PEMERIKSAAN MIKROSKOPIS DAN CARA PEWARNAAN

IDENTIFIKASI BAKTERIOLOGIS
SPECIMEN
BAKTERI MAKROMOLEKUL

Preparat langsung

Botol/med. transpor

Ag

Ab

DNA

Mikroskopis

Isolasi

MIKROSKOP
JENIS-JENIS MIKROSKOP 1. Mikroskop Cahaya 2. Mikroskop lapangan gelap (Dark field microscope) 3. Mikroskop fluoresens (Flourescence microscope) 4. Mikroskop elektron

1. Mikroskop Cahaya
Lensa: okuler, obyektif, tubus meja preparat, diafragma, mengatur sinar kondensor sumber Cahaya : listrik atau matahari kaca cembung : foluskan cahaya.

2. Mikroskop lapangan gelap (Dark field microscope)

Melihat pergerakan bakteri. Alternatif mikroskop cahaya : kondensornya diturunkan srendah mungkin diafragma dikecilkan sekecil mungkin. Dilakukan dlm kamar gelap

3. Mikroskop fluoresens (Flourescence microscope)

Preparat fluoresens, Tes imuno-fluoresens. Sumber Cahaya: sinar ultra-violet. Dilakukan dlm kamar gelap

4. Mikroskop elektron

Melihat benda lebih kecil dari bakteri: virus dll Melihat struktur sel bakteri dll Pembesaran >> tinggi dari mikroskop biasa/cahaya.

PEMBUATAN PREPARAT
Diperlukan: prep basah 1. Kaca benda atau kaca obyek atau kaca khusus 2. Kaca penutup 3. Sengkelit 4. Suspensi bakteri dlm NaCl 0.9% atau specimen cair 5. Vaselin Diperlukan: preparat hapus 1. Kaca benda 2. Specimen atau suspensi bakteri 3. Sengkelit 4. Lampu spiritus atau Bunsen

PREPARAT BASAH
a. Tetes gantung

1. Kaca penutup diatas meja 2. Satu-dua tetes specimen cair di tengah kaca 3. 4. 5.
penutup Vaselin pada keempat sudut kaca benda Letakkan kaca benda dengan cekungannya menghadap ke bawah. Lihat di bawah mikroskop lapangan gelap.

PREPARAT BASAH
b. Praparat basah ditutup kaca

penutup
1. Teteskan specimen cair di atas
kaca benda 2. Tutuplah dengan kaca penutup 3. Mikroskop pembesaran 10 kali 10 - 45 kali. 4. Untuk lebih jelas: diafragma ditutup dan kondensor diturunkan

Cara buat preparat u/ pewarnaan

1. Ambil specimen dgn ujung sengkelit,
sapukan merata pd perm. kaca benda bersih 2. Keringkan udara terbuka/chy mthr 3. Fiksasi dgn nyala api 3 kali, gunanya; u/ melekatkan pd kaca benda, u/ memudahkan zat warna masuk & berikatan dgn sitoplasma, mematikan bakteri pd specimen.

PREPARAT HAPUS

Pembuatan Preparat Hapus Ambil specimen dengan sengkelit sapukan pd

Manfaat fiksasi preparat:

kaca benda Keringkan preparat: udara terbuka atau pada udara Fiksasi preparat: liwatkan kali pada nyala api.

Merekatkan preparat pada kaca benda, Memudahkan zat warna masuk dan berikatan dgn sitoplasma, Mematikan bakteri pada specimen.

Pewarnaan sederhana
Bahan:karbol fuchin 10% a/ Mt Blue. Cara: 1. Buat preparat kering & fiksasi 2. Letakkan kaca benda di atas rak 3. Tungi dgn zat warna; kf a/ Mt Blue 4. Biarkan 1 menit 5. Buang & bilas & keringkan dgn kertas saring 6. Lihat di mikroskop 10x100 Hasil: hanya morfologi & cara berklp bakteri & warna sesuai zat warna yg digunakan

A. PEWARNAAN SERDERHANA

Bahan pewarnaan Cara mengerjakan yang dibutuhkan: 1. Buat preparat,

Larutan karbol
fuchsin 10% (air fuchsin) atau larutan methylen blue.

2.
3.

4.
5.

keringkan dan fiksasi Letakkan di atas rak preparat Tuangi zat warna 1 menit. Buang zat warnanya, bilas & keringkan. Mikroskop: 10 X 100.

Pewarnaan negatif
Bahan : cairan luka & tinta gambar Cara: 1.Letakkan 2 sengkelit cairan luka pd salah satu ujung kaca benda 2. Letakkan tinta cina 1 tetes didekatnya pelan campur keduanya 3. Kaca benda 45o tarik ke blkg & dorong cepat ke depan dgn rata 4. Keringkan & fiksasi nyala api 3 kali 5. Mikroskop 10x100 Hasil: morfologi & cara berklp bakteri ruang kosong dgn latar blkg hitam

B. PEWARNAAN NEGATIF (Morfologi, besar)

Bahan yang dibutuhkan Cairan luka Tinta gambar Cara mengerjakan Letakkan cairan luka pada ujung kaca benda pertama. Letakkan tinta cina dekat specimen campur Letakkan kacabenda kedua 45o di didepan campuran tarik ke belakang dorong ke depan Keringkan & fiksasi Mikroskop pembesaran 10 100

Pewarnaan burri-gins
Bahan: bakteri kapsul dlm nacl, tinta cina a/ air fuchin. Cara: 1. Buat p. negatif dr bakteri berkapsul. 2. Keringkan & fiksasi 3. Warnai dgn air fuchin 4. Biarkan 1 mnt & bilas air 5. Keringkan kertas saring lihat mikroskop 10x100 Hasil: dilhat kapsul ruang kosong, bakteri warna merah muda dan latar blkg hitam

C. PEWARNAAN BURRY-GINS (Kapsul)

Bahan yang diperlukan 1. Suspensi bakteri
dalam NaCl 0,9%.
Cara mengerjakan 1. Buat pewarnaan negatif 2. Keringkan dan fiksasi. 3. Letakkan pada rak

2. Tinta cina 3. Larutan air

fuchsin

4. 5.

pewarnaan, dan tuangi air fuchsin. Biarkan satu menit buang zat warna bilas & keringkan Mikroskop pembesaran 10 100.

Pewarnaan gram
Bahan: kristal violet 0.5%, lugol, alkohol 96%, air fuchin a/ saframin (kontras) Cara: 1. Preparat tipis rata dr specimen pd kaca benda keringkan & fiksasi 2. Tuangi kristal violet diamkan 1-2 mnt 3. Cuci air mengalir 4. Tetesi lugol 30 detik 5. Buang lugol & bilas air mengalir 6. Lunturkan alkohol 96% cuci air mengalir 7. Tetesi kontras 2 mnt 8. Buang dan cuci air mengalir 9. Periksa mikropkop Hasil: gram positif ungu tua dan gram negatif merah muda

Pewarnaan tahan asam

ZN: bahan karbol fuchin, asam alkohol 3% Mt Blue a/ malachite green 0.5% Cara: 1. Preparat hapus sputum kering & fiksasi 2. Tuangi karbol fuchin 3. Panasi sp menguap dinginkan & panasi lagi 3 kali dlm 10 mnt 4. Cuci air mengalir 5. Lunturkan asam alkohol 3% (H2SO4 1%u/ lepra) 6. Cuci air mengalir 7. Zat kontras mt blue a/ mal green 1 mnt 8. Cuci air mengalir 9. Kering dgn kertas isap lihat dgn oil emersi Hasil : BTA batang merah, negatif BTA biru latar blkg biru

E. PEWARNAAN TAHAN ASAM E.1. Pewarnaan Ziehl-Neelsen

Bahan yang dibutuhkan
Lautan karbol fuchsin Asam alcohol 3 % Larutan methylen blue atau malachite green 0,5%. 3. Panasi menguap, dinginkan dan panasi. (3 kali:10 menit). 4. Cuci dengan air mengalir. 5. Lunturkan: n asam alcohol 3% atau H2SO4 1% (lepra). 6. Bilas & Beri zat warna kontras: larutan methylen blue 0,5%: 1 7. Bilas & keringkan . 8. Mikroskop lensa emersi.

Cara mengerajakan
1. 2. Buat preparat sputum, keringkan dan fiksasi. Letakkan pada rak dan tuangi larutan karbol fuchsin