BAB III METODE PENELITIAN

3.1 Waktu dan Tempat Praktikum Pemeriksaan Vibrio Cholera dilaksanakan secara bertahap. Adapun waktu dan tempat pelaksanaan praktikum dilakukan sebagai berikut : 3.1.1 Pembuatan Media TSI, TCBS, SIM, dan SCA Hari, tanggal Waktu Tempat : Rabu, 5 Juni 2013 : Pukul 09.00 12.20 WITA : Laboratorium Bakteriologi Jurusan Analis Kesehatan Poltekkes Denpasar 3.1.2 Pengambilan Sampel Rektal Swab dan Penanaman ke Media TCBS Hari, tanggal Waktu Tempat : Rabu, 12 Juni 2013 : Pukul 09.00 12.20 WITA : Laboratorium Bakteriologi Jurusan Analis Kesehatan Poltekkes Denpasar 3.1.3 Pengamatan Secara Makroskopis Hari, tanggal Waktu Tempat :: Pukul 09.00 12.20 WITA : Laboratorium Bakteriologi Jurusan Analis Kesehatan Poltekkes Denpasar 3.2 Alat dan Bahan 3.2.1 Alat 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Neraca analitik Spatel Gelas beker Erlenmeyer Batang pengaduk Gelas ukur Api bunsen

8. 9.

Plate Kapas berlemak

10. Pinset 11. Inkubator 12. Lidi kapas 13. Ose dissposible 3.2.2 Bahan 1. Sampel Rektal Swab 2. Aquadest steril 3.2.3 Reagen/Media 1. Media TCBS 2. TCBS 3. SIM 4. SCA 3.3 Langkah Kerja A. Pembuatan Media TCBS 1. Alat dan bahan disiapkan 2. Ditimbang bubuk media TCBS sebanyak 17,6 g dengan menggunakan neraca analitik 3. Dilarutkan dengan aquadest steril sebanyak 200 ml di dalam erlenmeyer sambil diaduk hingga homogen. 4. Ditutup dengan kapas berlemak lalu dipanaskan dengan kompor listrik hingga media larut sempurna. 5. Didinginkan media hingga suhu 40 o C. 6. Dituangkan media ke dalam plate. 7. Media siap digunakan. 8. Jika tidak segera digunakan, dibungkus dengan kertas, kemudian disimpan dalam lenari es.

B. Pembuatan Media TSI 1. Alat dan bahan yang diperlukan disiapkan 2. Ditimbang bubuk TSI sebanyak 3,9 gram dengan menggunakan neraca analitik 3. Dilarutkan dengan aquadest sebanyak 60 ml di dalam erlenmeyer sambil diaduk 4. Ditutup erlenmeyer dengan kapas berlemak lalu dipanaskan pada kompor listrik sampai media larut sempurna 5. Disiapkan 10 tabung dan masing masing tabung dimasukkan sebanyak 5 ml menggunakan pipet ukur 6. Media disterilisasi dengan autoclave pada suhu 121 0C selama 15 menit 7. Media diletakkan pada posisi slant, dibiarkan hingga memadat 8. Media siap digunakan C. Pembuatan Media SIM 1. Alat dan bahan yang diperlukan disiapkan 2. Ditimbang bubuk SIM sebanyak 1,8 gram dengan menggunakan neraca analitik 3. Dilarutkan dengan aquadest sebanyak 60 ml di dalam erlenmeyer sambil diaduk 4. Ditutup erlenmeyer dengan kapas berlemak lalu dipanaskan pada kompor listrik sampai media larut sempurna 5. Disiapkan 10 tabung reaksi dan masing masing tabung dimasukkan sebanyak 5 ml menggunakan pipet ukur 6. Media disterilisasi dengan autoclave pada suhu 121 0C selama 15 menit 7. Media siap digunakan D. Pembuatan Media SCA 1. Alat dan bahan yang diperlukan disiapkan

2. Ditimbang bubuk SCA sebanyak 1,8 gram dengan menggunakan neraca analitik 3. Dilarutkan dengan aquadest sebanyak 60 ml di dalam erlenmeyer sambil diaduk 4. Ditutup erlenmeyer dengan kapas berlemak lalu dipanaskan pada kompor listrik sampai media larut sempurna 5. Disiapkan 10 tabung reaksi dan masing masing tabung dimasukkan sebanyak 5 ml menggunakan pipet ukur 6. Media disterilisasi dengan autoclave pada suhu 121 0C selama 15 menit 7. Media siap digunakan E. Pengambilan Sampel Orang yang hendak diambil swabnya disuruh bersimpuh dan menungging di atas tempat tidur. Tangan kiri petugas pengambil swab membuka lubang anus dan tangan kanan memasukkan lidi kapas steril ke dalam lubang anus dengan cara memutar sampai 2-3 cm. Setelah itu lidi kapas ke luar sambil tetap diputar searah jarum jam. Selanjutnya lidi kapas tadi dimasukkan dalam media carry and blair sampai terbenam ke dalam media. Apabila lidi atau tangkainya terlalu panjang, kita potong sehingga botol bisa ditutup rapat. Setelah diberi label, spesimen kita bawa ke laboratorium untuk diperiksa. F. Cara Penanaman sampel 1. Disiapkan media TCBS dengan diberi label sesuai dengan label pada sampel yang akan diperiksa. 2. Sampel (lidi kapas) pada media carry and blair diambil dengan pinset secar aseptis dan dioleskan satu titik pada media TCBS agar 3. Kemudian dari satu titik tersebut dibuat goresan 4 kuadrant menggunakan ose dissposible 4. Pengerjaan dilakukan di dekat api bunsen.

5. Media TCBS yang telah digores tadi diinkubasi pada suhu 370C selama 2x24 jam G. Pembacaan Hasil Setelah diinkubasi selama 2x24 jam pada media TCBS tidak ditumbuhi oleh koloni,hal ini menunjukkan hasil yang negative pada ketiga sampel