FACULTAD DE TECNOLOGA MEDICA

Tcnicas parasitolgicas

Diagnstico de laboratorio de las Enteroparasitosis

Caractersticas generales de las Enteroparasitosis

Principales protozoosis y helmintiasis intestinales

Ciclos biolgicos tipo: a) Entamoeba histolytica b) Taenia saginata c) Enterobius vermicularis d) Anquilostmidos Principios y utilidad de las tcnicas de estudio parasitolgico de heces. El examen coproparasitario

Elementos no parasitarios de las heces

El mtodo de Graham

ENTEROPARASITOSIS. Caractersticas generales

Tracto digest humano Numerosos parsitos: Protozoos Helmintos COMENSALES PATOGENOS Infestacin Va digestiva (mayora de casos) Va cutnea Formas infestantes QUISTES / OOQUISTES Protozoos HUEVOS LARVAS Helmintos Tenias, Triquina

ENTEROPARASITOSIS. Caractersticas generales

Mecanismos transmisin Infestacin por FECALISMO Infestacin por CARNIVORISMO Infestacin s/ ciclo ANO-MANO-BOCA

Infestacin CUTANEA
Mecanismos transmisin Relacin con ciclo biolgico

INFESTACION POR FECALISMO

Caracterstico de parsitos de ciclo biolgico MONOXENO PROTOZOOS a) PARASITOS b) COMENSALES

Entamoeba histolytica Giardia lamblia Isospora belli Cryptosporidium spp. Balantidium coli

Entamoeba coli Endolimax nana Iodamoeba butschlii Chilomastix mesnili Blsatocystis hominis Entamoeba polecki Enterocytozoon spp.

HELMINTOS Asacaris lumbricoides Trichuris trichiura Hymenolepis nana

INFESTACION POR FECALISMO

Medio Externo
Contam suelo
Formas infestantes

Ingestin Quistes Ooquistes Huevos Larvas

Hosp Infestado

(=)

Hosp Susceptible

Diagnstico de laboratorio de las Enteroparasitosis

IMPORTANTE:

1) Seleccin tcnica(s) s/ casos

Grupo o especies de parsitos Fase evolutiva

2) Examen de varias muestras (3) por paciente

 Evidenciacin de parsitos que: Viven en el tracto digestivo Realizan su trnsito al m ext a travs del mismo I) No todas las tcnicas son adecuadas para todos los parsitos: Importante conocer ciertos datos: Procedencia geogrfica del enfermo Resumen HC Resultados otras pruebas/anlisis Informacin relativa a trattos recientes II) Un ex aislado con result negativo no tiene ningn valor eliminatorio III) La muestra debe ser examinada rpidamente

El examen PARASITOLOGICO DE HECES forma parte del ESTUDIO COPROLOGICO, mas general, que informa sobre: Aspecto macroscpico de las heces Consistencia / agua / Veloc trnsito..... Color (calidad/cantidad flujo biliar)

Presencia de sangre, mucus ......

Aspecto microscpico restos alimenticios Presencia mucus, hemates, leucos, cls epiteliales ...... Presencia de parsitos (trofoz, quistes, huevos, larvas....) Elementos micticos, su relacin o proporcin con bacterias

El examen COPROPARASITARIO no resulta de utilidad cuando:

La eliminacin de los parsitos no se realiza por el intestino

La puesta de huevos no se lleva a cabo en el intestino

Los parsitos son inmaduros o estriles, y no dan lugar a formas de diseminacin

Parasitismo por un nico individuo (esp dioicas) Parasitismo reciente (fase adulta no desarrollada)

 1) Examen directo de una pequea porcin de heces frescas

2) Examen despus de aplicar un mtodo de concentracin 3) Examen de extensiones o preparaciones permanentes Examen directo Observacin microscpica minuciosa de toda la preparacin Objetivo seco dbil (10 x) Objetivo seco fuerte (25-40 x) Habitualmente no se emplea obj de inmersin Importante: No diluir demasiado las muestras

TECNICAS DEL EXAMEN COPROPARASITARIO Examen directo

SF Lugol

Movilidad Tincin (Trofozotos) Vacuolas Ncleos

TECNICAS DEL EXAMEN COPROPARASITARIO 2) Examen post-concentracin

Reunin en un pequeo vol los elementos parasitarios inicialmente dispersos en una gran masa de heces

Numerosos mtodos
Ninguno evidencia todos los tipos de parsitos, (cada uno tiene sus indicaciones precisas) Mtodos fsicos Mtodos difsicos

Por sedimentacin
Por flotacin

Empleo de 2 fases no miscibles Agua // Eter o Acetato etilo

METODOS DE CONCENTRACION
Mtodos fsicos

Dilucin minuciosa heces en lquido o solucin de densidad: Inferior a la de los parsitos (Tcnicas de sedimentacin) Superior (Tcnicas de flotacin)
Ventajas: Realizacin muy simple Precisan poco material Inconvenientes: Procesos largos Exigen mucha manipulacin No aplicables a series grandes de muestras

En ciertos casos se puede acelerar x centrifugacin suave

TECNICAS DE CONCENTRACION. Mt de sedimentacin simple Triturar las heces (10-20 g) en agua de grifo Poner la dil en una probeta de 250-500 cc y rellenar (agua grifo) Dejar reposar aprox 1 h
Deshechar sobrenadante Resuspender en agua de grifo Dejar sedimentar 45 min

Deshechar sobrenadante
Repetir esta op varias veces, hasta que el sobrenadante quede transparente Recoger y examinar el mat sedimentado. Hacer tres tomas: Superficie Media altura Fondo

TECNICAS DE CONCENTRACION. Mt de flotacin Caractersticas a considerar:

Densidad sol empleada > Dens parsitos Concentracin en superficie Importante: Manipular rpidamente Impreg huevos operculados Sediment Alteracin morfol huevos (Identificacin)
Sulfato de cinz Pelcula superficial

Sedimento

METODOS DE CONCENTRACION Mtodos fsicos. Ejemplos Tcnicas de sedimentacin Mtodo de sedimentacin simple Mtodo de Faust e Ingalls Sedimentacin en columna alta Tcnicas de flotacin Mtodo de Fulleborn Mtodo de Willis (flotacin en salmuera) Mtodo de Faust (flotacin en sulfato de zinc)

METODOS DE CONCENTRACION

Mtodos difsicos

Derivados todos del mt de Telemann (1.908)

Empleo de dos fases no-miscibles

Fase acuosa (sol. formaldehido)

Fase ter o disolv de lpidos (Acetato de etilo) Los elementos fecales y los parsitos se localizan en la fase acuosa o en la interfase agua-ter, en funcin de una caracterstica, el balance hidrfilo-lipfilo

METODOS DE CONCENTRACION Mtodos difsicos Realizacin :

Dilucin de las heces en agua (o el la fase acuosa)

Adicin y emulsin con el ter ( o acet de etilo)

Eter
Restos Lp disueltos

Centrifugacin suave
Algunos ejemplos: Mtodo de Telemann
Formalina

Mtodo de Rivas
Mtodo de Ritchie Mtodo de Blagg, Schloegel, Mansoer y Khalaf
Sedimento Parsitos

Acetato de etilo Restos fecales y grasa

Formalina

Sedimento (Parsitos)

12

EXAMENES DIRECTOS PARA DIAGNOSTICO DE ENTEROPARASITOSIS Tcnicas del Examen Coproparasitario. Resumen 1.- Observacin macroscpica 2.- Observacin microscpica 2.1.- Observacin microscpica de preparaciones en fresco (entre porta y cubre) Muestras de heces directamente en SF o Lugol Muestras de tcnicas de concentracin 2.2.- Observacin microscpica de preparaciones teidas, permanentes o no, que permiten la conservacin y la observacin cuidadosa y detallada de los parsitos

EXAMENES DIRECTOS PARA DIAGNOSTICO DE ENTEROPARASITOSIS TINCIONES ACIDO-ALCOHOL RESISTENTES Utilidad: Demostracin de ooquistes de Cryptosporidium spp. Evidenciacin de Cyclospora spp. Aplicables a frotis de heces (tb ciertos concentrados) Tcnicas: Las mas empleadas son la de KINYOUN y una modificacin de la ZIEHL-NEELSEN

TINCION DE HEMATOXILINA-FERRICA
Utilidad: Observacin detallada de quistes, pero s/t de trofozotos de protozoos. Si se realiza montaje, buena coleccin permanente Exige una realizacin cuidadosa,

COLORACIN DE KINYOUN (Cryptosporidium // Cyclospora) Fijacin frotis: Metanol 30 seg Tincin : 5 min (frio) con sol de Fuscina bsica Fusc bsica Fenol Etanol (95%) A dest 4g 8g 90 ml 100 ml

Lavado a) Etanol 50%: 3-5 min b) Agua corriente Decoloracin: Acido sulfrico 1%: 2 min

Contracoloracin: Azul metileno Loeffler: 1-2 min

Azul de metileno Alcohol 95% KOH 0,01% 0,3 g 30 ml 100 ml

Elementos no parasitarios de las heces

RESTOS ALIMENTICIOS

Tejido conjuntivo Fibras musculares estradas (carne) Att tamao / ngulos Grasas neutras Glbulos refringentes tamao variable Acidos grasos Agujas finas Almidn Crudo: Granos en capas concntricas Cls reserva amilcea (s/ procedencia) Celulosa Digerible: Masas celulsicas (cls reserva) No digerible: Traquedas, pelos vegetales, polen etc
CRISTALES

Origen alimentario (oxalato de calcio) Endgeno (Ox calcio, fosfato amnico-magnsico, Charcott-Leyden) Medicamentos

Tipos de anlisis
Tcnicas coproparasitolgicas. Tcnicas en parasitosis sanguneas y tisulares. Tcnicas de anlisis de contenido duodenal. Tcnicas de anlisis de flujo vaginal.

Obtencin de la muestra fecal

La muestra emitida espontneamente es la muestra ptima para el examen coprolgico. Tambin se pueden usar muestras obtenidas mediante:

Rectoscopa Tacto rectal Aspirado rectal

Muestras inadecuadas

Las que se han mantenido por ms de un da a temperatura ambiente. Las obtenidas despus de un estudio radiogrfico del tubo digestivo en el que se utiliz bario. Las que presentan gran cantidad de algunas sustancias que se han ingerido con fines teraputicos (v.gr. Aceite o antidiarreicos
con bismuto).

Laxantes

No han de utilizarse de rutina. En caso de usarse, debe preferirse el sulfato de sodio. En trminos generales, nunca, deben emplearse laxantes aceitosos ya que se eliminan en forma de gotas, las cuales interfieren con el anlisis microscpico.

N de muestras

Lo ptimo son tres muestras en das diferentes, esto debido a la eliminacin irregular de quistes o larvas de algunos parsitos, en vista de lo cual una sola muestra no tiene un 100% de sensibilidad.

Conservacin

En caso de que la muestra no pueda ser enviada inmediatamente al laboratorio, debe emplearse algn mtodo de conservacin para garantizar la calidad del diagnstico.

Refrigeracin

Cuando la conservacin se debe hacer por unas horas o hasta un da. Colocar el frasco con la muestra en el refrigerador, nunca en el congelador.

Preparaciones selladas

Se coloca la muestra entre porta y cubreobjetos y se sella el borde del cubreobjetos con vaselina, Barniz de uas o Blsamo de Canad. Se obtiene as una preparacin que puede durar unas horas.

Formalina

Se mezclan ca. 3 g de heces por cada 10 ml de formalina al 10%. Se preservan bien los huevecillos de helmintos y los quistes de protozoarios.

Reactivo MIF

Contiene merthiolate, yodo y formalina. Se prepara as:

250 ml de agua destilada 200 ml de merthiolate 1/100 25 ml de formalina 40% 5 ml de glicerina

Al

momento de usar se mezclan 23,5 ml de esta solucin con 1,5 ml de lugol concentrado.

Reactivo MIF

Se adicionan un gramo de heces frescas por cada 10 ml de solucin MIF.

Reactivo PVA

Alcohol polivinlico. Es una resina que se presenta como un polvo blanco que tiene los nombres comerciales de Elvanol o Gelvatol.

Reactivo PVA

Preparacin en portaobjetos. 3 gotas de fijador con un poco de materia fecal, y se deja secar. Se puede guardar hasta dos meses para coloracin posterior.

Reactivo PVA

Conservacin en frasco. Se mezcla una parte de heces con tres partes de fijador y se conserva tapado.

Anlisis

Observacin directa

Observacin directa en salina. Observacin directa en lugol. Frotis grueso de Kato-Katz. Tcnica de Stoll-Hausher

Tinciones

Hematoxilina frrica de Heindenhain. Coloracin tricrmica. Ziehl-Nielsen modificado Tincin de Koster. Wrigth Giemsa

Tcnicas de concentracin

Tcnicas de concentracin
Existen dos tipos:
Sedimentacin

Flotacin

Sedimentacin

Mtodo de Ritchie(formol-ter) Mtodo de Telemann Tcnica Saf Tcnica de Burrows(PAF)

Flotacin

Tcnica de Sheather(azcar).

Tcnica de Faust(sulfato de zinc).

Tcnica de Willis-Molloy(cloruro de sodio).

Tcnicas de anlisis de contenido duodenal

Anlisis de contenido duodenal

Mtodo de la cpsula de Beal.

Aspirado duodenal.

Cpsula de Beal

Se consigue bajo el nombre comercial de Entero-Test . Consiste en una cpsula de gelatina con un hilo, donde uno de sus extremos se fija a la mejilla del paciente, y el otro arrollado en la cpsula, se traga, se deja dos o tres horas y luego se retira.

Anlisis de fluido vaginal

Anlisis de fluido vaginal

Se realiza para buscar Trichomonas vaginalis, la

muestra se toma con aplicador con algodn

y se realiza la observacin directa

microscpica en solucin salina.

Parasitosis Sanguneos y Tisulares

Gota gruesa

Se realiza con sangre y consiste en una

preparacin gruesa en portaobjetos de la

muestra, la cual se fija y se tie para su observacin microscpica.

Raspado de piel

Cuando se presentan lceras sospechosas de infecciones por protozoarios, como leishmaniasis, se toma la muestra directamente de la lesin raspndola fuertemente con un bistur, luego el material se extiende en un portaobjetos para su fijacin, tincin y observacin.

Xenodiagnstico

Consiste en usar cultivos axnicos de vectores de la enfermedad que sean de un sitio geogrfico diferente para que se alimenten del husped y luego revisarlos para buscar el parsito.