南京医科大学附属南京第一医院 HLA-B27 检测操作程序 编 号：Sop-CL-FCM-002

中心实验室
Central Laboratory Of Nanjing First 日 期：2009-3-05
Hospital Affiliated To Nanjing 版 本：第一版
Medical University 第 1页 　共 2 页

一、目的：
保证流式细胞仪检测外周血淋巴细胞上 HLA-B27 表达量检验的工作质量，

旨在保证 HLA-B27 检测的正确操作程序和控制检测结果的精确度。

二、修改程序：

本 标 准 操 作 程 序 的 改 动 ， 可 由 任 一 使 用 本 SOP 的 工 作 人 员 提 出 ， 并

报经下述人员批准签字：质量主管、授权人（科主任），方可改动。
三、适用范围：

外周血中 T 淋巴细胞 HLA-B27 表达量检测。

四、 溯源：

Anti-HLA-B27 Kit(美国 BD Biosciences 公司；CAT:340183)。

五、实验原理：

HLA-B27 属于 1 型 MHC 基因。基本上表达在机体所有有核细胞上，特别是淋

巴细胞表面有丰富的含量。使用荧光定量标准微球，校正 HLA-B27 实验条件后，
测定样本中 T 淋巴细胞 HLA-B27 表达水平。若 HLA-B27 表达水平大于标准微球设
定 MARK，则为阳性结果；若 HLA-B27 表达水平低于标准微球设定 MARK，则为阴
性结果。

六、主要试剂：

Anti-HLA-B27 Kit(美国 BD Biosciences 公司；CAT:340183)，

其中包括：1、Anti-HLA-B27-FITC/CD3-PE
 2、HLA-B27 Calibration beads

3、FACS Lysing Solution

七、实验操作：

1、标本采集：使用 EDTA-K2 抗凝真空采血管，抽取静脉血 2ml。

2、染色和固定细胞：

（1） 标本管编号 A，取一只流式专用管 A1。

（2） A1 管加入 Anti-HLA-B27-FITC/CD3-PE 30ul。

（3） A1 管中再加入全血 50Ul，混均。

（4） 置室温，避光孵育 15min。

（5） 加入 FACSLysing 溶血液 2.0ml，置室温，避光孵育 10min。

（6） 300g 离心 5min，弃上清液。

（7） PBS 洗涤细胞两次，300g 离心 5min，弃上清液。

（8） 1%多聚甲醛 0.5mL。

3、上机检测；分析结果；打印实验报告。

八、参考值：

HLA-B27:阴性

九、临床意义：

HLA-B27 抗原表达与强直性脊椎炎发病具有高度的疾病相关性。在强直
性脊椎炎患者中，95%以上个体是 HLA-B27 抗原阳性；而在健康人群中
HLA-B27 抗原表达阳性者不足 7%。HLA-B27 阳性个体的该病相对危险率达
300%以上。现今发现与 HLA-B27 高度相关的疾病主要有：强直性脊椎炎、莱
特病（包括腹泻、多发性关节炎、尿道炎的综合症）和急性葡膜炎。最近研
究还认为与心肌炎等心脏病有关。
十、质量控制：
1、先用 HLA-B27 标准微球校准仪器，设定正确的“MARK”。

2、收集 T 细胞太少（少于 500 个）、碎片污染太多（超过 10%）、门中 T 淋

巴细胞不纯（小于 90%）可能引起实验结果不正确。
3、整个实验过程中注意避光、避免抗体、血液粘附于试管壁，否则细胞不
能被染色或染色不充分，而影响检验结果。
4、溶血时间不宜过长，否则会引进白细胞破碎。