Functiile acizilor nucleici

Acizii nucleici se gasesc in toate organismele vii, si au rol in procesele vitale normale sau patologice. ARN indeplineste functii importane in sinteza proteica in timp ce ADN are rol deosebit in ereditate si variabilitate. Rolul ARN-ului:

Intervine in sinteza proteica prin reprezentatii sai( Arn mesager,are rol in prima etapa a sintezei proteice denumita TRANSCRIPTIE , el finde cel care copiaza ianformatia de pe ADN, iar in cea de'a doua etapa denumita translatie, intervin si celelalte doua tipuri de ARN, respectiv, ARN de transfer care transporta amioacizii la locul sintezei proteice si ARN ribozomal care intra in consitutia RIBOZOMILOR ).

ADN are 3 functii importante:

1. 2.

ADN particeipa la variabilitate, in sensul ca poate prezenta procese de recombinare si de mutatie . Functia heterocatalitica in sensul ca informatia din ADN e copiata de ARN

3. Functia autocatalitica (functia care are la baza procesul de replicare

dupa modelul semiconservativ al ADN-ului. Replicarea ADN-ului, este un proces interfazic care are loc in stadiul S al interfazei ciclului celular.In procesul de replicare participa un complex multienzimatic , procesul find initiat prin separarea celor doua monocatene de ADN, dupa modelul semiconservativ semanator deschiderii unui fermuar. Separarea monocatenelor se realizeaza sub actiunea ADN helicazei care utilizeaza energia furnizata de ATP. Helicaza actioneaqza in pct specifice , precis localizate denumite ORNICINII DE REPLICARE. La nivelul originilor de replicare exista ARN cu adenina-timina care find legate prin 2 punti de hidrogen sunt denaturate fiziologic mai usor favorizand separarea monocatenelor . Acest tip de ADN cu adenina si timina in centrul originii de replicare este flancat de ADN cu citozina guanina mai stabil. Genomul eucariotelor prezinta o dimensiune mai mare si ADN find asociat cu proteine prezinte o viteaza de replicare mai mica decat la procariote unde ADN este liber neasociat cu proteinele.

La eucariote replicare ADN-ului ar incepe de la un capat al moleculei si s-ar realiza progresiv catre capatul opus ar fi necesare circa 500 de ore pana cand intreg ADN ar fi replicat, insa durata replicarii ADN la eucariote este de circa 6-8 ore ceea ce inseamna ca genomul eucariotelor prezinta mai multe origini de replicare.Secventa corespunzatoare unei origini de replicare poarta denumirea de REPLICONI, la nivelul fiecarui replicon, replicare se realizeaza in ambele sensuri avanseaza progresiv iar mai tarziu repliconii se unesc pana cand ADN este total replicat sau duplicat. Complexul proteic inplicat in replicare poarta denumirea de REPLISOM:

4. HELICAZE 5. Polimeraze 6. GIRAZE(topoizomeraze) 7. PRIMAZE(ARN) 8. LIGAZE 9. Proteine de replicare de tip A(RPA) numite si proteine SSB Topoizomerazele au rolul de a relaxa molecula de ADN si de a realiza sectiuni prin ruperea legaturilor fosfodiesterice, la nivelul monocatenei dupa care resudeaza monocatena afectata. Exista doua tipuri de topoizomeraze :topoizomeraze de tip I care sectioneaza legaturile unei catene si topoizomeraze de tip II(tetramer) care realizeaza rupturi simultane la nivelul ambelor catene . Proteinele SSB( tip A) sunt proteine cae se ataseaza pe monocatenele ADN si au rolul de a masca bazele complementare nepremitand realizare leg de H intre ele, impiedicand astfel... reimperecherea bazelor complementare adica mentinand monocatenele separate. Polimeraze ( alfa beta eta gama epsilon). ADN polimeraza alfa este cea care adauga prima nucleotida dupa care intevin ADN polimerazele delta si epsilon care continua sinteza de ADN . Polimeraza alfa beta are rol in repararea ADN iar polimeraza gama are rol in replicare ADN mitocondrial. Polimerazele la catena nou sintetizata nucleotide si prezinta doua caracteristici ele detin 2 caracteristici importante :

1. Polimerazele intotdeauna aditioneaza nucleotide numai in directia 5 3 2.Polimerazele nu sunt cele care incep sinteza unei noi catene ci ele doar alungesc noua catena prin adaugarea de nucleotide la hidroxilul carbonului 3 al secventei deja existenta pe noua catena secventa denumita amorsa sau primer Primaza sintetizeaza primerul( o secventa oligonucleotidica de doua pana la 10 nucleotide de ARN ) intervine ADN polimeraza alfa care aditioneaza 20-30 de nucleotide la primer iar apoi intervine ADN polimeraza delta care continua sinteza, mai tarziu primrul este distrus prin hidroliza enzimatica si este inlocuit cu AND, deci in mare am reprezentat acest complex multiproteic cu cele mai importante enzime care intervin in replicare. Replicarea este procesul prin care dintr'o molecula de ARN rezulta 2 molecule identice intre ele si cu molecula initiala fiecare dintre cele doua molecule prezentand o catena vechecatena care mai poarta denumirea de matrita, sablon sau tipar si o catena nou sintetizata. Schematic procesul replicarii se reprezinta sub forma literei Y, structura pe care o mai denumim si furca de replicare. Procesul de replicare nu se realizeaza sincron pe ambele catene deoarece polimeraza actioneaza numai in directia 53iar catenele sunt antiparalele. Sinteza ADN pe cele doua catene se realizeaza diferit si mai exact pe catena conducatoare(avansata sau directoare) cu directia 53 sinteza se face direct in sensul de actiune a polimerazei pe catena decalata(intarziata, succesoare) sinteza se realizeaza pe fragmente denumite fragmente OKAZAKI, sinteza catenei conducatoare necesita un singur PRIMER in timp ce sinteza catenei decalate necesita cate un PRIMER pt fiecare fragment OKAZAKI . Ligaza este enzima care uneste fragmentele OKAZAKI astupand spatiile sau golurile de pe catena decalata .

Etapele replicarii ADN

10. Separare monocatenelor de ADN sub actiunea HELICAZEI

11. Mentinerea minicatenelor separate sub actiunea SSB-urilor 12. Sinteza ADN-ului pe cele doua catene, respectiv pe catena conducatoare sinteza continua in directia 53, pe catena decalata sinteza este discontinua pe fragmente OKAZAKI unite in final de LIGAZA . 13. Rasucirea cele doua monocatene( una matrita si una nou creata) Experimentul MESELSOHN SI SYAHL.

ESCHERICHIA COLI NH4 CL , Cs CL A fost crescuta bacteria ESCHERICHIA COLI pe mai multe generaii pe un mediu de NH4 Cl care prezenta in loc de azotul 14, izotopul greu al acesteia Azot15, s-a extras ADN cu azot 14 si 15 si a fost supus centrifgarii. Prin sedimentare pentru ADN cu azot 14 s-a obitinut o banda situata deasupra tubului de centrifuga iar pentru AND cu azot 15 s-a obtinut o baza catre fundul tubului de centrifuga, dupa ce ESCHERICHIA COLI a fost crescuta mai multe generatii Nh4CL cu azot 15 a fost transferata pe Nh4Cl cu azot 14 si s-a analizat ADN dupa prima generatie , dupa a doua .. a 3-a ....... Dupa prima generatie de 90 de minute s-a extras ADN s-a ultracentrifugat in gradient de CsCl si prin analiza s-a observat aparitia unei benzi intermediare.Dupa prima generatie s-a obtinut 100% ADN hibrid dupa a 2-a generatie s-a obtinut 50% ADN hibrid si 50% ADN cu azot 14, dupa a 3-a generatie sa obtinur 75% ADN cu azot 14 si 25% ADN hibrid.

Denaturare si renaturarea ADN

La temperaturi crescute de 80 90 de grade sau sub actiunea unor solutii saline concentrate se rup leg de H dintre bazele azotate si se separa cele doua monocatene rezultand ADN denaturat . Daca monocatenele sunt supuse unei raciri lente ele au capacitatea de a reforma legaturile de H dintre baze si de a reconstitui structura de dublu helix. Temperatura de denaturare variaza in functie de dif specii si este dependenta in sensul de proportionala cu procentul de legaturi triple, adica ADN cu Adenina citozina denatureaza mai greu decat ADN cu guanina timina.Daca monocatenele sunt racite brusc atunci ele

raman separate si pot sa se uneasca tot prin complementaritate cu alta monocatena de ADN sau ARN formand hibrizi moleculari . Hibridizarea reprezinta reactia dintre monocatena de ADN si o sonda marcata fosforescenta , sonda rep o secventa de ADN obtinuta in mod artificial. Izolarea si purificare ADN si ARN , in izolarea ADN-ului: Obtinerea materialului biologic liza celulelor pentru eliberarea acizilor nucleici purificare si concentrarea acizilor nucleici obinuti inepartarea componentelor celulare nedorite( resturi celulare, proteine, etc) Reactia polomerizarii in lant PCN este reactia de copiere si amplificare a informatiei ADN Denaturare si amplificare ADN Alinierea primerilor la monocatena de ADN Elongarea noii catene

Secventierea ADN
Aceasta metoda ajuta la identificarea tipului si succesiunii bazelor azotate din doua baze de ADN .???? Secventierea automata. Prin secventierea automata fragmentul de interes(ADN) este marcat florescent si apoi este supus secventierii. Secventiatorul este prevazut cun fascicul laser care excita fiecare molecula de ADN si transforma valorile fluorescente intro succesiune de baze azotate