. Alat : - Timbangan & plastic timbang - Gelas ukur 1 liter - Erlenmayer 1000 ml - Petri dish steril 10 mm - Autoclaf - Lemari es - Lampu spritus B. Reagen : - Aquadest - Blood Agar Base - Darah domba C. Cara Kerja - Ditimbang 40 gr Blood Agar Base dimasukkan di erlenmayer, ditambahkan 900 ml aquadest. - Dipanaskan dikompor gas sampai mendidih diaduk dengan pengaduk - Ditutup erlenmayer dengan kapas yang dibungkus kasa steril - Disterilkan media diautoklaf menit - Dimatikan autoklaf dan dikeluarkan media diautoklaf ditunggu sampai suhu 50C lalu dituang di petri dish setebal 4 mm dan dibiarkan beku pada suhu kamar - Disimpan pada lemari es suhu 8C D. Pembahasan Pembuatan media blood plate agar adalah cara pembuatan media blood plate agar, yang dimana bertujuan untuk mendapatkan media blood plate agar sebagai media perbenihan dan identifikasi bakteribakteri Gram positive yang memerlukan eritrosit sebagai nutrisinya. pada suhu 121C selama 15

33

4.2.12 Pembuatan Media Cled Agar A. Alat : - Timbangan & plastic timbang - Gelas ukur 1 liter - Erlenmayer 1000 ml - Petri dish steril 10 mm - Autoclaf - Lemari es - Lampu spritus B. Reagen : - Aquadest - Cled Agar C. Cara Kerja - Ditimbang 33 gr Cled Agar ditambahkan 1000 ml aquadest. - Dipanaskan dikompor gas sampai mendidih diaduk dengan pengaduk - Ditutup erlenmayer dengan kapas yang dibungkus kasa steril - Disterilkan media diautoklaf menit - Dimatikan autoklaf dan dikeluarkan media diautoklaf ditunggu sampai suhu 80C lalu dituang di petri dish setebal 4 mm dan dibiarkan beku pada suhu kamar - Disimpan pada lemari es suhu 8C D. Pembahasan Pembuatan media Cled agar adalah cara pembuatan media Cled agar, untuk bertujuan mendapatkan media CLED agar sebagai media perbenihan dan identifikasi bakteri. pada suhu 121C selama 15 dimasukkan di erlenmayer,

34

4.2.13 Pembuatan Media Anaerob Thioglycolate A. Alat : - Timbangan & plastic timbang - Gelas ukur 1 liter - Beaker glas 200 ml - Autoclaf - Lemari es - Lampu spritus - Tabung reaksi bertutup steril B. Reagen : - Aquadest - Anaerob Thioglycolate Broth C. Cara Kerja - Ditimbang 3 gr Anaerob Thioglycolate Broth dimasukkan dibeaker glas, ditambahkan 100 ml aquadest. - Dipanaskan dikompor gas sampai mendidih diaduk dengan pengaduk - Dimasukkan didalam tabung steril 10 ml ditutup - Disterilkan media diautoklaf menit - Dimatikan autoklaf dan dikeluarkan media diautoklaf pada suhu 121C selama 15

diletakkan media posisi miring ditunggu suhu kamar. - Disimpan pada lemari es suhu 8C D. Pembahasan Pembuatan media anaerob thioglyolate adalah cara pembuatan media anaerob thioglycolate yang bertujuan untuk Mendapatkan

media anaerob thioglycolate sebagai media perbenihan bakteri-bakteri anaerob.

35

4.2.14 Pembuatan Media MH (Mueller Hinton) A. Alat : - Timbangan & plastic timbang - Gelas ukur 1 liter - Erlenmayer 1000 ml - Petri dish steril 10 mm - Autoclaf - Lemari es - Lampu spritus B. Reagen : - Aquadest - MH agar C. Cara Kerja - Ditimbang 38 gr MH agar dimasukkan di erlenmayer, ditambahkan 1000 ml aquadest. - Dipanaskan dikompor gas sampai mendidih diaduk dengan pengaduk - Ditutup erlenmayer dengan kapas yang dibungkus kasa steril - Disterilkan media diautoklaf menit - Dimatikan autoklaf dan dikeluarkan media diautoklaf ditunggu sampai suhu 70C lalu dituang di petri dish setebal 4 mm dan dibiarkan beku pada suhu kamar - Disimpan pada lemari es suhu 8C D. Pembahasan Pembuatan media MH agar adalah cara pembuatan media MH agar yang dimana bertujuan untuk mendapatkan MH agar sebagai media perbenenihan pada tes kepekaan antibiotika. pada suhu 121C selama 15

36

4.2.15 Pembuatan Media MC Conkey A. Alat : - Timbangan & plastic timbang - Gelas ukur 1 liter - Erlenmayer 1000 ml - Petri dish steril 10 mm - Autoclaf - Lemari es - Lampu spritus B. Reagen : - Aquadest - MC Conkey C. Cara Kerja - Ditimbang 52,5 gr MH agar dimasukkan di erlenmayer, ditambahkan 1000 ml aquadest. - Dipanaskan dikompor gas sampai mendidih diaduk dengan pengaduk - Ditutup erlenmayer dengan kapas yang dibungkus kasa steril - Disterilkan media diautoklaf menit - Dimatikan autoklaf dan dikeluarkan media diautoklaf ditunggu sampai suhu 70C lalu dituang di petri dish setebal 4 mm dan dibiarkan beku pada suhu kamar - Disimpan pada lemari es suhu 8C D. Pembahasan Pembuatan media Mc Conkey agar adalah cara pada suhu 121C selama 15

pembuatan media Mc Conkey agar yang dimana bertujuan untuk mendapatkan mediaMc Conkey agar sebagai media perbenihan dan identifikasi bakteri Gram negative.

37

4.2.16 Pembuatan Media EMB (Eosin Methylen Blue) A. Alat : - Timbangan & plastic timbang - Gelas ukur 1 liter - Erlenmayer 1000 ml - Petri dish steril 6 mm - Autoclaf - Lemari es - Lampu spritus B. Reagen : - Aquadest - EMB C. Cara Kerja - Ditimbang 37,5 gr EMB agar dimasukkan di erlenmayer, ditambahkan 1000 ml aquadest. - Dipanaskan dikompor gas sampai mendidih diaduk dengan pengaduk - Ditutup erlenmayer dengan kapas yang dibungkus kasa steril - Disterilkan media diautoklaf menit - Dimatikan autoklaf dan dikeluarkan media diautoklaf ditunggu sampai suhu 70C lalu dituang di petri dish setebal 4 mm dan dibiarkan beku pada suhu kamar - Disimpan pada lemari es suhu 8C D. Pembahasan Eosin Methylene Blue Agar adalah media selektif dan diferensial. Media ini mengandung Eosin dan metilen biru, yang menghambat pertumbuhan bakteri gram positif, maka media ini dipilih untuk bakteri gram negatif. EMBA juga mengandung karbohidrat laktosa, yang membuat bakteri gram negatif terdiferensiasi berdasarkan pada kemampuan mereka untuk memfermentasi laktosa. Warna media pada suhu 121C selama 15

38

sebelum pemupukan bakteri berwarna merah keunguan. Perubahan warna hijau metalik pada media EMBA karena Escherichia coli dapat memfermentasi laktosa yang mengakibatkan peningkatan kadar asam dalam media. Kadar asam yang tinggi dapat mengendapkan metylen blue dalam media EMBA

4.2.17 Pembuatan Media Pepton A. Alat : - Timbangan & plastic timbang - Gelas ukur 1 liter - Beaker glas 200 ml - Autoclaf - Lemari es - Lampu spritus - Tabung reaksi bertutup steril B. Reagen : - Aquadest - Pepton C. Cara Kerja - Ditimbang 1,7 gr pepton dimasukkan dibeaker glas,

ditambahkan 100 ml aquadest. - Dipanaskan dikompor gas sampai mendidih diaduk dengan pengaduk - Dimasukkan didalam tabung steril 3 ml ditutup - Disterilkan media diautoklaf menit - Dimatikan autoklaf dan dikeluarkan media diautoklaf ditunggu suhu kamar. - Disimpan pada lemari es suhu 8C pada suhu 121C selama 15

39

D. Pembahasan Pembuatan media Pepton adalah cara pembuatan media yang mengandung pepton yang dimana bertujuan untuk mendapatkan media Pepton sebagai media reaksi biokimia mengidentifikasi bakteribakteri yang bereksi dengan pepton.

4.2.18 Pembuatan Media BHI (Brain Heart Infusion) A. Alat : - Timbangan & plastic timbang - Gelas ukur 1 liter - Beaker glas 200 ml - Autoclaf - Lemari es - Lampu spritus - Tabung reaksi bertutup steril B. Reagen : - Aquadest - BHI (Brain Heart Infusion) C. Cara Kerja - Ditimbang 37 gr BHI dimasukkan dibeaker glas, ditambahkan 100 ml aquadest. - Dipanaskan dikompor gas sampai mendidih diaduk dengan pengaduk - Dimasukkan didalam tabung steril 3 ml ditutup - Disterilkan media diautoklaf menit - Dimatikan autoklaf dan dikeluarkan media diautoklaf ditunggu suhu kamar. - Disimpan pada lemari es suhu 8C pada suhu 121C selama 15

40

D. Pembahasan Media yang menguntungkan pertumbuhan mikroorganisme tertentukarena mengandung bahan-bahan tambahan ataupun bahan penghambat yang menekan tumbuhnya kompetitor. Jenis media ini juga bertujuanuntuk meningkatkan jumlah mikroorganisme yang diduga terlalu sedikit dalam bahan sampel, sehingga akan mudah untuk dihitung atau dianalisalebih lanjut. Berikut beberapa jenis media penyubur. BHI ( Brain Heart Infussion) untuk Streptococcus, Neisseri

4.2.19 Kultur Gaal A. Alat - Tabung - Ose Loupe - Ose Jarum - Plate - Api bunsen - Inkubator B. Bahan - Media Gaal - Mac Conkey - KIA - Gula-gula - Antisera Salmonella - Lysol - Pasir dalam botol C. Bahan pemriksaan - Sediaan darah segar

41

D. Cara Kerja a. Hari I - Dimasukkan darah segar digaal broth 5cc (Apabila sudah beku, darah dihancurkan dulu dengan batang pengaduk) - Dibekukan yang sudah dihancurkan dimasukkan didalam media gaal - Diinkubasi 37oC selama 24 jam. b. Hari II - Diambil 1 ose dari media gaal, ditanam dimedia Mc Conkey - Diinkubasi 37oC selama 24 jam. c. Hari III - Dilihat koloni dari media Mc Conkey, yang tidak memecah lactosa yang tumbuh (putih jernih) - Apabila tidak tumbuh, diinkubasi lagi 37oC selama 24 jam. d. Hari IV - Mc Conkey yang tidak tumbuh, diinkubasi lagi 37oC selama 24 jam. e. Hari IV - Apabila tidak tumbuh juga berarti Gaal Kultur tidak ada pertumbuhan kuman ( Salmonella negatif atau steril) E. Pembahasan Kultur gaal adalah cara pembiakan bakteri Salmonella dari spesimen darah pada media mengandung gaal, mengidentifikasi dan menguji sensitivitasnya terhadap antibiotika. Pemeriksaan ini

bertujuan menunjang diagnosis dan pengobatan yang tepat dari penyakit yang disebabkan oleh bakteri Salmonella.

42

4.2.20 Kultur Darah A. Alat - Tabung - Ose Loupe - Api Bunsen - Plate - Ose Jarum - Inkubator B. Bahan - Mc. Conkey - BAP (Blood Agar Plate) - Thioglycolate C. Bahan Pemeriksaan - Sediaan Darah D. Cara Kerja - Dimasukkan kurang lebih 5 ml darah segar didalam Media Pemupuk/BHI(Brain Heart Infusion ) diinkubasikan selama 24 jam. - Setelah 24 jam, ditanam pakai Ose Poupe dimedia Mac Conkey, Blood Agar Plate dan Thioglicolate Khusus untuk kuman An. Aerob, lalu diinkubasi di Anaerob jar 37 0C selama 24 jam, untuk Mac Conkey dan Blood Agar Plate diinkubasi di inkubator 37 0C selama 24 jam - Dilihat pertumbuhan kuman : Bila tak tumbuh laporkan hasil tak ada pertumbuhan kuman Bila tumbuh dilanjutkan ditentukan jenis kumannya lalu dilakukan sensitivity Test ( kepekaan kuman ) - Dilihat obat yang sensitive dan resistant, kemudian dilaporkan hasilnya.

43

E. Pembahasan Pemeriksaan dilakukan untuk kultur darah adalah cara pemeriksaan yang membiakkan bakteri dari specimen darah,

mengidentifikasi jenisnya dan

menguji sensitivitasnya terhadap

antibiotika, hal ini bertujuan untuk membantu diagnosis dan pengobatan yang tepat untuk penyakit yang disebabkan oleh bakteriemia

4.2.21 Kultur Urin A. Alat - Ose Jarum - Ose Loupe (5 mm) - Api Bunsen - Objek gelas - Lysol - Pasir - Cat Gram B. Media yang diperlukan : - Mac Conkey - CLED - BAP ( Blood Agar Plate ) - KIA - Biokomia reaksi + Agar Miring - Antisera C. Cara Kerja 1) Hari I Bahan Urin yang diterima harus urin baru dan langsung ditanam pada 3 media dengan ose steril - Mac Conkey - CLED ( Cyline Laktose Elektrolite Defition )

44

- BAP ( Blood Agar Plate) - Inkubasi 24 jam 37 0C 2) Hari II Dliihat pertumbuhan koloninya,bila ketiga media tidak ada pertumbuhan, berarti kultur urin steril Bila tumbuh = Mac Conkey Gram Batang tanam KIA = BAP Gram Coccus Cat Gram Plasma Koagulasi = CLED menghitung jumlah kuman dilihat dari jumlah koloni Bila jumlah koloni < 50 berarti hasil urin kultur steril / tidak terkontaminasi 50 koloni = 100.000 jumlah kuman. 3) Hari III Mac Conkey yang dicurigai tanam pakai ose jarum ke KIA inkubasi 37 0C selama 24 jam BAP koloni di cat gram jika dilihat Gram Coccus diteruskan (jika dilihat Gram Batang tidak diteruskan) Staphylococcus ditanam diagar miring NAS ( Nutrient Agar Slant) 37 0C selama 24 jam Streptococcus ditanam dileventhal miring (Coklat Agar Slant) 24 jam 37 0C 4) Hari IV KIA dilihat pertumbuhannya diteruskan tanam ke gulagula / biokemis reaksi 24 jam 37 0C Staphylococcus aureus dipastikan dengan plasma koagulasi Cara plasma darah diambil pakai ose, taruh di objek gelas di campur dengan koloni kuman dari agar miring kasar Staphylococcus dilihat warna pigmen agar miring

45

Jika pigmen putih Staphylococcus albus Jika pigmen kuning jeruk Staphylococcus citrus Jika pigmen kuning emas Staphylococcus aureus Stephylococcus di levental miring koloni kecil (hampir tak terlihat ) Warna putih (coklat muda) Beta streptococcus

5) Hari V Dilihat reaksi gula gula, dicocokkan dengan table gula gula / identifikasi kuman 6) Hari IV Kuman yang ditemukan, dilakukan sensitivity test di Muhler Hinton (M.H Agar). Inkubasi 37 0C selama 24Jam

7) Hari V Dilaporan hasil sensitivity test

D. Pembahasan Pemeriksaan Kultur Urin adalah suatu pemeriksaan dengan cara melakukan pembiakkan bakteri dari specimen urine urin, identifikasi jenisnya dan menguji sensitivitasnya terhadap antibiotika. Sehingga dapat membantu menegakkan diagnosis, pengobatan yang tepat untuk penyakit infeksi pada saluran kemih.

BAB V PEMBAHASAN

Mikrobiologi memiliki berbagai aspek yang terdiri dari cara pengambilan sampel mikrobiologi, pewarnaan, kultur, pembuatan media, reaksi biokimia, dan lain sebagainya, tetapi dalam pembahasan ini hanya pewarnaan saja. Zat warna akan bergabung secara kimiawi dengan protoplasma bakteri. Jika sel belum mati, proses pewarnaan inilah yang akan membunuhnya. Proses ini adalah proses yang drastis dan bisa menghasilkan artefak (Jawetz, 2007). Pewarna yang sering digunakan adalah garam. Pewarnaan basa terdiri dari kation yang diwarnai dengan anion yang tidak bewarna (misalnya, metilen biru klorida-). Pewarnaan asam merupakan kebalikan dari pewarnaan basa (misalnya, natrium+ eosinat-). Sel bakteri kaya akan asam nukleat, yang banyak membawa muatan negatif dalam bentuk gugus fosfat. Muatan ini akan bergabung dengan pewarna basa yang bermuatan positif. Pewarna asam tidak mewarnai sel bakteri sehingga dapat digunakan untuk menandai material .latar belakangnya dengan warna yang kontras (Jawetz, 2007). Pewarna basa mewarnai sel-sel bakteri secara seragam kecuali bila RNA sitoplasma hancur terlebih dahulu. Walaupun demikian, teknik pewarnaan khusus bisa digunakan untuk membedakan flagel, kapsul, dindig sel, membran sel, granula, nukleoid, dan spora (Jawetz, 2007).

5.1 Pewarnaan Gram 5.1.1 Tujuan untuk mengidentifikasi bakteri gram Positif & Negatif (Achmad, 2010). 5.1.2 Prinsip Bakteri gram positif akan mengikat dengan kuat senyawa kristal violet iodine, sehingga pada pelunturan dengan alkohol tidak akan luntur sedangkan bakteri gram Negatif akan luntur dan pada pemberian cat

46

47

Counterstain bakteri gram negatif yang tidak berwarna akan mengambil warna merah dari air fuchsin (Achmad, 2010). 5.1.3 Dasar Teori

Pengecatan Gram merupakan salah satu teknik pengecatan yang dikerjakan di laboratorium mikrobiologi untuk kepentingan identifikasi mikroorganisme. Morfologi mikroskopik mikroorganisme yang diperiksa

dan sifatnya yang khas terhadap pengecatan tertentu (pengecatan Gram) dapat digunakan untuk identifikasi awal. Pemeriksaan ini dapat dilakukan dengan cepat dan biaya murah serta, dalam kasus tertentu, dapat membantu dokter untuk memulai terapi suatu penyakit tanpa menunggu hasil kultur (Triyana, 2012). Metode pengecatan tersebut pertama kali ditemukan oleh Christian Gram pada tahun 1884. Dengan metode pengecatan Gram, bakteri dapat

dikelompokkan menjadi dua, yaitu bakteri Gram positif dan Gram negatif berdasarkan reaksi atau sifat bakteri terhadap cat tersebut. Reaksi atau sifat bakteri tersebut ditentukan oleh komposisi dinding selnya. Oleh karena itu, pengecatan Gram tidak bisa dilakukan pada mikroorganisme yang tidak mempunyai dinding sel seperti Mycoplasma sp (Triyana, 2012). A. Bahan langsung dari penderita Bahan disentrifuge terlebih dulu, kemudian endapannya dibuat preparat. Bahan yang berupa endapan (pellet) hasil sentrifuge tersebut diambil dengan ose steril atau kapas lidi steril kemudian digoreskan pada gelas obyek setipis mungkin. Panaskan gelas obyek di atas nyala api lampu spiritus sambil diayunkan secukupnya (jarak preparat sampai nyala api kira-kira 20 cm), sampai preparat tersebut kering. Setelah kering, teteskan formalin 1 %

tunggu selama 5 menit dan keringkan sekali lagi. Setelah betul-betul kering, preparat siap dicat (Triyana, 2012). B. Bahan dari biakan cair Ambil gelas obyek yang bersih dan steril, bebaskan dari lemak dengan memanaskan di atas nyala api spiritus. Ambil kuman dari biakan cair (yang sebelumnya telah diaduk secara steril) dengan menggunakan ose steril,

48

ratakan pada gelas obyek sehingga membentuk diameter kira-kira 1-2 cm. Preparat yang sudah dibuat kemudian dikeringkan dan ditetesi formalin dengan cara seperti pembuatan preparat langsung (Triyana, 2012). C. Bahan dari media pertumbuhan padat Ambil gelas obyek yang bersih dan steril, bebaskan dari lemak dengan memanaskan di atas nyala api spiritus. Teteskan satu ose kaldu atau NaCl pada gelas obyek tersebut. Dengan ose steril, ambil satu koloni kuman dan ratakan pada gelas obyek sehingga membentuk diameter 1 2 cm, campur dengan kaldu tadi sampai homogen kemudian tipiskan. Selanjutnya

dikerjakan sebagaimana membuat preparat dengan bahan berasal dari penderita (Triyana, 2012).

Gambar 5.1 Cara Pewarnaan Gram

Gambar 5.2 Interpretasi Hasil Pewarnaan Gram. (A) Gram Positif ; (B) Gram Negatif (Perbesaran lensa objektif 100X)

49

Pengecatan Gram merupakan salah satu teknik pewarnaan yang digunakan untuk mengidentifikasi bakteri (mikroorganisme). Zat warna yang digunakan pada pengecatan Gram meliputi crystal violet , yodium , alkohol dan safranin. Fungsi dari masing-masing zat warna tersebut adalah (Wahyuningsih, 2008). A. Crystal Violet Berwarna ungu. Merupakan pewarna primer (utama) yang akan memberi warna mikroorganisme target. Crystal Violet bersifat basa sehingga mampu berikatan dengan sel mikroorganisme yang bersifat asam , dengan begitu sel mikroorganisme yang transparan akan terlihat berwarna (Ungu)

(Wahyuningsih, 2008). B. Iodium Merupakan pewarna Mordan , yaitu pewarna yang berfungsi memfiksasi pewarna primer yang diserap mikroorganisme target. Pemberian yodium pada pengecatan Gram dimaksudkan untuk memperkuat pengikatan warna oleh bakteri (Wahyuningsih, 2008). C. Alkohol Solven organik yang berfungsi untuk membilas atau melunturkan kelebihan zat warna pada sel bakteri (mikroorganisme). Pemberian alkohol pada pengecatan ini dapat mengakibatkan terjadinya dua kemungkinan : a. Mikroorganisme (bakteri) akan tetap berwarna ungu b. Bakteri menjadi tidak berwarna (Wahyuningsih, 2008). D. Safranin Safranin merupakan pewarna tandingan atau pewarna sekunder. Zat ini berfungsi untuk mewarnai kembali sel-sel yang telah kehilangan pewarna utama setelah perlakuan dengan alkohol. Dengan kata lain , memberikan warna pada mikroorganisme non target (Wahyuningsih, 2008).

50

D. Kelebihan dan Kekurangan Pengecatan Gram (Triyana, 2012). 1) Kelebihan - Pengecatan Gram penting sebagai pedoman awal untuk

memutuskan terapi antibiotik, sebelum tersedia bukti definitif bakteri penyebab infeksi (kultur dan tes kepekaan bakteri terhadap antibiotik). Hal ini karena bakteri Gram positif dan negatif

mempunyai kepekaan yang berbeda terhadap berbagai jenis antibiotika. - Kadang-kadang morfologi bakteri yang telah dicat Gram

mempunyai makna diagnostik. Misalnya pada pemeriksaan Gram ditemukan Gram negatif diplococci intraseluler dari spesimen pus (nana) uretral, maka memberikan presumptive diagnosis untuk penyakit infeksi gonore. 2) Kekurangan : - Pengecatan Gram memerlukan mikroorganisme dalam jumlah banyak yakni lebih dari 104 per ml. Sampel yang cair dengan jumlah kecil mikroorganisme misalnya cairan serebrospinal, memerlukan prosedur sentrifuge dulu untuk mengkonsentrasikan mikroorganisme tersebut. kemudian mikroskopis. dilakukan Pellet (endapan hasil sentrifuge) untuk diperiksa secara

pengecatan

5.2 Pewarnaan Ziehl Neelsen 5.2.1 Tujuan Untuk menemukan Basil Tahan Asam (Achmad, 2010). 5.2.2 Prinsip BTA memiliki lapisan lemak yg sukar ditembus oleh cat, dengan pemanasan dan pengaruh fenol cat basic fuchsin dapat menembus lapisan lemak itu. Pendinginan pada proses pencucian akan merapatkan kembali lapisan lemak. Pada waktu pelunturan dengan

51

asam alkohol warna merah dari BTA tdk akan dilepaskan (Achmad, 2010). 5.2.3 Dasar Teori tahan asam adalah bakteri yang mempertahankan

Bakteri

karbolfuhsin(fuhsin basa yang terlarut dalam campuran fenol alkohol-air) bahkan jika dicuci dengan asam hidroklat dalam alkohol. Sediaan apus sel pada slide dimasukkan dalam karbolfuhsin dan dipanaskan dengan uap panas. Dalam proses ini pelunturan warna akan terjadi akibat alkohol-asam, dan pada tahap akhir digunakan pewarna pembalik (counterstain) yang kontras (biru atau hijau).Bakteri tahan asam (mycobacteria) akan tampak merah, yang lain akan berwarna sama dengan pewarna pembalik (Jawetz, 2007). Dengan pewarnaan Ziehl Neelsen, bakteri dibagi dalam dua golongan yaitu : 1. Bakteri yang berwarna merah dengan pewarnaan Ziehl Neelsen disebut bakteri tahan asam (acid fast). 2. Bakteri yang berwarna biru dengan pewarnaan Ziehl Neelsen disebut bakteri tidak tahan asam (non acid fast) (Entjang, 2003). Contoh bakteri tahan asam : Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium lepray. Semua bakteri gram negatif tidak tahan asam, sedangkan bakteri gram positif ada yang tahan asam, ada yang tidak tahan asam (Entjang, 2003). Menurut IUAT, yaitu: Negatif Positif Positif 1 Positif 2 Positif 3 : : : : : apabila tidak ditemukan BTA apabila terdapat 1 9 BTA / 100 lapang pandang. apabila terdapat 10 90 BTA / 100 lapang pandang. apabila terdapat 1 9 BTA / 1 lapang pandang. apabila terdapat > 10 BTA / 1 lapang pandang.

Tujuan pemberian carbol fuchsin 0,3% adalah untuk mewarnai seluruh sel bakteri. Tujuan pemberian alkohol asam 3% adalah meluruhkan warna dari carbol fuchsin, tetapi pada golongan BTA tidak terpengaruh pemberian alkohol asam 0,3% karena memiliki lapisan lipid yang sangat tebal sehingga alkohol sukar menembus dinding sel bakteri tersebut dan warna merah akibat

52

pemberian carbol fuchsin tidak hilang. Tujuan pemberian methylen blue adalah memberi warna background (Agnesa, 2010). Asam-cepat noda (pewarnaan Ziehl-Neelsen metode) adalah prosedur pewarnaan diferensial yang berguna yang secara khusus noda seluruh anggota marga mikobakteri. Prosedur ini memanfaatkan panas dan fenol (asam karbol) untuk membantu penetrasi, pewarna fuchsin dasar, ke bagian dalam sel mikobakteri, yang kedap pewarna rosaniline dasar dalam noda rutin seperti pewarnaan Gram. Lipid yang tinggi dan konten lilin dari dinding sel mikobakteri diperkirakan menjadi alasan untuk impermeabilitas tersebut (Hidayat, 2011). Ziehl-Neelsen adalah prosedur standar emas untuk diagnosis tuberkulosis dan lepra. Menjadi unassociated dengan flora manusia (kecuali

Mycobacterium smegmatis ditemukan dalam smegma manusia), menemukan asam-cepat basil dalam spesimen manusia seperti dahak dan mengorek hidung sangat mengindikasikan suatu proses infeksi aktif, yaitu tuberkulosis dan lepra. Asam-cepat patogen selain mikobakteri termasuk genera sangat sedikit seperti bakteri Nocardia dan Cryptosporidium jamur. Ziehl Neelsennoda juga dapat digunakan untuk identifikasi utama dari asam-cepat patogen lainnya (Hidayat, 2011). Mewarnai bakteri yang tahan terhadap asam digunakan cara pewarnaan Ziehl Neelson. Pewarnaan Ziehl Neelson terdapat beberapa perlakuan dan zat kimia yang diberikan. Fiksasi bertujuan untuk mematikan bakteri tetapi tidak mengubah struktur sel bakteri. Perlakuan pencucian dengan menggunakan aquades mengalir bertujuan untuk menutup kembali lemaknya (Agnesa, 2010).

53

Komposisi Ziehl Neelsen, Kinyoun Gabbet, dan Auramine phenol untuk pewarnaan Bakteri Tahan Asam pada tabel 5.1dibawah ini (Haidar, 2011) : Tabel 5.1 Komposisi Ziehl Neelsen & Kinyoun Gabbet dan Auramine phenol Reagensia Ziehl Neelsen Larutan Karbol Fuksin Basic Fuchsin : 0,3 g Alkohol 95% : 10 ml Fenol 5% : 90 ml Larutan Asam Alkohol Hcl Pekat : 3 ml Alkohol 95% : 97 ml Larutan Methylen Blue Methylen Blue : 0,3 g Aquadest : 100 ml Reagensia Kinyoun Gabbet Larutan Kinyoun Alkali Fuksin Fenol Alkohol 95% Aquadest Larutan Gabbet Methylen blue Asam Sulfat 96% Alkohol absolute Aquadest

: : : : : : : :

4g 8g 20 ml 100 ml 1g 20 ml 30 ml 50 ml

Reagensia Auramine-Phenol Auramine-Phenol Stain Auramine : 0,1 gr Ethyl Alcohol 95% : 95,9 gr Phenol : 3,0 gr Acid Alcohol Decolorizer Ethyl Alcohol 95% : 99,5 ml Hydrochloric Acid : 0,5 ml Potassium Permanganate Counterstain Potassium Permanganate : 0,5 gr Deionized Water 99,5 gr

54

Pemeriksaan dahak secara mikroskopik dengan pewarnaan Basil Tahan Asam (BTA) merupakan pemeriksaan yang sederhana, cepat, murah, dan cukup sensitif untuk mendukung diagnosis penyakit tuberkulosis serta untuk menilai kemajuan pengobatan. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan metoda pewarnaan BTA terbaik yang dapat digunakan secara rutin terutama di laboratorium dengan beban pekerjaan yang cukup tinggi. Sensitivitas, spesifisitas, nilai prediksi positif dan negatif tiga macam metode pewarnaan BTA, yaitu Tan Thiam Hok, Ziehl Neelsen, dan Fluorokrom, dibandingkan terhadap hasil biakan dahak pada medium padat Lowenstein Jensen sebagai baku emas. Intepretasi hasil pewarnaan mengacu pada skala IUTLD. Pertumbuhan Mycobacterium tuberculosis didapatkan pada 27 dari 98 spesimen sputum (27,6%) berasal dari 98 penderita tersangka tuberculosis. Sensitivitas metoda pewarnaan Tan Thiam Hok, Ziehl Neelsen, dan Fluorokrom adalah 62,9%, 81,5%, dan 92,6%, sedangkan spesifisitasnya berturut-turut adalah 92,9%, 91,6%, dan 91,1%. Nilai prediksi positif berturut-turut adalah 77,3%, 78,6%, dan 71,4%, sedangkan nilai prediksi negatif adalah 86,8%, 92,9%, dan 96,8%. Dari penelitian ini didapatkan bahwa Ziehl Neelsen merupaka metoda terbaik dan dapat dilakukan di laboratorium sederhana (Karuniawati,.dkk, 2005). Tabel 5.2 Nilai sensitivitas, spesifitas, prediksi positif dan prediksi negatif 3 macam pewarnaan basil tahan asam (Karuniawati,.dkk, 2005). Ziehl Tan Thiam Hok Fluorokrom Neelsen Sensitivitas Spesifisitas Nilai Prediksi Positif Nilai Prediksi Negatif 62,9 % 92,9 % 77,3 % 86,8 % 81,5 % 91,6 % 78,6 % 92,9 % 92,6 % 91,1 % 71,4 % 96,8 %

Tabel 5.2 menunjukkan nilai sensitivitas, spesifisitas, prediksi positif dan negatif dari 3 macam metode pewarnaan basil tahan asam yang dikerjakan dengan hasil kultur sebagai baku emas. Pewarnaan fluorokrom mempunyai

55

sensifisitas yang paling tinggi (92,6%) dibanding 2 metode pewarnaan yang lain, hal ini menunjukkan bahwa metode ini memberikan hasil yang negatif palsu paling rendah. Spesifisitas ketiga pewarnaan memberikan nilai yang hampir sama, yaitu Tan Thiam Hok 92,9 %, Ziehl Neelsen 91,6 %, dan flurokrom 91,1%. Nilai-nilai ini mununjukkan bahwa ketiganya memberikan hasil positif palsu 7 sampai 8 %. Dari penelitian ini Zeihl Neelsen adalah merupakan metode yang paling terbaik (Karuniawati,.dkk, 2005). Kelemahan dan kelebihan pewarnaan Kinyoun-Gabbet antara lain adalah: latar belakang berwarna ungu dan buram, basil kurang merah, lekosit ungu, reagen jarang dijumpai karena itu mahal harganya, komposisi dari fenol kristal/bubuk murni dan pada saat pembuatan reagen sebelum proses homogenisasi zat warna primer denagn carbol fuchsin dipanaskan/dilelehkan pada penangas atau autoclaf, dan terakhir pada proses pewarnaan lebih mudah, cepat dan praktis (Hidayat, 2011). Adapun kelemahan dan kelebihan Ziehl Neelsen yakni: latar belakang berwarna biru terang, basil merah jelas, reagen terjangkau dan mudah didapat, fenol diencerkan 5% dan tidak dipanaskan karena pemanasan dilakukan pada proses pewarnaan sedian zat warna utama maka dari itu agak lama waktu yang dibutuhkan (Hidayat, 2011). Teknik pewarnaan auramine-fenol fluorochrome dapat digunakan untuk mendeteksi M. tuberculosis dalam dahak, cairan serebrospinal, dan spesimen lain ketika ada mikroskop fluoresensi. Teknik ini memungkinkan pemeriksaan yang lebih cepat dari Pap karena tujuan 40x dapat digunakan. Auramine-fenol teknik dapat dengan mudah mendeteksi basil tuberkel ketika mereka sedikit. Auramine-Fenol noda menggabungkan dengan kapsul lilin dari mycobacterium dan tidak dapat decolorized dengan asam alkohol, banyak cara yang sama Carbol fuchsin bekerja dalam teknik pewarnaan tradisional. Sebagian besar latar belakang akan decolorized, namun, sedikit fluoresensi dapat dipertahankan. Penggunaan kalium permanganat

memadamkan latar belakang fluoresensi, sehingga hanya asam-cepat organisme untuk divisualisasikan (Hidayat, 2011).

56

Gambar 5.3 Interpretasi hasil Pewarnaan Zeihl Neelsen. (A) BTA (-) Ngatif ; (B) BTA (+) Positif (Perbesaran lensa objektif 100X)

5.3 Pewarnaan Neisser 5.3.1 Tujuan Menemukan bakteri bergranula dalam sampel (Achmad, 2010). 5.3.2 Prinsip Pengecatan dengan Neisser A&B menyebabkan granula Babes Ernst (poolkarrel) berwarna violet hitam, cat tadi oleh granula bakteri dipegang kuat terhadap air. Sehingga dengan cat Neisser C tidak berubah (luntur), badan bakteri akan terlunturkan oleh air yang terdapat pada Neisser C sehingga mengambil warna kuning atau coklat dari Neisser C (Achmad, 2010). 5.3.3 Dasar Teori Pewarnaan menurut Neisser adalah tes untuk kehadiran polifosfat disimpan dalam sel ( bahan penyimpanan). Metode ini adalah bantuan yang sangat diperlukan untuk identifikasi strain tertentu dari bakteri berfilamen. Selanjutnya, metode pewarnaan dapat membuat Bio-P bakteri, bertanggung jawab untuk penghapusan fosfat biologis, terlihat (Ludge, 2012). Sel Neisser negatif, pewarnaan hampir tidak atau tidak sama sekali (sedikit cokelat atau kuning; Tiga kelompok utama bakteri Neisser positif dapat dibedakan (Ludge, 2012).

57

a.

Bakteri berfilamen yang noda benar-benar abu-abu-violet. Ini hampir selalu berlaku untuk Nostocoida limicola atau Tipe 0092.

b.

Bakteri berfilamen yang mengandung biru-hitam tetesan polifosfat berwarna. Tanpa pewarnaan, tetesan ini tidak dapat dengan jelas diamati dengan mikroskop cahaya. Mereka memang jelas terlihat jika perbesaran yang jauh lebih tinggi (mikroskop elektron) digunakan. Ini tetesan, yang hadir berpasangan, merupakan karakteristik penting bagi

identifikasi Microthrix parvicella. c. Koloni biru-hitam sel berwarna. Ini terdiri dari Bio-P bakteri, ada beberapa variasi di mana jenis koloni dalam cara pewarnaan dengan Neisser. Teduh kadang-kadang jauh lebih ringan, atau hanya bagian dari pewarnaan sel muram. Pewarnaan Neisser, khusus untuk mewarnai Coynebacterium

diphtheriae. Untuk pewarnaan ini 3 (tiga) macam zat warna, yaitu : Neisser A isinya Methylen blue (Untuk mewarnai kromosom dan membran sel) Neisser B isinya Gentian violet (Untuk mewarnai inti sel) Neisser C isinya Chrysoidin (bewarna kuning) (Untuk mewarnai kapsul) Setelah dilakukan fiksasi, sediaan diwarnai dengan campuran dua bagian Neisser A dan satu bagian Neisser B (campuran ini harus selalu dibuat baru) selama 15-30 detik. Kelebihan zat warna dibuang dan tanpa dicuci sediaan diwarnaai dengan Neisser C selama 15-30 detik. Tanpa dicuci sediaan dikeringkan diantara dua helai kertas saring, kemudian dilihat dengan mikroskop, akan terlihat Coynebacterium diphtheriae berbentuk seperti halter, dimana batangnya bearna tengguli (kecoklat-coklatan) sedangkan kedua benjolan dikedua ujungnya bewarna ungu kebiru-biruan. Kedua benjolan ini diduga sebagai makanan persedian dan disebut granula Babes Ernst (Entjang, 2003).

58

Separates bakteri dalam 2 kelompok yaitu Neisser (+) positif dan Neisser (-) negatif. Membedakan mereka dengan filamen sel yang berisi butiran yang menumpuk.Neisser (+) positf biru dan Neisser (-) negatif kecoklatan (Ludge, 2012).

Gambar 5.4 Interpretasi hasil pewarnaan Neisser. (A) Neisser (-) Negatif ; (B) Neisser (+) Positif (Perbesaran lensa objektif 100X)

Gambar 5.5 Coynebacterium diphtheriae (Perbesaran lensa objektif 100X)

BAB VI PENUTUP

4.1 Kesimpulan Berdasarkan Praktek Kerja Lapangan (PKL) yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa: 1. Beberapa ilmu yang dapat diaplikasikan antara lain di bidang hematologi, Kimia Klinik, Imunologi, Mikrobiologi, Sampling, dan Patologi Anatomi. Namun dalam laporan penulis hanya membahas mengenai bidang Mirkobiologi 2. Selama melaksanakan Praktek Kerja Lapangan (PKL) di Laboratorium RSUD A. Wahab Sjahranie, ada beberapa hal yang bisa dijadikan sebagai pengalaman mahasiswa, salah satunya adalah cara pemeriksaan

Laboratorium yang berbeda dengan cara pemeriksaan yang didapat selama masa perkuliahan. 3. Unit Mikrobiologi memiliki berbagai aspek yang terdiri dari cara pengambilan sampel mikrobiologi, pewarnaan, kultur, pembuatan media, reaksi biokimia, dan lain sebagainya, dan pemeriksaan yang paling banyak dilakukan adalah bakteri tahan asam, kultur (darah,pus,urin) dan tes kepekaan antibiotik. 4. Pewarnaan Gram memiliki kelebihan sebagai sebagai pedoman awal untuk memutuskan terapi antibiotik, dan kelemahaannya memerlukan mikroorganisme dalam jumlah banyak yakni lebih dari 104 per ml. 5. Kelebihannya pewarnaan Ziehl Neelsen adalah latar belakang berwarna biru terang, basil merah jelas, reagen terjangkau dan mudah didapat, kelemahaannya karena fenol diencerkan 5% dan tidak dipanaskan sehinggan pewarnaan membutuhkan waktu yang lama untuk pemanasan. 6. Pewarnaan Neisser, khusus untuk mewarnai Coynebacterium diphtheriae, dimana kelebihan pewarnaan Neisser yaitu semua granula bakteri akan ikut tercat, dan kelemahannya yaitu ada beberapa variasi dimana kadangkadang bakteri terwarnai kurag jelas.

59

60

4.2 Saran Berdasarkan Praktek Kerja Lapangan (PKL) yang telah dilakukan dapat disarankan bahwa: 1. Kepada mahasiswa (i) yang mengikuti Praktek Kerja Lapangan (PKL) agar lebih memahami prinsip dari pemerisaan-pemeriksaan yang terdapat di Intalasi Laboratorium Patologi Klinik RSUD A.W Sjahranie Samarinda. 2. Kepada pihak penyelenggara STIKES Wiyata Husada Samarinda kegiatan Praktek Kerja Lapangan (PKL) dalam hal ini pihak akademik kampus agar kedepannya lebih ditingkatkan lagi dalam hal praktikum sehingga mahasiswa (i) yang mengikuti kegiatan ini memperoleh ilmu lebih optimal lagi. 3. Kepada pihak institusi Laboratorium Patologi Klinik RSUD A.W Sjahranie Samarinda agar sebaiknya dapat memberikan perkuliahan umum kepada mahasiswa (i), untuk menambah pengetahuan mahasiswa (i).

DAFTAR PUSTAKA

Achmad,M 2010. Pendidikan, Kesehatan dan Bioteknologi Kedokteran. http://masselekang.blogspot.com/2010/12/pewarnaan-bakteri.html. Diakses pada tanggal 14 Arpil 2012. Agnesa. A, 2010. Laporan Praktikum Bakteri Tahan Asam. http://kesmasunsoed.blogspot.com/2010/06/laporan-praktikum-bakteri-tahan-asam.html. Diakses pada tanggal 16 Maret 2012. Entjang.I, 2003. Mikrobiologi & Parasitologi untuk Akadami Keperawatan. Bandung : PT Citra Aditya Bakti. Haidar.C.A., 2011. Komposisi Ziehl Neelsen & Kinyoun Gabbet untuk pewarnaan BTA. http://chitunkgomez.blogspot.com/2011/07/komposisi-ziehl-neelsenkinyoun-gabbet.html. Diakses pada tanggal 18 April 2012. Hidayat.K.S., 2011. Perbandingan Hasil Pemeriksaan BTA. http://kusnadish.blogspot.com/2011/11/perbandingan-hasil-pemeriksaanbta.html. Diakses pada tanggal 14 Arpil 2012. Jawetz,M. dan Adelberg, 2007. Mikrobiologi Kedokteran. Jakarta : EGC. Ludge, 2012. Neisser Staining.http://www.asissludge.com/NeisGram.htm#Neisser_Staining. Diakses pada tanggal 14 Arpil 2012. Profil Rumah Sakit. http://rsudaws.com/maintentangkami/mainprofil.html. Diakses pada tanggal 26 Januari 2012. Standar Pelayanan Medik Laboratorium Klinik RSUD.A.Wahab Sjahranie Samarinda Tahun 2009. Triyana.S.Y., 2012. Pengecatan Gram. http://medicine.uii.ac.id/upload/mikro.../PENGECATAN%20GRAMsyt.doc. Diakses pada tanggal 26 Januari 2012. Wahjono.H, 2007. Peran Mikrobiologi Klinik Pada Penanganan Penyakit Infeksi. Semaranng : FKUNDIP. Wahyuningsih, 2008. Fungsi Zat Pewarna pada Pengecatan Gram. http://meiscience.blogspot.com/2009/10/fungsi-zat-pewarna-pada-pengecatangram.html. Diakses pada tanggal 14 Arpil 2012.