Lucrare editat cu avizul I.S.J.

Mehedini

Autori: Prof.gradul I, Lucian Cpitnescu, I.S.J. Mehedini, inspector colar general Prof.gradul I, Dumitru Gingu, Liceul Teoretic Gheorghe ieica Prof.definitiv, Adriana Giuic, Grupul colar Decebal Referent tiinific: Conf. univ. dr.Aurel Faur, Universitatea de Vest din Timioara, Facultatea de Chimie-Biologie-Geografie Coordonare metodic: Prof.Maria Diaconu, inspector colar, specialitatea biologie Redactor Prof. Laurean Crciunescu, director C.C.D. Coperta: Prof. Dumitru Gingu Revizie text Prof. Ana Miloev, Liceul Teoretic Gheorghe ieica Rezumat n limba englez: Prof. Florentina Popa, Grupul colar Decebal Tehnoredactare computerizat: Mihai Tudoroniu, informatician C.C.D.

ISBN

Tipografia: Casa Corpului Didactic Mehedini

Lucrarea urmrete formarea i dezvoltarea deprinderilor de observare i experimentare ale elevilor. Prezentarea are la baz relaia comunicare-aprofundare, sintez-evaluare. Lucrrile practice propuse pot fi realizate individual sau n grup, iar bogatul coninut tiinific sporete atractivitatea lucrrii. S-ar putea aprecia c adevratele tiine ale naturii au aprut datorit metodei experimentale. Experimentul nu a fost strin de progresele spectaculoase n domeniul cunoaterii. nsi civilizaia uman este produs al experimentului. Cauzele i legile naturii le putem cunoate, n primul rnd, cu ajutorul metodei experimentale. Experimentul permite individului sau grupului s intervin activ n cunoatere. Experimentul n biologie apare ca expresie a necesitii de explicare cauzal i legic a proceselor i fenomenelor. Experimentul nu ne ofer adevruri, ci date pentru elaborarea adevrurilor. El permite celui care l folosete s angajeze un dialog activ cu natura. Inspector colar General, Prof. LUCIAN CPITNESCU

Biologia, ramur de tiin cu caracter prin excelen experimental, presupune realizarea unui numr mare de experimente i observaii prin care s se consolideze nivelul teoretic de pregtire al elevilor. Elaborarea unui ndrumtor de lucrri practice vine n ntmpinarea acestui deziderat, fiind un instrument de lucru util elevilor i profesorilor din nvmntul preuniversitar. Prezenta lucrare este n conformitate cu curricula colar, are o ilustraie bogat i atractiv. Suntem convini c acest ndrumtor de lucrri practice va fi bine apreciat de ctre toi cei ce vor s se specializeze n domeniul tiinelor biologice. Conf. Dr. AUREL FAUR Universitatea de Vest din Timioara

Introducere Biologia este cea mai fascinant dintre tiinele care se predau n coal Viaa este subiectul care se studiaz cu interes i plcere ncepnd cu cei mai tineri discipoli i continund n toat ierarhia vrstelor. Pentru individ limitat, pentru lume infinit, viaa ca subiect de studiu n biologie se detaeaz de austeritatea i relativa rceal a obiectului de studiu al celorlalte tiine ale naturii. Lucrrile practice se pot efectua cu aparatura i instrumentarul existente n coli, materialele consumabile putnd fi procurate din natur i din comer. Programele colare prevd obiectivele i competenele care pot fi realizate cu ajutorul lucrrilor practice, al cror rol i loc n desfurarea procesului didactic l stabilete fiecare cadru didactic n concordan cu cerinele programei. Efortul depus pentru pregtirea lucrrilor practice este laborios, dar rezultatele obinute de elevi i participarea lor activ i afectiv rspltesc orice efort. Mediul de lucru, atmosfera fizic i comunicarea adecvat cu elevii n cadrul leciilor n care sunt prevzute lucrri practice, contribuie la creterea interesului elevilor pentru obiectul biologie. Tratarea individual a elevilor, dirijarea discret a activitilor, crearea unor situaii problem, stimularea gndirii elevilor pentru a formula ipoteze, rezolvarea prin descoperire cu ajutorul unor lucrri practice a problemei, sunt modaliti de activitate didactic eficiente care permit o formare complex i o evaluare mai bun a elevilor. Lucrrile practice la biologie prezint particulariti metodice n funcie de obiectul didactic principal urmrit, de modalitile de organizare i n funcie de activitatea care predomin. De exemplu, experimentul cu scop de investigare sau cercetare este desfurat n cadrul unei lecii de descoperire i cuprinde urmtoarele etape principale: stimularea interesului pentru efectuarea experimentului (crearea unei motivaii), punerea unei probleme, emiterea unor ipoteze, stabilirea modalitilor de verificare a ipotezelor (etapa desfurrii experimentului), prelucrarea datelor obinute,verificarea rezultatelor, stabilirea concluziilor. n cazul leciilor de recapitulare i atunci cnd experimentul este utilizat n etapa de fixare sau evaluare din cadrul unei lecii, se poate folosi fia de lucru care cuprinde probleme i sarcini de lucru pentru elevi. Sub aspectul modalitilor de organizare a experimentului, de cele mai multe ori, acesta se poate desfura sub form de activitate independent individual, de activitate organizat pe grupe cu sarcini comune sau pe grupe cu sarcini difereniate. Desfurarea experimentului ca activitate independent individual necesit material natural, substane, materiale i aparatur necesare efecturii experimentului, elevii lucrnd n ritmul lor propriu, cu ajutorul fiei de lucru (exemplu- o lucrare practic de microscopie). Desfurarea experimentului pe grupe cu sarcini comune sau pe grupe cu sarcini difereniate necesit mprirea clasei n grupe de elevi. Grupele este bine s fie eterogene- formate din elevi mai bine sau mai slab pregtii, elevi mai interesai sau mai puin interesai n studiul biologiei; n cadrul acestor echipe elevii lucreaz pe rnd i colaboreaz n gsirea soluiilor i realizarea sarcinilor nscrise n fi, n stabilirea concluziilor. n toate lucrrile practice, de mare importan este s fie stabilite modaliti de comunicare ntre membrii grupelor de elevi , ntre grupele de elevi i profesor pentru a preveni dezordinea. Interveniile profesorului n activitatea unei grupe se vor face n caz de necesitate sau la cererea elevilor i nu pentru rezolvarea sarcinilor, ci pentru a depi eventualele blocaje. Comunicarea cu elevii se cere s fie tonic, dominat de calm i stpnire de sine, chiar dac elevii merg la o anumit grup pe un drum greit. nvarea prin ncercare i eroare poate fi temeinic i creeaz o mobilizare mai bun a elevilor, o depire a tracului, creterea capacitii de decizie i a curajului n rezolvarea sarcinilor. Autorii

Foreword Life is the most complex, the most miraculous and the most beautiful phenomenon in the Universe. The birth of any creature is a cosmic event because it reflects the handwork of the whole Universe. So let us all le happy for our existence as there is live in ourselves. The knowledge of nature in all its complexity becomes an essential issue for les, people, as we are gifted with the power of science, of knowledge of language and of feelings which gives us great advantages in the struggle for existence in comparison with other biological species. A foolish behavior of man for the environment may turn against him. Man has to know the living natures, to respect it, otherwise he endangers his own existence and evolution. Biology, the science of live, helps us to know and to cherish the living nature. Florentina Popa

BIOLOGIE- CLASA A IX-A Metode de sterilizare utilizate n microbiologie

Sterilizarea este operaia de distrugere a microorganismelor prezente ntr-un mediu sau pe instrumentarul de laborator. Cunoaterea metodelor de sterilizare este necesar pentru desfurarea corect i reuita oricrei lucrri de microbiologie. Exist numeroase metode. Alegerea metodei potrivite depinde de natura materialului care va fi sterilizat (sticlrie, cauciuc, metal). Clasificarea metodelor de sterilizare se face n funcie de natura operaiilor efectuate: Metode care utilizeaz ageni fizici: cldura ( uscat, umed), radiaii UV, filtrarea, ultrasunetele. Metode care utilizeaz ageni chimici: substane antiseptice, substane dezinfectante. Metode care utilizeaz cldura uscat: incinerarea, nclzirea la rou, flambarea, sterilizarea cu ajutorul aerului cald. Metode care utilizeaz cldura umed: fierberea, pasteurizarea, tindalizarea, autoclavarea

Principul metodelor care se bazeaz pe cldur- n cursul operaiei are loc degradarea proteinelor microbiene pn la calcinarea materialului biologic. Cldura realizeaz distrugerea formelor vegetative la temperatura de 50- 60o C cam n 30 de minute. Dac se crete temperatura la 70o C formele vegetative sunt distruse n 10 minute. La 20o C cu cldur umed i la 100o C cu cldur uscat sunt distrui sporii. Incinerarea const n arderea materialului biologic n cuptoare speciale sau crematorii. Prin aceast metod sunt distruse cadavrele animalelor scoase din exploatare ca i vata i tifoanele infectate. nclzirea la rou este folosit pentru ansele bacteriologice care sunt meninute n flacra becului de gaz pn la rou, mai nti la baza flcrii, apoi la vrf. Ansa se sterilizeaz obligatoriu nainte i dup utilizare. Flambarea const n trecerea prin flacra becului de gaz de cteva ori a obiectului care se sterilizeaz- lame de sticl, pipete gradate, pipete Pasteur, nainte de sterilizare, idem mnerul ansei i gtul eprubetelor i baloanelor nainte i dup utilizare. Sterilizarea cu aer cald este cea mai eficient msur de sterilizare cu cldur uscat. Carbonizarea materiei vii se face n etuve la 180o C timp de o or. Este o metod de sterilizare complet: se sterilizeaz sticlria de laborator, instrumentarul chirurgical. Nu se pot steriliza seringile cu armtur metalic i obiectele de cauciuc. Obiectele se pregtesc pentru sterilizare astfel: sticlria s fie bine splat i perfect uscat. Se mpacheteaz n hrtie de ambalaj fiecare obiect n parte. Toate eprubetele i baloanele se astup cu dopuri de vat nvelite n tifon, se leag cu sfoar i li se aplic un capion de hrtie. Pipetele se ambaleaz individual, sau n cilindrii metalici. Vata, compresele, pansamentele se sterilizeaz n casonete speciale (cutii de tabl cu perei dubli) peretele intern prezint orificii i peste el se afl o centur metalic ce astup orificiile dup ncetarea sterilizrii. Controlul sterilizrii la etuv se face amplasnd pe lng materialele de sterilizat, tubuoare de sticl care conin zaharoz al crei punct de topire este de 170o C Dac zaharoza este caramelizat nseamn c s-a atins temperatura necesar. Temperatura nu trebuie depit pentru c vata i hrtia ard producnd substane inhibitoare pentru microorganisme. Cldura umed are o putere de penetrare mai mare- distruge microorganismele hidratate n timp mai scurt i la o temperatur mai sczut dect cldura uscat. Fierberea const n fierberea instrumentelor chirurgicale, seringilor la 100o C timp de 20- 30 minute. Fierberea nu este o metod complet, sporii nu sunt distrui. Se face n fierbtoare electrice sau cu gaze i se recomand s se foloseasc ap distilat pentru a evita depunerea srurilor. Se recomand adugarea a 4- 5% carbonat de sodiu sau borax care ridic cu cteva grade punctul de fierbere i mpiedec ruginirea. Teoretic obiectele sterilizate pot fi utilizate 24 de ore. Se recomand folosirea lor imediat. Pasteurizarea este sterilizare incomplet, sunt distruse numai formele vegetative, nu i sporii. Este folosit la stilizarea laptelui i a berii. Se face prin nclzirea produsului la 56- 90o C timp de 30 7

minute. nclzirea se face pe baie de ap. Produsele astfel sterilizate se pstreaz ambalate ermetic la 4o C pn la momentul folosirii pentru a mpiedeca germinarea sporilor. Tindalizarea este o pasteurizare repetat de 3 ori la intervale de 24 de ore. Se face la sterilizarea mediilor de cultur care conin diferite substane organice: glucide, gelatin, ser sanguin care se degradeaz la temperaturi mai mari.. n intervalul dintre sterilizri se pstreaz la temperatura camerei pentru ca sporii rmai nedistrui s evolueze la forme vegetative care vor fi distruse la viitoarea nclzire. Tindalizarea este o sterilizare complet. Autoclavarea este sterilizarea cu vapori de ap sub presiune. Este cea mai folosit n practica microbiologic,. este o sterilizare complet i sigur. Cu vapori de ap sub presiune se obin temperaturi peste 100o C. La 0,5 atmosfere temperatura este de 115o C La 1 atmosfer temperatura este de 121o C La 2 atmosfere temperatura este de 134o C nclzirea se face timp de 20 de minute. Materialele sterilizate sunt materialele infectate, culturile microbiene vechi, casonete cu instrumentarul medical, medii de cultur, obiecte din cauciuc. Sterilizarea se face n autoclav care este un cazan de tabl cu pereii dubli cei interni prezentnd orificii prin care trec vaporii. Antisepticele substane care mpiedec multiplicarea microorganismelor. Aceste substane au n general, aciune microbiostatic, acioneaz n concentraii mici i pentru timp scurt pot fi aplicate pe esuturi vii. Exemplu. Alcoolul etilic de 70o ,KMnO4 0,1%, tinctura de iod, acidul boric , H2O2 ,detergenii cationici de tip bromocet 0,1%. Dezinfectanii sunt substane care au n general, aciune microbicid, care distrug microbii de pe diferite obiecte neanimate. Exemple: formol, fenol, cloramina. Alcoolul absolut de 96o este un dezinfectant foarte slab, el acioneaz prin coagularea proteinelor.

Tipuri morfologice de baz la bacterii Forma bacteriilor este controlat genetic, ele ncadrndu-se ntr-un anumit tip morfologic i anumite dimensiuni. Forma poate fi influenat i de condiiile de mediu, totui polimorfismul este limitat- domin forma tipic pentru specia dat. Convenional forma bacteriilor se apreciaz pe bacterii din culturi tinere, aflate n cretere activ, cultivate pe medii corespunztoare i n condiii optime de temperatur, PH i presiune de oxigen adecvat. Dup form deosebim 5 tipuri: Bacterii sferice- coci, aproape izodiametrice, uor ovalare, poliedrice, reniforme. Dup modul de grupare la sfritul diviziunii -coci izolai -grupate cte dou Diplococcus pneumonie -tetrada - sarcina -streptococ Micrococcus tetragenes (4 celule) Sarcina lutea (8 celule) Streptococcus pyogene (celule n lan)

- stafilococi

Staphylococcus aureus (ciorchine)

Bacterii cilindrice ( bacili )- celule alungite- bastona, dar sunt i forme de tranziie, ntre coci i bastonae- cocobacili. Capetele bacililor pot fi: - rotunjite Pot fi: tiate drept ascuite picot -izolai grupai cte-doi

diplococi

- n palisad

Corynebacterium diphteriae

-streptobacili

Lactobacillus sp.

- n rozet

Agrobacterium stellatum

-grupri neregulate

3.Bacterii spiralate (elicoidale) Dup numrul spirelor i dup aspect sunt mai multe subtipuri: -vibrion Vibrio cholerae

- spirili cu ture de spir rigide -spirochetele cu ture de spir flexibile: -strnse - relaxate

Spirillum volutans Treponema pallidum Leptospira sp.

5. Bacterii ptrate. Descoperite n 1980 n Sinai de Walsby. Aparin genului Qadra, grupul Arhebacteriilor. n afara tipurilor de baz sunt i forme rare de bacterii: bacterii pedunculate, bacterii care nmuguresc, bacterii cu apendici acelulari rezultai din produi de excreie, bacterii care formeaz trichoame (lanuri de bacterii reunite de o teac polizaharidic comun, dar pot tri i izolat). Minicelulele- sunt corpusculi mici, sferici care nu cresc, ei se formeaz printr-o septare neobinuit a celulelor bacteriene. Se formeaz la extremitatea unor bacterii- Escherichia coli, Bacillus subtilis, Salmonella i Vibrio. Aceste minicelule nu au material nuclear, nu cresc i nu se divid, au totui metabolism propriu (cu enzime) sunt rezistente la radiaii ionizante. Sunt importante pentru cercetare, vor fi folosite ca vaccinuri vii.

10

Studiul mediilor de cultur utilizate n bacteriologie Mediul de cultur este un produs nutritiv preparat artificial n laborator n vederea cultivrii microorganismelor. Mediul de cultur trebuie s ndeplineasc urmtoarele condiii: Compoziia chimic s fie corespunztoare pentru dezvoltarea microorganismelor S asigure sursa de C, N ,srurile minerale i vitaminele PH-ul ntre 7- 7,5 pentru bacterii i 5,5- 6 pentru drojdii Mediul s fie steril Umiditatea mediului s fie corespunztoare S se asigure protecia fa de lumin S se asigure cerinele pentru oxigen n funcie de tipurile de microorganisme: aerobe, microaerofile, anaerobe Asigurarea temperaturii de dezvoltare de 25- 28oC pentru germenii saprofii i 37oC pentru germenii patogeni. Cele mai utilizate medii de cultur sunt mediile uzuale sau simple. Mediile uzuale pot fi lichideexemplu bulionul simplu de carne, sau solide- exemplu geloza nutritiv. Etapele preparrii unui mediu de cultur: Stabilirea compoziiei chimice a mediului n funcie de tipul de microorganisme Cntrirea substanelor n ordine din reet i dizolvarea lor n ordine n din cantitatea de ap, se adaug restul de ap, se corecteaz PH-ul fie cu HCl 10% fie cu NaOH . Dac este cazul se filtreaz Sterilizarea mediului printr-o metod adecvat- filtrare, tindalizare, autoclavare Reete pentru mediul de cultur: -mediu lichid Extract de carne- 3g Pepton- 5g NaCl 5g Ap distilat pn la 1000 ml -mediu solid Extract de carne 3g Pepton 5g NaCl -5g Agar 20g Ap distilat pn la 1000 ml

11

Tehnici de nsmnare utilizate n microbiologie nsmnarea este trecerea unei culturi microbiene sub form de inocul care conine microorganisme, pe un mediu de cultur favorabil dezvoltrii speciei microbiene. Condiia esenial de lucru este asepsia. Sunt mai multe tehnici n funcie de consistena mediului i de tipul de cultur pe care vrem s o nsmnm. nsmnarea n medii lichide 1. nsmnarea unui mediu lichid cu o cultur microbian dezvoltat n mediu lichid- se realizeaz cu pipeta gradat (pentru un volum fix) i pipeta Pasteur (pentru un volum oarecare) 2. nsmnarea unui mediu lichid cu o cultur microbian dezvoltat pe mediu solid cu ajutorul ansei bacteriene. Tehnica de lucru. Se recolteaz aseptic o poriune de cultur microbian n bucla ansei. Se introduce ansa n mod aseptic n eprubeta cu mediu lichid, se depune materialul pe peretele eprubetei, la nivelul interfeei cu mediul lichid, apoi se spal peretele eprubetei cu cteva picturi din mediul de cultur. Se omogenizeaz inoculul cu mediul de cultur prin rsucirea eprubetei ntre palme .Pe gtul eprubetei se noteaz numele culturii i data incubrii. Se termostateaz la temperatura optim de incubaie de 28- 37oC .

Dop

Sarcina lutea

15.08.2001

Geloz

Temperatura optim timp de 24 de ore

Mediu lichid

Dup inoculare se observ tulburarea mediului de cultur datorit multiplicrii celulelor bacteriene. Se obine o cultur bacterian n mediu lichid. nsmnarea mediilor solide. Sunt dou variante: nsmnarea mediilor solide nclinate cu o cultur microbian dezvoltat n mediu lichid. nsmnarea se face cu pipeta. nsmnarea mediilor solide nclinate, cu o cultur microbian dezvoltat pe mediu solid se face cu ansa bacteriologic Tehnica de lucru. Se recolteaz aseptic n bucla ansei o poriune de cultur (inocul) . Se introduce ansa n mod aseptic n eprubeta cu mediu nclinat steril, pn la fundul eprubetei unde este o pictur de ap de condensare. Se omogenizeaz inoculul n aceast pictur, apoi se traseaz pe suprafaa gelozei striuri n zigzag de la fundul spre gura eprubetei. 12

inocul

pictur de lichid de condensare

striuri n zig-zag

Se incubeaz la temperatura de dezvoltare a germenului 24-48 ore

cultur bacterian

nsmnarea mediilor solide repartizate n plci (pe geloz plci) Tehnica de lucru din cultura care trebuie nsmnat se face o suspensie foarte dens n ap fiziologic steril, indiferent dac nsmnm cu un produs solid sau lichid. Sunt dou variante n funcie de obiectul utilizat

13

- Tehnica nsmnrii n pnz prin inundare: se aspir cu pipeta 2-3 ml din suspensia bacterian dens, se las s se scurg tot volumul de lichid pe suprafaa gelozei astfel ca s fie acoperit toat

inocul exces de inocul mediu suspensie bacteriologic dens n ap fiziologic steril suprafaa cu inocul, se nclin placa i cu aceeai pipet se extrage excesul de inocul. Se noteaz pe capacul plcii numele culturii i se incubeaz la temperatura optim 24- 48 ore. -nsmnarea cu ajutorul tamponului de vat Se mbib tamponul n suspensia bacterian, se preseaz de pereii interiori ai eprubetei pentru a ndeprta excesul de inocul pe suprafaa plcii cu geloz se traseaz striuri foarte apropiate n zig- zag pe toat suprafaa plcii nti pe o direcie, se rotete placa cu 90o, se traseaz din nou striuri foarte apropiate, apoi un striu marginal. Dup incubare se va observa c ntreaga suprafa a mediului de cultur este acoperit cu un strat uniform de celule- se obine o cultur n pnz. nsmnarea n pnz se face pentru obinerea de mas celular bogat, pentru realizarea tehnicii autobiogramei i n cazul culturii bacteriofagilor.

Tampon de vat

Se noteaz numele culturii nsmnate, data i se incubeaz la temperatura optim de dezvoltare 24- 48 de ore Metode de examinare a microorganismelor la microscop. I. n stare vie, pe preparate proaspete ntre lam i lamel. Examinarea preparatelor proaspete se face pentru evidenierea mobilitii germenilor, se dau puine detalii de structur, dar mobilitatea este un caracter care poate servi la identificarea unei specii de bacterii alturi de alte caracteristici studiate: structura, morfologia, proprieti biochimice, proprieti serologice, de patogenitate ca i reactivitatea germenilor pentru diferii colorani- activitate tinctorial. Se examineaz pe viu: bacili, spirili, leptospire, spirochete. Materiale necesare: Lame cu lamele curate i degresate, culturi microbiene n mediu lichid sau suspensie n ap fiziologic steril, sau mediu natural, pipete Pasteur, vas cu amestec sulfocromic. Mod de lucru: Se recolteaz cu pipeta Pasteur o cantitate mic de cultur, se depune o pictur pe lam, apoi lamela la 45o se aeaz pe marginea picturii i se las s cad uor fr s prind aer. Observarea preparatelor lam- lamel se face la microscopul optic cu obiectiv uscat (40x), dar pot fi observate ui la microscopul cu fond negru i la microscopul cu contrast de faz. Microorganismele 14

efectueaz micri active, datorit prezenei flagelilor, n toate direciile cmpului- naintare, rsucire, rostogolire; micri pasive- datorate nclinrii platinei- sunt micri ntr-un singur sens. Dup examinare preparatul se pune ntr-un cristalizor cu soluie desinfectant- clorur mercuric 2 %. II. Germeni omori prin diferite procedee de fixare i colorare pe preparate fixe numite frotiuri. Examinarea frotiurilor permite studierea morfologiei germenilor, evidenierea unor structuri intra i extraparietale. Frotiul este un preparat microbiologic etalat pe lame microscopice. Pot fi executate din culturi microbiene dezvoltate pe mediu solid cu ajutorul ansei, sau din cultur lichid cu pipeta Pasteur. Materiale necesare : Culturi microbiene, ap fiziologic steril, ans bacteriologic, stative de colorare, creion de scris pe sticl, lame curate i degresate. nainte de efectuarea frotiului lamele se flambeaz pe faa pe care se va efectua frotiul. Timpii de lucru. 1. Etalarea. ntr-o pictur de ap fiziologic steril luat n bucla ansei i pus pe lam se omogenizeaz o cantitate mic de cultur recoltat n bucla ansei. Etalarea se face cu ajutorul ansei prin micri circulare concentrice. Frotiul trebuie s fie subire i uniform pentru a mpiedica suprapunerea germenilor. Suprafaa de etalare se mrete, frotiul nu trebuie s depeasc marginile lamei. 2. Uscarea. Se face la temperatura camerei, nu se recomand agitarea n aer . 3. Fixarea. Se face cu cldur sau ageni chimici. Se trece lama cu faa opus frotiului prin flacra becului de gaz de cteva ori. Fixarea este ncheiat cnd lama frige. Se controleaz temperatura trecnd-o pe dosul palmei stngi. Fixarea cu ageni chimici- metanol, etanol, sau alcool- eter. n cursul operaiei de fixare, germenii sunt omori. Se nltur posibilitatea infectrii, preparatul ader mai bine la lam, se mrete i afinitatea pentru colorani. Pentru efectuarea frotiului din mediu lichid se procedeaz la fel, dar se folosete pipeta Pasteur. 4. Colorarea. Se datoreaz reaciei de combinare ntre anumii colorani i unii constitueni ai celulelor bacteriene. Coloranii utilizai sunt substane organice din grupul anilinei, extrai din gudroanele de huil sau substane chimice de tipul srurilor cu caracter bazic sau acid: fucsina bazic, violet de genian, albastru de metilen, fucsina acid, eozina Metode de colorare utilizate. Simple, cnd se folosete aciunea unui singur colorant. Difereniale, cnd acioneaz 2 sau mai muli colorani Speciale sau selective, se utilizeaz colorani selectivi care evideniaz anumite structuri celulare. Coloraia simpl cu fucsina. Frotiul se fixeaz la flacr. Colorarea cu soluie de fucsina bazic soluie 1% hidroalcoolic fenicat din care se prepar soluia de lucru 1/10. fucsina se menine pe lam un minut. Se spal cu ap de robinet, se usuc la aer, se examineaz la microscop cu obiectivul de imersie ntr-o pictur de ulei de cedru. Bacteriile sunt colorate uniform, ceea ce constituie un artefact datorat faptului c diferite componente celulare, dei au structuri diferite au afinitate aproape egal pentru coloranii bazici. coloraia simpl se face n scop orientativ. Dac e vorba de o cultur pur se poate observa tipul morfologic al germenilor i confirmarea puritii culturii. Dac frotiul este fcut din preparat natural se poate constata prezena, microorganismelor, tipul i densitatea lor. Coloraia Gram. A fost introdus n practica microbiologic de Gram. Se utilizeaz aciunea a doi colorani: fucsin bazic i violetul de genian, este o coloraie diferenial- difereniaz toate bacteriile n dou grupe: Gram pozitive i Gram negative, care se bazeaz pe diferenele structural biochimice i biologice, dar n special pe structura diferit a peretelui celular. Este o coloraie cu valoare taxonomic, descrierea ncepnd cu caracterul Gram .Descrierea metodei. Frotiul este fixat la flacr. Se coloreaz cu soluie de violet de genian 1% care se menine pe lam 1-2 minute, apoi colorantul se scurge i preparatul se spal cu ap. Toate bacteriile se coloreaz n violet. Mordansarea cu soluie Lugol 1:2:300 iod, iodur de potasiu, ap distilat. Soluia se menine pe lam 2-3 minute. Preparatele nu se spal. n timpul acestei operaii iodul formeaz cu violetul de genian un complex iodat cu greutate molecular mare care la unele bacterii este stabil, la altele este instabil. Decolorarea cu alcool aceton (3-1) se menine 5- 7 secunde pe lam, apoi se face o splare abundent cu ap pentru a opri aciunea decolorantului. 15

Recolorarea cu soluie de fucsin bazic 1%, 1/10. se menine pe lam un minut. Preparatul se spal cu ap, sunt uscate i se examineaz la microscop cu obiectivul de imersie. Celulele la care complexul este instabil se decoloreaz i vor fi recolorate cu fucsin n rou, celelalte rmn colorate n violet . Interpretarea observaiilor. Dac preparatul este dintr-un amestec de germeni- unele bacterii vor fi colorate violet- Gram +, altele n rou- Gram . Principiul coloraiei Gram. Coloranii bazici au mare afinitate i reacioneaz cu componentele acide din citoplasma bacteriilor, iar dup tratarea cu soluia Lugol se formeaz un complex iodat stabil. La Gram pozitive i instabil la Gram negative care trebuie colorate apoi cu un colorant de contrast pentru evideniere. Ipoteza acceptat este c un rol esenial n colorare l are peretele celular. Coloraia Gram depinde foarte mult de vrsta culturii bacteriene. Numai culturile tinere permit o coloraie i o interpretare corect. Pe msur ce mbtrnesc i schimb comportamentul- bacteriile Gram pozitiv se coloreaz ca i cele Gram negativ. Bacterii Gram pozitive. Bacilii sporulai- Bacillus subtilis, Bacillus aureus, specii ale genurilor Staphylococcus, Streptococcus, bacteriile lactice- Lactobacillus. Bacterii Gram negative. Escherichia coli, Proteus, Salmonella, gonococul- Neisseria, se comport la fel toate celulele eucariote, cu excepia drojdiilor.

16

Structura celulei bacteriene

Virusuri

cili

capsul perete celular citoplasma (conine acid nucleic, glicogen, grsimi i uneori un pigment

flagel

O bacterie tipic. Procesele eseniale ale vieii, precum i producerea energiei, au loc n citoplasm. Peretele celular este rigid i capsula este vscoas (groas i lipicioas) pentru a preveni uscarea celulei. Cilii i flagelii sunt pentru locomoie.
Bacteriile se numr printre cele mai mici organisme vii. Aceti Bacillus proteus au fost colorai cu argint i mrii de aproximativ 2500 de ori pentru a deveni vizibili.

Un model al unui virus icosaedric (cu 20 de laturi). nveliul exterior const din molecule proteice, iar miezul are o singur molecul de ADN sau ARN

Acest virus bacteriofag T-2 atac bacterii. Capul su este ca o prism hexagonal. Un tub ngust ntr-o teac spiralat iese din baza prismei Din teac ies ase picioare proteice.

17

Celula animal i celula vegetal (dup Enciclopedia Encarta)

reticul endoplasmatic rugos ribozom por nuclear nucleol nveli nuclear aparat Golgi centriol lizozom nucleu

reticul endoplasmatic neted

citoplasm

mitocondrie

membran celular

Celula animal

lizozom

por nuclear nveli nuclear nucleu

aparat Golgi nucleol

ribozom membran tilacoidal grana

cloroplast

reticul endoplasmatic rugos reticul endoplasmatic neted

vacuol

plasmodesme citoplasm perete celular

mitocondrie

Celula vegetal

membran celular

18

Tipuri de celule eucariote

Tipuri de celule vegetale: A,B i Cfibre sclerenchimatice: A i B vedere longitudinal; Cseciune transversal; D i E colenchim: D n seciune longitudinal; E- seciune transversal; F i H- sclereide; Gparenchim; I- celul de parenchim lemnos

Forme de celule animale

19

Observaii asupra structurii unor alge unicelulare i pluricelulare ncrengtura Chlorophyta Algele verzi constituie o grupare polimorf, cu forte muli reprezentani,rspndit n mediul acvatic,iar unii pe soluri umede sau pe alte substraturi,de regul tot umede. Cloroplastele de forma variat cte una sau mai multe n celul conin clorofilele a i b, care predomin,de aceea aceste alge au culoarea verde. Clorofitele se caracterizeaz printr-un aparat vegetativ foarte variat, dar foarte puin difereniat, fiind reprezentat prin alge unicelulare, izolate sau reunite in colonii sau cenobii sau pluricelulare, lamelare sau filamentoase, simple sau ramificate. La unele alge verzi, talul alctuiete filamente tubulare (sifonalele), plurinucleare, simple sau ramificate. Clorofitele unicelulare au forme si dimensiuni foarte variate, putnd fi: ovale, sferice, stelate, cilindrice, poliedrice etc. Organizarea celulei. n celul se afl citoplasma, un nucleu (sau mai muli), cromatofori, vacuole, stigma, pirenoizi etc. Membrana celular de cele mai multe ori este celulozic. Uneori, peretele celular este alctuit n parte i din substane pectice, acestea intrnd de obicei n alctuirea pturii externe, care adeseori se gelific. Exist si cazuri, mai rare, cnd celula este delimitat de o pelicul citoplasmatic. La unii reprezentani, membrana celular este impregnat cu sruri de calciu. Celula posed unul sau civa cromatofori mari (bandiformi, stelai, n forma de inel etc.) sau mai muli si mici (ovali, lenticulari) de culoare verde . Ordinul Volvocales.Unicelulare, flagelate, izolate sau formnd colonii sau cenobii. La aceste alge, att celulele vegetative ct i elementele de reproducere, au cte doi i au patru flageli egali, foarte rar mai muli. Organizarea celulei este asemntoare celei de la euglenofite. Celula conine citoplasma, un nucleu, cloroplast mare n form de clopot sau cup, prevzut de obicei cu un pirenoid, vacuole etc. Membrana celular adeseori este celulozic, la unele specii celulozo-pectic, iar la altele este nlocuit cu un nvelii subire citoplasmatic (periplast), care le permite schimbarea formei.

Cylindromonas fontinalis

Platydorina caudata

Basichlamys sacculifera

Ordinul Chlorococcales. Sunt alge unicelulare, solitare, coloniale sau cenobiale, imobile deoarece sunt lipsite de flageli. Alctuirea celulei se aseamn cu cea de la volvocale. Majoritatea lor conin n celula un singur nucleu, dar sunt i puine excepii multinucleate. Cele mai Scenedesmus quadrispina Coelastrum astroideum multe sunt rspndite n ape dulci. 20

Ordinul Ulotrichales. Grup mare de alge verzi cu tal pluricelular, filamentos, uneori lamelar sau cilindric i ntodeauna fixat de substrat. Talul filamentos poate fi simplu sau ramificat. La aceste alge se difereniaz o parte bazala fixata printr-o celula bazala rizopodial i alta superioar sau terminal. Creterea talului se realizeaz prin diviziunea tuturor celulelor sau numai a celor din partea apical. Celulele sunt uninucleate, coninnd cte un cloroplast mare, parietal pe care se afl pirenoizi. Triesc n ape dulci sau marine,unele fiind adaptate la viaa de uscat.

Gloeotila contorta

Stichococcus bacillaris

Ordinul Zygnematales. Alge pluricelulare cu celule dispuse n serie, alctuind filamente simple libere. Cloroplatii axiali sau parietali, de form variat.

Zygnemopsis decussata

Zygnema circumcarinatum

Zygopodium ericetorum

Ordinul Desmidiales.Alge unicelulare izolate,form variat (oval, stelat, cilindric) Celulele lor sunt alctuite din dou jumti simetrice distincte, separate printr-o strangulaie. Cloroplatii sunt axiali. Membrana celulei este neted sau ornamentat, prevzut cu pori i uneori impregnat cu sruri de fier.

1. Micrasterias tropica ; 2. Micrasterias denticulata ; 3. Micrasterias rotata; 4. Euastrum oblongum.

21

Comparaie ntre celula vegetal i animal Studiul celulei se poate face n laborator, prin observarea la microscop a preparatelor din colecia colii sau a celor pe care elevii i le pregtesc singuri, dup indicaiile i sub supravegherea profesorului. Este necesar s se studieze paralel celula vegetal i cea animal, pentru a se vedea asemnrile i deosebirile dintre ele. Dm mai jos o modalitate de desfurare a unei lucrri practice de studiu comparativ al celulei vegetale i animale. Material necesar: microscop, lame, lamele, bisturiu, bulb de ceap, albastru de metil n soluie de 1%, infuzie de fn, pipet efilat (Pasteur) Mod de lucru. a. Preparate proaspete din foi de ceap De la un bulb de ceap se desprinde cu pensa un fragment din epiderma superioar (partea concav) a frunzelor crnoase. Fragmentul epidermic se pune n cutia Petri: Se taie cu foarfecele sub ap o poriune din acest fragment (circa 5x8 mm) i se pune ntr-o pictur de ap pe lam, n aa fel nct s fie bine etalat. Epiderma se aeaz cu axa longitudinal paralel cu latura mic a lamei. Se aplic apoi lamela, lsnd-o s cad uor peste materialul vegetal. Examinarea la microscop. Preparatul se analizeaz mai nti cu obiectivul mic (7 sau 10). n cmpul microscopului se observ un esut format dintr-un singur strat de celule. Pentru a putea s vedei nucleul, colorai preparatul pe lam cu o pictur de iod n iodur de potasiu (soluie Lugol). Se aplic pictura de soluie Lugol la o margine a lamelei, iar la marginea opus se absoarbe apa de sub lamel cu o fie de hrtie de filtru. Putei apoi s examinai preparatul cu obiectivul 20x. Peretele celular apare ca un nveli transparent cu poriuni mai subiri numite punctuaiuni; ntre pereii a dou celule vecine se afl lamela mijlocie. Citoplasma apare ca un strat subire, transparent, de-a lungul peretelui celular. Are aspect granular, este incolor, dup colorare este glbuie. Nucleul se poate afla n centrul celulei, la unul din capete sau poate avea poziie parietal. Este invizibil nainte de colorare. Dup colorare cu iod devine vizibil avnd o culoare galben strlucitor i aspect granular. b. Preparate proaspete cu protozoare Despre celula animal, elevii pot dobndi o reprezentare satisfctoare examinnd preparate microscopice cu protozoare. Unele se pot obine din infuzii care se pregtesc astfel: se iau paie de orz, orez sau fn, care provin din locuri umede; se taie mrunt i se aeaz pe fundul unui vas de sticl ntr-un strat de 2-3 cm. Peste ele se toarn ap cldu. Vasul se ine descoperit i la un loc cu o temperatur de 200C, luminat, dar ferit de contactul direct cu razele de soare. Dup cteva zile se observ c la suprafa se formeaz o pojghi cu un luciu metalic, iar apa devine opalescent. n ap se gsesc acum nenumrate protozoare al cror numr i varietate cresc pe zi ce trece, atta timp ct infuzia ofer condiii prielnice de dezvoltare. Protozoarele se strng sub pelicula gelatinoas. Se ia cu o pipet o pictur de ap din acest loc, se pune pe o lam de sticl, se acoper cu lamela i se observ la microscop; se vd micile organisme unicelulare: protozoare, alge, bacterii, dezvoltate din sporii de rezisten ce se gsesc pe paiele de fn, provenite din locurile bltoase. Pentru a obine o cultur pur numai de parameci, folosim o infuzie steril preparat astfel: ntr-un balon de sticl se fierbe fnul n ap curat timp de 30 minute. n aceste condiii sunt omorte toate microorganismele din infuzie, cu excepia sporilor de Bacillus subtilis cu care se hrnete parameciul. n cteva zile, acest bacil se nmulete intens, ceea ce se poate observa prin formarea la suprafaa lichidului din balona unei pojghie gelatinoase, i astfel este asigurat hrana paramecilor. Cu o pipet curat, se ia din infuzia pregtit anterior o cantitate mic ce conine parameci i se nsmneaz noua infuzie. Se astup balonul cu un dop de vat steril. n aceste condiii, paramecii se nmulesc cu repeziciune; acum n infuzie se gsesc numai parameci. Se poate obine i o cultur de amibe. Astfel, ntr-un borcan de sticl cu o capacitate 500 cm3 se introduc mai nti 2-3 lame de sticl, apoi un strat de 2-3 cm paie de fn de mlatin, tiate n buci mici. Peste acestea se toarn ap de balt, atta ct s mbibe bine toctura de fn. Se acoper vasul cu o plac de sticl i se aeaz la lumin, la o temperatur de 20o, dar nu n btaia razelor de soare. Dup 2-3 zile , 22

peste coninutul borcanului se adaug o cantitate de ap murdar dintr-un an sau balt, n care se gsesc frunze i rmurele n descompunere. Se adaug i puin ml de pe fund, pn cnd borcanul se umple trei sferturi din capacitatea sa.. dup 8- 10 zile, vom gsi amibe pe fundul vasului, i pe lamele de sticl ce au fost aezate la nceput. Pe lamele de sticl scoase i puse la microscop se observ amibele.
ectoplasm endoplasm membran cili vacuol pulsatil

peristom macronucleu micronucleu membranel citostom citofaringe

Celule din epiderma de ceap

vcuol digestiv

Paramoecium caudatum

Bacterii, alge verzi, fotosinteza-lucrare de laborator din recapitulare Material necesar: microscoape, truse de disecie, lame, lamele, mtasea broatei, cultur de Bacillus subtilis. Modul de lucru. Cu 3-4 zile nainte de desfurarea lucrrii elevii vor fi solicitai s prepare culturi de Bacillus subtilis, iar cu o zi nainte s recolteze alge verzi pluricelulare: mtasea broatei i lna broatei. Prepararea culturii de Bacillus subtilis. ntr-un borcan de sticl se introduc boabe de fasole pn la o treime din capacitatea sa. Se adaug ap cldu pn la trei sferturi, apoi se ine la o temperatur de 20o timp de 48 de ore. Lichidul din vas se tulbur, iar la suprafa se formeaz o pelicul bogat n bacterii. Efectuarea preparatelor microscopice cu Bacillus subtilis Pe o lam de sticl flambat n flacra unei spirtiere, se depune cu ajutorul unei pipete Pasteur, o pictur din cultura de Bacillus subtilis. Bacteriile se recolteaz din pelicula de la suprafaa borcanului, unde se afl n numr foarte mare. Se aplic lamela i se examineaz la microscop cu obiectivul 10x i apoi cu 20x. Se poate observa o distribuie relativ uniform a bacteriilor n cmpul microscopului. Datorit transparenei lor, forma bacteriilor nu este vizibil, ele se pot remarca datorit micrilor n valuri pe care le efectueaz Efectuarea preparatelor cu alge verzi pluricelulare. Se aleg filamente de mtasea broatei, care sunt alunecoase la pipit i se aeaz pe lama de sticl ntr-o pictur de ap. n mod asemntor se procedeaz i cu filamente de lna broatei. Se etaleaz bine preparatele, n aa fel nct s nu fie suprapuse talurile, se acoper cu lamela i se examineaz la microscop cu obiectivele 6x i 10x. Se identific cele dou alge i dup forma cromatoforilor. Se deseneaz imaginile observate pe caiete. Efectuarea unor preparate combinate. Se monteaz pe lama de sticl un filament de mtasea broatei. Peste filament, n pictura de ap se adaug o pictur din cultura de Bacillus subtilis. Se acoper cu lamela. Se las preparatul timp de 10 minute la lumin puternic, apoi se examineaz la microscop. Se observ c bacteriile sunt aezate numai 23

n jurul filamentului de alg verde. Se las preparatul timp de 10 minute la ntuneric, apoi se examineaz din nou la microscop. Se observ c bacteriile sunt rspndite uniform sub lamel. Concluzii . Bacteriile din specia Bacillus subtilis respir aerob, ele au nevoie de oxigen. O dovad n acest sens este pelicula care se formeaz la suprafaa culturii. n preparatul combinat inut la lumin, oxigenul din apa de sub lamel este consumat rapid de ctre bacterii. Singura surs de oxigen sub lamel este filamentul de mtasea broatei care face fotosintez. Bacteriile atrase de oxigen se orienteaz n jurul filamentului de alg. La ntuneric fotosinteza nceteaz. Att bacteriile, ct i alga verde respir i consum tot oxigenul de sub lamel. n aceast situaie, bacteriile, care sunt mobile, se ndeprteaz de filamentul de alg i se ndreapt spre marginile lamelei unde se dizolv oxigen din aer. Cloroplastele i micrile citoplasmatice n celulele frunzelor de ciuma apelor (Elodea canadensis) Matricea celular (citosolul) reprezint compartimentul cel mai frmntat al celulei, cuprins de o permanent micare frenetic cunoscut sub numele de dinez. Uneori aceste micri intracelulare au o mare amplitudine, determinnd deplasarea componenilor citosolici i odat cu aceasta a tuturor organitelor celulare, ntr-un singur sens sau n mai multe sensuri.. Dineza poate fi observat n toate celulele vii, dar mai uor, datorit amplitudinii sale particulare n celulele plantelor acvatice (ex. ciuma apelor -Elodea canadensis, srmulia apelor- Valisneria spiralis, mrarul de balt- Miriophylum spicatum) Material necesar. Microscop cu condensator i iluminare electric, lam de sticl, lamele, trus de disecie, frunze de Elodea canadensis sau Valisneria spiralis. Modul de lucru. Se detaeaz o frunz de ciuma apei din vrful vegetativ al tulpinii i se pune pe o lam de sticl (cu vrful spre observator) ntr-o pictur de ap; se acoper cu lamela. Dup cteva minute, stimulat de lumin i de cldura degajat de lampa microscopului, vei observa micarea citoplasmatic, n special, n celulele situate n zona median a frunzei. Celulele avnd pereii subiri, permit observarea a numeroase cloroplaste de form oval, lenticular sau sferic, dup cum sunt privite lateral sau din fa. Cloroplastele sunt antrenate ntr-o micare de rotaie de-a lungul pereilor celulari. Observaiile se fac cu obiectivele 20x i 40x. Se deseneaz pe caiete.

24

Evidenierea plasmalemei i a tonoplasmei Plasmalema ca i tonoplasma sunt citomembrane cu grosimi de circa 8- 10 nm, dimensiuni ce se situeaz cu mult sub puterea de rezoluie a microscopului fotonic; ca urmare ele nu pot fi vizionate dect la microscopul electronic. Prezena lor poate fi demonstrat prin plasmoliz, fenomen ce const n desprinderea (parial sau total) a protoplastului de perete. Plasmoliza nu poate fi neleas dect prin prisma permeabilitii selective i dinamice a acestor citomembrane. Materiale biologice: Bulbi de Allium cepa, frunze de Elodea canadensis. ntocmirea preparatului: Se desprinde un fragment din epiderma superioar a frunzelor crnoase ce intr n constituia bulbului de Allium cepa ( o frunzuli de Elodea sau un fragment din frunza de Valisneria) i se monteaz ntr-o pictur de ap. Se analizeaz la microscop i se constat starea de turgescen a celulelor. Pe una din laturile lamelei se depun 2-3 picturi de soluie concentrat de NaCl ( 1M de KNO3 sau 5-7% de zaharoz), iar pe latura opus o bucic de hrtie de filtru. Pe msur ce apa este absorbit de hrtia de filtru soluia salin (sau de zaharoz) penetreaz ntre lam i lamel, crend un mediu hipertonic n jurul materialului biologic. n consecin apa din vacuol trece n mediul extracelular (fenomen numit exosmoz), vacuola i micoreaz treptat volumul, iar celula ncepe s se plasmolizeze. Plasmoliza ncepe la colurile celulei i se extinde treptat, trecnd de la forma concav (incipient) la cea convex (final). Fenomenul este reversibil dac plasmoliza a fost indus de o soluie fiziologic i n-a depit un prag critic. Deplasmoliza se poate realiza prin nlocuirea treptat ( ca mai sus, dar n sens invers) a mediului hipertonic cu apa. Reversibilitatea fenomenului demonstreaz c plasmoliza i deplasmoliza sunt nu numai procese fizicochimice, ci i fiziologice. Morfologia cromoplastelor Cromoplastele sunt plastide colorate n galben, portocaliu, rou sau n nuane intermediare. Se gsesc n petalele florilor, n fructe, frunze i chiar n rdcini. Cromoplaste la morcov. (Daucus carota) Materiale necesare: Rdcini tuberizate de morcov, lame i lamele de sticl, brici anatomic (lam de ras nefolosit), vas Petri cu ap. Mod de lucru: Se fac seciuni transversale prin rdcina tuberizat de morcov. Seciunile trebuie s fie foarte fine. Imediat dup secionare se pun n vasul Petri cu ap. Dup ce am efectuat un numr mai mare de seciuni, alegem pe cea mai fin, de dimensiunile unei lamele i o punem pe lam ntr-o pictur de ap. Se acoper cu lamela. Cu obiectivul mic prindem o poriune de esut ct mai clar. esutul respectiv, parenchimul de depozitare, se analizeaz cu obiectivul 40x. citoplasm n cmpul microscopic se vor observa cromoplast nucleu celule poligonale prozenchimatice n care se afl cte un nucleu i numeroase cromoplaste. 25

Cromoplastele au form acicular, dreptunghiular sau paralelipipedic. Ele sunt nconjurate de citoplasm abundent. Cromoplaste la tomate (Lycopersicum esculentum) Materiale necesare: Fructe coapte de tomate, lame i lamele de sticl, bisturiu, brici anatomic, ac spatulat. Mod de lucru: Fructul se spal cu ap de robinet; cu ajutorul unui bisturiu se ndeprteaz peretele extern pe o anumit poriune, dup care se face o seciune foarte fin prin partea crnoas a fructului. Se pune seciunea pe lam, ntr-o pictur de ap, apoi se aeaz lamela. Cu obiectivul nuclei 40x vom observa un numr mare de celule mezoendocarpice, n majoritate izolate, care conin cte un nucleu, numeroase cromoplaste i granule de l amidon. Cromoplastele sunt roiiportocalii, de form sferic sau ovoidal. Pe msura maturizrii fructului, carotina trece n izomerul su numit licopin, care cristalizeaz sub form de cristale aciculare. Incluziuni ergastice Amidonul Amidonul care se formeaz n cloroplaste este cunoscut sub numele de amidon autohton. Cea mai mare cantitate de amidon se gsete ns n organele plantelor (semine, tulpini i frunze normale sau metamorfozate etc.). Acesta este amidonul de rezerv. Forma pe care o mbrac amidonul de hil hil hil rezerv este cea de gruncioare, caracteristice fiecrei 4 plante. 3 Materiale necesare: Cariopse de gru (Triticum aestivum), porumb (Zea mays), orez (Oryza sativa), ovz (Avena sativa), semine de fasole (Phaseolus vulgaris), tubercul de cartof (Solanum tuberosum), lam i lamele de sticl, bisturiu, ac spatulat, iod n iodur de potasiu. Mod de lucru: Cu ajutorul unui bisturiu sau ac spatulat 2
sc

1 6 7

gp

8 9

Diferite granule de amidon: simple: 1 i 4 la Solanum tuberosum; compuse: 8-la Oryza sativa; 9- la Avena sativa; gp.- granule pariale; sc.- straturi concentrice de depunere. 26

se rade puin din endospermul de analizat (gru, porumb, orz, ovz, fasole) sau din esutul de depozitare (cartof). Masa obinut se pune pe lam ntr-o pictur de ap. Recomandm ca masa de amidon s nu fie prea dens pentru c granulele se suprapun i ngreuiaz analiza. La unul din capetele lamei punem o pictur de iod n iodur de potasiu (soluie Lugol), apoi cu ajutorul lamelei sau al acului spatulat se aduce spre masa de amidon o uvi de colorant. Se amestec bine cu materialul pn cnd se coloreaz omogen, dup care se acoper cu lamela. Excesul de colorant se ndeprteaz cu o bucic de hrtie de filtru. Colorarea nu trebuie s fie intens, deoarece aceasta ar ngreuia analiza granulelor de amidon. Colorarea materialului se poate face i altfel: inem o fie de hrtie de filtru pe una din laturile lamelei, n timp ce pe latura opus punem o pictur de colorant puternic diluat. Hrtia de filtru absoarbe apa de sub lamel, care este nlocuit de soluia de iod n iodur de potasiu. Acesta ptrunde pe sub lamel colornd n albastru granulele de amidon. Din categoria granulelor de amidon simplu vom analiza la microscop urmtoarele tipuri: La cartof, granulele au forma variat, dar cele mai multe sunt ovale. Hilul este sferic, foarte mic i excentric. Strat urile mai ntunecate, care alterneaz cu cele mai deschise la culoare, conin o cantitate mai mare de ap. Adesea, pe lng granule simple, vom observa granule compuse i semicompuse (1,2,3 i4) La gru, granulele sunt sferice, cu hilul aezat central. La fasole se vd granule elipsoidale, ovale sau mai mult sau mai puin sferice. Hilul este alungit i ramificat. La porumb, granulele sunt poligonale, cu hilul aezat n centrul granulului. Amidonul compus poate fi analizat la urmtoarele specii: La orez, granulul de amidon este alctuit din 4 pn la 100 de granule pariale. Acestea sunt tot de form poligonal. Hilul se observ mai greu dect n exemplul precedent. La ovz, granulul este compus din circa 300 de granule pariale. Forma granulului compus este oval sau mai mult sau mai puin sferic, iar a granulelor pariale, de obicei, poligonal. Grsimile Una dintre cele mai frecvente incluziuni ergastice din celulele vegetale o constituie grsimile. Ele se gsesc sub form de corpusculi sferici n celulele muchilor hepatici, n seminele plantelor oleaginoase etc. Materiale necesare: Semine de dovleac (Cucurbita pepo) sau floarea soarelui (Helianthus annuus), lame i lamele de sticl, bisturiu i ac spatulat, Sudan III, tinctura de Alcanna sau OsO4. Mod de lucru: Cu ajutorul bisturiului se detaeaz un fragment de esut endospermatic din smna de dovleac sau de floarea soarelui. Acesta se pune pe lam, se coloreaz cu unul din coloranii menionai, dup care se acoper cu lamela. Deasupra lamelei se pune o fie de hrtie de filtru, apoi se apas cu degetul pentru omogenizarea materialului dintre lam i lamel. La microscop se observ n celulele separate sau n gruprile de celule, numeroase formaiuni mai mult sau mai puin sferice de culoare galben (dac am folosit Sudan III), roie (dac am utilizat tinctur de Alcanna) sau neagr (dup tratarea cu OsO4). Aceste formaiuni reprezint grsimile. Cristalele de oxalat de calciu Cristalele care se ntlnesc frecvent n celulele plantelor sunt formate din oxalat de calciu. Ele se gsesc ca formaiuni ergastice, de obicei n vacuole. Materiale necesare: Catafile de pe bulbul de ceap (Allium cepa), peioluri de begonie (Begonia semperflorens), tulpini metamorfozate de linti (Lemna trisulca) frunze de vi de vie (Vitis vinifera), brici anatomic sau lam de ras. 27

Mod de lucru: 1.Se desprind de pe bulbul de ceap cteva catafile (frunze externe de culoare galben-brun), se pun ntr-o soluie de 10-15% glicerin n ap i se fierb n flacra unui bec Bunsen sau spirtier. u Se detaeaz dintr-o catafil un fragment i se pune pe cr lam ntr-o pictur de ap glicerinat i se u acoper cu lamela. m r n catafilele de ceap se observ celule, n general, u prozenchimatice n care 1 2 3 se pot vedea numeroase Substane ergastice solide: 1. celule dintr-o catafil de ceap; 2. celule din peiolul de cristale prismatice, Begonia sp.; 3. celul din tulpina de Lemna trisulca; cr.-cristale prismatice de oxalat de lungi, incolore, calciu, m-macle; u- ursini de oxalat de calciu; ra- rafide strlucitoare. De cele mai multe ori cristalele sunt izolate; uneori se ntlnesc i cristale concrescute numite macle sau druze. 2. n cazul peiolului de begonie i al frunzei de vi de vie se fac seciuni transversale ct mai fine, se pun ntr-o pictur de ap pe lam i se acoper cu lamela. La preparatele de begonie se observ la microscop druze de oxalat de calciu de diferite forme i mrimi. 3.Tulpinile metamorfozate de linti se secioneaz sau se fragmenteaz. Se pune cte o seciune sau un fragment pe lam ntr-o pictur de ap, dup care se acoper cu lamela.. n preparatele fcute, se observ fascicule de cristale aciculare numite rafide. Epiderma i formaiunile epidermice Materiale necesare:Frunze modificate din bulbul de ceap (Allium cepa), fragmente din frunze de varz (Brassica oleracea), proaspete sau conservate n alcool, rou de Congo i crisoidin, brici anatomic, lame i lamele de sticl. Mod de lucru: Se vor efectua preparate proaspete sau permanente, executnd seciuni tangeniale i transversale prin tipurile de frunze amintite. Seciunile se javelizeaz, se spal i se coloreaz. Epiderma i stomatele la ceap. Analiznd apical (de sus) epiderma superioar a frunzei bulbului de ceap observm c este alctuit dintr-un singur strat de celule prozenchimatice foarte strns alipite unele de altele, fr a lsa spaii intercelulare. Pereii celulelor sunt subiri, celulozici. De-a lungul acestora se pot observa cu obiectivul 40x, punctuaiuni simple, prin care celulele comunic ntre ele. Din loc n loc se observ celule mai mici, reniforme care reprezint stomatele. n 28

Epiderma i stomate la Allium cepa: n- nucleu; mm- perete celular; v- vacuol;; st- stomata; cicitoplasm

fiecare celul stomatic se afl un nucleu nconjurat de citoplasm. ntre cele dou celule stomatice se afl ostiola. Epiderma i stomatele la varz. Analiznd epiderma apical, vom observa n cmpul microscopului numeroase celule mai mult sau mai puin heterodiametrice, cu pereii uor ondulai, subiri, celulozici. Celulele epidermei sunt strns unite ntre ele, fr a lsa spaii intercelulare. Stomatele sunt dispuse neregulat printre celulele epidermei. n jurul celulelor stomatice se afl trei celule anexe, dintre care una este mult mai mic dect celelalte. Stomata mpreun cu celulele anexe alctuiesc aparatul stomatic. n afara nucleului n celulele stomatice se mai afl numeroase cloroplaste.

Stomate n epiderma de la varz: cs- celule stomatice; ca- celule anexe inegale; cecelule epidermice; cl- cloroplati

esuturi mecanice sau de susinere Acestea sunt esuturi specializate care au rol de susinere. Se cunosc dou esuturi de susinere: colenchimul i sclerenchimul. Materiale necesare: fragmente de tulpin de dovleac (Cucurbita pepo), soc (Sambucus nigra), in (Linum usitatatissimum), ap de Javel, rou de Congo i crisoidin, lame i lamele, gelatin glicerinat, brici anatomic. Modul de lucru: Se fac seciuni transversale prin tulpinile plantelor menionate, n vederea efecturii de preparate proaspete sau permanente. Colenchimul . Colenchimul angular la dovleac. n seciuni transversale efectuate prin tulpina de dovleac se observ, de la interior spre exterior, urmtoarele esuturi: pp. epiderma alctuit dintr-un singur strat de celule relativ mici, acoperit de o cuticul evident. Din loc n loc, unele celule epidermice sunt transformate n peri simpli, rigizi, unicelulari. Imediat sub epiderm, n anumite puncte, se observ un esut alctuit din celule ngroate numai la unghiurile acestora. v Acesta este colenchimul angular, care intr Fragment de esut colenchimatic, din n structura scoarei. tulpina de dovleac: pp- protoplasm Colenchimul tabular la soc. Pe seciuni transversale parietal cu nucleu; v- vacuol se observ la exterior epiderma unistratificat alctuit din celule mari, cu pereii externi uor bombai, protejat la exterior de cuticul. Urmeaz cteva straturi de suber, apoi felogenul i n sfrit esutul mecanic numit colenchim tabular. 29

Acesta este alctuit din celule heterodiametrice cu pereii ngroai inegal: pereii tangeniali externi sunt mai groi dect pereii tangeniali interni, iar cei radiali sunt uor ngroai. Sclerenchimul Sclerenchimul la in. n seciuni transversale efectuate prin tulpin de in se observ de la exterior spre interior urmtoarele esuturi: epiderma unistratificat alctuit din celule strns unite ntre ele, protejate de cuticul; scoara, alctuit din celule parenchimatice sub endodermul, care nu ntodeauna poate fi identificat, se afl pachete de celule cu lumen mic, uniform ngroate. Acestea sunt celule sclerenchimatice, de origine floematic. Ele reprezint fibrele textile ale inului.

Seciune transversal prin tulpina de in: ctcuticul; ep- epiderm; sc- scoar; ta- teac amilifer; fscfibre sclerenchimatice; fl- floem; xl- xilem

Osmoza Prin osmoz se nelege difuziunea dintre dou soluii separate de o membran poroas. Materiale necesare: osmometru Dutrochet, membran degresat de intestin, soluie de zaharoz 10% sau NaCl 20%, cristalizor, grtar-grilaj de sticl. Mod de lucru:La partea lit a osmometrului se fixeaz cu ajutorul unui fir de a, membrana, bine umectat n prealabil. Dup ce membrana este bine ntins i legat, se toarn n osmometru, printr-o plnie, o soluie osmotic activ de zaharoz. Se va evita umplerea complet a osmometrului. Dup aceast operaie, osmometrul se introduce ntr-un vas cu ap distilat, n aa fel nct captul cu membrana s se sprijine pe grtarul de sticl. Se noteaz nivelul lichidului din osmometru cu tu sau cerneal pe tubul de sticl. Se va observa, dup un timp, c nivelul lichidului din osmometru crete. Aceast cretere se datoreaz moleculelor de ap distilat din cristalizor, care traverseaz membrana intestinal, ptrunznd n soluia mai concentrat. Acest proces fizico-chimic reprezint curentul endosmotic (endosmoza). Dup un timp, datorit faptului c membrana este permeabil, substana dizolvat din a- ap distilat b- soluie de osmometru (zaharoza) difuzeaz i ea spre exterior printr-un curent zaharoz exosmotic (exosmoza), pn cnd se ajunge la echilibrul de concentraie. Se observ o scdere a nivelului lichidului n tub.

30

Tehnica evidenierii cromozomilor Materiale: Bulbi (semine) de ceap, boabe (cariopse) de secar,, alcool etilic absolut, acid acetic glacial, acid clorhidric 1N, carmin acetic, reactiv Schif, (fucsin bazic decolorat), lame, lamele, etuv termostatat, microscop fotonic. Mod de lucru: Pentru obinerea probelor biologice (radicele) se procedeaz astfel: bulbii de ceap se suspend pe gura unor borcane pline cu ap boabele de secar (gru, porumb) se ordoneaz n cutii Petri, pe hrtie de filtru umectate, la distane de circa 1 cm vasele se depoziteaz ntr-un loc ntunecos. Dup 3-5 zile bulbii, ca i boabele, germineaz, formnd radicele. n momentul n care acestea au atins lungimea de 0,5- 1 cm, se recolteaz i se prelucreaz pentru obinerea de preparate. Prelucrarea probelor biologice prin metoda Feulgen se toarn peste radicele un amestec de alcool etilic- acid acetic glacial n raport de 3 la 1 pentru fixarea probelor. Operaia este finit dup 12- 24 ore. Probele se in la frigider. Se ndeprteaz fixatorul, iar peste radicele se toarn acid clorhidric 1N, cald la 600 . probele se in n etuv la 60o timp de 5 minute, cele de ceap, respectiv 10 minute cele de secar. Prin acest tratament acid se distruge (hidrolizeaz) lamela mijlocie i n acest fel celulele, devenite libere, pot fi etalate ntr-un singur strat. Se ndeprteaz acidul clorhidric i se adaug colorant (fucsina bazic decolorat, reactivul Schif). Dup circa 30 minute colorarea probelor biologice este optimal. ntocmirea preparatului Pe o lam se pune o pictur de carmin acetic n care se introduce vrful colorat al radicelei. Se acoper cu o lamel. Peste lamel se depune o bucat de hrtie de filtru. Se apas puternic cu degetul peste hrtia de filtru pentru a extrage excesul de colorant dintre lam i lamel i pentru a realiza o prim etalare a materialului biologic. Se continu etalarea prin bti cu un beior n lamel, pn cnd materialul biologic este uniform distribuit. Analiza microscopic. Preparatele ntocmite se analizeaz la microscop. Sunt selectate metafazele n care cromozomii sunt bine etalai i individualizai. Se numr i se deseneaz.

INTERFAZ

PROFAZ

METAFAZ

ANAFAZ

TELOFAZ

CELULE- FIICE

31

Studiul meiozei la plante Materiale necesare: Spice de graminee cerealiere (secar, orz, gru, porumb) aflate n stadiul de burduf, conservate n soluia Carnoy (alcool etilic absolut i acid acetic glacial 3 la 1), carmin acetic, lame, lamele, microscop. ntocmirea preparatului. Se depun pe o lam pentru microscop 2 picturi de carmin acetic. Se desprinde din spic un spicule care se depune pe colul lamei. Se scot din fiecare floare fertil a spiculeului cele trei stamine (antere), care se introduc n picturile de carmin i se secioneaz de cte 2-3 ori transversal, pentru a facilita golirea sacilor polinici. Se preseaz cu acul spatulat asupra fragmentelor de anter, pentru a determina ieirea n afar a esutului microsporogen din sacii polinici. Se nclzete lama la flacra unei lmpi cu spirt, pn la emisia de vapori; operaia se repet de 2-3 ori; se evit evaporarea complet a colorantului Materialul de pe lam, imersionat n carmin se acoper cu o lamel; peste lamel se aeaz o hrtie de filtru, se apas uor cu degetul pentru extragerea restului de carmin. Se analizeaz la microscop cu obiectivele 10x i 20x. Se vor observa diferite faze ale meiozelor I i II.

Reprezentarea schematic a ciclului meiotic (meioza)

32

Structura organelor vegetative-observaii epiderma cu peri sugtori scoara exoderma endoderma periciclu

fascicul lemnos mduva fascicul liberian Structura primar a rdcinii n seciune transversal

Presiunea osmotic exprimat n atmosfere

epiderm

scoar fascicul liberolemnos Structura primar a tulpinii de Ranunculus repens (piciorul cocoului) n seciune

stomat lacun medular

33

Structura frunzei

sclerenchim

epiderm superioar esut palisadic colenchim

seciune tangenial a celulelor n palisad lacun

lemn

liber

stomat epiderma inferioar seciune tangenial a esutului lacunos

lemn

parenchim colenchim

lacun

liber teac parenchimatic

stomat

seciune transversal

seciune longitudinal

34

parenchim lacunos parenchim palisadic

Cript cu peri protectori

stomat

35

Structura organelor vegetative- lucrri practice de microscopie Structura primar a rdcinii de Ranunculus repens Materiale necesare: Rdcini de piciorul cocoului trtor, mduv de soc, lam de sticl, lam de ras , microscop. ntocmirea preparatului: Se include rdcina n mduva de soc i se efectueaz seciuni transversale care se aeaz pe lama de sticl ntr-o pictur de ap. Se examineaz cu obiectivul 6x sau 10x.

rz. ex. sc. pc.

Structura primar a rdcinii de Ranunculus repens: 1seciune transversal; 2- seciune longitudinal; cc- cilindru central, end- endoderma, ex- exoderma, fl (lib)- floem, mparenchim medular meristematic; pa- pr absorbant, pcparenchim cortical, per (p)- periciclu; rm- raze medulare primare; rz- rizoderm; sc- scoar; xi- xilem (dup N. Toma)

36

Structura primar a tulpinii de Ranunculus repens Materiale necesare: Tulpin de piciorul cocoului trtor, mduv de soc, lam de sticl, lam de ras , microscop. ntocmirea preparatului: Se include tulpina n mduva de soc, se efectueaz seciuni transversale care se javelizeaz, apoi se coloreaz cu albastru de metilen, se spal cu ap, se coloreaz din nou, cu soluie Lugol i se aeaz pe lama de sticl ntr-o pictur de ap. Se examineaz cu obiectivul 6x sau 10x.

Structura primar a tulpinii de Ranunculus repens:1- fragment structural din tulpin; 2fascicul libero-lemnos colateral deschis; cacelule anexe, cb- cambiu intrafascicular; ctcuticul; ec- elemente ciuruite, ep- epiderm; fl- floem; fp- fie de pasaj; mf-metafloem; mx- metaxilem, pf- protofloem; plparenchim lemnos; pr- protoxilem; scscoar; scl- sclerenchim; tr-trahee; xlxylem (dup N. Toma)

37

Structura intern a frunzei de ridiche-Raphanus sp. Materiale necesare: Frunz matur de ridiche, ap de Javel, rou de Congo, crisoidin, lame, lamele, lam de ras, microscop. ntocmirea preparatului. Se include frunza n mduva de soc, astfel ca s fie prins i nervura principal sau o nervur secundar i se efectueaz o seciune transversal. Se monteaz ntr-o pictur de ap pe lama de sticl, se acoper cu lamela. Se examineaz la microscop cu obiectivul 6x sau 10x.

Structura frunzei de ridiche: 1- cuticula; 2- epiderma superioar; 3- epiderma inferioar; 4- esut palisadic; 5- esut lacunar; 6fascicul libero-lemnos; 7- lemn; 8liber; 9- sclerenchim; 10- stomate, 11- camer substomatic

Aspectul stomatei la dicotiledonate: 1- celule stomatice; 2- celule epidermice, 3- ostiol; 4nucleu; 5-citoplasm; 6cloroplaste

38

Organe de reproducere la plante

pistil stamin ovar petale

Structura florii

sepale ovul receptacul peiol

Structura ovulului la Polygonum divaricatum: an-antipode; ch-chalaz; cl-calot; fll-fascicul libero-lemnos; fn-funicul; h-hil; ineintegument extern; ini- integument intern; mmicropil; ns-nucleu secundar al sacului embrionar; nu-nucel; o-oosfer; se-sac embrionar; sisinergide (dup I. Grinescu)

Granule de polen: Mentha aquatica(1-3); 3- seciune optic prin acelai granul de polen, 4- Jussteua erecta; 5- Rhododendron hirsutum; 6- Calliandra laxa; 7- polinii de Orchis maculata; 8- polinii de Asclepias floribunda: cg- celul generativ; ex- exin; int- intin; nv- nucleu vegetativ; (dup I. Grinescu)

39

Observaii microscopice asupra unor protozoare 1. Clasa Flagelate (Flagellata) cuprinde protozoare prevzute cu unul sau mai muli flageli. Noi studiem Euglena viridis i Trypanosoma equiperdum, prima fiind specie liber, cea de-a doua fiind parazit.

flagel

infundibul stigm blefaroplast vezicul contractil

pelicul

Euglena viridisspecie foarte comun, se colecteaz de pe fundul anurilor i al blilor, din lacuri, smrcuri i fntni. La microscop se studiaz ntr-o pictur de ap ntre lam i lamel. Pentru studierea animalului efectuai preparatul microscopic i studiai desenul alturat.

cromatofor

paraglicogen

nucleu nucleol

Euglena viridis

40

flagel Trypanosoma equiperdum. Se poate obine n stare vie de la institutele medicoveterinare, se inoculeaz n mamifere mici (cobai). Din sngele acestora se efectueaz frotiuri pe lam. La microscop, printre elementele figurate ale sngelui se pot observa paraziii cu corp foarte mic, ca nite virgule ngroate, spiralate, ascuite la ambele capete. Pentru studiul detaliilor se studiaz preparatul cu obiectivul cu imersie. nucleu

membrana ondulat

blefaroplast

41

Clasa Rizopode (Rhizopoda) cuprinde protozoare care se deplaseaz i se hrnesc cu ajutorul unor pseudopode. Vom studia specia Amoeba proteus. Amoeba proteus este specie comun n apele dulci putnd fi colectat de pe partea inferioar a frunzelor plantelor acvatice. Triete la suprafaa apelor stagnante i infuziilor, hrnindu-se cu organisme mici, vegetale i animale. Msoar pn la 500 microni. n cmpul microscopului apare ca o mas vscoas, refringent, care n micare i schimb mereu forma prin emiterea de pseudopode scurte, digitiforme din care unul este anterior, mai mare i aplatizat.

vacuol digestiv

ectoplasm endoplasm

vacuol pulsatil

nucleu

pseudopod

Amoeba proteus

42

Clasa Ciliofore (Ciliophora) cuprinde protozoare prevzute cu cili vibratili. Vom studia speciile Paramoecium caudatum, form liber i Vorticella microstoma, form fixat. Paramoecium caudatum se gsete n numr mare n infuzii, ape stttoare, pmnt umed. Are corpul oval alungit, de 0,25 mm lungime, mai gros la o extremitate. Pe latura stng are o adncitur.

ectoplasm endoplasm membran cili vacuol pulsatil

peristom

macronucleu micronucleu membranel citostom citofaringe vacuol digestiv

Paramecium caudatum

43

Vorticella microstoma se obine din aceleai medii ca i parameciul prin raderea superficial a diferitelor suporturi submerse din ap: frunze, crengue, pietre pe care aceast specie triete fixat. La microscop apare ca un clopot lung de 0,2 mm, sprijinit pe un peduncul.

zon adoral peristom vestibul macronucleu micronucleu vacuol pulsatil citostom vacuol digestiv

mioneme

peduncul Vorticella lutea

Vorticella microstoma

44

Spongieri
Buretele de ap dulce (Spongilla lacustris). Forma corpului la aceast specie este foarte variat. n general, mbrac suportul pe care se fixeaz, sub forma unei pojghie subiri i moi. De obicei se ntlnete nfurat ca un manon n jurul tulpinilor de trestie sau al altor plante acvatice. Uneori st ntins pe suprafaa pietrelor, scndurilor i altor obiecte submerse. ntodeauna ns prezint ramificaii caracteristice. Este o specie colonial, colorat cenuiu sau galben, cu nuane de brun i verde, atingnd lungimea de aproximativ 20 cm. Scheletul su este format din spiculi silicioi, ale cror extremiti dau suprafeei coloniei un aspect rugos. Din loc n loc se observ osculi, iar cu ajutorul lupei i pori inhalani. Triete i la noi n ar, n bli, lacuri i uneori n apele care curg lin. Spongilla se poate ine vie n acvariu. Se aduce animalul cu suport cu tot ntr-un borcan cu ap i se pune ntr-un acvariu dinainte pregtit. Trecerea n acvariu se face sub ap. Nu se ine mpreun cu alte animale, iar apa trebuie schimbat des. Pentru a o pstra fixat, se face un preparat lichid n alcool 80% sau formol 4%. Lichidul conservant se schimb de mai multe ori, deoarece esuturile spongierului sunt mbibate cu mult ap i se dilueaz.

oscul

pori inhalani

suport
spicul monaxon spicul triaxon spicul tetraxon

Spiculii spongierilor pot avea un singur ax, atunci se numesc monaxoni, trei axe principale, triaxoni, sau patru axe principale, tetraxoni. Spiculii se studiaz la microscop n preparate fixate. Pentru a face un preparat microscopic, se ia o bucic dintr-un spongier calcaros i o alt bucic dintr-un spongier silicios, se pun ntr-o eprubet peste care se toarn o soluie slab de hidrat de potasiu. Se nclzete coninutul pn la fierbere, distrugnd n acest fel toat partea crnoas. Coninutul se spal de cteva ori cu ap, iar din spiculii rmai se face un preparat permanent.

45

Cnidari. Structura. Cnidarii sunt animale cu simetrie radiar, segmentate i care prezint dou straturi celulareectodermul (stratul extern) i endodermul (stratul intern). ntre cele dou straturi se afl o lamel mai mult sau mai puin structurat- mezogleea. Endodermul delimiteaz cavitatea intern a corpului (cavitatea gastric) care are o singur deschidere- orificiul buco-anal. Capsulele urzictoare se gsesc n interiorul celulelor urzictoare; ele folosesc pentru capturarea hranei i pentru protecie mpotriva altor animale. Cnidarii prezint esuturi simplificate alctuite din diferite tipuri de celule (celule nervoase,gamei, celule digestive, celule mioepiteliale). Clasa Hidrozoare (Hydrozoa)-hidre.Triesc individual sau n colonii; majoritatea se fixeaz de substrat; ventuze slab dezvoltate; tentacule cu numeroase celule urzictoare; cavitatea digestiv fr perei despritori, alternan de generaii; au mare capacitate de regenerare.

endoderm ectoderm mezoglee nematocyst (celul urzictoare) celul glandular nematocist

celul nervoas celul senzitiv

Structura unui polip i a unei meduze (seciune longitudinal)

talp mezoglee cavitate digestiv ectoderm endoderm

orificiu buco-anal

tentacul

46

bra bucal orificiul pungii subgenitale gonad orificiul bucal

tentacul canal circular

canal radiar simplu canal radiar ramificat ropalie Clasa Scifozoare (Scyphozoa)meduze. Form de clopot sau umbrel. Tentacule parial cu celule urzictoare; mezoglee gelatinoas mult mai groas; alternan de generaii (meduze mari, libere, polipi mici) cenosarc

sifonozoid Clasa Antozoare (Anthozoa)- corali Adesea foarte colorai, de unde le vine i numele de animale-flori; triesc individual sau n colonii; cavitate digestiv cu perei despritori subiri (septe); nu prezint alternan de generaii (nu prezint forma de meduz, ci numai cea de polip). La multe specii apare un schelet calcaros n jurul polipului; formeaz recife i atoli. Sunt exclusiv marine (madreporarii, coralul rou)

polip retractat polip n extensiune

schelet

canale endodermice 47

musculatura longitudinal a corpului musc. circular a corpului parenchim

Viermi

epiteliu ciliat lumenul tecii faringiene lumenul faringelui musc. circ. a faringelui testicule

musculatura dorso-ventral

cordoane nervoase

cecumii tubului digestiv

Dendrocoelum lacteum. Seciune transversal

ochi

cili vibratili ramura anterioar a intestinului rabdite nucleu m. bazal musculatura circular

faringe orificiu bucal

musculatura longitudinal parenchim

Dendrocoelum lacteumtegumentul

Dendrocoelum lacteum. Morfologie extern. Tub digestiv

ramurile posterioare ale intestinului

Dendrocoelum lacteum are corpul oval alungit, turtit dorso-ventral, lung de aproximativ 3 cm. Este de culoare alb, de unde i numele ce i se d de planarie alb. La extremitatea anterioar este trunchiat transversal i are patru lobi. Pe partea dorsal a regiunii anterioare se observ dou pete mici, rotunde, de culoare neagr: ochii. n treimea posteriooar a feei ventrale, pe linia median, se gsete situat orificiul bucal, n vrful unui tub musculos exertil, care este faringele. Prin transparena corpului se observ c de la faringe pornesc trei ramuri digestive longitudinale: o ramur se ndreapt spre partea anterioar (ramura anterioar) i dou ramuri spre partea posterioar a corpului ( posterioare).

48

orificiu bucal faringe orificiu genital ventuza ventral ventuz bucal

ramurile longitudinale ale tubului digestiv

Distomum hepaticum. Morfologia extern i tubul digestiv

diverticule intestinale

Clasa Trematode .Fasciola hepatica (Distomum hepaticum), glbeaza. Are corpul oval i puternic turtit dorso-ventral, mai lat la captul anterior i mai ngust la cel posterior, semnnd n ansamblu cu un smbure de dovleac. Lungimea corpului este de 20-50 mm. n vrful extremitii anterioare se gsete ventuza bucal, care are n mijlocul ei orificiul bucal. n apropierea ventuzei bucale se gsete ventuza ventral.. Ventuza ventral nu are nici un orificiu i mpreun cu ventuza bucal reprezint organele de fixare ale acestui parazit de pereii canalelor biliare ale gazdei. Aproximativ la jumtatea distanei dintre cele dou ventuze este situat orificiul genital. La extremitatea posterioar a corpului se gsete un por mic, orificiul excretor. Prin transparena corpului se observ tubul digestiv, constituit dintr-un faringe i dou ramuri digestive, care se termin nfundat, fr orificiu anal. Ramurile digestive au o mulime de diverticule laterale

49

ramificaiile uterului proglote tinere

rostru

proglote mature

crlige
ventuze

scolex
gt

papil genital

canale excretoare

Clasa Cestoidee. Taenia solium, panglica. Paraziteaz n intestinul subire la om. Are corpul lung de 2-4, rareori 8 m, de culoare alb, puternic turtit dorso-ventral, de forma unei panglici. Partea anterioar a corpului este subire ca un fir de a i se termin cu o umfltur globuloas mic, ct o gmlie de ac, cu diametrul de 1 mm, numit scolex. La microscop, n partea anterioar a scolexului, se observ o proeminen scurt, numit rostru, iar la baza acestuia dou coroane de crlige. Pe cele patru laturi ale scolexului se disting patru ventuze rotunde. Cu ajutorul rostrului, croetelor i al ventuzelor, tenia se fixeaz temporar de peretele intestinului. Dup scolex urmeaz o poriune filiform, ngust, nedivizat n segmente, numit gt, iar dup aceasta, corpul propriu-zis, numit strobil. Strobilul este constituit din 800-900 de segmente, care se numesc proglote. Proglotele din apropierea gtului sunt cele mai tinere, mici i mai late dect lungi. nspre partea mijlocie a strobilului, ele devin tot att de lungi ct sunt de late, iar poriunea terminal a acestuia, unde proglotele sunt mari i mature, lungimea lor ntrece pn la de dou ori limea. Pe una din laturi, fiecare proglot are cte o ridictur, numit papil genital, n mijlocul creia se gsete orificiul genital. La un studiu mai amnunit, fcut pe proglote mature i mai tinere nefecundate, se pot studia organele interne.

50

Clasa Rotifere. Epiphanes senta triete n ape dulci, alturi de infuzori. Are corpul lung de 0,5 mm, mprit n trei pri distincte: una anterioar, numit regiune cefalic sau cap, una mijlocie, numit trunchi i una posterioar numit picior sau coad. Pe partea ventral a extremitii cefalice se gsete gura. Aceast extremitate are forma unui disc, nconjurat de o coroan de cili, numit cingulum. Pe faa ventral, coroana de cili trece pe marginea posterioar a gurii i se nvrtete n jurul discului ca o roat, fapt pentru care se numete aparat rotator. Micarea cililor ajut la antrenarea alimentelor spre orificiul bucal i la deplasarea animalului dintr-un loc n altul. Regiunea trunchiului are aspect de butoia i este acoperit de o cuticul slab dezvoltat, cu uoare inelaii, care permit animalului s se lungeasc sau s se scurteze. Piciorul sau coada este reprezentat prin extremitatea posterioar, ngustat a corpului. El este scurt, conic, cu cuticula inelat i se termin cu dou prelungiri, numite degete. La extremitatea lor se deschide cte o gland, numit gland cimentar. Cu secreia acestor glande se poate fixa temporar pe suport. Prin transparena tegumentului se observ i organizaia intern.

Clasa Nematode Ascaris suis (limbricul). Seciune transversal prin corp

linie median dorsal cordon nervos dorsal

fibre musculare

uterus cu ou linie lateral canal excretor ovar epiteliu intestinal lumenul intestinului intestin cordon nervos ventral cuticul linie median ventral oviduct

51

faringe intestin ovar testicul ovar

vagin

oviduct canal deferent

uterus
vezicul seminal

cloac

Ascaris suum, limbricul porcului. Are corp lung, cilindric, de culoare alb lptoas, ascuit la ambele capete, nesegmentat i acoperit cu o cuticul chitinoas. Pe laturile corpului se observ de la un capt la cellalt al viermelui dou dungi longitudinale de culoare roz, numite linii laterale. Sexele sunt separate i prezint un dimorfism sexual accentuat. Masculul are corpul lung de 15-17 cm. Extremitatea anterioar a corpului este dreapt, iar cea posterioar ndoit ca un crlig. Examinnd cu o lup extremitatea anterioar, se observ orificiul bucal, iar n jurul acestuia trei buze. La extremitatea posterioar, subterminal, se distinge orificiul cloacal. Din acesta proemin la exterior doi epi, organe de copulaie care se numesc spiculi. Femela este mai mare dect masculul, avnd o lungime 20-25 cm. Ambele extremiti ale corpului sunt drepte. Orificiul bucal este aezat ca la mascul, la extremitatea anterioar a corpului i nconjurat de cele trei buze. Orificiul anal se gsete la extremitatea posterioar, subterminal. n treimea anterioar a corpului, pe partea ventral, se poate observa cu lupa porul genital. Ceva mai sus nspre partea anterioar, se poate observa un alt por, porul excretor.

52

Capul, vzut dorsal cu trompa evaginat

anten cap palp ciri tentaculari tromp faringian parapode cngi

tentacule segmente palpi prostomiu ciri tentaculari parapode trunchi peristomiu parapodii primul inel somatic an intersegmentar ochi

Nereis diversicolor. Morfologia extern

Anelide. Clasa Polichete. Nereis diversicolor Este un vierme de mrimea unei rme obinuite, cu corpul viu i diferit colorat, fapt ce a sugerat denumirea sa de diversicolor. Triete n Marea Mediteran, Marea Neagr i n lacurile litorale ale Mrii Negre, n nisip, pe sub pietre, n crpturi de roci sau pe fundul acoperit cu alge. Are corpul cilindric, uor turtit dorso-ventral, constituit din trei regiuni distincte: regiunea anterioar, cefalic sau capul, regiunea mijlocie, trunchiul sau soma i regiunea posterioar sau pigidiul. Capul este constituit din dou pri. Prima poriune este ngust i alungit, de forma unui triunghi rotunjit, numit lob cefalic sau prostomiu. La extremitatea anterioar a acestuia spre mijloc, se disting dou prelungiri subiri i scurte, antenele. La baza prostomiului, de o parte i de alta a sa, se observ i cu ochiul liber cte dou puncte proeminente, care sunt ochii. Din aceeai regiune pornesc dou prelungiri mai groase i mai lungi dect antenele, palpii, care sunt organe senzitive. Dup prostomiu urmeaz a doua poriune a capului, mult mai lat, care se numete peristomiu. Pe partea ventral a capului, n mijlocul peristomiului, este situat orificiul bucal. Trunchiul sau soma este constituit dintr-un numr mare de segmente homonome. Segmentele sunt delimitate unul de cellalt prin nite anuri intersegmentare, care dau animalului un aspect inelat. Fiecare segment poart pe laturile sale cte o pereche de expansiuni laterale, numite parapode; cu ajutorul lor animalul se trte sau noat. Pigidiul este ultimul segment al corpului. El este mai ngust i mai alungit dect segmentele care-l preced. Nu are parapode, dar poart dou prelungiri terminale lungi, filamentoase, care se numesc ciri anali. La partea posterioar a pigidiului se gsete orificiul anal.

53

prostomiu ganglioni cerebroizi faringe nefridii inimi contractile esofag receptacule seminale glande calcifere ovar oviduct canal deferent nefridie gu (stomac glandular) stomac musculos vas de snge dorsal intestin

vezicule seminale

diafragme

vas de snge ventral

tiflosolis lan nervos

Clasa Oligochete. Lumbricus

terrestris- rma Organizaia intern. Pentru studiul organizaiei interne se face disecia animalului. ntr-o tav de disecie plin cu ap pn la jumtate, se aeaz rma anesteziat, n poziie orizontal, cu partea ventral n jos. Ambele capete se fixeaz de fundul tvii cu cte un ac cu gmlie. La fixarea extremitii anterioare se are grij ca s se nfig acul puin lateral, pentru a nu deranja ganglionii cerebroizi. Cu o foarfec de disecie se taie tegumentul ct mai superficial pe linia median, de la clitel pn la
epiteliu intestinal

tiflosolis vas de snge dorsal epiderm musculatur circular musculatur longitudinal peri nefridie celule clorogene cavitate celomic

orificiu excretor lan nervos vas de snge ventral

Lumbricus terrestris-seciune transversal printr-un segment

extremitatea anterioar a corpului. n continuare se prinde cu o pens marginea tegumentului tiat, iar cu ajutorul unui bisturiu foarte ascuit se desprinde cu grij, fr s se deterioreze organele interne. Dup ce s-a terminat aceast operaie, se rsfrnge tegumentul pe fundul tvii, de o parte i de alta a animalului, i se fixeaz pe tav cu ace de gmlie mplntata oblic. Primul lucru care se observ dup deschiderea rmei este segmentarea ei intern; la limita dintre inele se disting membrane subiri transversale, numite disepimente, care mpart interiorul rmei n tot attea segmente cte se observ i la exterior.

54

Molute

cochilie pneumostom brul mantalei tentacule mari

ochi tentacul mic cap picior orificiu genital hermafrodit

Clasa Gasteropode. Studiul melcului cu cochilie. Corpul este format din cap, picior i mas visceral. Capul nu este delimitat net de picior. El poart o pereche de tentacule mici, aezate n partea anterioar i o pereche de tentacule mari situate n urma acestora i dorsal. n vrful fiecrui tentacul mare se observ cte un ochi, ca o pat mic neagr. La baza tentaculului mare de pe latura dreapt i puin n urma lui se gsete orificiul genital hermafrodit. Sub tentaculele mici, la extremitatea anterioar a capului, se gsete orificiul bucal, mrginit de 3 buze, dou laterale i una ventral. Capul se continu cu piciorul n form de talp. Pe partea dorsal a piciorului se ridic masa visceral, acoperit de manta, peste care este dispus cochilia. Mantaua formeaz n jurul deschiderii cochiliei o ngroare crnoas, numit brul mantalei. Pe latura dreapt a brului mantalei se afl un orificiu numit pneumostom. apex linie de sutur columel apex

orificiu bucal

striuri de cretere

ultima spir ombelic marginea columelar a peristomului

apertur peristom holostom ombelic cavitatea cochiliei

Studiul cochiliei. Pentru a orienta o cochilie se procedeaz astfel: se aeaz cochilia ntre degetul mare i cel arttor, cu apexul n sus, i se nvrtete n jurul axei sale pn cnd peristomul vine n faa examinatorului. Cnd peristomul se gsete asimetric n dreapta cochiliei, este o cochilie dextr. Dac peristomul se gsete n stnga, cochilia respectiv se numete senestr (Planorbis, Clausillia). Pe cochilia secionat longitudinal se observ n interior o ax median calcaroas numit columel. La captul inferior al columelei, peretele extern al columelei are o nfundtur, numit umbilic.

55

orificiu genital

brul mantalei pneumostom

gland albuminipar hepatopancreas inim organul lui Bojanus

Corpul fr cochilie cu indicarea liniilor de incizie Organizaia intern. Cu ajutorul unui foarfece se execut mai multe tieturi dup cum urmeaz: se introduce foarfeca n pneumostom, se taie brul mantalei, iar apoi mantaua n lungul brului, continundu-se de la dreapta la spre stnga, conform liniei indicatoare A-B. Marginea mantalei eliberat de masa visceral se rsfrnge spre dreapta i se fixeaz cu ace cu gmlie n tava de disecie, pe un dop de plut nalt ct corpul animalului. Se constat c sub manta exist o cavitate larg, numit camer paleal. A doua incizie, C- D, se face tind tegumentul pe linia mediandorsal a piciorului, din mijlocul brului mantalei pn la extremitatea anterioar a capului. Dup aceast operaie, se continu incizia din punctul C spre partea posterioar a corpului, apoi n lungul spirelor, pn se izoleaz hepato-pancreasul, intestinul, canalul glandei hermafrodite i glanda genital hermafrodit care este mplntat n pancreas. Dup efectuarea celei de-a doua tieturi, tegumentul se rsfrnge n tava de disecie cu ap pn la jumtate i se prinde de fundul ei cu ace de gmlie.

Studiul melcului fr cochilie. Acest studiu necesit n primul rnd ndeprtarea cochiliei care se poate face n dou moduri: a. se ine piciorul melcului n mna stng, iar cu mna dreapt se nvrtete cochilia de la dreapta la stnga, deurubnd-o ncet i cu mare atenie, pentru a nu se distruge masa visceral. b. n cazul cnd cochilia nu se desprinde de masa visceral, se ndeprteaz prin tierea ei cu un foarfece. Tierea se face de-a lungul turelor de spir, pe linia de sutur, ncepnd de la peristom i naintnd spre apex. Dup ndeprtarea complet a cochiliei, apare masa visceral ,nvrtit de asemenea n spiral i acoperit de o membran subire care este mantaua. Prin transparena mantalei se pot observa unele organe, ca: hepatopancreasul, care ocup aproape n ntregime masa visceral, plmnul, inima, glanda albuminipar i glanda hermafrodit.

faringe esofag gland salivar brul mantalei pneumostom orificiu anal orificiu excretor ureter rectum plmn organul lui Bojanus hepato pancreas auricul pericard ventricul

mas visceral

Helix pomatia-organele din cavitatea paleal

56

faringe ganglioni cerebroizi canalele glandelor salivare esofag glande salivare ganglioni pedioi i viscerali nervi muchi retractori ai piciorului orificiu anal orificiu excretor plmn

Helix pomatia- Organizaia intern: aparatul digestiv, nervos i muscular.

canal excretor stomac hepatopancreas intestin orificiu genital masculin i feminin glande multifide Penis sacul sgeii vagin oviduct canal deferent esofag secionat canalul receptaculului seminal inim organul lui Bojanus

flagelul penisului

Helix pomatia- aparatul reproductor.

muchiul retractor al penisului

receptacul seminal gland albuminipar canalul glandei hermafrodite

gland hermafrodit hepatopancreas intestin secionat

57

impresia muchiului adductor anterior

impresia muchiului retractor anterior

impresia muchiului retractor posterior

impresia muchiului protractor impresia paleal

impresia muchiului adductor posterior

Anodonta cygnea-valva dreapt vzut pe partea sa intern Anodonta cygnea-vzut la exterior pe partea stng
dorsal apex umbone ligament sifon cloacal sifon branhial anterior

posterior

cochilie picior ventral striuri de cretere

Clasa Lamelibranhiate. Anodonta cygnea- scoica de balt. Studiul cochiliei. Cochilia acoper n ntregime corpul scoicii. Ea are form oval, convex spre mijloc, mai lat i rotunjit la un capt, ceva mai ngust la captul opus. Mrimea ei variaz ntre 8 i 19 cm. Este constituit din dou buci simetrice, una dreapt i alta stng, care se numesc valve. Ele sunt prinse una de alta prin intermediul unei fii cornoase de culoare brun-negricioas care poart numele de ligament. Deoarece ligamentul se gsete la exterior se numete ligament extern. Regiunea de pe valv n dreptul creia ele se articuleaz se numete n. Valvele au cte o poriune mai proeminent care se numete umbone. Vrful umbonelui se numete apex. De jur mprejurul acestuia, spre marginea cochiliei i paralel cu ea, se observ, sub forma unor dungi mai ntunecate, striurile de cretere. Captul mai lit i rotunjit al cochiliei reprezint partea anterioar, cel opus, partea posterioar. Pentru a studia suprafaa intern a cochiliei trebuie detaat de corpul animalului. Se introduce vrful unui bisturiu ntre cele dou valve prin regiunea ventral, n aa fel ca lama s ptrund ntre cochilie i manta. Se desprinde mantaua pe toat ntinderea sa de suprafaa intern a valvei, dup care muchii adductori se desprind de cochilie. ndat ce aceast operaiune a fost efectuat, se ridic valva ca un capac, rmnnd fixat de cealalt valv numai prin ligament. Dup eliberarea unei valve, se desprinde prin acelai procedeu cealalt valv.

58

orificiul glandei genitale ventricul stomac hepatopancreas ganglion cerebroid canal excretor pericard auricul stng organul lui Bojanus muchi adductor posterior rectum sifon cloacal anus

Anodonta

gur sifon branhial ganglion pedios conectiv cerebro pedios gland genital intestin conectiv cerebro visceral branhie ganglion visceral

Scoica de balt. Organizaia intern vzut pe partea stng. Animalul eliberat de cochilie, se aeaz cu partea dorsal pe fundul unei tvi de disecie. Se rsfrng lateral lobii mantalei i se fixeaz cu ace de fundul tvii. Cu un bisturiu foarte bine ascuit, se taie piciorul n lungul su, n dou jumti simetrice. Se continu aceast operaie i prin corpul animalului, obinnd dou jumti egale. Se studiaz apoi suprafaa de seciune a uneia din cele dou jumti ale corpului.

cygnea-

muchi retractor anterior

Anodonta cygnea. Organele din cavitatea paleal vzute pe partea stng.

muchi protractor

muchi retractor posterior muchi adductor posterior sifon cloacal

muchi adductor anterior

picior palpi labiali

sifon branhial manta lamele branhiale lam branhial extern lam branhial intern

59

Artropode chel rostru 1,2,3,4,5= pereiopode anten antenul ochi

segmente abdominale

uropode

telson Astacus fluviatilis. Morfologia extern vzut dorsal

60

antene antenule orificiu excretor orificiu bucal

apendice bucale

pereiopode

orificiu genital

pleopode ou

orificiu anal uropode

Astacus fluviatilis. Un individ femel. Morfologia extern vzut ventral.

61

orificiu excretor orificiu bucal apendice bucale

pereiopode

orificiu genital mascul

gonopode

pleopode

orificiu anal stomat Astacus fluviatilis. Un individ mascul. Morfologia extern vzut ventral

62

ganglioni cerebroizi gland verde muchi cardiaci anteriori ai stomacului stomac muchi mandibulari arter oftalmic hepatopancreas extremitatea dorsal a testiculelor osteole arter antenar inim muchi cardiaci posteriori ai stomacului

canal deferent

intestin arter abdominal

muchi abdominali

Astacus fluviatilis- racul. Disecie. Se aeaz racul n tava de disecie, cu partea dorsal n sus i se fixeaz de fundul tvii cu ace cu gmlie, care se nfig n cletele primei perechi de pereiopode i n telson. Cu un foarfece bine ascuit se fac dou incizii n lungul corpului, pe prile sale laterale. Operaia se ncepe de la nivelul articulaiei segmentului ase cu telsonul, se taier carapacea dorsal a segmentului ase, iar apoi succesiv, urmnd marginea corpului, cea a segmentelor urmtoare i n cele din urm carapacea cefalotoracelui, pn napoia ochiului. Cele dou incizii longitudinale se unesc printr-o incizie transversal. Cu ajutorul unei pense se ridic i se ndeprteaz poriunile dorsale ale carapacei tiate, detandu-le cu un bisturiu de muchii sau membranele care ader la ele.

63

Astacus fluviatilis. Apendicele .

testicule

ovar

canal deferent

oviduct

orificii genitale

orificii genitale

Astacus fluviatilis. Aparatul genital mascul 64

Astacus fluviatilis. Aparatul genital femel

Arahnide pianjeni. Organizare intern

Arahnidele au corpul format din cefalotorace i abdomen. Majoritatea au patru perechi de picioare prinse de cefalotorace. Nu au antene, majoritatea speciilor au respiraie traheal

Insecte . Organizare intern

Insectele au corpul format din cap, torace i abdomen. Cele trei perechi de picioare articulate sunt prinse de torace. Au dou perechi de aripi, reduse la unele specii. Aparatul bucal este difereniat n funcie de grup.

65

Echinoderme. Structura schematic a unui arici de mare i a unei stele de mare

Echinoderme. Structura . Corpul echinodermelor este cel mai adesea cilindric, sferic sau aplatizat n form de stea. Ele prezint un schelet de origine dermic alctuit din numeroase plci calcaroase. Plcile calcaroase sunt libere sau sudate; majoritatea poart spini. Caracteristic echinodermelor este sistemul lor de tuburi, cu rol n special n locomoie (sistemul ambulacrar). Acesta este alctuit dintr-un inel tubular de la care pornesc cinci canale radiare. Sistemul ambulacrar este legat printr-unul din aceste cinci canale radiare de placa madreporic (plac ciuruit de numeroi pori). De la sistemul radiar sau ambulacrar pornesc numeroase tubuoare elastice prevzute cu ventuze (picioruele ambulacrare).

66

BIOLOGIE CLASA A X- A

Experiene de evideniere, msurare i nregistrare a excitabilitii neuromusculare Preparate neuromusculare. Pentru demonstrarea proprietilor muchilor se folosete preparatul neuromuscular. Preparatele neuromusculare sunt ansambluri de uniti funcionale reprezentate prin muchi i nervii lor motori. Preparatele neuromusculare pot fi detaate complet din organism sau pot fi lsate n continuare n organism, respectnd relaiile vasculare i relaia nervului cu centrii medulari. Astfel de preparate sunt denumite in situ. Pe asemenea preparate excitarea muchiului se face indirect, adic prin excitarea nervului corespunztor. Acest mod de excitare are avantajul c transmite excitaia la toate unitile musculare i se obin rezultate mai bune. Preparatele neuromusculare obinute de la animalele poichiloterme i pstreaz timp ndelungat viabilitatea fr s fim nevoii s asigurm pe durata experienei temperatura constant, egal cu cea corporal, aa cum ar fi cazul preparatelor neuromusculare obinute de la homeoterme. Material necesar: broasc, instrumente de disecie, planet sau cuv de disecie, ace de disecie, ace cu gmlie, baghete de sticl cu vrful bont, lam de sticl, ser fiziologic, vat, dispozitiv pentru excitaie electric (de la reea, de la acumulator sau de la o baterie electric de buzunar), fire de a. Modul de lucru. Se paralizeaz broasca prin distrugerea axului cerebrospinal i se fixeaz cu faa ventral pe planet, cu membrele n extensie, cu ajutorul unor ace cu gmlie. Se ndeprteaz tegumentul unui membru posterior, apoi se disociaz masa muscular a coapsei n plan axial , cu ajutorul unei baghete de sticl cu vrf bont. Se disociaz nervul sciatic situat ntre muchiul triceps i semimembranos. Nervul este flancat de artera i vena femural de care trebuie degajat. Dup ce a fost izolat, nervul se secioneaz ct mai aproape de regiunea coccigian. Disociem acum muchiul gastrocnemian inserat la captul su inferior prin tendonul lui Ahile. Cu ajutorul unei baghete de sticl cu vrf bont se introduce un fir de a pe sub tendon i se leag strns, apoi se secioneaz tendonul sub aceast legtur. inndu-se de capetele firelor de a ale legturii se ridic muchiul i se detaeaz prin secionarea piciorului deasupra i sub articulaia tibiofemural. n acest fel se pstreaz inseria proximal a muchiului gastrocnemian pe o poriune de os femural. Aceast articulaie fixat cu ace n msua miografului, va constitui todeauna captul fix al preparatului neuromuscular, iar tendonul, prin firul de a conectat la prghie, constituie captul mobil. Se va evita lezarea nervului prin ntindere, ciupire, presare. S-a obinut astfel preparatul neuromuscular gastrocnemian-sciatic. Se aeaz preparatul pe o lam curat de sticl i se acoper cu un tampon de vat mbibat cu ser fiziologic, pentru a evita deshidratarea nervului. n acest mod preparatul va rezista un timp oarecare 2 1 n

Preparat neuromuscular gastrocnemian-sciatic 1 i 2 fire de a; n- nerv sciatic

67

Excitabilitatea muscular. Excitani mecanici. Se penseaz cu vrful pensei nervul la extremitatea distal fa de muchi. Se observ c determin o contracie. Dac se repet aceast pensare n acelai loc nu se mai obine un rspuns din cauz c s-a produs degradarea nervului n locul respectiv. Pentru a obine o nou excitare mecanic prin pensare este necesar s pensm pe traseul nervului alturi de locul primei excitri, dar nspre muchi unde nevul este nelezat. De fiecare dat vom constata c dup o prim pensare, pe acelai loc, nu se mai poate obine excitarea nervului. Rezult c integritatea anatomic i fiziologic a nervului sunt condiii eseniale, pentru ca s se produc o excitaie prin aplicarea oricrui excitant. Suprimarea posibilitii de transmitere a excitaiilor de la centrii motori pe traseul unui nerv lezat determin pierderea tonusului muscular, urmat de paralizia muchiului. Excitani termici. Se aplic pe suprafaa de seciune a nervului un corp metalic cald sau un cristal de ghea. Se observ c n ambele cazuri muchiul rspunde prin contracie Excitani chimici. Pe un alt preparat neuromuscular se aplic un cristal de NaCl pe suprafaa de seciune a nervului i, dup puin timp, se obine contracia muchiului. Prin aplicarea clorurii de sodiu se produce deshidratarea nervului, timp n care are loc un fenomen de excitaie. Acelai efect se obine prin atingerea suprafeei de seciune a nervului, cu o baghet nmuiat n acid clorhidric sau acetic. Excitani electrici. n experienele de fiziologie se ntrebuineaz n mod frecvent curentul electric continuu sau alternativ cu voltaj mic, deoarece acesta poate fi dozat n intensitate i durat, nu deterioreaz muchiul n timpul trecerii lui prin esutul muscular, nu produce modificri ireversibile care ar mpiedica repetarea excitaiei n acelai loc. Pentru ca muchiul s reacioneze, excitantul trebuie s ating o intensitate prag de excitabilitate. Instalaia electric pentru efectuarea unei excitaii se realizeaz astfel: cu srme subiri de cupru, izolate se face un circuit electric ntre sursa de curent, cheia ntreruptoare i excitator. Capetele terminale ale srmelor se ndoaie puin pentru a se aeza nervul. ntreruptorul este folosit pentru stabilirea i ntreruperea circuitului. Sursa de curent folosit poate fi i cea din reeaua oraului care se trece printr-un transformator de sonerie de 5-8 voli. Dac intensitatea curentului a atins valoarea medie, att la stabilirea ct i la ntreruperea circuitului , adic de fiecare dat cnd n circuitul electric se produce o variaie brusc de intensitate a stimulului, se obine o excitaie care determin contracia muchiului. Contractilitatea muscular. Este proprietatea fiziologic fundamental caracteristic muchilor. n funcie de frecvena i intensitatea stimulilor, se pot distinge: contracii simple sau secuse, contracii susinute sau tetanosul i contracii tonice. n funcie de tensiunea care se dezvolt n muchi n timpul contraciilor deosebim contracii izotonice i contracii izometrice. Contracia izotonic se realizeaz fr efectuarea unui lucru mecanic atunci cnd muchiul ridic propria lui greutate. n acest caz el nu dezvolt nici un fel de tensiune sau dezvolt una foarte slab. Cnd ns muchiul trebuie s efectueze un lucru mecanic se dezvolt o tensiune corespunztoare ca intensitate cantitii de lucru mecanic ce trebuie efectuat. n cazul n care lucrul mecanic depete ca intensitate tensiunea maxim n muchi, acesta nu se mai poate scurta. n consecin, cu toate c s-a dezvoltat o tensiune maxim, muchiul rmne la aceeai lungimeizometric. Tensiunea maxim dezvoltat n condiii de contracie izometric este msurabil. Contracia izotonic. Cnd muchiul care se scurteaz are tot timpul o tensiune constant, reprezentat prin fora care se dezvolt pentru ridicarea propriei greuti, rezult o contracie izotonic este cazul contraciei simple (secusa) a muchilor. Contracia izometric. n cazul cnd n muchi se dezvolt starea de tensiune maxim, fr s se poat scurta din cauz c rezistena care se opune, adic ncrctura muchiului depete tensiunea maxim dezvoltat, se produce o contracie izometric care nu se exteriorizeaz printr-un lucru mecanic dinamic, nu se produce o micare. i acest fel de contracii pot fi experimentate de elevi, de pild un elev mpinge cu mna i cu toat puterea de care este capabil, peretele clasei i nu-l poate deplasa. Alt elev ncearc s deplaseze o greutate pe care nu o poate urni. n ambele cazuri, tensiunea muscular se dezvolt progresiv; la intensitatea maxim, lungimea fibrelor musculare rmne aceeai.

68

Tipuri de aparat locomotor la nevertebrate i la vertebrate Saltul la nevertebrate Membrele posterioare ale unei lcuste exercit o presiune brusc asupra solului i n urma destinderii brute a acestora corpul insectei este proiectat n sus i nainte. Pe parcursul efecturii saltului se observ o succesiune de flexiuni i extensii ale membrelor posterioare. Descrierea membrului posterior al lcustei. Este lung, format din segmente articulate ntre ele, dispuse n forma literei Z. Coapsa este cea mai voluminoas. La extremitatea membrului se observ dou gheare. Acestea se fixeaz de neregularitile substratului i se evit astfel alunecarea n momentul decolrii Seciune longitudinal a unui membru posterior la nivelul coapsei i gambe membran fin i flexibil

perete chitinos

muchi extensori

muchi flexori ai gambei

Fiecare segment este alctuit la exterior dintr-un perete rigid bogat n chitin care joac rolul unui schelet extern. Articulaiile la nivelul peretelui rigid sunt suple permind micrile unui segment n raport cu segmentul vecin. Coapsa voluminoas conine la interior muchi dezvoltai care se inser pe peretele rigid al gambei. Cnd se contract muchii flexori are loc flectarea gambei. Cnd se contract muchii extensori se produce extensia gambei. Flexiunile i extensiile succesive ale membrului posterior care determin efectuarea saltului se datoreaz contraciilor muchilor interni care se inser pe un schelet extern.

Saltul la vertebrate Iepurele se deplaseaz prin salturi. Membrele posterioare se fixeaz pe sol i exercit o presiune asupra acestuia. Membrele posterioare flectate, pliate, se destind brusc. Aceast extensie brusc propulseaz corpul animalului nainte. Iepurele nu atinge solul, el este pentru un timp suspendat n aer. Aterizarea se face pe membrele anterioare care amortizeaz ocul atingerii solului prin replierea lor cu suplee. n timpul saltului se observ o succesiune de flexiuni i extensii ale membrelor posterioare. Vom cuta relaia dintre funcionarea membrelor posterioare i alctuirea lor. Descrierea membrului posterior la iepure. Membrele posterioare ale iepurelui sunt mult mai lungi dect membrele anterioare i sunt pliate n forma literei Z n timpul repausului. Coapsa este bogat n musculatur. Destinderea brusc a membrelor posterioare la iepure este responsabil de deplasarea ntregului corp al animalului.

69

Studiul membrului posterior care realizeaz saltul.

muchi extensori ai gambei muchi flexori ai gambei genunchi gamb

picior

Scheletul mparte membrul posterior n segmente care se mic la nivelul unei articulaii. Micrile de flectare a gambei pe coaps sunt asigurate de muchii coapsei situai sub femur. Aceti muchi se inser pe oasele gambei pe de o parte i de coaps i bazin pe de alt parte. Cnd se contract, ei apropie oasele gambei de osul coapsei. Ei se numesc muchi flexori ai gambei. Micrile de extensie ale gambei sunt asigurate de muchii situai n coaps deasupra femurului. Aceti muchi se inser pe oasele gambei la un capt i pe coaps i bazin la cellalt capt. Cnd se contract, ei determin extensia gambei. Aceti muchi se numesc extensori ai gambei. Muchii sunt organe active ale micrii, oasele sunt organe pasive, iar articulaiile permit micrile unui segment n raport cu altul.

70

notul i echilibrul pstrvului n ap. Dac se imobilizeaz nottoarele unui pete, el se ntoarce cu partea ventral n sus. nottoarele asigur deci, prin micrile lor echilibrul petelui n ap. Observaii asupra structurii unei nottoare. Evidenierea cauzelor supleei i comitent a rigiditii acesteia.

radii osoase membran fin

O nottoare este constituit din radii osoase articulate ntre ele, reunite printr-o membran fin care confer supleea. Musculatura asigur mobilitatea sa. Echilibrul n ap este deci un fenomen determinat de micrile nottoarelor. notul ondulatoriu. Un pstrv de 20- 30 cm poate parcurge 12 km ntr-o or. Examinarea unor fotografii succesive ale micrilor arat c notul rapid al pstrvului este datorat btilor apei de ctre coad i nottoarea codal care lovesc apa lateral n dreapta i n stnga. Aceste bti provoac ondulri ale corpului care exercit o presiune asupra apei. notul rapid este notul ondulatoriu.

notul ondulatoriu la pstrv

71

Observarea unei seciuni transversale prin coada de pstrv

muchi

coloana vertebral

Coada este constituit din muchi care se inser pe o coloan vertebral n acelai timp rigid i supl. Contracia muchilor din partea dreapt, apoi a celor din partea stng provoac btile cozii. Coada supl i musculoas este deci, principalul organ propulsor al pstrvului . Forma hidrodinamic a corpului, modul de dispunere a solzilor, prezena mucusului, favorizeaz alunecarea corpului n ap i ajut la nvingerea rezistenei mediului acvatic

72

Separarea pigmenilor asimilatori prin metoda cromatografiei pe hrtie Plantele fotoautotrofe, adaptate la ndeplinirea procesului de fotosintez conin un ansamblu de pigmeni ce intervin n acest proces, ansamblu cunoscut sub numele de pigmeni asimilatori. Acetia se mpart n trei grupe i anume: pigmeni clorofilieni, pigmeni carotenoizi i pigmeni ficobilinici. Cu excepia pigmeilor ficobilinici ( ce pot fi extrai n ap distila) toi ceilali pigmeni asimilatori pot fi extrai cu ajutorul unor solveni organici (alcool etilic, alcool metilic, aceton etc.) prin mojarare la rece sau prin fierbere. Separarea pigmenilor asimilatori din extractul de clorofil brut prin metoda cromatografic se bazeaz pe capacitatea acestora de a fi absorbii n mod diferit de ctre anumite substraturi. Modul de lucru. Se extrag pigmenii asimilatori din frunze prin una din metodele amintite mai sus obinndu-se un extract de clorofil brut. Pentru separarea pigmenilor asimilatori din soluie se procedeaz n felul urmtor: pe o fie de hrtie de filtru, lat de 3 cm i lung de 15- 20 cm, se traseaz cu ajutorul unei pipete Pasteur, la unul din capete, la o distan de 2 cm, o dung transversal de soluie de pigmeni. Dup ce se usuc, se repet operaia de 10- 12 ori, pentru a obine o band intens colorat. Dup fiecare trasare este necesar uscarea hrtiei de filtru. Se introduce apoi hrtia de filtru ntr-un cilindru de sticl fixndu-se de crligul baghetei ce strbate dopul cu partea opus dungii colorate, astfel ca hrtia de filtru s nu ating pereii cilindrului i nici amestecul format din 30 pri benzin, o parte aceton i 0,3 pri alcool metilic, care se gsete pe fundul cilindrului. Se ine hrtia suspendat deasupra amestecului 15- 20 minute pentru ca n interiorul cilindrului s se formeze o atmosfer saturat n vaporii celor trei substane din amestec dup care prin apsarea baghetei se introduce captul inferior al hrtiei de filtru n amestec pe o distan de 0,5 cm. Solventul se va ridica prin capilaritate de-a lungul hrtiei antrennd cu el pigmenii, care datorit gradului diferit de absorbie se vor repartiza astfel: la partea superioar carotina, marcat printr-o dung portocalie, apoi xantofila de culoare galben, clorofila a de culoare verde- albstruie i clorofila b de culoare glbuie.

frunze+aceton+ nisip caroten hrtie cromatografic xantofile

clorofila a pat de clorofil soluie de clorofil clorofila b solvent pat iniial

73

Influena factorilor externi asupra fotosintezei Dintre factorii externi care influeneaz intensitatea fotosintezei cei mai importani sunt lumina, concentraia de CO2, i temperatura. Influena acestor factori se poate evidenia experimental, n condiii de laborator cu ajutorul plantelor acvatice superioare folosind metoda bulelor. Influena intensitii luminii Materiale necesare: Eprubet mijlocie, stativ pentru eprubete, lamp reflector, plant acvatic, postament, muf dubl, muf, tij scurt. Modul de lucru: Se tie c fotosinteza ncepe la cele mai mici intensiti de lumin, crete n intensitate o dat cu creterea intensitii luminii pn la o anumit intensitate luminoas dup care rmne relativ constant pentru ca la intensiti mari de lumin intensitatea fotosintezei s scad. Modul de lucru. Se iau ramuri de plante acvatice submerse (Elodea, Miriophyllum, Ceratophyllum etc.), se secioneaz oblic cu o lam de ras astfel nct s aib o lungime de 6-10 cm dup care se introduc cu vrful n jos n cte o eprubet umplut cu ap, avnd grij ca suprafaa de seciune s nu ating pereii eprubetelor. Eprubetele astfel pregtite se introduc ntr-un stativ i se aeaz la lumina unui bec electric, la o distan de aproximativ 20 cm de acesta i se ateapt pn cnd ncep s se degaj bule de oxigen. Pentru experien se alege o ramur care degaj un numr constant de bule, cuprins ntre 20- 40 pe minut. Punerea n eviden a influenei intensitii luminii asupra intensitii fotosintezei se face plasnd stativul cu eprubeta ce conine ramura aleas pentru determinri la distane diferite de sursa de lumin (20, 30, 40, 50 i 60 cm) i numrnd bulele emise pe minut, pentru fiecare dintre aceste distane. Se va constata c numrul de bule degajate ntr-un minut scade pe msur ce stativul este ndeprtat de sursa de lumin datorit scderii intensitii luminii. Dac pe parcursul determinrilor degajarea de bule de ctre ramur se deregleaz sau emisiunea de bule nceteaz, experiena trebuie reluat cu o nou ramur. Influena compoziiei spectrale a luminii Fotosinteza este influenat de radiaiile spectrului vizibil pe care plantele le absorb cu ajutorul pigmenilor asimilatori, pigmeni caracteristici diferitelor grupe de plante fotoautotrofe. Evidenierea influenei diferitelor radiaii ale spectrului asupra intensitii fotosintezei se poate face cu ajutorul unor filtre de sticl, de celofan colorat sau cu ajutorul unor soluii colorate ale cror culori corespund culorilor spectrului vizibil. Materiale necesare: Postament, eprubet mare, lamp reflector, ecran din sticl, filtre colorate, plant acvatic, muf dubl, tij lung, tij scurt, clem susinere tuburi, suport filtru, baghet din sticl. Modul de lucru. Pentru determinare se folosesc ramuri de plante acvatice submerse, pregtite dup procedeul prezentat n experiena anterioar. Stativul cu eprubeta cu planta aleas pentru determinri se aeaz la 20- 30 cm de sursa de lumin. ntre sursa de lumin i eprubet se intercaleaz pe rnd filtrele colorate, numrnd de fiecare dat numrul de bule degajate pe minut. Dup fiecare determinare nainte de a schimba filtrul se verific dac n lumina becului ramura degaj numrul iniial de bule i numai dup aceea se schimb filtrul cu unul de alt culoare. Rezultatele se noteaz ntr-un tabel iar la sfritul experienei se pot reprezenta grafic.

74

Influena temperaturii asupra fotosintezei Materiale necesare: Eprubet mare, pahar Berzelius, plant acvatic, postament, muf dubl, clem susinere tuburi, tij lung, sit cu azbest, termometru, lamp reflector, lamp cu spirt. Modul de lucru: Folosim tot eprubeta cu Elodea care se ine tot timpul experienei la aceeai distan fa de sursa de lumin. Urmrim degajarea de bule n eprubeta cu ap la temperatura camerei i apoi degajarea de bule ce are loc la o temperatur ntre 30-35oC. Apa se nclzete n paharul Berzelius, pn la temperatura de 35oC i se toarn n eprubeta cu Elodea. Se constat astfel c prin ridicarea temperaturii crete i intensitatea fotosintezei. Evidenierea necesitii prezenei pigmenilor asimilatori pentru desfurarea procesului de fotosintez Materiale necesare: Spirtier, alcool medicinal, pahar Berzelius, trus de disecie, soluie Lugol, sit cu azbest, cutie Petri. Modul de lucru: Pentru evidenierea necesitii prezenei pigmenilor asimilatori n procesul de fotosintez, se folosesc frunze de Coleus. Frunzele acestor plante se caracterizeaz prin aceea c n partea central a limbului conin pigmeni antocianici i nu pigmeni asimilatori. Se detaeaz o frunz de pe o plant care a fost inut n prealabil cteva ore la lumin, se introduce ntr-un pahar Berzelius cu ap i se fierbe pentru a omor celulele i pentru a extrage pigmenii antocianici. Apoi se procedeaz la extragerea pigmenilor asimilatori prin fierberea frunzei n alcool. Dup extragerea pigmenilor asimilatori se spal frunza cu ap i se trece ntr-o cutie Petri cu soluie Lugol care coloreaz amidonul n albastru. Dup 2-3 minute se scoate frunza, se spal cu ap i se etaleaz pe o foaie alb. Limbul s-a colorat n albastru numai n zonele care au posedat pigmeni asimilatori (zonele marginale) nu i n zona central lipsit de pigmeni asimilatori. Aceasta ne demonstreaz c amidonul se sintetizeaz la lumin doar n prezena pigmenilor asimilatori. Punerea n eviden a fotosintezei prin metoda bulelor Materiale necesare: Eprubet mare, muf dubl, clem susinere tuburi, tij lung, baghet de sticl, plant acvatic, lamp reflector. Modul de lucru: O ramur de Elodea se secioneaz oblic la partea bazal i se introduce cu vrful n jos ntr-o eprubet cu ap de conduct. Pentru a observa mai uor eliberarea oxigenului, ramura se fixeaz de bagheta de sticl n aa fel ca partea secionat s se gseasc la 2-3 cm sub nivelul apei i s nu ating pereii. Eprubeta cu ramura se aeaz la lumin natural sau n faa unui bec de 100- 150W. Dup 2-3 minute prin partea secionat ncep s se degaje bule de gaz. Dac degajarea de bule nu are loc dup expunerea la lumin, se face o secionare mai oblic; dac bulele sunt prea numeroase, secionarea se face mai puin oblic. Eliminarea oxigenului se explic astfel: oxigenul care se formeaz n procesul fotosintezei, difuzeaz n spaiile intercelulare i se degaj sub form de bule prin partea secionat unde spaiile intercelulare comunic cu exteriorul. n afar de oxigen, aceste bule mai conin azot i chiar dioxid de carbon.

75

Evidenierea oxigenului eliminat n fotosintez Materiale necesare:Vas anatomic, suport pentru plnie, plnie transparent, eprubet mijlocie, postament, tij lung, lamp reflector, muf dubl, soluie carbonat de sodiu, Elodea sp. Modul de lucru: n vasul anatomic plin cu ap curent se pun ramuri de Elodea, Ceratophyllum sau Myriophyllum i se acoper cu o plnie aezat cu gura n jos. Plnia se sprijin pe un suport metalic. Peste gtul plniei se aeaz o eprubet plin cu ap. Pentru a fixa eprubeta trebuie ca nivelul apei din vas s treac peste partea superioar a plniei. Experiena montat se aeaz la lumina direct a soarelui sau la lumina reflectorului. Oxigenul care se degaj n urma procesului de fotosintez se culege n partea superioar a eprubetei. Pentru a ne convinge c gazul degajat n eprubet este oxigen acoperim gura eprubetei cu degetul, o ridicm din ap, o ntoarcem cu gura n sus i introducem repede n interiorul ei un b de chibrit care arde fr flacr. Observm c bul de chibrit arde cu flacr vie. Gazul acumulat n eprubet, nu arde, dar ntreine arderea. Acesta este oxigenul. Pentru ca fotosinteza s fie mai evident i apa din vas s fie mai bogat n dioxid de carbon se adaug o cantitate de aproximativ 0,1% carbonat acid de sodiu.

Asimilaia CO2 n timpul fotosintezei Materiale necesare: Eprubet mare, plant acvatic, stativ pentru eprubete, muf dubl, lamp reflector, postament, tij lung, NaHCO3. Modul de lucru: Se dovedete necesitatea CO2 n fotosintez lund o eprubet cu ap n care se introduce ramura de Elodea. Aezm eprubeta n faa luminii i numrm bulele degajate ntr-un minut. nlocuim apa din eprubet cu ap fiart i rcit. Prin fierbere apa pierde CO2 dizolvat. Urmrind degajarea de bule, constatm c este foarte lent. Dac adugm o cantitate mic de NaHCO3, dup scurt timp observm degajarea unui numr mare de bule, deoarece NaHCO3 prin disociere, pune n libertate CO2. 2NaHCO3 CO2 +Na2CO3 +H2O

Evidenierea cilor de conducere a apei n corpul plantelor Materiale necesare: Eprubet mijlocie, stativ pentru eprubete, ramuri tinere de soc, cristalizor, flori albe cu tije, eozin soluie 0,1%, frunze cu nervuri paralele. Modul de lucru. Evidenierea cilor de conducere a apei n corpul plantelor se poate face prin mai multe metode: - Se iau flori de lcrmioare sau mueel ai cror pedunculi au fost tiai sub ap; se introduc n eprubeta ce conine eozin 0,1%. Dup ctva timp se constat c nervurile petalelor se coloreaz n rou. Soluia de eozin urc prin vasele lemnoase i coloreaz nervurile petalelor. O seciune n peduncul observat la microscop evideniaz coloraia vaselor de lemn. 76

- Se iau fragmente de frunz, cu nervaiunea paralel. Un fragment se aeaz la suprafaa apei, nervurile fiind paralele cu apa, iar cellalt fragment se aeaz perpendicular pe suprafaa apei. Dup ctva timp se constat c fragmentul de frunz aezat perpendicular pe suprafaa apei i menine turgescena, iar cellalt se ofilete, nemaifiind aprovizionat cu ap. - Se iau cinci fragmente de ramuri de soc la care se fac seciuni n urmtoarea ordine: 1. se ndeprteaz scoara; 2. se ndeprteaz mduva 3. se ndeprteaz scoara i mduva 4. pe anumite poriuni de 2-3 mm se ntrerup toate esuturile 5. se las ramura intact Se introduc toate fragmentele n ap i se schimb apa zilnic. Pentru a urmri efectul secionrilor, ramurile vor avea deasupra seciunilor muguri. Dup ctva timp se constat c la fragmentele nr.1,2,3 i 5 se deschid mugurii i chiar se pot dezvolta frunze. La ramura nr.4 mugurii se usuc. n acest caz vasele lemnoase fiind secionate, apa nu ajunge s alimenteze mugurii i acetia se usuc.

Evidenierea rolului forei de suciune a frunzelor n conducerea apei n corpul plantelor Materiale necesare. Tub scurt, tub n form de U cu brae inegale, dop de cauciuc cu o gaur, postament, dop de cauciuc crestat, muf dubl, tij lung, clem de susinere, ramur cu frunze. Modul de lucru. Se realizeaz montajul din figur. La partea inferioar a tubului de sticl se monteaz dopul de cauciuc prin orificiul cruia trece tubul de sticl n form de U. la partea superioar a tubului, n dopul de cauciuc perforat i prevzut cu o cresttur se fixeaz o ramur cu frunze. Se toarn ap n tubul de sticl care va trece i n tubul U pe care cu un marcher se noteaz nivelul lichidului. Dup 1-2 ore se noteaz din nou nivelul apei. Diferena de nivel reprezint fora de suciune a celulelor frunzelor.

Micrile plantelor

Evidenierea geotropismului tulpinilor i rdcinilor Geotropismul face parte din categoria micrilor de curbare efectuate de organele vegetale pe cale de cretere sub influena gravitaiei. Orientarea micrii este determinat de direcia excitantului i poate fi pozitiv i negativ. Materiale necesare: Postament, eprubet mare, muf dubl, clem susinere tuburi, tij lung, semine de fasole, gru, mazre, cristalizor, rumegu de lemn, nisip. Modul de lucru. Evidenierea geotropismului se poate face cu urmtorul montaj: se iau trei plantule (de mazre, porumb sau lupin) crescute n rumegu de lemn, cu rdcinile puternice, drepte i 77

lungi de 2-3 cm. Se aeaz n trei eprubete mari n care am pus ,de asemenea, rumegu umezit. Eprubetele se aeaz n trei poziii diferite, dar se in n condiii favorabile de cretere. Poziiile celor trei eprubete vor fi: a. poziia normal, cu rdcina vertical ndreptat cu vrful n jos. n aceast poziie nu are loc nici un impuls geotropic. b. Poziia orizontal, cnd rdcina formeaz cu verticala un unghi de 90o. n aceast poziie, excitaia geic atinge mrimea maxim. c. Poziie inversat- planta se aeaz cu vrful rdcinii n sus i cu tulpina n jos. La plantele tinere se observ c n decurs de 1-4 ore, sub aciunea gravitaiei, organele axiale (rdcina i tulpina) se orienteaz n direcie vertical, dar n sens opus, tulpina n sus i rdcina n jos. Cele dou laturi din regiunea de cretere a tulpinilor aflate ntr-o poziie nclinat fa de vertical cresc inegal sub efectul excitaiei gravitaiei. Latura dinspre Pmnt a tulpinii, crete mai puternic dect cea opus, ca urmare vrful su se ndreapt n sus (geotropism negativ). Rdcina reacioneaz invers, faa sa dinspre Pmnt se alungete mai puin dect cealalt, de aceea vrful ei se ndreapt ctre pmnt (geotropism pozitiv). Experiment cu tulpini articulate de graminee. Cnd o tulpin de graminee este orizontal, n dreptul unui nod se produce o curbur n form de genunchi i paiul se ridic vertical. Se scot din pmnt i se sdesc n tuburi graminee tinere avnd cteva internoduri , se ud pmntul i se aeaz tubul n poziie orizontal. n curs de 24 de ore se vor produce curburile geotropice la noduri. Se taie segmente tinere din tulpin de graminee, n aa fel ca s aib la mijloc un nod. Se pune ntr-un cristalizor nisip umed, formnd n centru un mic muuroi. n acesta se fixeaz cu un capt segmente de pai n poziie orizontal. Se pstreaz la ntuneric meninnd umed nisipul. Dup o or paiul curbeaz n dreptul nodului, ca urmare internodul se ndreapt n sus. Curburile geotropice ale tulpinilor articulate se observ bine la Tradescantia. Punerea n eviden a factorilor fizici ai naturii i a legilor care stau la baza producerii i dirijrii acestor fenomene, se realizeaz cu ajutorul clinostatului.

Micri prin imbibiie Micrile de imbibiie au loc n esuturile moarte ale plantelor, n urma uscrii sau umezirii Materiale necesare: Conuri uscate de conifere, psti uscate de leguminoase, cutie Petri. Modul de lucru. Conurile uscate de conifere (Picea, Pinus, Larix) au solzii ndeprtai. Dac se mbib cu ap, acetia se curbeaz spre ax, acoperindu-se. Prin mbibare partea extern a solzului se lungete mai mult dect partea sa intern, fiindc are fibrele orientate transversal n timp ce partea intern are fibrele orientate longitudinal. Efectul este bine vizibil dac se scufund numai jumtate din con. Solzii din ap se strng, iar cei din aer rmn ndeprtai, ceea ce face ca partea mbibat s par mult mai mic. Mrirea i micorarea dimensiunii fibrelor vegetale prin mbibare i desimbibare este mai accentuat de-a curmeziul dect n lungul lor. Curburi de torsiune au loc la uscarea pstilor multor leguminoase, datorit faptului c fibrele sclerenchimatice suprapuse sunt aezate perpendicular ntre ele i oblic fa de axa longitudinal a pstii. Dac o pstaie se scufund n ap cald se observ c ea se ndreapt. Cnd se pune la uscat pstaia se rsucete din nou.

78

Evidenierea respiraiei celulare Materiale necesare: Cristalizor, infuzie de fn bogat n infuzori,lame pentru microscopie, lamele, sering, paie uscate de graminee, parafin sau cear, pens, lamp de spirt. Modul de lucru. Pe o lam curat se pregtete o camer de observaie, care se realizeaz astfel: cu ajutorul a trei fragmente de pai lungi de 1,2- 1,5 cm, impregnate cu cear topit sau parafin, se ncadreaz un spaiu pe trei laturi ale unui ptrat. Se obine o camer ptrat avnd o latur liber. n camer se introduce lichid de infuzie i se acoper cu o lamel, avnd grij s nu se introduc bule aer. Se observ la microscop i dac exist un numr mare de infuzori, se consider preparatul corespunztor. Dup 15 minute, se introduce sub lamel, cu ajutorul acului seringii, n centrul camerei, una sau dou bule de aer. Se las n repaus 10 minute, dup care se examineaz din nou preparatul la microscop. Se constat c infuzorii s-au ngrmdit n jurul bulelor de aer, din necesitatea de a respira, ntruct n bulele de aer se gsete O2 mai mult dect n lichidul cuprins n spaiul limitat de sub lamel. Fenomenul se numete oxitactism pozitiv i este determinat de posibilitatea unor schimburi respiratorii mai avantajoase dect n restul camerei. Evidenierea respiraiei tisulare Respiraia n intimitatea ei este un proces complex, dar n ultim analiz el se exprim prin consum de oxigen i eliberarea de CO2. Sub aceste aspecte respiraia poate fi pus n eviden la diferite esuturi animale. Materiale necesare: Broasc, trus de disecie, eprubet mijlocie, soluie salin de albastru de metilen n concentraie de 1%, cloroform, ser Ringer, ulei vegetal, baie cu ap, termometru. Modul de lucru. Se sacrific o broasc prin decapitare, apoi se ndeprteaz tegumentul de pe membrele posterioare, prin jupuire. Se cur instrumentele i se separ din masa muscular circa 2 g de esut. Se depun ntr-o cutie Petri i se taie foarte mrunt cu foarfeca. esutul mrunit este viu i capabil de activitate metabolic. Se mparte n dou pri egale i se introduce n cte o eprubet peste care se toarn ser Ringer. Se agit bine, apoi una din eprubete se las la temperatura camerei, iar cealalt se scufund ntr-o baie de ap avnd temperatura peste + 50o C. la aceast temperatur enzimele care intervin n procesele metabolice sunt inactivate. Dup 15 minute, se scoate eprubeta din baie i se rcete n ap la temperatura camerei. Apoi se adaug n fiecare eprubet cte 5 ml dintr-o soluie izotonic salin (NaCl 0,7%) cu albastru de metilen n concentraie de 1. Se agit i se las n repaus. Se prelinge ulei pe peretele eprubetelor n aa fel ca la suprafaa lichidului s fie un strat de 1 cm. Se examineaz din cnd n cnd i se constat c n eprubeta care a stat la temperatura camerei, se produce o uoar decolorare a albastrului de metilen, care ncepe la suprafaa de contact cu esutul i se extinde n 15-20 minute n toat masa lichidului. n eprubeta inut la temperatura ridicat albastrul de metilen nu se decoloreaz. Albastrul de metilen este o substan care prezint proprietatea de a putea fi uor oxidat si redus. n prezena oxigenului se gsete forma oxidat, ntruct oxigenul molecular desprinde i capteaz doi atomi de hidrogen de pe fiecare molecul de albastru de metilen. n aceast experien esutul viu consumnd oxigenul din soluie, permite reducerea albastrului de metilen, adic redobndirea atomilor de hidrogen pierdui i transformarea sa ntr-o form incolor (leucoderivat). n acest mod se dovedete c esutul viu consum oxigen, iar cel mort nu.

79

Disecii la vertebrate Tema lucrrii: Disecia la petii osoi (Perca fluviatilis -bibanul) Este o specie de ap dulce cu corpul alungit, uor comprimat lateral. Gura cu poziie terminal, poart dini puternici i numeroi. Ochii situai pe laturile capului sunt mari, turtii i fr pleoape i glande anexe. Pe faa dorsal a capului, spre vrful botului, se gsesc narinele. Trunchiul este acoperit de solzi ctenoizi. Pe laturile corpului se gsete linia lateral, organ principal de orientare al petilor. Coada este alctuit dintr-un peduncul caudal i nottoarea propriu-zis de tip homocerc, cu cei doi lobi simetrici susinui de lame dermice. napoia operculelor se inser cele dou nottoare pectorale, iar ventral, cu poziie toracic, se gsesc situate nottoarele ventrale. napoia acestora, spre partea posterioar a corpului, se inser nottoarea anal. Median i dorsal se gsesc dou nottoare dorsale apropiate, prima cu raze epoase, a doua cu raze moi. Anterior nottoarei anale, ntr-o invaginare comun, se gsesc 3 orificii: anal, genital i excretor. Material necesar: Pete proaspt, truse de disecie, tav de disecie, ace pentru fixat. Tehnica de lucru. Se ia petele cu mna stng, iar cu foarfeca se face o incizie pe linia medioventral, de la orificiul anal pn la cap, tind i centura scapular. Nu se introduce foarfeca prea profund, pentru a nu afecta organele interne. Se aeaz petele pe latura dreapt ntr-o tav de disecie, cu fundul acoperit de un strat de cear de albine n amestec cu parafin i smoal. Cu ajutorul acelor cu gmlie se fixeaz petele de stratul de pe fundul vasului. nainte de a deschide cavitatea corpului, se secioneaz tegumentul de pe flancul expus i se nltur pentru a scoate n eviden musculatura. Se observ, c pe fiecare latur a corpului, se ntinde un muchi lateral, de la cap pn la coad. Muchii laterali sunt alctuii din benzi transversale numite miomere, al cror numr este egal cu cel al vertebrelor, separate de perei conjunctivi numii miosepte. Pentru a pune n eviden branhiile se ndeprteaz operculele. Pentru deschiderea cavitii abdominale se secioneaz peretele lateral al corpului, dup o linie curb, ce pornete de la orificiul anal n sus, apoi paralel cu coloana vertebral pn la opercul. Peretele secionat se nltur pentru a pune n eviden organele interne.

Disecia la biban: 1. limb; 2. narine; 3. faringe i branhii; 4. vertebre; 5. coaste; 6. stomac; 7. aorta ventral; 8. inima; 9. ficat; 10. vezica biliar; 11. celom, 12. cecumi 1 pilorici, 13. splin; , 14. intestin, 15. gonad; 16. vezica urinar; 17. rinichi, 18. vezica urinar; 19. anus; 20. desch. uro-genit.;21. not. dorsale; 22. not. codal; 23. not. anal; 24. not. ventral.

80

Tema lucrrii: Disecia la broasca de lac ( Rana ridibunda) Broasca de lac are corpul robust, turtit dorso-ventral, alctuit din cap i trunchi, lipsit de coad. Capul voluminos se prinde direct de trunchi, deoarece nu se difereniaz un gt. Gura are deschiderea larg, iar pe maxilarul superior se gsesc dini numeroi i mruni. Pe laturile capului se gsesc ochii proemineni, protejai de dou pleoape i de o membran nictitant. Glandele lacrimale i Harder sunt prezente. Pe faa superioar a capului, ctre vrful botului, se gsesc nrile, deschiderile sacilor olfactivi. napoia ochilor se gsesc membranele timpanice, cu contur circular. Membrele anterioare sunt scurte, slab dezvoltate, prevzute cu patru degete. Membrele anterioare servesc la susinerea corpului pe sol i ca frn dup un salt. Membrele posterioare mult mai dezvoltate, sunt adaptate pentru not i srit. Ele sunt prevzute cu 5 degete lungi prinse ntr-o palmatur interdigital. Tegumentul broatei se mic uor fa de corp datorit prezenei unui numr mare de saci limfatici. Material necesar. Broate vii, truse de disecie, tav de disecie, ace pentru fixat. Tehnica de lucru. Broasca se sacrific prin spinalizare sau prin anestezie cu eter sau cloroform. Dup sacrificare se aeaz ntr-o tav de disecie cu abdomenul n sus. Se fixeaz cu ace maxilarul superior i membrele n extensie. nainte de a deschide cavitatea corpului se desprinde pielea pentru a pune n eviden musculatura. n acest scop se face o incizie n tegument pe linia median a feei ventrale a corpului, ncepnd de la orificiul cloacal pn la mandibul. Apoi se mai fac alte dou tieturi transversale, perpendiculare pe prima, ce se vor ntinde i de-a lungul picioarelor. Cu pensa se prinde tegumentul i se desprinde uor de corp. Operaia nu este dificil deoarece la amfibieni tegumentul nu ader pe toat suprafaa la muchi, ci doar n anumite puncte. Ea rmne separat de ptura de muchi prin nite spaii, sacii limfatici. Pe faa intern pielea este foarte bine vascularizat, deoarece ndeplinete i funcia respiratorie. Prin ndeprtarea pielii apare musculatura difereniat n muchi specializai pentru realizarea anumitor funcii. Ventral se observ muchiul drept abdominal, deo parte i de alta a liniei albe. Pe mijlocul acestui muchi se ntinde vena abdominal, care nu trebuie secionat pentru a evita hemoragia. Pe laturile abdomenului se ntind muchii oblici externi, care prin contracie micoreaz cavitatea abdominal. Anterior dreptului abdominal se gsete muchiul pectoral, al crui tendon se inser pe humerus, fiind un adductor al braului. Pe faa dorsal se disting: muchiul dorsal care acoper omoplatul, muchiul latul dorsal, n form de evantai, care rotete braul, muchiul lungul dorsal, care se ntinde de-a lungul coloanei vertebrale, precum i ali muchi mai mici i mai puin evideni. Este de asemenea bine dezvoltat musculatura membrelor posterioare. Pentru deschiderea cavitii corpului se taie cu un foarfece peretele muscular ventral, stomat pe linia median, de la orificiul cloacal pn la mandibul. Se taie cu grij centura scapular pentru a nu atinge inima. Pereii laterali ai cavitii abdominale se rsfrng de-o parte i de alta a corpului i se fixeaz cu ace de substratul tvii de disecie. Preparatul se spal cu ap i tot sub ap se observ organizaia intern.

81

Tema lucrrii: Disecia la oprla cenuie (Lacerta agilis) Corpul oprlei este difereniat n cap, gt, trunchi i coad i este acoperit de solzi epidermici. Forma solzilor variaz chiar la acelai animal n diferite regiuni ale corpului. Suprafaa dorsal a capului este acoperit de plci cornoase al cror numr i poziie constituie un criteriu taxonomic. Ctre vrful botului, tot pe faa dorsal a capului, se gsesc nrile. Lateral sunt plasai ochii protejai de dou pleoape i o membran nictitant. La partea posterioar a capului se afl deschiderile auditive cu membranele timpanice situate mai n profunzimea acestora. Trunchiul alungit este acoperit pe spate de solzi mruni, iar pe partea ventral de solzi mai mari dispui n iruri longitudinale. n dreptul gtului solzii formeaz un gulera festonat. La limita dintre trunchi i coad se gsete orificiul cloacal, o fant transversal. Coada este lung, cilindric i acoperit cu solzi dispui n verticile. Membrele sunt bine dezvoltate, terminate cu 5 degete i prevzute cu gheare. Pe partea intern a coapselor se gsesc porii femurali. Material necesar. oprle vii, truse de disecie, tav de disecie, ace pentru fixat. Tehnica de lucru. Se sacrific animalul prin narcotizare cu cloroform sau eter etilic. Dup sacrificare se aeaz animalul cu abdomenul n sus. Se fixeaz membrele cu ace i se secioneaz tegumentul medio-ventral, de la cloac pn la mandibul. La nivelul membrelor se fac seciuni transversale pe prima. Tegumentul se rsfrnge lateral i se fixeaz cu bolduri, scondu-se n eviden musculatura ventral. Se taie apoi peretele muscular al corpului, pe aceeai linie de disecie. Se secioneaz cu atenie centura pelvian i scapular. Se rsfrng pe laturi lambourile musculare punnduse n eviden organizaia intern a oprlei.

Disecia la femel de oprl cenuie (Lacerta agilis) 1. trahee; 2. timus; 3. artere carotide; 4. canal carotidian; 5. crje aortice(dreapt i stng); 6. atrii (drept i stng); 7. ventricul; 8. plnia oviductului; 9. oviduct; 10. plmn; 11. ficat; 12. vena suprahepatic; 13. ou; 14. stomac; 15. pancreas; 16. intestinul subire; 17. ovar, 18. intestinul gros; 19. deschiderea rectului; 20. vezica urinar; 21. orificiul ureterelor; 22. orificiul oviductelor; 23. deschiderea cloacal.

82

Disecia la masculul de oprl cenuie (Lacerta agilis) 1. os hioid; 2. trahee; 3. tiroid; 4. timus; 5. plmn; 6. ven jugular; 7. arter carotid; 8. arc aortic; 9. atriu; 10. ventricul; 11. vena hepatic, 12. aorta; 13. ficat; 14. vezica biliar, 15. artera mezenteric; 16. pancreas, 17. intestin; 18. splin, 19. testicul stng, 20. testicul drept; 21. epididim; 22. suprarenale; 23. canalul lui Muller, 24. rinichi; 25. rect; 26. vezica urinar; 27. corp adipos, 28. cloac, 29. orificiul urinar i genital mascul, 30. penis; 31. muchi retractori ai penisului; 32. pori femurali. Tema lucrrii: Disecia la porumbel ( Columba livia) Porumbelul are capul oval, ciocul mic i drept. Partea bazal a ciocului este acoperit de o cerom, o membran moale, pigmentat i bogat n corpusculi tactili. La baza ciocului, la nivelul ceromei, se gsesc nrile nguste. Ochii sunt mari, protejai de dou pleoape mobile i o membran nictitant transparent. napoia ochiului se gsete orificiul conductului auditiv extern, puin vizibil, fiind acoperit cu pene modificate. Gtul este relativ lung i mobil, iar corpul scurt, ovoid, terminat cu o coad. La baza cozii, pe faa inferioar, se afl orificiul cloacal, o fant transversal limitat de o proeminen tegumentar. Tot corpul, cu excepia ciocului i a membrelor posterioare, este acoperit de pene, care dup structura, locul de inserie i locul pe care l au aparin urmtoarelor categorii: pene de contur (remige, rectrice, tectrice), fulgi, puf, pene filiforme, pene modificate (ornamentale, cili, vibrize). Penele se inser pe anumite zone ale corpului numite pterii, mrginit de zone golae- apterii. Aripile sunt mari i ascuite asigurnd un zbor rapid. Picioarele sunt scurte i terminate cu 4 degete prevzute cu gheare, dintre care primul orientat posterior, iar celelalte trei orientate anterior. Faa plantar a degetelor este acoperit cu scuturi cornoase. Material necesar: cloroform, trus de disecie, tav de disecie. Tehnica de lucru. Se sacrific porumbelul prin cloroformizare i apoi se fixeaz pe o tav de disecie cu abdomenul n sus. Aripile se ntind pe laturi, iar picioarele se extind napoi i puin lateral. Se smulg penele de pe faa ventral a trunchiului i gtului (exceptnd coada i aripile). Se taie cu o foarfece tegumentul pe linia medio-ventral, de la orificiul cloacal pn la baza ciocului. Se mai fac nc dou tieturi transversale pe prima; una n dreptul aripilor, alta n dreptul membrelor posterioare. Se desprinde cu grij pielea, mai ales pe partea ventral a gtului pentru a nu se rupe gua, care este subire i aderent. Se ndeprteaz lateral lambourile de piele i se fixeaz cu ace. Se observ musculatura ventral care poart amprenta unei adaptri profunde la zbor. Cei mai dezvoltai muchi sunt cei pectorali, care au rol n coborrea i n ridicarea aripilor. Marele pectoral este cel mai activ dintre toi muchii, el se inser cu un capt pe stern, iar cu cel opus pe creasta humeral. La aciunea marelui pectoral se adaug cea a micului pectoral, care se inser pe coracoid i humerus. Antagonist celor doi muchi care coboar aripile este muchiul supracoracoid, mai puin voluminos, care ridic aripile. Se secioneaz musculatura pectoral, paralel cu carena, pn ce apare sternul. Cu o pens se prinde sternul i se ridic uor, iar cu un foarfece se taie coastele. Se desprind din articulaie coracoidele i toracalele (claviculele) i se 83

ndeprteaz toate aceste pri scheletice. Se face apoi o incizie n musculatura abdomenului pn la orificiul cloacal. Astfel se pune n eviden dispoziia in situ a tuturor organelor interne. Se spal bine de snge cavitatea visceral pn ce apa rmne clar iar organele se disting bine.

Disecia la porumbel. 1. esofag; 2. gu; 3. trahee; 4. sirinx; 5. timus; 6. vena jugular; 7. tiroida; 8. paratiroide; 9. atriu drept; 10. atriu stng; 11. ventricul drept; 12. ventricul stng; 13. trunchi brahiocefalic; 14. arter subclavicular; 15. artera carotid; 16. vena subclavicular; 17. vena cav inferioar; 18. ficat; 19. stomac triturator(pipot); 20. ans duodenal; 21. pancreas; 22. intestin; 23. deschiderea cloacal.

Tema lucrrii: Disecia la iepurele de cas (Oryctolagus cuniculus) Iepurele de cas prezint capul mare n raport cu trunchiul, cu o regiune anterioar (facial) i o regiune posterioar (cranial) distincte. Orificiul bucal este mrginit de dou buze. Cea superioar este despicat, fiecare jumtate avnd pe marginea inferioar cte un lob acoperit de peri. Buza inferioar prezint i ea lobi, dar de dimensiuni mai mici. La vrful botului exist o zon lipsit de peri numit rhinarium, iar la partea superioar a acesteia se disting nrile ca dou fante. Pe bot poart vibrize bine dezvoltate (musti). ochii sunt mari, protejai de dou pleoape mobile, care poart pe margini peri lungi (gene). Membrana nictitant este rudimentar, ea se menine sub forma unei cute mici n unghiul intern al ochiului. Lateral i posterior se gsesc pavilioanele auditive bine dezvoltate, cu numeroase vase sanguine, care se observ prin transparena tegumentului. Gtul, dei nu este lung, prezint o mare mobilitate. Trunchiul alungit se termin cu o coad scurt. Membrele sunt inegale, cele posterioare fiind mai lungi, n legtur cu deplasarea n salturi. La membrele anterioare prezint 5 degete, iar la cele posterioare 4 degete, degetul 1 fiind redus. Degetele sunt prevzute cu gheare. Tot corpul (excepie rhinarium) este acoperit de blan format din peri scuri i dei i puf moale la baz. Glandele sudoripare sunt puin dezvoltate i prezente numai n zona inghinal. Glandele mamare, 3-5 perechi, au poziie abdominal. Material necesar. Iepure viu, truse de disecie, tav de disecie, cloroform, ace pentru fixat. Tehnica de lucru. Animalul sacrificat prin cloroformizare, ntr-un vas mai mare de sticl nchis etan cu capacul, se aeaz cu abdomenul n sus ntr-o tav de disecie sau pe o planet de lemn. Membrele se pot fixa de suport cu mici cuie. Se ud cu ap blana pe linia median a prii ventrale dnd 84

prul de o parte i de alta. Cu pensa se apuc pielea n partea posterioar a abdomenului i cu o foarfece se face o incizie pn la unghiul mandibulei. La nivelul membrelor se fac seciuni transversale pe prima. Se jupoaie pielea de pe faa ventral i de pe laturile corpului i se fixeaz de suport prin ace, scond n eviden musculatura. Pe linia median a prii ventrale, apare o linie alb, aponevroza fibroas. Pe aceast linie se secioneaz peretele muscular al abdomenului, de la orificiul urinar pn la xifistren. De la acest punct se face seciunea pe limita inferioar a toracelui. Se mai face o seciune la nivelul membrelor posterioare. Lambourile musculare se ntind lateral i se fixeaz cu ace. n acest fel se pune n eviden dispoziia organelor abdominale. Pentru evidenierea organelor cavitii toracice se fac dou seciuni oblice prin coaste. Se taie i claviculele. Se prinde sternul cu o pens i se ridic o dat cu coastele secionate (la limita dintre partea cartilaginoas i cea osoas). Se nltur aceste pri osoase lsnd descoperit cavitatea toracic. Aceasta este separat de cea abdominal prin diafragm, un muchi circular i subire, dar cu rol deosebit n respiraie. Se secioneaz apoi musculatura gtului.

Disecia la iepurele de cas (Oryctolagus cuniculus): 1. arterele carotide comune; 2. anastomoza jugular; 3. vena jugular extern; 4. arc aortic; 5. artera i vena subclavicular; 6. vena cav anterioar; 7. atriul drept; 8. ventriculul drept; 9. artera pulmonar; 10. atriul stng; 11. ventriculul stng; 12. plmn; 13. vena cav posterioar; 14. ficat; 15. vezica biliar; 16. ductul biliar, 17. esofag; 18. stomac; 19. splin; 20. pilor; 21. pancreas; 22. ductul pancreatic; 23. duoden, 24. artera i vena renal; 25. rinichi; 26. ureter; 27. ileum; 28. colon; 29. cecum, 30. apendice vermiform; 31. vezica urinar, 32. coarda spermatic(artera, vena i nervul); 33. rectum; 34. capul epididimului; 35. testicul; 36. canal deferent.

85

Organizaia intern la iepure

86

ANATOMIA I FIZIOLOGIA OMULUI-CLASA A XI-A

Morfologia, structura i compoziia chimic a oaselor 1. Structura macroscopic a oaselor Material necesar: oase de mamifer luate de la abator, din menaj sau de la animale sacrificate n laborator, instrumente de disecie, ferstru mic de mn (eventual de traforaj), tav de disecie, surs de cldur, mojar sau piuli, sod caustic. Mod de lucru: Se cur oasele cu ajutorul instrumentelor de disecie pn cnd se ajunge la periost. Se examineaz acesta, se analizeaz epifizele cu cartilajele articulare, ligamentele, se analizeaz aspectele morfologice ale diferitelor tipuri de oase. Se secioneaz longitudinal i transversal prile cele mai importante ale fiecrui tip de os lung, lat, scurt. Se examineaz corpul osului lung cu mduva lui (alb i roie), materia osoas compact din diafiz, spongioas din epifize i fibroas din tbliile de la suprafaa unui os lat sau scurt. Se discut despre orientarea lamelelor osoase din epifize i despre modul n care aceast orientare este determinat de forele mecanice ce acioneaz asupra osului, despre structura oaselor n raport cu rolul pe care l au de ndeplinit. Dup aceasta se ndeprteaz mduva, se spal bine corpul osului cu ap i se terge cu o crp curat, pentru a vedea lumenul canalului medular din diafiz. Pe un os lung secionat longitudinal i fiert timp de or n ap cu NaOH (pentru ca s se distrug esuturile moi i mduva roie din epifize) se observ cu lupa foarte clar textura spongioas a epifizelor. ncercnd rezistena la presiune, folosind o lam metalic, se constat c osul compact din diafiz este mult mai dur dect osul spongios epifizar Concluzie. Oasele sunt piese dure, solide, a cror constituie corespunde rolului de susinere, aprare, locomoie. 2.Compoziia chimic a osului. Prin analize chimice au fost determinate calitativ i cantitativ diferite substane minerale i organice care intr, n compoziia osului, att n starea normal ct i n cazul unor tulburri patologice ce afecteaz acest sistem. Pentru punerea n eviden a componenilor minerali i organici se pot face mai multe experiene. Material necesar. Fragmente de oase degresate de mamifer sau de pasre, capsul de calcinat, mojar cu pistil sau piuli, sod caustic, benzin, soluie de acid clorhidric 5- 15%, eprubet cu dop perforat, prin care trece un tub de sticl lung de 10 cm cu diametrul 0,5 cm, un pahar, ap de var, fin de os calcinat, lame de sticl, microscop, acid azotic 5%, molibdat de amoniu 1%, surs de cldur. Mod de lucru. a. Identificarea substanelor organice din os Se ine la flacr o bucat de os i se constat c o parte din materia sa constitutiv arde, degajnd un fum i un miros caracteristic. Totodat se desprind i cad picturi de grsime. Materia care arde reprezint substana organic a osului- oseina. Prelungind aceast ardere ntr-o flacr puternic sau punnd osul pe jratic ncins se ajunge s se distrug ntreaga materie organic. n cursul acestui proces se trece printr-o faz de carbonizare, cnd, prin coloraia negricioas caracteristic, se poate recunoate modul cum este distribuit substana organic. Dac se cntrete osul nainte de calcinare i dup ce toat substana organic a fost ars se constat c osul a pierdut 1/3 din greutatea lui, ceea ce nseamn c 2/3 din greutatea osului o constituie substanele minerale i 1/3 substanele organice. Osul calcinat i pstreaz forma, dar devine extrem de fragil. Poate fi spart uor dac este lovit cu ciocanul i prin mojarare poate fi transformat n pulbere. Pentru o mai bun cercetare a alctuirii substanei organice fundamentale-oseina- se procedeaz n felul urmtor: se ia un os subire de pasre, de miel sau de iepure, se cur bine i se fierbe timp de 1-2 ore n ap n care se adaug sod caustic. Prin acest procedeu se ndeprteaz substanele grase. 87

Degresarea se poate obine i prin extracie cu benzin, n care osul se ine mai multe ore. Dup degresare se spal bine piesa i se introduce ntr-un vas de sticl adecvat n care se gsete o soluie de acid clorhidric n concentraie de 10-15%. Se las n contact cu acesta timp de 12 ore, dup care se rennoiete soluia de acid clorhidric. Dup alte 12 ore se repet operaia. Astfel, n timp de 36-48 de ore de la nceperea experienei se obine dizolvarea n acid a tuturor substanelor minerale din os, rmnnd numai substana organic. Osul i conserv forma, dar este foarte flexibil; dac este un os lung se poate chiar nnoda. Oasele demineralizate pot fi pstrate ca oricare pies anatomic, n formol 5%. Ele pot fi cu uurin tiate i disociate, iar dac se introduc ntr-o flacr ard complet. b. Evidenierea substanelor minerale din os. Evidenierea carbonului. Se pregtete o eprubet cu dop perforat prin care trece un tub de sticl recurbat ce se prelungete la captul care rmne n afar cu un tub de cauciuc sau de material plastic. n aceast eprubet se introduc fragmente uscate i mojarate dintr-un os degresat. ntr-o alt eprubet se introduce Ca(OH)2. Peste pulberea de os se toarn aproximativ 5 ml HCl 15%, se pune repede dopul i captul liber al tubului de cauciuc se introduce n apa de var. Sub aciunea HCl, n eprubet se dezvolt bule de CO2, care barbotnd n apa de var o tulbur, deoarece se formeaz carbonat de calciu. Evidenierea calciului. Un vrf de cuit de pulbere de os se pune ntr-o eprubet cu puin HCl 15% pentru dizolvarea srurilor minerale. Se filtreaz. La filtrat se adaug o cantitate potrivit de H2SO4 15%. Se amestec i se las cteva minute n repaus. Dup aceasta se ia cu o pipet efilat de sticl puin lichid din fundul eprubetei. Se aeaz pe o lam de sticl, se acoper cu lamela i se examineaz la microscop. Se observ cristale de sulfat de calciu (aciculare, prismatice, macle n form de fier de lance). Evaporndu-se soluia la aer se mai formeaz numeroase alte cristale caracteristice .S-a demonstrat astfel prezena calciului. n oase, acesta se gsete sub form de carbonat de calciu, fosfat tricalcic, fluorur de calciu etc. Evidenierea fosfatului se face astfel: se demineralizeaz un os cu acid azotic 5%. Soluia obinut se filtreaz i filtratul se trateaz cu o soluie de molibdat de amoniu. Se obine colorarea soluiei n galben i, prin nclzire uoar, i face apariia un precipitat de aceeai culoare. Este fosfatul de amoniu care demonstreaz existena unui fosfatfosfatul tricalcic-hidratat din compoziia mineral a osului. Adugm c printre substanele minerale din os se mai gsesc i sruri de magneziu. Datorit tuturor acestor sruri minerale, osul are duritatea sa specific, iar rezistena la traciune este determinat de fibrele care intr n constituia lamelor osoase, orientate n raport cu direcia aciunii forelor mecanice, a marilor solicitri. Concluzii. Osul este alctuit din substane organice- oseina (substan proteic) i grsimi- i din substane anorganice, reprezentate prin carbonat de calciu, fosfat tricalcic hidratat, fluorur de calciu i unele sruri de potasiu. Componentele chimice se pot separa prin calcinare i prin demineralizare cu acizi anorganici slabi. Prin diferite tehnici de laborator pot fi evideniai ioni de Ca++, Mg++, carbonat, fosfat. 3.Structura microscopic a osului Material necesar. Oase late i foarte subiri, de exemplu caren sternal de la o pasre, lame, lamele, alcool, polizor cu piatr foarte fin, lame de ras sau bisturiu foarte bine ascuit, foarfece. Mod de lucru: exist posibilitatea de a se obine uor preparate pentru observarea la microscop a structurii osului. n acest scop se pot utiliza cu succes buci mici cu suprafee de 1 cm2 dintr-o caren de pui de gin. Se taie cu foarfecele poriunea translucid, care este i cea mai subire din caren i se cur cu bisturiul sau cu lama esutul conjunctiv adiacent i periostul. Apoi cu bisturiul sau cu lama se rade pn cnd osul devine att de transparent nct se poate citi prin el un text aezat dedesubt. Pentru a realiza o subiere mai grabnic se umezete piesa cu o pictur de ap. La sfrit se spal preparatul cu ap i alcool, apoi se aeaz pe lam n cteva picturi de ap, se acoper cu lamela i se examineaz la microscop. O metod pentru obinerea unei seciuni prin diafiza unui os lung este urmtoarea: se taie cu fierstrul o poriune mic din diafiz i, dup ce se cur bine de mduv, periost, se degreseaz prin inere n alcool, eter, benzen sau toluen. Fragmentul de diafiz se polizeaz cu rbdare pe o piatr fin pn se obine o foi osoas transparent; aceasta se aeaz pe lam n cteva picturi de ap i se acoper cu lamela. 88

Examinate la microscop, n ambele seciuni se pot vedea canalele Hawers i osteoplastele dispuse n rnduri concentrice n jurul canalelor, precum i unele canalicule comunicante dintre osteoplaste. Osteocitele nu se vd, ele au fost distruse prin autoliz, dar osteoplastele reproduc fidel forma osteocitelor. Pentru a se vedea osteocitele trebuie s se realizeze o seciune foarte fin ntr-o poriune de os care a fost, n prealabil, complet demineralizat. Seciunea se coloreaz. Observarea la microscop a osteoplastelor se poate face i ntr-un fragment subire de opercul de la un pete mic, care se pune ntre lam i lamel cu o pictur de ap. Fragmentele foarte subiri de os pot fi incluzionate n balsam de Canada ntre lam i lamel. Piesele se spal cu ap, apoi cu benzin, se las cteva zile s se usuce dup care se aeaz pe lam n balsam. Pentru a observa structura epifizelor se procedeaz astfel: se ia un os lung, se secioneaz epifiza i o parte din diafiz cu fierstrul. Se cur de esuturile moi i se calcineaz la o flacr puternic. Cu ochiul liber sau cu lupa se observ dispoziia substanei minerale rmase n epifiz. Acesta se prezint format din trabecule orientate n evantai i ntretiate n corpul epifizei. Orientarea determin formarea unei structuri adaptate pentru rezisten la traciune i presiune n direcia solicitrilor mecanice.
2 3 4 5 6

7 1

8 9 10
esut osos compact: 1. cavitate medular; 2. periost; 3.osteon; 4. arteriol; 5. venul; 6. nerv; 7. lamele osoase, 8. trabecule; 9. osteocit; 10. canal central

Studiul carbohidrailor ntr-o eprubet pipeteaz 10 picturi de soluie de nitrat de argint 1% i tot attea picturi de hidroxil de amoniu. Dup ce precipitatul format n eprubet s-a dizolvat adaug glucoz i nclzete soluia. Ce crezi c s-a format pe pereii eprubetei? ncearc s explici fenomenul!

89

Studiul enzimelor a). Pregtete lucrarea de laborator cu ajutorul tabelului de mai jos! Numeroteaz eprubetele de la 1 la 4. Materiale necesare: soluie de pepsin, burete din albu de ou, acid clorhidric 0,3% i 10%, soluie diluat de carbonat de sodiu, baie de ap, stativ de eprubete, eprubete. Pregtirea buretelui de albu de ou: se bate albuul de ou i se aeaz deasupra unui vas cu ap cald. Dup cteva minute albuul se ntrete. Albuul de ou ntrit este lsat s se usuce. Eprubeta Soluie de pepsin Burete din albu de ou HCl 0,3% HCl 10% Soluie diluat de carbonat de sodiu Aeaz cele 4 eprubete timp de 40 de minute ntr-o baie de ap la temperatura de 37C Gradul de dizolvare al albuului de ou 1 3 ml + 3 ml 2 3 ml + 3 ml 3 3 ml + 3 ml 4 3 ml + -

Completeaz propoziia de mai jos! .este o enzim prezent n sucul gastric. Care este pH-ul sucului gastric? b). Numeroteaz eprubetele de la 1 la 6 i cu ajutorul tabelului pregtete lucrarea de laborator! Materiale necesare: soluie de amidon, saliv, iod-iodur de potasiu, soluie Fehling I. i II., stativ, eprubete, baie de ap. Eprubeta 1 2 3 4 5 6 Soluie de amidon 3 ml 3 ml 3 ml 3 ml 3 ml Amilaz salivar 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml Baie de ap 37C 37C 37C 20C 10C Ghea Rezultatul probei Lugol Rezultatul probei Fehling Dup 10-15 minute: Proba Lugol: pipeteaz pe o sticl de ceas o pictur din fiecare eprubet. Adaug la fiecare prob soluie de iod-iodur de potasiu. Proba Fehling: ntr-o eprubet pipeteaz 10 picturi de soluie Fehling I. dup care adaug tot attea picturi de soluie Fehling II. Din soluia obinut pipeteaz cte o pictur n fiecare din cele 6 eprubete. Concluzii: Cu proba Lugol se pun n eviden. Cu proba Fehling se pun n eviden.. 1. 2. 3. 4. 5. 6. Pe baza observaiilor asupra eprubetelor 1,2 i 3 ncearc s descoperi care sunt condiiile necesare activitii amilazei salivare! Pe baza observaiilor asupra eprubetelor 4,5 i 6 ncearc s determini care este temperatura optim pentru activitatea enzimei salivare! c). Pe baza observaiilor anterioare realizeaz graficele! 90

Activitatea amilazei salivare Activitatea pepsinei din sucul gastric Evidenierea lecitinei din ou a).1/4 din glbenu pune ntr-un vas, peste care printr-o permanent amestecare, pe baie de ap, torni 15 ml de etanol fierbinte. De ce este etanolul util n extragerea lecitinei? Ce substane se gsesc n suspensie? Dup rcire, filtreaz soluia ntr-o eprubet. Aceast operaiune se repet, de attea ori, pn cnd se obine o soluie transparent. Emulsia conine Filtratul conine b) ntr-o eprubet pune 2 ml aceton, peste care pui cteva picturi de filtrat. Peste filtratul rmas punei ap distilat. Cum se comport lecitina n: - aceton - ap.. Scrie formula lecitinei! Scrie prile cu polaritate i fr polaritate ale moleculei. Ce fel de solvent este apa? Se dizolv n ea lecitina? De ce? S iei n considerare i mrimea moleculei. Lecitina se dizolv n solveni care dizolv lipidele? Face excepie lecitina? Ce rol are lecitina n glbenuul de ou? Maioneza se prepar prin adaos de ulei, ap, glbenu de ou i condimente. De ce trebuie uleiul adugat sub form de picturi? Analiza rezultatelor: datorit existenei prilor cu polaritate i fr polaritate, lecitina se dizolv n etanol (excepie acetona), dar i n ap. Sub aciunea etanolului fierbinte, proteinele precipit i lecitina ajunge n solvent. La fel precipit n aceton, iar n ap formeaz o soluie coloidal opalescent. Lecitina din glbenuul de ou fixeaz att lipidele fr polaritate ct i cele cu polaritate. Cnd preparm maioneza, lecitina emulsioneaz uleiul i creeaz o punte ntre suprafaa de contact ulei-ap.

Evidenierea vitaminei C ntr-o eprubet pune 5 ml suc de lmie. Adaug tot atta acid acetic glacial peste care 4-5 picturi de indicator de metil. Ce culoare va avea soluia? nclzete soluia la 40-50C, dup care adaug KBrO3 (bromat de potasiu) de 0,01 mol. Ce observi? Vitamina C (acidul ascorbic) are legtur dubl, care sub aciunea oxidanilor se oxideaz (O2 din aer, KBrO3). Aceast metod se folosete i pentru stabilirea cantitii de vitamina C. Ce boal apare n lipsa vitaminei C? Analiza rezultatelor: soluia roie cu vitamina C sub aciunea bromatului de potasiu devine treptat incolor. Lipsa vitaminei C produce scorbutul. Hidrosolubile sunt vitaminele B,C, iar liposolubile vitaminele A,D, E, K. Datorit alimentaiei variate omul primete necesarul de vitamine/zi, dar cele hidrosolubile trebuie asigurate zilnic pentru c nu se depoziteaz n organism

91

FIZIOLOGIE Animale de experien n cercetrile de fiziologie utilizarea animalelor este indispensabil. Se folosesc cini, iepuri, cobai, oareci, obolani, pisici, maimue, broate. Dintre acestea cel mai frecvent se recurge la broate. Prinderea animalului. Broasca este un animal uor de prins: -nu se ncearc prinderea de partea posterioar, - la apropierea minii de partea posterioar animalul rspunde prin salturi, iar urmrirea este dificil; - se recomand ca o mn s fie aezat n faa animalului, iar cealalt va prinde partea dorsal a broatei. oarecele se prinde de coad cu mna liber. obolanul este prins de pielea cefei cu o pens Kocker i cu mna stng de coad. Imobilizarea Broasca se imobilizeaz pe planeta confecionat din lemn moale sau o plac de lemn pe care se lipete un strat subire de plut, care permite nfigerea uoar a acelor de laborator. Fixarea se face prin introducerea acelor n membrele anterioare i posterioare n decubit dorsal sau ventral, conform necesitilor de lucru. De obicei nainte de imobilizare se spinalizeaz broasca (distrugerea mduvei spinrii) sau se decapiteaz. Cnd experiena necesit integritatea sistemului nervos animalele sunt narcotizate cu uretan sau cloroform i apoi sunt fixate pe planet. Cnd se folosete uretan 25%, acesta se injecteaz n sacii limfatici ai broatei n cantitate de 0,2-0,8 ml. Dac se folosete cloroform se creeaz o atmosfer de cloroform sub un clopot de sticl. Spinalizarea Se prinde broasca n palma stng i cu indexul se flecteaz capul n unghi de 45 de grade cu trunchiul. - ntre indexul i policele minii drepte se ine un ac care este lsat s alunece pe linia median a capului n direcie caudal; - ~ la 3mm n spatele liniei ce unete marginile posterioare ale timpanelor se simte un an transversal ce corespunde cu articulaia occipito-vertebral; - se neap cu acul pielea din aceast regiune pn se ajunge n canalul rahidian, apoi se orienteaz acul n direcie caudal i se ptrunde n canalul vertebral; - cnd se simte o rezisten nseamn c acul nu se afl n canal; - prin rotirea acului n canalul vertebral se distruge mduva, avnd loc extensia puternic a membrelor; - n acest moment rspunsul motor la ciupire lipsete. Decapitarea Este necesar pentru a menine integritatea mduvei: - broasca se ine cu partea dorsal n palm, iar degetul arttor prinde mandibula i o coboar; - se ptrunde cu foarfeca n cavitatea bucal i se secioneaz de-a lungul liniei retro-oculare. Analiza arcului reflex Materiale necesare: broasc, trus de disecie, crlig pentru suspendat broasca, CH3-COOH, soluie 5%, vat, excitator electric. Mod de lucru: - se decapiteaz broasca i se suspend de un stativ cu ajutorul unui crlig, apoi se ateapt 10-15 minute pentru a trece ocul operator, cauzele acestuia fiind traumatismul suferit i deconectarea mduvei de centrii nervoi superiori. 1. Se introduce degetul labei posterioare n soluie de CH3-COOH 5% i asistm la retracia labei (reflex de flexie), rezultnd c toate elementele arcului reflex sunt intacte; 92

2. Se evideniaz nervul sciatic pe sub care se trece un fir de a fr a-l lega, apoi se nfoar laba broatei cu vat mbibat n cloroform sau novocain. Dup ~ 15 minute se ndeprteaz vata i se introduce laba n CH3-COOH 5%. Reflexul nu mai are loc pentru c au fost anesteziai receptorii. Se spal apoi 15 minute laba anesteziat, rezultnd reluarea reflexului; 3. Sub nervul sciatic, ct mai aproape de genunchi se introduce un tampon mbibat n novocain, - se noteaz momentul dispariiei reflexului, stimulnd din minut n minut, - dispariia reflexului se datoreaz anestezierii fibrelor senzitive ale nervului sciatic (nerv mixt), - se stimuleaz tegumentul deasupra nivelului tamponului i se observ prezena reflexului - dup un timp nici aceast stimulare nu mai declaneaz rspunsul reflex pentru c au fost anesteziate i fibrele motorii ale nervului sciatic, - aceste efecte pot fi obinute mai simplu, prin secionarea nervului sciatic 4. Cu ajutorul acului de spinalizat se distruge mduva i se constat dispariia tuturor reflexelor. Concluzie: Condiia esenial pentru producerea actului reflex este integritatea arcului reflex. ntreruperea lui duce la dispariia reflexului. Oboseala sinaptic Noiunea de sinaps a fost introdus n fiziologie de Sherrington i se refer la locul de contact ntre dou celule nervoase. Ulterior noiunea de sinaps a fost extins i la jonciunile neuro-efectoare (placa motorie), sinapsa reprezentnd poriunea cea mai fatigabil a unui circuit nervos. Materiale necesare:broasc, trus de disecie, excitatoare, bobin de inducie, redresor, ntreruptor Morse, soluie Ringer, cloroform. Mod de lucru: I. 1. - se decapiteaz broasca i se evideniaz cei doi nervi sciatici; 2. - sub sciaticul stng se plaseaz un excitator electric, - se ndeprteaz la maxim cele dou bobine i apoi se crete intensitatea curentului electric prin apropierea bobinelor, - se excit sciaticul stng, - cnd intensitatea curentului este suficient de mare pentru a determina i contracia reflex a labei drepte, se stimuleaz n continuare pn cnd membrul posterior drept nu se mai contract; 3. se ateapt 30 de secunde pentru a fi convini c laba nu se mai contract, - se stimuleaz sciaticul stng n continuare, astfel nct laba respectiv se contract Interpretare: Dup ce se plaseaz i sub sciaticul drept un al doilea excitator, se observ c de data aceasta, membrul posterior drept, care fusese obosit, i reia activitatea. Explicaia const n instalarea fenomenului de oboseal la nivelul sinapselor medulare. II. 1. cu ajutorul acului de spinalizat se distrug centrii medulari, 2. - sub sciaticul stng se introduce un tampon de vat mbibat cu cloroform i se ateapt 5 minute pentru ca acesta s-i fac efectul (blocheaz conductibilitatea nervoas), - se stimuleaz ambii nervi sciatici prin impulsuri date cu ntreruptorul Morse i se constat c numai laba dreapt prezint contracii reflexe deoarece sciaticul stng este scos din funciune. 3. se continu stimularea pn ce membrul posterior drept nu mai rspunde deoarece s-a instalat fenomenul de oboseal, - se scoate tamponul din partea stng i pe msura restabilirii funcionalitii nervului se constat c laba stng i reia activitatea. 4. cu un excitator de mn se stimuleaz direct gastrocnemianul drept care fusese obosit, - n acest caz are loc contracia gastrocnemianului, ceea ce arat c la nivelul muchiului nu s-a instalat fenomenul de oboseal muscular, 93

- pe tot parcursul experienei nervii sciatici se umecteaz cu soluie Ringer. Interpretare: n cazul experimentului II se deduce instalarea fenomenului de oboseal la nivelul plcii motorii. Oboseala se datoreaz epuizrii rezervelor de mediator chimic din butonul sinaptic; n cazul plcii motorii mediatorul chimic este acetilcolina. Ordinea instalrii fenomenului de oboseal este urmtoarea: - la nivelul centrului nervos, - la nivelul plcii motorii, - la nivelul fibrei musculare. Fiziologia muchilor: preparate neuromusculare, contracia muscular, . Preparate neuromusculare. Pentru demonstrarea proprietilor muchilor se folosete preparatul neuromuscular. Preparatele neuromusculare sunt ansambluri de uniti funcionale reprezentate prin muchi i nervii lor motori. Preparatele neuromusculare pot fi detaate complet din organism sau pot fi lsate n continuare n organism, respectnd relaiile vasculare i relaia nervului cu centrii medulari. Astfel de preparate sunt denumite in situ. Pe asemenea preparate excitarea muchiului se face indirect, adic prin excitarea nervului corespunztor. Acest mod de excitare are avantajul c transmite excitaia la toate unitile musculare i se obin rezultate mai bune. Preparatele neuromusculare obinute de la animalele poichiloterme i pstreaz timp ndelungat viabilitatea fr s fim nevoii s asigurm pe durata experienei temperatura constant, egal cu cea corporal, aa cum ar fi cazul preparatelor neuromusculare obinute de la homeoterme. Material necesar: Broasc, instrumente de disecie ,planet sau cuv de disecie, ace de disecie, , ace cu gmlie, baghete de sticl cu vrful bont,, lam de sticl, ser fiziologic, vat, dispozitiv pentru excitaie electric (de la reea, de la acumulator sau de la o baterie electric de buzunar), fire de a. Modul de lucru. Se paralizeaz broasca prin distrugerea axului cerebrospinal i se fixeaz cu faa ventral pe planet, cu membrele n extensie, cu ajutorul unor ace cu gmlie. Se ndeprteaz tegumentul unui membru posterior, apoi se disociaz masa muscular a coapsei n plan axial, cu ajutorul unei baghete de sticl cu vrf bont. Se disociaz nervul sciatic situat ntre muchiul triceps i semimembranos. Nervul este flancat de artera i vena femural de care trebuie degajat. Dup ce a fost izolat, nervul se secioneaz ct mai aproape de regiunea coccigian. Disociem acum muchiul gastrocnemian inserat la captul su inferior prin tendonul lui Ahile. Cu ajutorul unei baghete de sticl cu vrf bont se introduce un fir de a pe sub tendon i se leag strns, apoi se secioneaz tendonul sub aceast legtur. inndu-se de capetele firelor de a ale legturii se ridic muchiul i se detaeaz prin secionarea piciorului deasupra i sub articulaia tibiofemural. n acest fel se pstreaz inseria proximal a muchiului gastrocnemian pe o poriune de os femural. Aceast articulaie fixat cu ace n msua miografului va constitui todeauna captul fix al preparatului neuromuscular, iar tendonul, prin firul de a conectat la prghie, constituie captul mobil. Se va evita lezarea nervului prin ntindere, ciupire, presare. S-a obinut astfel preparatul neuromuscular gastrocnemian sciatic. Se aeaz preparatul pe o lam curat de sticl i se acoper cu un tampon de vat mbibat cu ser fiziologic, pentru a evita deshidratarea nervului. n acest mod preparatul va rezista un timp oarecare. Contracia simpl sau secusa Este contracia unic a unui muchi determinat de excitarea lui cu un excitant care acioneaz o singur dat, indiferent dac se aplic direct sau indirect. Material necesar: O broasc, instrumente de disecie, kinograf, miograf, band de hrtie, lamp cu motorin, surs de curent continuu, ntreruptor. Mod de lucru. Mai nti se monteaz o instalaie electric necesar excitrii. Se izoleaz apoi un preparat gastrocnemian-sciatic. Prin dispozitivul de nregistrat se asigur nscrierea curbelor caracteristice tipurilor de contracie. Cnd se apas pe butonul ntreruptor, se stabilete circuitul electric, se produce o variaie brusc a intensitii excitantului ceea ce are ca efect declanarea contraciei. Muchiul se scurteaz repede, apoi se relaxeaz revenind la starea de repaus, adic recapt lungimea de la nceput. Penia nscrie pe suprafaa de nregistrare o urm- miograma. Cnd se ridic degetul de pe ntreruptor, se produce din nou o variaie brusc a intensitii excitantului, care determin o nou secus, de intensitate 94

mai mic. Atta timp ct prin muchi continu s treac curent electric de intensitate constant, nu apar fenomene vizibile. Rezult c muchiul rspunde prin contracii att la stabilirea curentului ct i la ntreruperea lui pentru c, n ambele cazuri, se produc variaii brute ale intensitii curentului. Se obin deci dou secuse, ambele putndu-se nregistra succesiv. Subliniem c pentru obinerea celei de-a doua secuse nu se ntrerupe circuitul nainte ca muchiul s se fi relaxat complet, dup prima excitare. Analiznd miograma obinut n condiiile de mai sus putem delimita: 1) perioada de contracie marcat prin traseul ascendent al curbei; 2) perioada de relaxare marcat prin traseul descendent Contracia susinut sau tetanosul fiziologic. Dac mai multe excitaii se succed la intervale mai scurte dect durata unei secuse se obine o contracie susinut prelungit sau tetanic. Att timp ct dureaz aciunea repetat a excitaiilor, cea de-a doua excitaie acionnd n timpul fazei de relaxare a muchiului, relaxarea nu se mai continu i se produce o nou contracie, pe miogram traseul este din nou ascendent. Dac urmeaz excitaii, distanate n acelai fel, se obin rezultate asemntoare celor precedente; ntregul traseu apare ca o linie sinuoas. S-a obinut astfel o fuziune incomplet de contracii, adic un tetanos fiziologic incomplet. Deci n tetanosul incomplet, dup fiecare contracie are loc un nceput de relaxare, care nu se definitiveaz datorit excitaiei succesive A. Kimograful i nregistrarea secusei i tetanosului: ce determin o nou stare de 1. cilindru inscriptor contracie. Dac excitaiile se 2. peni 3. gastrocnemian de broasc petrec cu o frecven mai 4. dispozitiv electric pentru nregistrarea mare, cea de-a doua i timpului 5. pil electric urmtoarele acioneaz 6. bobin de inducie asupra muchiului n timpul B. Graficul i analiza unei secuse musculare fazei de scurtare sau la finele a-b perioada latent acestei stri; se observ c b- c- perioada de contracie c- d- perioada de relaxare muchiul rmne contractat tot timpul ct se produc aceste excitaii. Traseul miogramei n continuare este o linie orizontal. S-a obinut astfel un tetanos fiziologic complet. n strile de tetanos complet, succesiunea mare a impulsurilor determin meninerea total i permanent a muchiului n stare de contracie. n organism datorit frecvenei mari a impulsurilor nervoase motoare (200-300 pe sec.) muchiul este meninut n stare de contracie tot timpul ct dureaz un travaliu. n concluzie, succesiunea rapid a impulsurilor determin meninerea total i permanent a muchiului n stare de contracie. Demonstrm tetanosul fiziologic incomplet i complet folosind curentul continuu de 3-5 voli, cu condiia s acionm ntreruptorul cu o frecven corespunztoare, provocnd minimum 20 excitaii pe secund. Pentru nregistrare ne servim de aceeai instalaie cu care am fcut nscrierea unei contracii simple. Singura deosebire este viteza cu mult mai mic de rotire a cilindrului. Pentru nregistrare se aduce penia n contact cu hrtia kimografului, care se deplaseaz i, dup ce penia a nscris pe hrtie o mic poriune de linie dreapt, apsm brusc pe butonul ntreruptorului de 3-4 ori la intervale rare i se constat c se obin tot attea secuse, nregistrate numai n intensitate. Se mrete frecvena excitaiilor i se nregistreaz un traseu care prezint platoul dinat al tetanosului incomplet. Se mrete acum i mai mult frecvena excitaiilor (20- 30 pe secund) i se obine o curb cu un platou neted al tetanosului complet.

95

Legile reflexelor Se ia o broasc spinal (broasca decapitat cu centrii medulari intaci). Dup 10 minute, pentru depirea ocului spinal, broasca decapitat se suspend pe un stativ cu o srm introdus prin planeul bucal. Stimulai pielea gambei, prin aplicarea unor buci de hrtie de filtru mbibate cu acid sulfuric de concentraii diferite: 0,1- 0,3, 0,5; 0,7; 1 i 2%. Dup fiecare testare, splai gamba cu ap i uscai-o prin tamponare cu hrtie de filtru. Se obin reacii de rspuns tot mai ample, proporionale cu concentraia acidului sulfuric folosit, potrivit legilor lui Pfluger: Legea localizrii. La excitarea cu concentraia slab de acid sulfuric (0,1- 0,3 %) se observ o uoar schi a labei piciorului. Legea unilateralitii. La concentraii de 0,5% , obinem flexia ntregului membru posterior. Legea simetriei. La o,7% se constat c broasca flecteaz puternic membrul posterior respectiv, i concomitent, flecteaz membrul posterior de partea opus. Legea iradierii. Utiliznd o hrtie de filtru mbibat cu A. Demonstrarea acid sulfuric 1% se obin legilor lui Pflger: a- broasc decerebrat contracii ale tuturor b- vas cu ap acidulat extremitilor. 1legea localizrii Legea generalizrii. La o 2- legea unilateralitii concentraie de 2% se produc 3- legea simetriei convulsii generalizate ale 4- legea iradierii 5- legea generalizrii musculaturii membrelor i 6- legea coordonrii trunchiului. B. Schema reaciei n locul acidului se poate folosi, conform legilor lui ca stimul, un curent de inducie a Pflger crui intensitate va fi crescut progresiv.

96

ANALIZATORI

1.Analizatorul cutanat Analizatorul cutanat este ansamblul morfofuncional prin care organismul obine: a) senzaii tactile, de pipit, presiune; senzaii termice; senzaii dureroase. Receptorii cutanai sunt localizai n tegument, unii liberi, alii ncapsulai. Cei specializai pentru excitaiile tactile i termice se gsesc n epiteliul de acoperire al tegumentului i mucoaselor. Receptorii tactili i termici au o densitate mai mare variabil dintr-un loc n altul, determinnd diferenieri n gradul de acuitate tactil i termic pe diferite suprafee tegumentare. Determinarea sensibilitii tactile. Esteziometria este o metod de msurare a sensibilitii tactile pe suprafaa tegumentului. Sensibilitatea tactil este cu att mai fin, cu ct n regiunea tegumentar cercetat sunt prezeni mai muli corpusculi tactili. Material necesar . Esteziometrul este un aparat alctuit dintr-o rigl metalic gradat, susinut de un mner plasat n mijlocul ei. Pe rigl se gsesc doi cursori, situai de o parte i de alta a mnerului i care pot fi deplasai de la mijlocul la extremitile riglei. Distana cu care se deplaseaz un cursor se citete pe rigl. La capetele inferioare ale cursorilor se pot aplica dou vrfuri ascuite, din os, sau dou butoane metalice, dup cum dorim s msurm sensibilitatea tactil sau la presiune. Pentru msurarea acesteia din urm, pe fiecare cursor se afl i o gradaie, care indic valoarea presiunii. n absena esteziometrului poate fi folosit un compas sau un ubler. Mod de lucru. Determinarea sensibilitii la contact. Un elev servete drept subiect. El trebuie s nchid ochii pentru a nu vedea deplasarea cursorilor i, atunci cnd se aplic cele dou vrfuri pe o regiune tegumentar, s declare cte contacte simte. Un cursor rmne la zero, cellalt se deplaseaz progresiv n lungul riglei. n felul acesta se mrete spaiul dintre cele dou vrfuri i se citete pe rigl distana la care se gsesc cnd subiectul declar c simte dou puncte de contact. Astfel se exploreaz mai multe regiuni tegumentare pentru a se vedea diferenele de sensibilitate. Cu ct mai mare este distana ntre cele dou vrfuri, aplicate pe o regiune tegumentar n momentul cnd subiectul percepe dou contacte, cu att sensibilitatea tactil este mai mic, fiind dependent de numrul de corpusculi tactili repartizai n acea regiune tegumentar. Dm cteva valori medii pentru mai multe regiuni: Vrful limbii= 0,5 mm, buza inferioar 1,5 mm, buza superioar 1 mm, brbie 7 mm, frunte 4 mm, obraji 4,5 mm, tmpl 7 mm, ceaf 20 mm, dosul minii 6 mm, palma 4 mm, antebra 15 mm, coaps 7 cm, vrful degetelor 1-2 mm, spate 5-6 cm. Determinarea sensibilitii la presiune. Se nlocuiesc vrfurile ascuite ale cursorilor cu butoni metalici. Se apas cu aceti butoni pe o regiune tegumentar pn cnd subiectul declar c simte presiunea exercitat. Se citete pe rigla Experiena lui Aristotel: vertical, gradat a cursorului valoarea presiunii 1- contactul cu bila avnd exprimate n mg. degetele alipite Experiena lui Aristotel. Regiunile tegumentare au n scoara cerebral zone de proiecie bine precizate, ale cror raporturi spaiale reproduc pe acelea ale regiunilor tegumentare luate n consideraie. Aceasta poate fi demonstrat prin clasica experien a lui Aristotel. Se procedeaz n felul urmtor: se aeaz o bil cu diametrul de 0,5 cm ntre vrfurile degetului arttor i celui mijlociu . Se capt senzaia unei 97
2- contactul unei singure bile cu degetele ncruciate 3- teritoriile tegumentare receptoare excitate n (2) sunt suficient de distanate pentru a determina senzaia dubl

singure bile deoarece proiecia cortical a regiunii interne a degetului arttor i cea a regiunii tegumentare externe a degetului mijlociu sunt foarte apropiate. Dac subiectul ncrucieaz cele dou degete i palpeaz bila, va avea senzaia a dou bile deoarece, de data aceasta, au fost excitate terminaiile tactile de pe suprafaa extern a degetului arttor i cele de pe suprafaa intern a degetului mijlociu, iar aceste dou regiuni tegumentare se proiecteaz pe scoar n dou puncte diferite, mai ndeprtate. n consecin de formeaz senzaii separate de atingere a bilei, n fiecare zon cortical. Observaie. Sensibilitatea de contact i de presiune are ca excitant un agent mecanic care prin apsare mai slab sau mai puternic determin o deformare a tegumentului i ca urmare excitarea receptorilor tactili Meissner i de presiune Vater-Pacini. Cnd presiunea se exercit cu aceeai intensitate pe o suprafa mare de tegument, ea nu se simte dect la marginea zonei de contact. Aa de pild, cnd ne aflm cu tot corpul n ap nu simim presiunea exercitat asupra tegumentului de masa de ap. Tot aa dac ntr-un vas cu mercur vrm mna n metalul lichid, nu simim presiunea la suprafaa de contact cu mercurul. Simim ns presiune i ntr-un caz i n altul la marginile zonei de contact. Avem impresia c numai n acel loc se exercit fora de apsare. De asemenea nu simim presiunea exercitat de sus n jos cnd stm n picioare cu tlpile aezate pe o suprafa neted, ns prezena pe aceast suprafa a unui grunte ct de mic este simit, datorit forei de apsare, deci de deformare a tegumentului i implicit a excitrii receptorilor cu o intensitate mai mare la locul unde se afl asperitatea respectiv. Receptorii tactili se adapteaz uor la presiune, de aceea contactele permanente nu sunt percepute. Aa face ca mbrcmintea, nclmintea, inelul din deget nu se fac simite. Acuitatea tactil crete la orbi nu printr-o mrire a densitii corpusculilor tactili n tegumentul de la vrful degetelor, ci printr-o perfecionare compensatorie, realizat prin exerciiu care duce la o capacitate de analiz crescut n segmentul cortical al analizatorului cutanat tactil. 2 .Analizatorul olfactiv Analizatorul olfactiv este ansamblul morfofuncional prin intermediul cruia se formeaz senzaia olfactiv. Excitanii adecvai ai receptorilor olfactivi sunt substane chimice ce se gsesc n stare volatil, n aerul inspirat. Receptorii olfactivi sunt situai n epiteliul senzorial al mucoasei nazale olfactive din cornetul superior. n respiraia curent aerul atinge doar marginea anteroinferioar a cornetului nazal superior i astfel, mucoasa olfactiv nu vine n contact cu aerul proaspt. Datorit difuziunii aerului expirat n interiorul spaiului cornetului superior se produce senzaia olfactiv. Prin adulmecare aerul inspirat este antrenat mai intens spre cornetul nazal superior i astfel excitarea chemoreceptorilor olfactivi se face mult mai repede cu laten mai mic. Pragul de excitare al receptorilor olfactivi este variabil cu starea fiziopatologic a subiectului i cu durata de aciune a substanei mirositoare. n legtur cu fiziologia analizatorului olfactiv propunem urmtoarele experiene: Se vor pregti sticlue cu substane odorante : benzen, toluen sau alt substan volatil, n concentraia cea mai mic care poate fi perceput i se va cere unui elev s identifice mirosul. Se va observa c el va face o inspiraie profund sau inspiraii scurte, repetate, de adulmecare. Dup cteva exerciii reuete s identifice dup miros substana odorant. Se va da unui elev s mnnce, de pild, un mr cu o anumit arom i i se va cere s spun dac simte mirosul deosebit. Se va observa c acesta, triturnd mrul n cursul masticaiei, expir aerul din cavitatea bucal, prin coane, spre cavitile nazale. Acest procedeu al degustrii este folosit n aprecierea aromelor substanelor alimentare. Se d unui elev s inspire timp ndelungat aer n care se gsete o cantitate crescut de substane odorante. Elevul declar dup un timp c nu mai simte mirosul respectiv. nlocuind substana odorant, elevul declar c simte mirosul noii substane. Explicaie. n primul caz s-a produs oboseala receptorilor olfactivi pentru acea substan, receptorii rmnnd totui sensibili pentru o nou substan.

98

Olfactometria. Gradul de olfacie poate fi apreciat prin msurarea minimului de substan odorant identificabil, echivalent cu pragul de percepere. Metoda de msurare a acuitii olfactive este olfactometria. n acest sens se folosete olfactometrul Zwaardemacker sau unul improvizat. Acest aparat const dintr-un tub de sticl lung de Olfactometrul 3 circa 40 cm cu un capt ndoit Zwaardemacker: pentru a putea fi introdus n 1- tub de sticl gradat 2 1 narin. Cellalt capt prezint 2- tub poros gradaii, la intervale de 0,5 cm. 3- paravan Poriunea gradat a tubului de sticl alunec n interiorul unui alt tub din material poros sau n interiorul unui tub de cauciuc. Dac acest al doilea tub este scos din tubul 1 (gradat) se poate citi pe acesta din urm distana cu care tubul 2 depete tubul 1. Mod de lucru. se impregneaz tubul poros cu o substan odorant dup care se introduce n interiorul lui tubul de sticl gradat, potrivindu-se cap la cap. Se aplic un paravan de hrtie n apropierea captului ndoit al tubului gradat pentru ca subiectul s nu vad cu ct alunec tubul poros n afar. Subiectul este invitat s inspire puternic i scurt de cteva ori. Cnd cele dou tuburi se gsesc cap la cap, aerul inspirat nu vine n contact cu substana odorant din tubul poros i n consecin subiectul nu are nici o senzaie olfactiv. Dup aceasta, experimentatorul face s alunece ncet tubul poros de pe tubul de sticl pn cnd subiectul declar c a simit mirosul substanei cu care a fost impregnat tubul poros. Cu ct suprafaa tubului poros care vine n contact cu aerul inspirat este mai mare, cu att numrul particulelor mirositoare antrenate de aer este mai mare i acuitatea olfactiv este mai mic i invers. Dup 10 minute se utilizeaz un alt tub poros impregnat cu o alt substan i se cerceteaz acuitatea olfactiv n raport cu acesta. Se constat c acuitatea olfactiv variaz n funcie de substana mirositoare cercetat. Sensibilitatea olfactiv variaz n funcie de umiditate, temperatur, presiune atmosferic (factori externi), precum i n funcie de starea fiziologic (factori interni). Astfel, n strile emotive acuitatea olfactiv crete. Starea de inflamaie a mucoasei nazale micoreaz sensibilitatea olfactiv. Adaptarea la un anumit miros duce la diminuarea acuitii olfactive pentru acesta. Concluzii. Analizatorul olfactiv este un analizator chimic, exteroceptorii olfactivi sunt excitai de substane odorante din mediu. Importana biologic a sensibilitii olfactive const n decelarea prezenei n aer a unor substane chimice dintre care unele ar putea fi nocive. mpreun cu simul gustului are rol n controlul calitii alimentelor. 3 .Analizatorul optic Analizatorul optic este ansamblul morfofuncional prin care se formeaz i se analizeaz senzaiile luminoase. Studiul anatomic al organului de sim se poate face pe ochi de bou luat din abator sau pe ochi neenucleai, atunci cnd dispunem de capul unui mamifer, pentru a studia organele anexe. Mod de lucru. In situ putem observa organele de protecie, pleoapele care delimiteaz fanta palpebral. n structura pleoapei se afl o lam scheletic- tarsul- format din esut fibroelastic, care poate fi palpat cu uurin. Apucnd cu pensa o pleoap i rsfrngnd-o se observ conjunctiva care cptuete faa intern a pleoapelor i faa extern a globului ocular pn la limita corneei. n unghiul intern, nazal, al ochiului vedem pliul semilunar, vestigiu al celei de-a treia pleoape existente la psri, reptile, batracieni. Secionnd pleoapa superioar n unghiul extern observm glanda lacrimal. Secionnd apoi conjunctiva de jur mprejur se ptrunde n cavitatea orbital. Pentru a scoate afar globul 99

ocular secionm inseriile muchilor de pe ecuatorul globului ocular i nervul optic. Examinnd spaiul orbital observm c este umplut cu grsime, c cei ase muchi ai globului ocular formeaz un con prin mijlocul cruia trece nervul optic i sunt inserai la cealalt extremitate, n fundul peretelui orbital. Disecia globului ocular. ncepe cu curirea lui de grsime, esut conjunctiv, muchi pn se ajunge la prima tunic- sclerotica. Aceasta este o membran de culoare alb- cenuie, fibroas, opac bombat i transparent anterior- corneea transparent, iar la polul posterior al globului ocular, strbtut de nervul optic. Cu un bisturiu ascuit sau cu o lam de ras se face o incizie n sclerotic, pe linia ecuatorial, evitnd ptrunderea n cavitatea globului ocular. Cnd se ajunge la coroid se nceteaz secionarea n profunzime. Cu o foarfece curb orientat cu vrful n sus, introdus n incizia nceput cu bisturiul, se continu selecionarea scleroticii pe linia ecuatorial Plecndu-se de la marginile seciunii se fac alte seciuni orientate spre emergena nervului optic. Sclerotica fiind uor aderent de coroid, lambourile scleroticii se detaeaz n evantai i se fixeaz cu ace pe planet. Se observ ochiul delimitat de coroid, membran de culoare brun pe faa dinspre sclerotic i neagr pe faa dinspre retin cci desprinzndu-se de retin de care e lipit, ia cu sine i ptura pigmentar neagr a retinei (care nu-i aparine dar care e intim aderent de coroid). Procedm apoi la ndeprtarea jumtii anterioare a scleroticii, pentru care facem o seciune cu foarfecele, pn la cornee i o ndeprtm mpreun cu aceasta. Globul ocular rmne astfel fr sclerotic i cornee, delimitat numai de coroid. Astfel s-a deschis camera anterioar din care se scurge umoarea apoas. Verificm rezistena la traciune a scleroticii, se examineaz irisul care are la mijloc un orificiu circular- pupila. Irisul detaat este pus pe o lam de sticl, cu partea intern n sus pentru a fi observat. ndeprtnd irisul descoperim faa anterioar cristalinului. Prin transparena cristalinului, cu rol de lentil, se poate examina fundul ochiului. Se vd retina cu pata oarb i cu pata galben, vasele de snge. Se desprinde acum cristalinul i i se examineaz proprietile optice: se citete prin el un text de ziar i se observ c literele apar foarte mrite. Lund cristalinul ntre degete pentru a aprecia gradul de consisten la o uoar presiune se desprinde uor o membran fin, denumit capsula cristalinului. Dup ndeprtarea cristalinului apare umoarea vitroas care formeaz un corp transparent, omogen, cu o consecin caracteristic. Dup golirea camerei posterioare de corpul vitros se poate observa direct retina. Concluzie. Corneea ,umoarea apoas, cristalinul, umoarea sticloas sunt medii transparente cu o consisten diferit, ceea ce confer variate grade de refracie i realizeaz n ansamblu un sistem dioptric adecvat formrii imaginii pe retin. n repaus acest sistem dioptric are aproximativ 60 dioptrii. Acomodarea ochiului Capacitatea ochiului de a vedea obiectele clar n spaiu se datorete proceselor de adaptare care au loc la nivelul irisului, cristalinului i al retinei. Aceast adaptare poart numele de acomodare i poate fi demonstrat astfel: Reflexul pupilar pentru dozarea intensitii luminii Este un reflex fotomotor de acomodare. Datorit variaiei diametrului pupilei, ochiul are capacitatea de a regla cantitatea de lumin ce ptrunde n interiorul lui. Mrirea sau micorarea spaiului pupilar este determinat de starea de contracie sau relaxare a fibrelor musculare din iris, dispuse radiar i circular. Cnd fibrele musculare radiare se contract, cele circulare se relaxeaz, spaiul pupilar crete, fenomen denumit midriaz, iar cantitatea de lumin ce ptrunde n ochi este mai mare. Cnd fibrele musculare circulare se contract, cele radiare se relaxeaz, spaiul pupilar se micoreaz, fenomen denumit mioz. Mioza i midriaza sunt reflexe fotomotorii coordonate de sistemul nervos vegetativ. Este aezat un elev n faa unei surse de lumin, i se acoper ochii cu palma i se ine astfel 2-3 minute. I se atrage atenia elevului c la descoperire s priveasc cu ochii larg deschii spre sursa de lumin. Se ndeprteaz palma i i se privesc pupilele . Se constat c la nceput acestea sunt mult mrite, dar c ele se micoreaz treptat i destul de repede, devenind punctiforme, dac sursa de lumin este puternic. La ntuneric s-a produs midriaz, la lumin mioz. Procednd ca n cazul precedent se ridic palma de pe un singur ochi, care astfel este expus direct luminii. De pe cellalt ochi palma se ridic puin, fr a da posibilitatea luminii s acioneze direct asupra irisului, dar permind observarea ochiului. Se observ c i acest al doilea ochi prezint 100

reflexul pupilar de mioz dei el nu a fost expus direct aciunii luminii. Fenomenul se explic prin aciunea constrictoare sinergic a muchilor iridoconstrictori inervai de parasimpatic Acomodarea pentru vederea obiectelor situate la distane diferite. Vederea clar a obiectelor situate la distane diferite ntre punctele remotum i proximum se realizeaz prin activitatea reflex a muchilor ciliari, care determin modificarea curburii suprafeei cristalinului, cu intensitatea necesar focalizrii razelor de lumin pe retin. Demonstrm aceasta prin urmtoarele experiene: Imaginile lui Purkinje. ntr-o camer obscur aezm n faa ochiului unei persoane care privete n deprtare, puin lateral fa de axul ochiului, o lumnare aprins i din partea cealalt, din acelai unghi, privim spre pupila respectiv. Vom observa trei imagini oglindite ale fcliei lumnrii, dintre care dou sunt drepte i una rsturnat. Cea mai luminoas este cea reflectat de faa anterioar a corneei, care se comport ca o oglind convex i este o imagine dreapt. A doua imagine, cea mijlocie, este de asemenea dreapt, dar ceva mai mare i mai puin luminoas i este reflectat de faa anterioar a cristalinului, care se comport tot ca o lentil convex. A treia imagine este mai mic, rsturnat, i reprezint imaginea reflectat de faa posterioar a cristalinului care joac rolul unei oglinzi concave. Dup observarea celor trei imagini invitm subiectul s priveasc un obiect apropiat. Se constat c imaginile date de feele cristalinului s-au micorat. Mai evident este micorarea celei de-a doua imagini, dat de faa anterioar a cristalinului. n timpul acomodrii pentru vederea obiectului apropiat, convexitile suprafeelor anterioar i posterioar ale cristalinului se mresc prin micorarea razelor de curbur, aceast convexitate fiind mai intens pentru suprafaa anterioar.
Imaginile lui Purkinje: A- ochiul neacomodat B- ochiul acomodat 1, 1I- imagini formate pe faa anterioar a corneei 2, 2I- imagini formate pe faa anterioar a cristalinului 3, 3I- imagini formate pe faa posterioar a cristalinului

Mecanismul acomodrii pentru distan poate fi pus n eviden i n felul urmtor: subiectul fixeaz cu privirea un obiect pe care-l ine cu mna sa avnd braul ntins. Observatorul st ntr-o parte , cu faa spre subiect i-i privete acestuia ochiul. Se comand subiectului s apropie obiectul din ce n ce mai mult. Ochiul se acomodeaz pentru distane din ce n ce mai mici. Dou fenomene sunt perceptibile observatorului: mai nti o variaie a diametrului pupilar care devine mai mic pe msura apropierii obiectului, apoi o uoar deplasare nainte a irisului, provocat de bombarea feei anterioare a cristalinului. Cristalinul nu se poate acomoda n acelai timp dect pentru o singur distan. Prin experiena urmtoare se poate face dovada acestui fapt. Material necesar. O planet de desen sau tabla clasei, un text tiprit, o bucat de tifon sau o sit metalic. Mod de lucru. Se aeaz pe planet sau pe tabl textul tiprit, iar n faa lui la o oarecare distan se ntinde tifonul sau sita. Privind prin sit de la oarecare distan se constat c se poate citi textul, dar nu se distinge clar reeaua sitei. Dac se fixeaz ns privirea asupra reelei sitei, caracterele textului se vd difuz i nu se pot citi. Aceeai experien se poate face i mai simplu innd un vrf de creion ntre textul tiprit i ochi. Dac se fixeaz textul, vrful de creion se vede difuz, iar dac se fixeaz privirea asupra vrfului de creion textul nu se mai vede clar. Concluzii. Pentru ca imaginea unui obiect privit s fie clar, razele ce vin de la el trebuie s focalizeze pe retin. Datorit elasticitii sale i activitii motoare reflexe a muchiului ciliar, convergena feelor cristalinului variaz focaliznd pe retin. Ca urmare n acelai moment pe retin se formeaz imagini clare numai pentru obiectele ce se gsesc n acelai plan, restul apar cu imagini neclare. Sistemul de acomodare al cristalinului funcioneaz n mod reflex sub control nervos vegetativ. n 101

hipermetropie i presbitism se face corectarea forei de refracie a cristalinului cu lentile convergente, iar n miopie cu lentile divergente. Punerea n eviden a petei galbene i a punctului orb. La polul posterior al ochiului, n depresiunea numit fovea centralis retina are acuitate vizual maxim. La 3,5 mm mai jos de fovea central, ctre unghiul intern al orbitei, este locul pe unde fibrele nervului optic prsesc globul ocular. Aici nu se gsesc elemente receptoare i deci nu se formeaz imagine, fapt pentru care se numete punctul orb. Experimental putem pune n eviden rolul acestor dou regiuni retiniene astfel: Material necesar. Soluie de alaun de crom 5%, flacon cu pereii plani de aproximativ 5 cm grosime, ecran alb luminat puternic. Mod de lucru. Experiena lui Maxwell pentru punerea n eviden a petei galbene. Dup ce s-a dizolvat alaunul de crom se filtreaz soluia albastr- verzuie astfel obinut i se umple cu ea flaconul, care apoi se astup. O astfel de soluie nu las s treac prin ea dect radiaiile albastre, verzi i pe cele roii, cu lungime mare de und. Subiectul ine ochii nchii timp de un minut. n acelai timp, experimentatorul aranjeaz flaconul n faa ochilor subiectului i comand acestuia s deschid ochii pentru a privi prin soluie un ecran alb, puternic luminat. Subiectul declar c vede un punct rou, oval sau rotund, pe fondul albastru- verzui. Este imaginea petei galbene. Mod de lucru. Experiena lui Mariotte pentru punerea n eviden a punctului orb. Pe o bucat de hrtie de 20/15 cm se deseneaz dou repere (o cruciuli i un disc negru) la o distan de 7- 10 cm (reprezint distana aproximativ dintre cele dou pupile). Ochiul stng fiind nchis, se privete cu ochiul drept reperul care este aezat n stnga (cruciulia). Acest reper se vede clar, n timp ce reperul din dreapta (discul negru) se vede difuz. Se apropie hrtia cu cele dou repere, privindu-se mereu acelai reper (cruciulia). Se observ c la o distan de circa 15 cm de ochi Experiena lui reperul- discul negru nu se mai Mariotte: vede deloc. Fenomenul se 1- pata galben datorete faptului c la aceast 2- punctul orb distan, imaginea reperului negru 3- discul negru se proiecteaz pe retin n dreptul 4- cruciulia petei oarbe, adic acolo unde lipsesc elementele fotosensibile i nu se formeaz imaginea. Culori complementare. Sinteza luminii Prin amestecul n proporii egale a celor apte culori se poate face sinteza luminii albe. Acest fapt se demonstreaz cu discul lui Newton cruia i se dau 30- 40 de turaii pe secund. Se mai poate obine lumin alb i prin amestecul numai al unor culori, care au fost numite culori complementare, ca de exemplu rou + verde-albastru; portocaliu + albastru; galben + albastru-indigo; galben- verde + violet. Printr-o experien simpl se pot pune n eviden culorile complementare. Materialul necesar. Ptrate de hrtie de culori pure (rou, verde , albastru i galben) cu latura de 2 cm, o coal mare de hrtie alb pe care se aeaz aceste ptrate. Mod de lucru. Subiectul privete intens timp de 5 minute de la o distan de 2 m un ptrat colorat, de exemplu cel rou, dup care deplaseaz foarte repede privirea pe fondul alb. Va constata c pe acest fond, i apare un ptrat de aceeai mrime dar de culoare verde. Dac procedeaz invers, i anume privete iniial ptratul verde, se constat c la deplasarea privirii pe fondul alb vede un ptrat de culoare roie. Culoarea care apare pe fondul alb este complementar culorii privite iniial. Explicaia fenomenului este urmtoarea: n timp ce se privete atent culoarea roie, elementele fotosensibile ale acestei culori obosesc, aa c, atunci cnd deplasm privirea pe fondul alb, elementele fotosensibile retiniene pentru culoarea complementar, adic acelea pentru verde sunt excitate de lumina alb i ca urmare, apare lumina verde. La fel se ntmpl i pentru celelalte culori complementare menionate mai sus. 102

Percepia micrii Senzaia de micare se produce n condiii diferite dup cum ochiul: - percepe deplasarea unui mobil cnd poziia sa este fix i imaginea se deplaseaz pe retin. - cnd ochiul urmrete mobilul n deplasare atunci senzaia de micare depinde de reflexele cu punct de plecare n muchii oculomotori, determinate de modificrile de orientare ale ochilor. Materialul necesar . Aparat de proiecie, ecran alb, un carton de 5 cm lime, prevzut cu dou orificii a i b (avnd diametrul de 2-3 mm) i meninut n poziie vertical, o limb de carton n forma unui T fixat printr-o caps O, putnd s fie astfel deplasat n arc de cerc. Limitarea deplasrii se face prin nite susintori t i . Pe latura mic a T-ului se afl un F cu diametrul de 0,5 cm, care trebuie s se gseasc la acelai nivel cu orificiile de carton. Experiena se face n camer obscur. Mod de lucru Senzaia de micare produs prin deplasarea imaginii pe retin. Se proiecteaz pe ecran prin cele dou orificii ale cartonului un fascicul de lumin. Se vd dou puncte luminoase. Micnd limba de carton de la dreapta la stnga i invers cele dou orificii a i b vor fi acoperite alternativ i astfel n acest timp pe ecran se vede n permanen numai un Dispozitiv pentru punerea n eviden a rolului deplasrii singur punct luminos. Dac frecvena imaginii retiniene n percepia micrii: deplasrii este de una pe secund, cele dou C- cartonul prevzut cu cele dou orificii a i b puncte luminoase care apar n mod succesiv L- limb de carton n forma unui T O- caps de fixare dau impresia unui singur punct luminos animat t i - susintori pentru limitarea deplasrii de o micare de dute-vino. Aceasta se F- orificiul de pe latura mic a T- ului datorete formrii succesive a imaginilor, n dou puncte retiniene diferite dar apropiate .

Micarea consecutiv Dac, dup ce am fixat cu privirea cteva momente un obiect mobil, ducem privirea asupra unui obiect imobil, vom avea impresia c i acesta din urm se deplaseaz. Se poate face urmtoarea experien: se deseneaz cu tu pe un disc de carton alb de 30 cm diametru o spiral regulat, traseul avnd o grosime de 8 mm. Discului i se imprim micri de rotaie uniforme , cnd ntr-un sens cnd n cellalt. Viteza de rotaie trebuie s fie aceea ce d impresia c spirele se ndeprteaz sau se apropie de centru. Se privete discul n Micarea micare timp de 10 sec., apoi se privete cu ambii ochi un obiect consecutiv fix aezat pe un fond uniform (de pild o pasre mpiat). Dup sensul de rotaie al spiralei, se pare c pasrea se ndeprteaz sau se apropie. Faptul se explic astfel: ca urmare a persistenei imaginilor luminoase, ochiul compar poziia imaginii fixe cu cea a imaginii mobile i o raporteaz la aceasta. Uneori perceperea micrii este fals, de exemplu: avem impresia c se mic trenul n care ne gsim i care staioneaz, dei n realitate, se mic trenul de pe linia vecin la care noi privim pe fereastr.

103

FUNCII DE NUTRIIE Aciunea digestiv a amilazei salivare Procesul de digestie cu efect chimic n gur, se realizeaz prin intermediul enzimei din saliv care are o aciune hidrolitic asupra amidonului. Material necesar. Eprubete, plnie i hrtie de filtru, hrtie de turnesol, amidon, vase de fiert. Mode de lucru. Recoltarea salivei la om se face astfel: se spal bine gura cu ap cldu, apoi se excit secreia glandelor salivare, mestecnd o bucat de gum. Saliva ce se formeaz se colecteaz ntr-o eprubet prin plnia n care se gsete vat de sticl sau tifon. Ca s ndeprtm mucusul din saliv, acesta se precipit cu acid acetic 3% i dup ce se agit se filtreaz. Un masaj energic asupra gingiilor stimuleaz secreia salivar i se obine astfel o saliv fluid fr spum. Proprietile salivei. Saliva este un lichid clar, care rezult din amestecul lichidului secretat de glandele parotide, srac n mucin i ca atare de o consisten fluid, cu lichidul secretat de glandele submandibulare i sublinguale, bogat n mucin i cu o consisten vscoas.. Cu o hrtie de turnesol se demonstreaz reacia alcalin a salivei, datorit bicarbonailor de sodiu i fosfailor disodici. Aceste sruri au rolul de a facilita aciunea enzimelor. Prepararea soluiei de amidon. Asupra amidonului crud, aciunea amilazei salivare este slab i ntrziat din cauza stratului de celuloz ce acoper granulele de amidon. Mai repede are loc reacia asupra amidonului fiert sau copt; pentru aceasta este nevoie s preparm soluia de amidon fiert. ntr-un pahar cu ap se pune o linguri de amidon pur i se amestec s nu se fac aglomerri. Totul se toarn peste ap care clocotete timp de 5-10 minute. Se las s se rceasc i s se decanteze 24 de ore. Se separ supernatantul cu care se realizeaz urmtoarele probe: Se toarn 5 ml soluie de amidon ntr-o eprubet i se adaug o pictur de I +IK. Se produce o coloraie albastr caracteristic. ntr-o alt eprubet, la aceeai cantitate de amidon, se introduce 1 ml saliv, se agit i se adaug o pictur de I+IK. Se observ aceeai coloraie albastr, ceea ce dovedete c un contact de scurt durat cu saliva nu modific structura chimic a amidonului. Se ia alt eprubet i se repet experiena precedent cu deosebire c soluia de I+IK se adaug mai trziu (dup 35 min.). n acest caz nu se mai obine coloraia albastr, ci una violacee, rocat sau glbuie, fapt ce demonstreaz c amidonul a fost hidrolizat prin contactul mai prelungit cu saliva, trecnd prin stadii de dextrine. Se face contraproba, care const n inactivarea salivei prin fierbere (n baia de ap), timp de 30 minute sau meninerea la 0o. Saliva se inactiveaz ireversibil sub aciunea temperaturilor ridicate i se inactiveaz n mod reversibil sub aciunea temperaturilor sczute. Numai eprubeta cu saliv inut la 0o, readus la temperatura camerei, dup circa o or, redobndete fora de hidroliz a amidonului. Adugnd saliv inactivat prin fierbere la soluia de amidon proaspt, se constat c n acest caz amidonul nu este hidrolizat i se coloreaz cu I+IK n albastru, chiar dup mai multe ore de contact cu saliva fiart. Se toarn n dou eprubete aceeai cantitate de soluie de amidon i, apoi, ntr-una din ele se adaug saliv activ, iar n cealalt aceeai cantitate de saliv inactivat. Se las n contact aproximativ 10 minute, apoi se adaug n fiecare puin licoare Fehling i se nclzete la fierbere. Se observ c n eprubeta cu saliv activ are loc reducerea licoarei Fehling, pe cnd n cealalt, nu. Concluzie. Descompunerea amidonului n zaharuri mai simple, reductoare, ncepe n gur i se face datorit amilazei salivare. Pn la faza final de maltoz, descompunerea trece prin stadii intermediare- dextrinele. Activitatea enzimei se desfoar cu randament optim ntre 37-40o C i n mediu alcalin. Prin fierbere, enzima este distrus i hidroliza nu mai are loc.

104

Stomacul Aciunea digestiv a sucului gastric De la om i de la animale, sucul gastric poate fi recoltat cu ajutorul sondelor (tuburi subiri de cauciuc care pot fi introduse n stomac); de la animale se recolteaz sucul gastric i prin fistule. Aceste procedee de recoltare sunt greu realizabile n coal. Este posibil ns obinerea unui extract de mucoas gastric, din stomac de porc, care conine enzimele secretate de glandele gastrice. Pentru a evidenia aciunea pepsinei asupra proteinelor se procedeaz astfel: Materiale necesare: Stomac proaspt de porc, instrumente de disecie, mojar, soluie de HCl 0,4%, pahare Berzelius, un ou, vas de fiert, fibrin, ap distilat, soluie de NaOH 20%, eprubete. Mod de lucru: I. Dup ce stomacul a fost deschis i bine splat se desprinde de pe regiunea fundic o suprafa de 10-20 cm ptrai mucoas i se mojareaz. Dup mojarare se adaug pictur cu pictur soluia de HCl 0,4% i se las n repaus 15-20 de minute, dup care se filtreaz printr-un tifon dublu. Se folosete ca substrat proteic fibrina care este mai digerabil la aciunea pepsinei sau cubulee de albu de ou fiert. Fibrina se poate obine de la centrele de colectare a sngelui sau se poate pregti n laborator. Se iau 10-15 cm cubi de snge proaspt prin extracie din vena unui animal. Din sering, sngele se vars ntr-un pahar i cu o baghet de sticl se agit pentru a aduna filamentele de fibrin. Fibrina se spal sub curent de ap pentru a ndeprta hematiile lizate; fibrina splat are culoare alb. Filtratul obinut dup triturarea de mucoas gastric se separ n dou poriuni, din care una se inactiveaz prin fierbere (n baie de ap). n dou eprubete se introduc cteva cubulee de albu sau fibrin. ntr-o eprubet se toarn extract gastric nefiert, iar n cealalt, extract gastric inactivat. Ambele eprubete se in la o temperatur ntre 37 40 timp de mai multe ore. Se constat c n vasul cu extract activ s-a produs digerarea marginilor cuburilor (fibrinei), deci un nceput de digestie, pe cnd n cellalt acestea au rmas intacte. Pepsina hidrocloric din extractul de mucoas are aciune digestiv asupra proteinelor. Folosind extract obinut din material mojarat, dar neutralizat cu o baz slab, sau extract de mucoas creia nu i-am adugat HCl diluat, chiar dac se ine n contact cu proteina la 37 -40 timp ndelungat, digestia nu are loc; demonstrm astfel rolul HCl ca activator al pepsinei. II. n patru phrue se repartizeaz cantiti egale de fibrin sau cubulee de albu de ou: n vasul 1 se pun 5ml soluie de extract de mucoas gastric i 5 ml HCl 0,4%; n vasul 2 se pun 5 ml soluie de extract de suc gastric i 5 ml ap; n vasul 3 se pun 5 ml soluie de extract de suc gastric, inactivat prin fierbere, apoi rcit, i 5 ml HCl 0,4%; n vasul 4 se pun 5 ml de ap i 5 ml HCL 0,4%. Toate cele 4 pahare se introduc n baie de ap cald ntre 37 -40 i se in 30 de minute. n vasul 1, fibrina se umfl, devine translucid, se dizolv, deoarece n prezena HCl pepsina devine proteolitic i transform fibrina n polipeptide. n vasul 2 , pepsina nefiind activat nu se observ nici o modificare. n vasele 3 i 4, fibrina a devenit translucid, dar nu s-a dizolvat. Inactivarea pepsinei prin cldur n vasul 3 i absena pepsinei n vasul 4 probeaz c HCl nu este suficient singur pentru a realiza aciunea hidrolizant asupra proteinelor. Concluzii. Experienele de mai sus au demonstrat c mucoasa gastric conine enzime proteolitice. Glandele gastrice secret o proenzim pepsinogenul care devine activ n prezena HCl. Este bine s se reaminteasc elevilor i despre rolul celorlalte enzime gastrice, labfermentul i lipaza gastric. Faptele trebuie interpretate n sensul c stomacul este n primul rnd un organ de depozit i numai n mod secundar un organ de digestie. Emulsionarea grsimilor cu ajutorul bilei Materiale necesare: eprubete mijlocii, pipet medical, stativ pentru eprubete, hrtie de filtru, lame de sticl, ulei, vezic biliar de porc sau de vit. Modul de lucru. Se iau dou benzi de hrtie de filtru din care una mbibat cu ap, iar cealalt cu bil. Se pune apoi fiecare hrtie ntr-o eprubet cu ulei pn se realizeaz contactul cu uleiul. Se observ c uleiul ptrunde n hrtia mbibat cu bil, pe cnd n cea mbibat cu ap nu ptrunde. 105

Pe dou lame de sticl se pune cte o bucic de hrtie de filtru mbibat una cu ap, cealalt cu bil. Se las s cad dintr-o pipet cte o pictur de ulei pe fiecare hrtie. Pictura de ulei de pe hrtia mbibat cu ap i menine forma, pe cnd cealalt pictur se aplatizeaz i se ntinde pe suprafaa hrtiei mbibat cu bil. n dou eprubete se pune puin ulei i ap. n una din ele se mai adaug 5-6 ml bil i se agit. Se observ formarea unei emulsii temporare n eprubeta fr bil i a unei emulsii durabile n eprubeta cu bil. Srurile biliare coboar valoarea tensiunii superficiale a solventului la o valoare apropiat de cea a grsimii. Astfel, nemaifiind diferene mari de tensiune superficial ntre cele dou lichide n contact, suspensia uneia n cealalt poate da o emulsie permanent. Concluzie. Prin aciunea tensioactiv a srurilor biliare, emulsiile grsimilor se menin, ceea ce confer o suprafa mai mare de contact cu enzima specific- lipaza pancreatic i intestinal. Grsimile compacte (slnina) nu pot fi scindate de lipaz dect n partea lor de contact.. ca urmare, durata de digestie a acestora este de circa 12-15 ore n funcie de cantitatea consumat la prnz. Sngele Recoltarea sngelui. Observarea elementelor figurate. Frotiul de snge. Pentru studiul morfologic al elementelor figurate ale sngelui se fac frotiuri pe lame i se cerceteaz la microscop. Recoltarea sngelui pentru efectuarea unui frotiu se face la om din pulpa degetului. La iepure, cobai i alte animale mici de laborator, din pavilionul urechii, la psri, din creast sau membrana interdigital (la palmipede), la broasc, direct din inim, absorbind prin acul unei seringi. Materiale necesare: Vat, alcool, eter, ac sterilizat, lame i lamele, albastru de metil i soluia May-Grunwald-Giemsa. Mod de lucru. Se dezinfecteaz pulpa degetului cu tampoane de vat mbibate n alcool i eter. Cu acul sterilizat prin flambare sau fierbere 30 de minute se face o neptur. Primele picturi de snge se terg cu tamponul de vat, apoi se aplic marginea lefuit a unei lame de sticl lng pictura de snge, care ader de marginea lamei. Se aeaz marginea lefuit cu pictura de snge pe suprafaa unei alte lame, aproape de captul ei, n poziie oblic (cu un unghi de 30-40) i printr-o micare de translaie rapid, dar uoar, sngele este mpins prin spaiul capilar de la contactul celor dou lame. ntinderea trebuie fcut ntr-un strat ct mai subire ca globulele s nu se suprapun. Se usuc frotiul prin agitarea lamei n aer, astfel pelicula ader de lam i globulele i pstreaz leucocit forma . Stadii succesive de ntindere a unui Fixarea mai frotiu de snge(I, II i III). 1 i 2 lame de sticl; 3 pictur de snge. bun se face cu amestec de eter i alcool n pri egale din care se pun deasupra peliculei de snge cteva picturi i se las timp de 15hematie 20 de minute. plachet sanguin Urmeaz colorarea. Cea mai simpl colorare se face cu soluie de albastru de metil (1%). O colorare Frotiu de snge de om mai bun se obine folosind colorani specifici, cum este soluia May-Grunwald-Giemsa. Cu cteva picturi 106

de soluie se acoper lama, se in pe preparat 2-3 minute, apoi se spal cu ap curat la robinet, se terge lama pe faa ei inferioar, se las s se usuce n suport, se privete la microscop, de preferin cu obiectivul de imersie. Este bine s se fac dou preparate, unul cu snge de om sau alt mamifer i altul cu snge de broasc sau alt vertebrat, la care globulele roii sunt nucleate i de forme diferite i astfel s se studieze comparativ. n cmpul microscopic, eritrocitele de om apar de forma unor discuri biconcave, anucleate, cele de broasc de form eliptic, biconvexe, nucleate. Leucocitele sunt mai puine, mai mari, cu contur neregulat i nucleu colorat n mov. Se vor identifica diferitele feluri de leucocite, dup aspectul nucleului. Se pot obine preparate bogate n leucocite n modul urmtor: se injecteaz n sacii limfatici dorsali ai unei broate o suspensie concentrat de carmin. Dup cteva ore se secioneaz tegumentul cu un foarfece i se recolteaz limfa din saci, cu o sering. Se pune o pictur pe lam, se ncadreaz cu vaselin i se aplic lamela. Se realizeaz astfel o camer umed n care se poate pstra ctva timp limfa. SE fac observaii la microscop i se vd leucocitele a cror citoplasm este plin cu granule de carmin. A fost pus n eviden astfel i aciunea fagocitar a leucocitelor. Determinarea grupelor sanguine Grupele sanguine au fost descoperite n anul 1901 de Landsteiner i Moss. Ei au constatat c n membrana eritrocitelor exist substane de natur mucopolizaharidic cu valoare de antigene denumite aglutinogene A i B. n plasm sunt prezente simultan substane de natur globulinic denumite anticorpi (alfa) i (beta) sau aglutinine. Niciodat n acelai snge nu pot coexista aglutinogenul cu aglutinina corespunztoare; nu pot exista cuplurile A cu i B cu pentru c are loc aglutinarea hema tiilor, ducnd la hemoliz. Pe baza repartiiei aglutinogenilor i aglutininelor au fost stabilite cele 4 grupe sanguine ale sistemului ABO. n cazul transfuziei nu trebuie s se ntlneasc aglutinogenul donatorului cu aglutinina corespunztoare din sngele primitorului. Denumirea grupei vine de la aglutinogen. Grupa O este donator universal, iar grupa AB este primitor universal. Grupa sanguin OI AII BIII ABIV Aglutinogen (n eritrocite) A B A,B Aglutinin (n plasm) , Primete de la O O,A O,B O,A,B,AB Doneaz la O,A,B,AB A,AB B,AB AB

Grupa sanguin este ereditar i nu se schimb nici n cazul transfuziilor masive de snge. Transmiterea ei se face n conformitate cu legile lui Mendel. Metode de determinare 1. Determinarea aglutinogenelor prin metoda Beth-Vincent cu ajutorul serurilor hemotest; 2. Determinarea aglutininelor prin metoda Simoniu cu ajutorul eritrocitelor-test. Determinarea aglutinogenelor Metoda utilizeaz serurile hemotest O (alfa, beta), A (beta), B (alfa). Materiale necesare: seruri hemotest,, spirt medicinal,, eter, ace, sering, vat, pipete Pasteur, lame cu godeu, lame simple. Mod de lucru: - pe suprafaa unei lame cu godeu bine degresat cu alcool i eter se aplic cu pipete diferite cte o pictur de ser hemotest de la stnga spre dreapta n ordinea urmtoare: 107

n stnga OI, la mijloc AII, n dreapta BIII; - se degreseaz pulpa degetului i se neap cu acul de sering; prima pictur se terge i din a doua pictur se recolteaz cu ajutorul unei lame microscopice 3 picturi de snge cu ajutorul colurilor lamei; - trebuie procedat n aa fel nct pictura de snge s fie aproximativ 1/20 din pictura de ser; - se amestec pictura de snge n pictura de ser hemotest; - se ateapt 3-4 minute, meninnd lamele la temperatura camerei i apoi se face citirea. Interpretarea rezultatelor Sunt posibile 4 combinaii: 1. dac aglutinarea nu are loc n nici una din cele 3 picturi, ele rmnnd uniform colorate n roz, sngele aparine grupei OI

2. dac aglutinarea are loc n prima i a treia pictur i lipsete n mijloc, sngele aparine grupei AII

3. dac aglutinarea are loc n prima i a doua pictur, lipsind n pictura a treia, sngele aparine grupei BIII;

4. dac aglutinarea are loc n toate cele trei picturi sngele aparine grupei ABIV.

Erori ce pot falsifica rezultatele: - nu se pstreaz raportul 1/20 ntre cele dou picturi; - folosirea unor seruri hemotest vechi - citirea se realizeaz imediat dup realizarea combinaiilor, deci nu se las s se nvecheasc combinaia, deoarece prin evaporare apar erori de interpretare.

108

Observaia circulaiei capilare Capilarele reprezint segmentul vascular prin care are loc schimbul de substane ntre snge i esuturi. Diametrul unui capilar fiind extrem de mic, de ordinul micronilor, circulaia sngelui n acesta se vede numai la microscop n membrane subiri ca: membrana interdigital la broasc, la nivelul limbii, n mezenter i n plmni. Materiale necesare: Microscop, broasc, planet ce prezint un orificiu cu un diametru de circa 2 cm, instrumente de disecie, ace, tifon, vat, ser fiziologic. Mod de lucru: - dup spinalizare broasca se aeaz n decubit ventral, iar membrana iterdigital dintre degetele 3-4 se aplic pe orificiul planetei cu condiia s nu fie prea ntins pentru a nu stnjeni circulaia; - se va observa circulaia sngelui n artere (cu vitez mare), iar la nivelul capilarelor deplasarea eritrocitelor ca nite monede, observndu-se i deformarea acestora; - se poate observa circulaia capilar i n limb, dup ce aceasta s-a fixat cu un ac pe suprafaa orificiului planetei. Observarea circulaiei n membrana interdigital. Cu ajutorul unor fii de tifon umede, se imobilizeaz o broasc pe planet, cu faa dorsal n sus, avnd extremitatea piciorului posterior n dreptul orificiului, astfel ca membrana interdigital s poat fi ntins deasupra orificiului. Degetele se fixeaz etalate deasupra orificiului cu ace cu gmlie introduse n lauri de a legate pe fiecare deget. Se umezete membrana cu ap i se potrivete planeta pe msua microscopului, astfel ca membrana s se gseasc n dreptul obiectivului. Se lumineaz puternic i se observ cum circul sngele n arteriole, venule i mai ales n reeaua capilar. Coloana de snge la nivelul capilarelor este att de subire nct nu se identific dect prin deplasarea evident a hematiilor. La broasc, hematiile au form eliptic, sunt mari i nucleate, deci uor de urmrit n deplasarea lor de ctre coloana de lichid circulant. Observarea circulaiei n limba de broasc. Se poate lucra cu acelai animal schimbndu-i doar poziia pe planet., n sensul c n dreptul orificiului s se etaleze limba. Se observ la microscop. n limb se poate remarca densitatea capilarelor cu mult mai mare dect n membrana interdigital. Observarea circulaiei n mezenter. Se pregtete o broasc spinal prin distrugerea encefalului, mduva lsndu-se intact. Se fixeaz pe o planet cu faa dorsal n sus. Se face o incizie lateral n peretele abdominal drept. Se introduce prin incizie o pens i se apuc o ans intestinal care se trage n afar. Se etaleaz cu grij ansa deasupra orificiului i se fixeaz pe margine cu ace nfipte n peretele intestinului. Se umezete cu ser fiziologic i se observ la microscop, dup 5 minute, timp necesar pentru trecerea ocului spinal i restabilirea tonusului vascular. Se pot observa vase de calibre diferite, arteriale i venoase cu traseu paralel, ns cu deplasarea n sens contrar a coloanei de snge. De remarcat c viteza de curgere n vasele arteriale este cu mult mai mare dect n cele venoase. De observat modul de distribuire a vaselor arteriale i de confluere a vaselor venoase. n vasele de calibru mai mare se observ deplasarea sngelui cu vitez mai mare n regiunea axial a vasului i cu mult mai lent pe lng pereii vasului. n capilare cu lumenul mic (sub dimensiunile hematiilor), hematiile se deplaseaz una cte una lent i la o ramificaie trebuie chiar s se deformeze pentru a trece mai departe. Dac se aplic o pictur de ser Ringer cu adrenalin sau acetilcolin, viteza de curgere a sngelui se modific n funcie de intensitatea reaciei vasomotorii- vasoconstricie sau vasodilatare. Observarea circulaiei n plmnul de broasc. La o broasc spinal se face o incizie lateral la baza membrului anterior. Se introduce n laringele broatei captul unui tub de sticl. La capt este conectat cu un tub de cauciuc prin care se sufl ncet. Se observ c plmnul se umple cu aer i se exteriorizeaz prin incizia lateral. Se aranjeaz preparatul astfel ca plmnul s vin n dreptul orificiului plutei, peste care s-a aezat o lam de sticl. Se umecteaz cu ser i se observ la microscop. n plmn se poate identifica grosimea peretelui pulmonar, structura lui i densitatea extrem de mare a reelei capilare. 109

Concluzii. n artere, viteza sngelui e mai mare dect n vene. Sngele circul sub forma unui curent continuu, elementele figurate fiind antrenate n micare de presiunea sngelui. Capilarele sunt vase cu calibrul cel mai mic n care sngele circul foarte ncet, iar eritrocitele trec chiar cte una, din cauza lumenului mic al acestor vase. Structura inimii Materiale necesare: o inim de viel, de porc sau oaie (este necesar ca trunchiurile marilor vase s fie secionate ct mai departe de inim), trus de disecie, ser fiziologic pentru homeoterme, vat, alcool., microscop. Modul de lucru. Se vor observa anurile longitudinal i transversal cu ramurile arterelor coronare. Se examineaz prile externe ale ventriculelor i se compar cu descrierea din manual. Se trece apoi la secionarea inimii deschiznd pe rnd fiecare camer. Incizia atriului drept trebuie s mearg rectiliniu, ncepnd de la mijlocul spaiului dintre cele vene cave, pn la baza ventriculului corespunztor. Atriul stng se deschide printr-o incizie care ncepe ntre rdcinile drepte i stngi ale venelor pulmonare i merge, de asemenea, pn la baza ventriculului corespunztor. Ventriculele se deschid prin seciuni n form de V cu vrful n jos. Pentru ventriculul drept, incizia ncepe de la baza arterei pulmonare i merge paralel cu anul anterior (n care se gsete artera coronar anterioar) pn aproape de vrful ventriculului, iar de acolo, se ndreapt din nou n sus, fcnd un unghi de aproape 60o cu prima incizie. n acest mod s-a decupat peretele anterior al ventriculului drept i apucnd cu pensa de vrful lamboului se ridic pentru a se putea observa interiorul cavitii: muchii papilari, cordoanele tendinoase, valvulele atrioventriculare i valvulele sigmoide. Pentru ventriculul stng se procedeaz similar, fcnd prima incizie paralel cu acelai an anterior, iar a doua, de la vrful ventriculului spre baza sa. Ridicnd i aici lamboul se poate vedea interiorul. Se observ: structura peretelui inimii cu endocardul, miocardul, i epicardul su. Se va compara grosimea miocardului atrial cu a celui ventricular i a miocardului celor dou ventricule. Se vor examina la microscop lame cu esut miocardic. n atrii se vor observa orificiile prin care acestea comunic cu venele i cu ventriculele respective. n ventricule se vor observa orificiile de comunicare cu atriile i cu arterele respective. Atenia elevilor trebuie s fie ndreptat cu deosebire asupra aparatelor valvulare: valvulele tricuspid i bicuspid cu corzile lor tendinoase, muchii papilari i valvulele sigmoide.

110

Observarea activitii cardiace Explorarea funcional a inimii n laborator se face foarte uor pe inim de broasc. Materiale necesare: Broate de talie mai mare, plac de plut i instrumente de disecie, sticle de ceasornic, ser Ringer, pahar Berzelius, biuret, canul Straub sau pipet instilatoare. Mod de lucru. I. Observarea activitii inimii de broasc in situ Se paralizeaz o broasc prin distrugerea mduvei spinrii, se fixeaz pe planet cu faa ventral n sus i membrele n extensie. Se face o incizie a tegumentului pe linia median, se prinde cu pensa apendicele xifoid i se taie cu foarfecele de o parte i de alta claviculele, pentru a se ndeprta ntregul plastron sternal. Trebuie s se evite secionarea venei abdominale i a arterelor brahiale. Cu o pens fin se apuc membrana pericardic i se secioneaz, degajnd inima. Inima broatei este tricameral, avnd dou atrii i un ventricul i un sinus venos n care se deschid venele. Atriul drept este de culoare mai nchis deoarece conine snge venos, pe cnd cel stng, de culoare mai deschis, deoarece conine snge arterial, oxigenat. Se palpeaz cu vrful degetului ventriculul pentru a intui gradul de duritate al miocardului n timpul sistolei i diastolei. Izolarea inimii de broasc: 1-ventriculul; 2- serfin Se prinde vrful inimii cu o serfin i metalic; 3- vrful canulei de sticl introdus n sinusul se orienteaz rostral. Se va remarca venos i fixat cu firul de a (4) confluarea marilor vase venoase n sinus i delimitarea lui fa de atrii prin linia alb Cnd se ridic vrful inimii se observ o fie de esut conjunctiv care se secioneaz cu un foarfece fin pentru a nlesni astfel rsturnarea ventriculului peste atrii i meninerea lui n aceast poziie timp mai ndelungat. Sinusul venos se contract n acelai ritm cu inima. De fapt, de aici iau natere impulsurile care se propag la atrii i apoi la ventricul. n cazul cnd nu dispunem de o serfin, inima se conecteaz prin intermediul unui fir de a legat de vrful ei cu o prghie uoar din pai, avnd la vrf un stegule Se poate urmri alternana strilor de contracie sistol i de relaxare diastol. Frecvena acestor revoluii cardiace este de 15-30 de minute, dependent de Instalaie pentru demonstrarea contraciilor cordului de broasc. 1-inim; 2- serfin, 3- fir de a; 4- axul care fixeaz numeroi factori, ntre care variaiile de prghia; 5- furc; 6- prghie amplificatoare; stegule. temperatur. Picurnd pe inim ser cald (28-30) sau ser rece ), (10frecvena se modific accelerndu-se la cald i moderndu-se la rece. Pipind inima se pot percepe modificri de consisten din timpul sistolei i al diastolei. Culoarea variaz, n sistol ventriculul este palid i roz n diastol. Diferena de culoare se datoreaz faptului c n cordul de broasc nu exist o vascularizaie coronar. II. Automatismul cardiac este proprietatea inimii de a-i menine activitatea ritmic n afara relaiilor sale cu organismul. Se poate pune n eviden pe cordul izolat. De la o broasc spinalizat se detaeaz inima de corp, secionnd crosele aortice i vasele venoase. Dup izolare se pune inima pe o sticl de ceas, n ser fiziologic pentru a evita deshidratarea. Activitatea inimii dureaz n afara organismului cca. 30 de minute datorit existenei n structura sa a unui 111

sistem excitoconductor, capabil s genereze impulsurile necesare determinrii contraciilor succesive. Se observ i se cronometreaz contraciile ritmice i regulate ale inimii izolate de organism. Activitatea dureaz timp ndelungat, dac se primenete din cnd n cnd serul care o scald. Activitatea ritmic poate fi influenat n sensul unei reduceri adugnd ser rece (la 5) sau intensificri prin adugarea de ser cald (cca. 25-30). Cordul izolat poate fi meninut n stare de activitate timp ndelungat, cu condiia de a fi perfuzat cu ser Ringer. Pentru realizarea unei perfuzii a cordului izolat, acesta trebuie s fie conectat cu o canul Straub, prin intermediul creia lichidul de perfuzie ptrunde n cavitile inimii. Fixarea inimii pe canul se face astfel: Se sacrific o broasc i i se descoper inima. Dup ce ventriculul a fost rsturnat peste atrii, se introduce pe sub sinus un fir de a. Se face o incizie n form de V cu vrful foarfecelui (prin ciupire), n peretele sinusului, n afara locului de unire a acestuia cu atriile. Prin aceast incizie se introduce vrful unei canule Straub sau al unei pipete instilatoare de sticl procurat de la farmacie. Vrful canulei trebuie s conin soluie Ringer, pentru a evita formarea de coaguli. Firul de a introdus n prealabil sub peretele sinusului este nnodat acum deasupra vrfului canulei. Astfel ntregul perete sinusal este legat de vrful canulei. Se are n vedere ca legtura s nu depeasc limita liniei albe unde este localizat ganglionul Remak, prin a crui izolare se produce oprirea activitii cardiace. n cazul cnd se folosete pipeta instilatoare, firele de a se fixeaz pe peretele de sticl al canulei cu o bucic de leucoplast; n caz contrar, inima alunec n afar i cade de pe canul. Se secioneaz crosele aortice i vasele venoase sub nivelul ligaturii; inima este detaat din corp i rmne fixat de canul. Se fixeaz canula pe suport cu ajutorul unei cleme, cu deschiderea n sus. Se las s curg n canul lichid Ringer dintr-o biuret sau un alt rezervor cu un debit de 20 de picturi pe minut. Din canul Lichidul trece n inim i apoi este expulzat prin crosele aortice. Modificm debitul de perfuzie reducnd sau crescnd numrul de picturi pe minut. Vom observa c frecvena i fora de contracie se schimb n raport direct cu volumul de lichid perfuzat pn la o anumit limit maxim cnd inima se gonfleaz, deoarece fora cu care preseaz lichidul depete fora de contracie. Creterea forei de contracie proporional cu volumul de lichid perfuzat se face pe seama forei de rezerv a inimii i ne demonstreaz c presiunea ce se exercit pe faa intern a cavitii cardiace constituie un excitant. Cnd volumul de lichid perfuzat este redus la 2-3 picturi pe minut, deci cu debit mic, amplitudinea i frecvena cardiac scad. Perfuzm inima cu soluie Ringer cu debit constant variind numai temperatura:10 , 15, 20,25,30 i notm frecvena contraciilor n unitatea de timp, precum i amplitudinea contraciei. Vom constata o accelerare de ritm la temperaturi ridicate (tahicardie) i ncetinirea de ritm la temperaturi sczute (brahicardie). Concluzii: Inima are o activitate ritmic, automat; ritmicitatea i amplitudinea contraciilor sunt influenate de factori termici i de presiune, precum i de impulsurile nervoase. Respiraia Organele respiratorii asigur trecerea O2 din aerul alveolar n snge i a CO2 din snge n aerul alveolar. Mecanica respiratorie. Reprezint ansamblul proceselor prin care se asigur primenirea aerului alveolar. Aceasta se face prin trecerea aerului atmosferic n spaiul alveolar i din spaiul alveolar n atmosfer. Deplasarea aerului este condiionat de variaiile de presiune dintre aerul atmosferic i cel alveolar. Variaia de presiune n sensul unei sau al unei creteri n spaiul alveolar este realizat de prin micrile efectuate de pereii cutiei toracice, ca urmare a contraciei muchilor inspiratori i expiratori. Respiraiile normale (eupneice) , accelerate (polipneice), forate (dispneice) i suprimate (apneice) sunt coordonate de centrii nervoi, n diferite condiii fiziologice ale organismului, dup nevoile acestuia n oxigen. Amplitudinea i frecvena celor dou faze (inspiraia i expiraia) n diferite situaii pot fi studiate n primul rnd prin autoobservare, apoi prin experienele pe care le propunem n continuare. 112

Material necesar. Un metru de croitorie, un ceasornic cu secundar sau cronometru. Mod de lucru. Se msoar perimetrul toracic al unui elev direct peste cma sau bluz, n timpul expiraiei i inspiraiei linitite. Se cronometreaz numrul de respiraii pe minut, iar prin calcul se stabilete durata unei respiraii complete. Subiectul este invitat apoi s execute un efort fizic susinut pentru o scurt durat de timp (s ridice de mai multe ori o greutate, s alerge timp de cteva minute pe culoar etc.); se procedeaz n acelai fel la msurarea perimetrului toracic n inspiraie i n expiraie i la nregistrarea ritmului respirator. Frecvena i amplitudinea au crescut. Se vor observa micrile ritmice ale peretelui abdominal i se vor explica aceste fapte. Cu privire la ritmul i profunzimea respiraiilor se va cere elevilor ca la situaii identice, s compare acestea pe organismul propriu i organismul unor persoane naintate n vrst. O experien uor de efectuat, care privete relaia dintre ritmul respirator i presiunea parial a gazelor respiratorii n atmosfera intraalveolar, este cea care pune n eviden apneea i polipneea. Un elev este invitat s-i rein pentru un moment respiraia apnee. Apneea voliional dup expiraie poate dura circa 20 s, iar dup inspiraie poate fi prelungit pn la 30 s. Se produce n acest fel anoxia esuturilor, care este urmat de imediat de o accelerare a frecvenei la 20- 25- 30 pe minut polipnee compensatorie. Se vor crea discuii n legtur cu aceste observaii i se vor face referiri la respiraia la nlimi (pe muni sau n atmosfera nalt) i n adncuri (scafandrii, mineri). Se mai pot face referiri la accelerarea de ritm n cazul temperaturilor ridicate, la apneea reflex provocat de un jet de ap rece proiectat neateptat pe tegument i la modificrile respiraiei n timpul strnutului, tusei, deglutiiei, sughiului, vomei. Demonstrarea mecanicii Experiena lui Donders: respiratorii cu aparatul Donders. A- expiraie Experiena cu aparatul B- inspiraie Donders completeaz nelegerea 1. clopot de sticl 2. membran de cauciuc rolului fiziologic al muchiului 3. dop prin care trec e tubul (T) diafragmei n mecanica respiraiei corespunztor traheii i un alt i rolul esutului elastic pulmonar. tub (V) care servete pentru a Aparatul Donders se compune face un vid parial; dintr-un clopot de sticl prin al 4. manometru 5. balonae de cauciuc crui gt trece un dop strbtut de conectate la captul bifurcat al un tub. De tub se prinde traheea tubului (T). mpreun cu plmnii disecai de la un mamifer- iepure sau cobai. Partea de jos a clopotului este nchis de o membran de cauciuc ce are n mijlocul ei, n afar, un crlig de care se poate trage. Atragem atenia elevilor c analogia acestui clopot de sticl cu cavitatea toracic nu este perfect deoarece in situ ntre cele dou foie pleurale un spaiu real aa cum exist ntre plmni i peretele clopotului din experiena noastr. n aceast experien nu se demonstreaz fora de adeziune dintre cele dou foie pleurale. Trgnd n jos membrana de cauciuc, spaiul n clopot crete, se micoreaz presiunea, n plmni intr atunci aer din atmosfer i ei se dilat. Membrana de cauciuc are rolul diafragmei, iar tragerea ei n jos reprezint contracia n cursul inspiraiei, urmat de alungirea diametrului sagital. Dnd drumul membranei de cauciuc, aceasta revine. Presiunea n cavitatea clopotului i n plmni crete peste valoarea presiunii atmosferice; plmnii sunt comprimai i aerul intrat n ei este evacuat pn la egalarea presiunii (vezi fig.). Experienei descrise i se poate crea o variant: n cazul cnd lipsesc plmnii naturali putem lua dou balonae de cauciuc, pe care le prindem la captul bifurcat al tubului de sticl ce trece prin dop. Se manevreaz n acelai fel i se obin rezultate similare. n lipsa unui clopot utilizm o sticl creia i s-a tiat fundul. Prin gtul sticlei trece, ca i n cazul precedent tubul, de care este fixat un balon de cauciuc sau plmn. Introducem parial sticla cu fundul ntr-un vas cu ap; ridicarea i coborrea sticlei micoreaz sau mrete presiunea intern, balonaul se umfl si se dezumfl. n acest caz membrana de cauciuc a fost nlocuit cu nivelul apei. Se arat c fenomenele observate n acest mod sunt analoage fenomenelor care au loc n procesul respiraiei. Se stabilesc urmtoarele corelaii: 113

1. prin micorarea spaiului cutiei toracice, ca urmare a coborrii coastelor i a boltirii n sus a diafragmului, spaiul toracic se micoreaz, plmnii sunt comprimai, crete presiunea intrapulmonar i aerul este eliminat- expiraia. 2. prin ridicarea cutiei toracice i contracia diafragmului, capacitatea toracic se mrete. Ca urmare scade presiunea intrapulmonar, plmnii fiind obligai s urmeze pereii cutiei toracice i aerul din afar intr- inspiraia. Concluzii. Muchii respiratori toracici i diafragmul, prin contraciile i relaxrile lor, modific ritmic cele trei axe ale cavitii toracice. Aceasta nu este ns suficient dect cu meninerea tensiunii superficiale ntre cele dou pleure. Modificarea ntr-un sens i n cellalt a volumului toracic modific presiunea intraalveolar i determin inspiraia i expiraia. esutul elastic din parenchimul pulmonar are rolul de a facilita distensia plmnului n inspiraie i revenirea la forma iniial n expiraie. Identificarea prezenei bioxidului de carbon n aerul expirat Bioxidul de carbon care rezult din catabolizarea substanelor organice este transportat pe cale sanguin de la esuturi la plmni, difuzeaz n aerul alveolar, iar de aici se elimin o dat cu aerul expirat. Demonstrarea prezenei CO2 n aerul expirat se poate face astfel: Material necesar: Cilindrii gradai, pahare Berzelius, eprubete , ap de var, hidroxid de sodiu n soluie de 20%, fenolftalein, tub de sticl sau pipet, acid clorhidric n soluie de 10%. Mod de lucru. Cu o pipet se introduc ntr-o eprubet curat circa 10 ml de ap de var limpede. Se barboteaz n apa de var, printr-un tub de sticl sau prin pipet aer de la sfritul unor expiraii profunde. Se constat c apa de var se tulbur foarte repede. Se las n repaus i se observ c se depune la fund un precipitat alb de carbonat de calciu. Se adaug acid clorhidric pictur cu pictur; soluia se limpezete deoarece precipitatul se dizolv. n acest timp se degaj bule de gaze) CaCO3 + H2O Ca(OH)2+ CO2 CO2 CaCO3 + 2HCl CaCl2 + H2CO3 H2O se experimenteaz n acelai mod folosind n locul Ca(OH)2 hidroxid de sodiu sau potasiu. n acest caz nu se observ un precipitat i de aceea pentru a putea urmri efectiv CO2 eliminat se adaug n soluia alcalin un indicator (fenolftalein). Soluia se coloreaz n rou caracteristic, ns dup ce ncepe barbotarea aerului expirat, se observ c ea se decoloreaz n mod treptat devenind pn la urm incolor, fapt care denot c acidul carbonic eliminat a neutralizat tot hidroxidul. Supapele lui Mller. Din experiena urmtoare ne vom da seama mai bine c aerul expirat conine cu mult mai mult dioxid de carbon dect aerul inspirat. Ca i n cazul precedent, demonstraia supapelor lui Mller se efectueaz o dat cu studiul schimbului de gaze la nivel pulmonar. Supapele lui Mller sunt formate din dou flacoane de sticl alb n care se pune ap de var i se astup cu dopuri, prin care trec dopuri de sticl sau de plastic ce se monteaz ca n figur. Se vede c din cele dou tuburi care strbat fiecare dop, unul nu ajunge n lichid, iar cellalt ptrunde n apa de var pn aproape la fund. Tubul scurt al unui flacon i tubul lung al celuilalt sunt unite printr-un tub n T legat cu tub de cauciuc. Braul liber al tubului n Supapele lui Mller prin T se prelungete cu un tub de cauciuc prin care se demonstreaz care subiectul respir. Pe traseul tubului n prezena CO2 n aerul T se pun dou cleme care au rol de supape. expirat: Unul din flacoane (1) servete ca vas 1 i 2 vase spltoare; spltor pentru aerul inspirat din camer 3.- cleme 4. tubul prin care se care trecnd prin vas se purific de CO2 iar inspir i se expir cellalt (2) ca vas spltor pentru reinerea CO2 coninut n aerul expirat.. n timpul inspiraiei se nchide clema dinspre vasul 2, iar n timpul expiraiei se nchide clema dinspre vasul 1. Subiectul face cteva inspiraii i expiraii 114

obinuite prin supapele lui Mller. Elevii vor observa c dup 2- 3 respiraii apa de var din flaconul 2, prin care trece aerul expirat, se tulbur mult mai mult n comparaie cu apa de var din flaconul 1, care rmne limpede sau se tulbur foarte puin. Concluzia care se desprinde este c aerul expirat conine mai mult CO2 dect aerul inspirat.

Punerea n eviden a consumului de oxigen Materiale necesare: o crati cu capacitatea de 2 l, un cilindru gradat de 1- 2 l (eventual o sticl oarecare cu gtul larg), trei tuburi de cauciuc, un vas absorbant (poate fi nlocuit cu un borcan pentru chimicale), un tub Y sau n T (din sticl Experien prin care sau metal), soluie de NaOH 40%, pense se demonstreaz pentru rufe. consumul de oxigen Mod de lucru : n respiraie: 1. cilindru gradat Se face instalaia ca n figur. 2. tub de cauciuc Se introduce soluia de NaOH n vasul pentru inspiraie absorbant. Se aplic bine dopul i se 3. tub n y verific etaneitatea sa i a tuburilor de 4. tub de cauciuc sticl sau de metal care trec prin el. se fac pentru expiraie 5.vas cu NaOH legturile tuburilor de cauciuc cu vasul pentru absoria CO2 absorbant prin intermediul tubului Y. Se 6. tub de cauciuc aplic pensele pentru dirijarea circuitului pentru nchiderea nchis al aerului. Se pune ap n crati. Se circuitului introduc capetele libere ale tuburilor de 7.pens nazal 8. castron cu ap cauciuc n cilindrul gradat pn aproape de mijloc, apoi se potrivete gura acestuia n ap i este meninut n poziie vertical de un ajutor, astfel nct s nu comunice cu atmosfera. Subiectul trebuie s manevreze pensele de pe tuburile de cauciuc i s respire, numai pe gur, prin tubul Y, n care scop i se va pensa nasul. I se atrage atenia c n timpul inspiraiei trebuie s asigure venirea aerului din cilindru prin deschiderea pensei de pe tubul de cauciuc direct (2), iar n expiraie nchide pensa (2) i trebuie s foreze trecerea aerului prin vasul absorbant al bioxidului de carbon i s-l pompeze n cilindrul gradat, deschiznd cealalt pens. Se va acorda o atenie deosebit manevrrii penselor spre a evita aspirarea de soluie caustic (NaOH) din vasul absorbant i spre a se asigura reinerea n aceast soluie a ntregii cantiti de CO2 expirat. Se constat c subiectul simte n scurt timp c nu mai are aer. Atunci (la sfritul unei expiraii) se nchid ambele pense de pe tuburile de cauciuc i se scoate din gura subiectului tubul Y. Se observ c n timpul experienei a ptruns o cantitate oarecare de ap n cilindru, care a nlocuit partea de aer consumat. Faptul este adevrat dac s-a avut grij ca volumele de aer inspirat i expirat s fie aproximativ egale. Se demonstreaz c partea din aer consumat era reprezentat de oxigen. Ridicnd ncet cilindrul i introducnd n el o lumnare aprins se constat c flacra acesteia plete i se stinge imediat din cauza lipsei de oxigen, care a fost consumat. Demonstraia consumului de oxigen se mai poate face simplu i concludent dup cum urmeaz: Se ia un cilindru de 1 l. Se lipete n lungul lui o band de hrtie care a fost, n prealabil, gradat. Se parafineaz hrtia. Se pregtete un dop de plut avnd diametrul ceva mai mic dect al gurii cilindrului. Se lipete pe dop, la mijloc, un capt de lumnare. Se ia un castron cu ap i se aeaz pe suprafaa acesteia dopul cu lumnarea aprins. Se acoper cu cilindrul gradat i se observ c, dup cteva secunde, flacra plete i apoi se stinge. n acest timp (circa20- 30 s) se urc ap n interiorul cilindrului. Volumul de ap ne indic volumul de aer nlocuit.

115

Msurarea capacitii vitale Sub denumirea de capacitate vital se nelege cantitatea maxim de aer pe care o poate expira o persoan care la sfritul unei inspiraii forate. Msurtoarea capacitii vitale se face cu spirometrul. Material necesar. Spirometru, alcool. Mod de lucru: Se efectueaz o inspiraie forat, apoi aerul se elimin printr-o expiraie forat n tubul spirometrului. Valoarea acestui volum de aer reprezint capacitatea vital care, care nsumeaz aerul respirator curent + aerul inspirator de rezerv sau complementar + aerul expirator de rezerv. Capacitatea vital variaz n funcie de talie, grad de dezvoltare al aparatului respirator, sex, antrenamentul realizat prin exerciii de respiraie. Determinarea sa reprezint un real interes practic deoarece rezistena organismului la diferite activiti fizice i n special cele sportive este condiionat de o capacitate vital normal. Dm mai jos o formul, aceea a fiziologului West, dup care se calculeaz capacitatea vital standard (C.V.S.) pe care trebuie s o aib o persoan n funcie de nlime i sex: - pentru femei C.V. = I x 20; - pentru brbai C.V.= I x 25 - pentru atlei C.V. = I x 29 n care I este nlimea n centimetri. Valoarea standard se compar apoi cu valoarea real obinut prin determinarea capacitii vitale la aparat i se apreciaz n procente la sut plusul sau minusul fa de acest standard, de exemplu: o persoan de sex Spirometru : feminin are nlimea de 160 cm. Capacitatea vital 1- vas cu ap standard este de 160 x 20 =3200 cm3. Dac n urma 2- clopot metalic determinrii capacitii vitale reale (C.V.R.) s-au 3- rigl gradat 4- contragreutate pentru echilibrarea clopotului gsit 3000 cm3 nseamn c exist o diferen de 200 5- tub de cauciuc care se adapteaz la cavitatea cm3 ntre C.V.S. i C.V.R.(3200 3000= 200) . prin bucal calcul se stabilete n procente % minusul de 6,6% 6- indicator

116

CLASA A XII-a

Genetic
Modelarea structurii dublu catenare a ADN-ului Materiale necesare: carton sau placaj, trus de traforaj, echer, compas, patru culori diferite, srm de cupru sau aluminiu de diferite grosimi, ace cu gmlie. Mod de lucru: 1. Desenarea pe carton sau pe placaj a modelului adeninei, guaninei, timinei i citozinei dimensiunea 5-10 cm (5 cm pt. pirimidine i 10 cm pentru. purine). fig. 1 2. Decuparea modelului fiecrei baze azotate i colorarea modelelor: A-galben, T-negru, G-rou, Calbastru. Se realizeaz circa 30-40 de copii pentru fiecare baz azotat. 3. Desenarea modelului dezoxiribozei sub forma unui hexagon ca cel din figur, cu stabilirea poziiei carbonului 3 i 5 (care apare ca o prelungire a hexagonului la unul din capetele sale ascuite). Efectuarea a 30-40 de copii. 4. Desenarea unui ptrat cu latura de 3-4 cm, reprezentnd radicalul fosforic. Efectuarea a 30-40 de copii.

10 cm purin

5cm pirimidin

4cm dezoxiriboz

2cm radical fosforic

Fig. 1. Modelarea componentelor ADN-ului

5. Folosind fig. 1, stabilii o succesiune de baze azotate pentru una din catenele dublei elice ( de exemplu A,G,C,T,T,A,A,G,C,T,T,A,A,T,A,T,T,A,G,G,G,C,C,A,A). 6. Pe principiul complementaritii, stabilii cu ajutorul decupajelor bazelor azotate succesiunea de pe catena complementar ( n cazul de mai sus ea va fi: T,C,G,A,A,T,T,C,G,A,A,T,T,A,T,A,A,T,C,C,C,G,G,T,T). 7. Legai bazele azotate la cele dou catene complementare prin puni de hidrogen (duble ntre A i T i triple ntre C i G), folosindu-v de srme mai groase dect cele folosite la legturile dintre celelalte componente. Srmele le prindei n modelul bazelor azotate la locul potrivit, aa cum se vede n fig. 2 8. Stabilii legtura dintre modelul bazei azotate i acela al dezoxiribozei cu ajutorul srmei, fcnd un orificiu n cele dou modele la locul potrivit conform Fig.2

117

9. Stabilii legtura dintre modelul dezoxiribozei i acela al radicalului fosforic, urmrind regula ca la o caten aceast legtur s fie de la carbonul 5 la carbonul 3, iar la catena complementar de la 3 la 5, sugernd sensul opus al celor dou catene complementare.

Toate materialele indicate, ca i soluiile tehnice folosite sunt variabile n funcie de ingeniozitatea i posibilitile fiecrui experimentator.

118

Evidenierea cromatinei sexuale La mamifere, inclusiv la om, determinismul cromozomial al sexului este de tip Drosophila: XX pt. femel i XY pt. mascul. Cromozomul Y a suferit n cursul evoluiei mamifer4lor o continu degradare genetic, heterocromatinizndu-se. El poart doar gena sau genele care determin transformarea progonadei n testicul. Rezult c femela mamiferelor, avnd doi cromozomi X, ar prezenta un numr mai mare de gene dect sexul mascul. Aceast situaie ar fi incompatibil cu existena normal a speciilor. Din aceast cauz i la femela mamiferelor unul din cei doi cromozomi X a suferit o heterocromatinizare (inactivare genic). Acest cromozom X, heterocromatic apare n nucleul interfazic sub forma unui corpuscul oval sau triunghiular lipit de membrana intern a nucleului i este numit cromatin sexual sau corpuscul Barr. Materiale necesare: soluie carmin-acetic, ac spatulat pstrat n condiii aseptice, lame i lamele microscopice, hrtie de filtru. Mod de lucru. Se colecteaz mucoasa bucal prin raclarea peretelui lateral al cavitii bucale cu un ac spatulat steril sau cu o lam microscopic steril, ndeprtnd primul strat de celule epiteliale (care sunt descuamate, moarte) i prelevnd un strat de celule vii. Se pune materialul pe o lam microscopic mpreun cu o pictur de carmin-acetic. Se aplic lamela. Se las 2-3 minute. Se ndeprteaz excesul de carmin, se apas puternic peste lamel cu degetul mare, pentru etalarea celulelor. Nucleul apare colorat n rou. n cazurile normale, la femeie se identific n interiorul nucleului un corpuscul mic, mai puternic colorat dect restul nucleului, care este corpusculul Barr. La brbai nu se identific cromatina sexual n cazurile normale

Leucocit polimorfonuclear cu corpuscul Barr

119

Tipuri particulare de cromozomi n afara tipurilor obinuite de cromozomi au mai fost descrise i unele tipuri particulare. Astfel n ovocitele de triton, deci n meioz, au fost descrii cromozomii plumoi sau n perie de sticl de lamp care prezint o ax central din care pornesc bucle I laterale. De asemenea, n glandele salivare de la II larvele musculiei de oet ( Drosophila melanogaster) au fost descrii cromozomii uriai IV sau politeni (fig.1) n celulele obinuite ale corpului drosofilei se afl cte 8 cromozomi care formeaz patru perechi (I-IV); 3 perechi de autozomi i o pereche de heterozomi (cromozomi ai sexului) (XX la femel, la mascul) fig. 2 Evidenierea cromozomilor uriai Materiale necesare: lame i lamele microscopice, ac spatulat, soluie carmin-acetic, lam de spirt, hrtie de filtru, larve de drosofil n stadiul III (nainte de mpupare). Mod de lucru: Se folosesc larve n stadiul III de Drosophila sau Chironomide, femele, care sunt mai mari dect cele mascule. Glandele salivare sunt plasate n partea anterioar a corpului larvei legate de armtura bucal, care apare ca un punct negru prin transparena tegumentului. Cu ajutorul acului spatulat se face o incizie napoia acestui punct negru. Printr-o Fig.3 micare de smulgere se detaeaz aceast parte anterioar a corpului care se pune ntr-o pictur de carmin-acetic n care st circa 3 minute. Se aplic lamela, apoi hrtia de filtru. Se preseaz puternic cu degetul mare pentru etalare. Se nltur excesul de carmin i apoi se examineaz la microscop. Cele mai frumoase imagini se obin la cromozomii uriai de la Chironomus (fig. 3) Se recomand aceast insect ntruct larvele sale pot fi uor procurate. La nivelul cromozomului uria de Chironomus se pot evidenia foarte uor i pufele (dezlnri locale ale cromozomului la nivelul crora se sintetizeaz ARN-ul ribozomal)
III

Fig.1

Fig.2

XY

120

Structura i morfologia cromozomilor. Cariotipul La debutul diviziunii cromozomul prezint dou subuniti structurale longitudinale numite cromatide, libere pe toat lungimea lor, fiind unite numai la nivelul unei constricii primare numit centromer. Unii cromozomi pot prezenta i constricii secundare la nivelul crora se organizeaz nucleolul la sfritul diviziunii, ca i formaiuni heterocromatice, la un Fig.1 capt, numite satelii. (fig.1) Cea mai constant morfologie a cromozomilor se ntlnete n metafaz, cnd acetia ating cel mai nalt grad de contractare-condensare. n interiorul cromatidei se afl dou filamente spiralate numite cromoneme rsucite reciproc helicoidal i prezentnd din loc n loc ngrori ca nite mrgele numite cromomere. Dup poziia centromerului (fig. 2), cromozomul poate fi: - metacentric (centromerul este situat la mijlocul cromozomului, rezultnd dou metacentric brae egale); submetacentric - submetacentric (centromerul este deplasat fa de centru, rezultnd dou acrocentric brae inegale); telocentric acrocentric (centromerul este deplasat Fig.2 spre un capt al cromozomului rezultnd un bra foarte lung i unul foarte scurt, izodiametric); - telocentric (centromerul este plasat pe captul cromozomului acesta avnd un singur bra) Materiale necesare: preparate citologice cu cromozomi de Allium i Mesocricetus sau oricare alt plant sau animal, microscop binocular cu obiectiv de imersie (x 90), ulei de imersie, micrometru ocular i micrometru obiectiv, camer clar, foarfece, past de lipit, rigl de msurat. Mod de lucru: -Se vizualizeaz lamele microscopice cu preparate la obiectiv 40. Se aleg cele mai bune metafaze (fr cromozomi suprapui, dar cu cromatide bine ndeprtate, n urma aciunii colchicinei). Se vizualizeaz la obiectiv de imersie. -Se numr cromozomii, se deseneaz la camera clar cromozomii din placa metafazic aleas. -Se msoar cromozomii cu ajutorul micrometrului ocular dup o prealabil stabilire a echivalenei ntre scala micrometrului ocular i a micrometrului obiectiv (de exemplu 10 gradaii din micrometrul ocular intr n 8 gradaii ale micrometrului obiectiv). Dac nu dispunem de micrometru ocular i obiectiv cromozomii se msoar pe desenul realizat la camera clar cu ajutorul riglei de msurat, asemenea operaie servindu-ne numai pentru mperecherea cromozomilor, nu ns i pentru aprecierea dimensiunii cromozomilor. -Dup desenarea la camera clar i msurarea fiecrui cromozom se stabilete tipul morfologic pentru fiecare cromozom i se scrie lng el, folosind simbolurile: m = metacentric; sm submetacentric; t telocentric; ac acrocentric; st subtelocentric. -Se detaeaz fiecare cromozom din placa metafazic desenat; folosind foarfecele, decuparea fcndu-se cu pstrarea unui spaiu de civa milimetrii de jur mprejurul cromozomului. -Se mperecheaz cromozomii, mai nti, considernd lungimea total a lor i poziia centromerului i mai apoi, considernd raportul dintre brae pentru a stabili poziia precis a centromerului. -Se lipesc cromozomii n perechi dup dimensiune i morfologie, alctuindu-se astfel cariotipul. Studiul cariotipic al speciilor ne ajut s evideniem nrudirea sau nenrudirea dintre ele, precum i modificrile 121

care au loc la nivelul materialului genetic sub influena diferiilor factori nocivi. De asemenea, ne ajut s elucidm cile pe care a mers evoluia speciei considerate. Studiul cariotipului uman , ne ajut la stabilirea cu certitudine a naturii unor maladii ereditare care au la baz modificri n numrul i structura cromozomilor (trisomia 21 un cromozom suplimentar la perechea 21, sindroame cu defecte fizice i psihice remarcabile sindrom Klinefelter, sindrom Turner).

Cariotip normal

Fig.3

Cariotip patologic

122

Cariotipul uman a fost descoperit n 1956 de Tjia i Lenon cu ajutorul ocului hipotonic. Cariotipul este aranjarea dup mrime i morfologie a cromozomilor. Cromozomii umani sunt repartizai n 7 grupe A-G la care se adaug perechea de cromozomi de sex. Grupele cuprind cromozomii astfel: A1 -7; B4-5; C6-12; D13-15; E16-18; F1920; G21-22; perechea de sex.

123

CARIOTIPUL UMAN

124

Studiul aciunii unor ageni mutageni asupra materialului genetic la plante i la animale Materiale necesare: dotare standard pentru aplicarea metodei Feulgen sau Giemsa, substane chimice mutagene (dietilsulfat, etilmetansulfonat etc.), pesticide, raticide, diveri ageni poluani (SO2), colchicin n concentraie de pn la 2%, acionnd statmochinetic i determinnd poliploidizarea. Mod de lucru: Se folosesc soluii apoase 0,5-1% de dietilsulfat, procurate de la laboratoarele de chimie sau genetic. Se administreaz animalelor de laborator n hran sau se trateaz radicelele de ceap sau seminele de secar, gru, orz, etc. cu asemenea soluii, n diluii succesive: 0,001, 0,01, 0,1, 1%, timp de 1-24 de ore. Dup tratarea radicelelor cu substana mutagen, acestea se scot din fiolele n care s-a realizat tratamentul i dup o atent splare cu ap de robinet i ap distilat sunt folosite n efectuarea preparatelor citologice, n care se evideniaz modificri n structura materialului genetic i n comportamentul cromozomilor n mitoz. Cele mai comune sunt fragmentarea cromozomilor, picnoza, apariia de cromozomi inelari, dispunerea radiar a cromozomilor n metafaz i apariia de cromozomi retardatari ntrziai (care nu migreaz spre poli n anafaz sau telofaz). Pe seama cromozomilor ntrziai pot aprea la sfritul diviziunii micronuclei pe lng nucleii-fii obinuii. Determinarea gradului de ploidie la plante Prin metode directe: Se fac preparate citologice i se numr direct cromozomii n metafaz. Prin metode indirecte: a. Macroscopice. S-a constatat c exist o corelaie direct ntre gradul de ploidie i anumite caractere morfologice sau productive, astfel: - culoarea frunzelor este mai nchis la plantele poliploide dect la cele diploide corespunztoare; - greutatea rdcinii i concentraia de zahr la sfecla triploid i tetraploid sunt mai mari dect la plantele diploide; - formele autotetraploide au un numr mai mic de fructe i de semine per plant dect formele diploide corespunztoare. b. Microscopice. Exist o corelaie direct ntre numrul de cloroplaste i numrul de stomate, pe de o parte, i gradul de ploidie pe de alt parte. Numrul de stomate pe unitatea foliar este mai mic la formele poliploide comparativ cu cele diploide corespunztoare. Mod de lucru: Cu ajutorul unei pense se desprinde epiderma inferioar a frunzelor de sfecl de zahr diploid, triploid i tetraploid, fixate n alcool acetic 3:1. Pe o lam microscopic se pune epidrma ntr-o pictur de soluie de iod n iodur de potasiu, care coloreaz amidonul din cloroplaste, evideniindu-le mai bine pe acestea. Se aplic lamela. Se numr cloroplastele i se msoar cu ajutorul micrometrului ocular diametrul lung al stomatelor la 50-100 de stomate.

125

Exerciii de caracterizare genetic Stabilire spectrului genetic individual (experimentatorul trebuie s-i cunoasc bunicii i eventual strbunicii pot culege date de la prini , bunici, rude). Materiale necesare: o coal de hrtie, compas, echer, rigl. Se iau n considerare urmtoarele caractere individuale: 1. Culoarea ochilor: culoarea albastr este recesiv fa de alte culori 2. Culoarea prului: pr blond recesiv fa de cel nchis; pr rou recesiv fa de culorile mai nchise 3. Direcia de orientare a prului: vrtej n direcia mersului acelor de ceasornic dominant fa de vrtejul n sens invers 4. Pr cre dominant fa de cel neted 5. Prezena prului pe segmentul mijlociu al degetelor (altele dect arttorul) dominant fa de absena prului 6. Daltonismul (confuzia culorilor) recesiv fa de vederea normal 7. Chelia prematur sau regulat este motenit ca un caracter dominant care se manifest n jurul vrstei de 34 de ani. Caracterul nu se manifest dect extrem de rar la femei (este un caracter limitat de sex). Elevii pot s aprecieze situaia lor, judecnd pe cea a prinilor, dat fiind dominana caracterului. 8. Lobul aderent al urechii este recesiv fa de cel liber sau pendul 9. Posibilitatea de a da degetul mare pe spate dominant fa de condiia opus cu ligamente strnse 10. Capacitatea de a degusta unele substane precum tioureea sau feniltiocarbamida este dominant fa de incapacitatea de a degusta aceste substane 11. Prezena gropiei n obraz este dominant fa de absena acesteia 12. Vrful vduvei prul de pe frunte extins n centrul ei ca un triunghi dominant fa de linia dreapt a prului pe frunte 13. Capacitatea de a ndoi limba, astfel nct marginile laterale s formeze un U este dominant fa de incapacitatea de ndoi astfel limba. Mod de lucru: Se alctuiete o hart privind caracteristicile individuale ereditare ale fiecrui individ dup modelul din figur.

126

Bibliografie selectiv

01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20

Anghel I. i col.-Practicum de Biologie (vol.I i II), Societatea de tiine Biologice; Bucureti, 1989 Andrei M., Anghel I, Popescu I., Stoica E.- Lucrri practice de Biologie vegetal, EDP, Bucureti,1981 Ciurchea M., Ciolac Russu A., Ion I- Metodica predrii tiinelor biologice,EDP, Bucureti, 1983 Ceuca T., Valenciuc N., Popescu A- Zoologia vertebratelor, EDP, Bucureti, 1983 Gavril L, Toma N- Biologie, Manual pentru clasa a IX-a, Editura Economica Preuniversitaria, Bucureti, 2004 Cotuna D-Fiziologie, Editura Mirton, Timioara, 1998 Grinescu I.-Botanica, Editura tiinific i Enciclopedic, Bucureti, 1985 Kereke A. Biologie pentru grupele de performan, Editura Dacia Educaional, Cluj Napoca 2003 Lepi I.- Protozoologie, Editura Academiei R.S.R., 1965 Marinescu J., Drgnescu C.- Microbiologia produselor alimentare, EDP R.A., Bucureti, 1990 Matic Z, Drbanu C.- Lucrri practice de zoologia nevertebratelor, EDP, Bucureti, 1965 Matic Z. i col .- Zoologia nevertebratelor, EDP, Bucureti, 1983 Olteanu F. i col .- Trus de Biologie pentru elevi- liceu, ntreprinderea Didactica, 1981 Prvu C.- Universul Plantelor-mic enciclopedie, Editura Enciclopedic, Bucureti, 1997 Prvu C.-ndrumar pentru cunoaterea naturii, EDP, Bucureti, 1981 Popovici L., Moruzi C.,Toma I.- Atlas Botanic , EDP R.A., Bucureti, 1994 Raicu P-Genetica, EDP, Bucureti, 1992 Stoica M., Mihilescu I.-Lucrri practice de Anatomie i Fiziologie animal, EDP, Bucureti, 1974 Tavernier R. et. col.-Biologie-Geologie, Bordas, Paris, 1988 Wilkinson R. -Compendiu de Biologie, Editura ALL Educaional (traducere de Vasilescu S.). Bucureti, 1999

127

CUPRINS Argument .. Introducere Cuvnt limba englez..... Biologie clasa a IX-a- Metode de sterilizare utilizate n microbiologie... Tipuri morfologice de baz la bacterii.... Studiul mediilor de cultur utilizate n bacteriologie... Tehnici de nsmnare utilizate n microbiologie Metode de examinare a microorganismelor la microscop Structura celulei bacteriene Celula animal i celula vegetal... Tipuri de celule eucariote Observaii asupra structurii unor alge unicelulare i pluricelulare Comparaie ntre celula vegetal i animal.. Bacterii, alge verzi, fotosinteza... Cloroplastele i micrile citoplasmatice n celulele frunzelor de ciuma apelor... Evidenierea plasmalemei i a tonoplasmei... Morfologia cromoplastelor. Incluziuni ergastice.. Epiderma i formaiunile epidermice. esuturi mecanice sau de susinere Osmoza.. Tehnica evidenierii cromozomilor. Studiul meiozei la plante.. Structura organelor vegetative-observaii. Structura frunzei.. Structura organelor vegetative- lucrri practice de microscopie Structura primar a rdcinii de Ranunculus repens... Structura primar a tulpinii de Ranunculus repens... Structura intern a frunzei de ridiche-Raphanus sp.. Organe de reproducere la plante Observaii microscopice asupra unor protozoare. Spongieri... Cnidari................................................................................................................................................... Viermi ... Molute . Artropode . Echinoderme.. BIOLOGIE CLASA A X- A..... Experiene de evideniere, msurare i nregistrare a excitabilitii neuromusculare. Excitabilitatea muscular. Tipuri de aparat locomotor la nevertebrate i la vertebrate notul i echilibrul pstrvului n ap. Separarea pigmenilor asimilatori prin metoda cromatografiei pe hrtie.. Influena factorilor externi asupra fotosintezei. Influena intensitii luminii Influena compoziiei spectrale a luminii Influena temperaturii asupra fotosintezei. Evidenierea necesitii existenei pigmenilor asimilatori... Punerea n eviden a fotosintezei prin metoda bulelor Evidena oxigenului eliminat n fotosintez Asimilaia CO2 n fotosintez... 128 3 5 6 7 9 11 12 14 17 18 19 20 22 23 24 25 25 26 28 29 30 31 32 33 34 36 36 37 38 39 40 45 46 48 55 60 66 67 67 68 69 71 73 74 74 74 75 75 75 76 76

Evidenierea cilor de conducere a apei n corpul plantelor Evidenierea rolului forei de suciune a frunzelor n conducerea apei n . Micrile plantelor Evidenierea geotropismului tulpinilor i rdcinilor... Micri prin imbibiie... Evidenierea respiraiei celulare.. Evidenierea respiraiei tisulare.. Disecii la vertebrate. Disecia la petii osoi (Perca fluviatilis bibanul................................................................................. Disecia la broasca de lac ( Rana ridibunda)........................................................................................ Disecia la oprla cenuie (Lacerta agilis).. Disecia la porumbel (Columba livia)... Disecia la iepurele de cas (Oryctolagus cuniculus)... ANATOMIA I FIZIOLOGIA OMULUI-CLASA A XI-A.. Morfologia, structura i compoziia chimic a oaselor.. Structura microscopic a osului.. Studiul carbohidrailor. Studiul enzimelor.. Evidenierea lecitinei din ou. Evidenierea vitaminei C.. Animale de experien.. Analiza actului reflex Oboseala sinaptic Fiziologia muchilor: preparate neuromusculare, contracia muscular... Legile reflexelor. ANALIZATORI.. Analizatorul cutanat. Analizatorul olfactiv. Olfactometria. Analizatorul optic.. Acomodarea ochiului Reflexul pupilar pentru dozarea intensitii luminii. Acomodarea pentru vederea obiectelor situate la distane diferite. Punerea n eviden a petei galbene i a punctului orb. Culori complementare.. Percepia micrii.. Micarea consecutiv FUNCII DE NUTRIIE Aciunea digestiv a amilazei salivare Stomacul Emulsionarea grsimilor cu ajutorul bilei.. Sngele... Recoltarea sngelui. Observarea elementelor figurate. Frotiul de snge Determinarea grupelor sanguine. Observaia circulaiei capilare. Structura inimii Observarea activitii cardiace Respiraia... Identificarea prezenei bioxidului de carbon n aerul expirat.. Punerea n eviden a consumului de oxigen.. Msurarea capacitii vitale CLASA A XII-a.. Modelarea structurii dublu catenare a ADN-ului.. Evidenierea cromatinei sexuale.. 129

75 76 77 77 78 79 79 80 80 81 82 83 84 87 87 88 89 90 91 91 92 92 93 94 96 97 97 98 99 99 100 100 101 102 102 103 103 104 104 105 105 106 106 107 109 110 111 112 114 115 116 117 117 119

Tipuri particulare de cromozomi Evidenierea cromozomilor uriai... Structura i morfologia cromozomilor. Cariotipul Studiul aciunii unor ageni mutageni asupra materialului genetic la plante i la animale.. Determinarea gradului de ploidie la plante Exerciii de caracterizare genetic.. Bibliografie ... Cuprins .

120 120 121 124 125 126 127 128

130