UNIVERSITATEA BABE-BOLYAI DIN CLUJ-NAPOCA

FACULTATEA DE CHIMIE I INGINERIE CHIMIC

CARACTERIZAREA FIZICO-CHIMIC A UNOR
STRUCTURI SUPRAMOLECULARE FORMATE DIN
COMPUI BIOLOGIC ACTIVI




TEZ DE DOCTORAT
REZUMAT


Autor,
ING. CHIM. CSABA-PL RCZ





CONDUCTOR TIINIFIC
PROF. UNIV. DR. MARIA TOMOAIA-COTIEL







Cluj-Napoca
2011
2

CUPRINS
INTRODUCERE.............................................................................................................. 1
1. Metode i tehnici de studiu al unor structuri supramoleculare..................................... 2
1.1. Tensiunea i presiunea interfacial....................................................................... 2
1.2 Balana de film monomolecular (LBT)................................................................. 7
1.2.1 Filme insolubile de biosurfactani etalate pe suprafee lichide...................... 7
1.2.2 Izoterme de compresiune............................................................................... 8
1.2.3 Orientarea biomuleculelor la interfaa aer/ap............................................... 10
1.2.4 Compresibilitate superficial......................................................................... 12
1 1.2.5. Filme Langmuir-Blodgett ( LB).................................................................... 14
1.2.6. Echipamentul KSV 5000............................................................................. 14
1.3 Metode microscopice............................................................................................. 19
1.3.1 Microscopia electronic................................................................................ 19
1.3.1.1Microscopul electronic de transmisie (TEM).............................................. 20
1.3.1.2 Microscopia electronic de baleiaj (SEM)................................................. 23
1.3.1.3 Microscopia de for atomic (AFM)......................................................... 25
1.4 Analiza calorimetric dinamic diferenial (DSC-Differential Scanning
Calorimetry)...............................................................................................................

28
1.5 Spectroscopie UV-VIZ.......................................................................................... 29
1.6 Spectroscopia FTIR.............................................................................................. 31
1.7 Determinarea structurii prin difracie de raze X................................................... 35
1.7.1 Difracia de raze X....................................................................................... 35
1.7.2 Factorul de structur..................................................................................... 37
1.7.3 Metode de determinare a structurii cristaline................................................. 39
1.7.4 Obinerea modelului structural din difractograme pe pulberi...................... 40
1.7.4.1. Problema indexrii................................................................................ 40
1.7.4.2. Metode de obinere a modelului structural.......................................... 41
1.7.4.3 Rafinarea modelului structural prin metoda Rietveld.......................... 42
1.7.5 Aparatur i mod de lucru.............................................................................. 44
1.8 Bibliografie........................................................................................................... 48
2. Formarea i caracterizarea fizico-chimic a unor micele ale colatului de sodiu n
sisteme bifazice................................................................................................................

52
2. 1 Relaii ntre structura chimic i proprietile superficiale n sisteme care
conin colat de sodiu....................................................................................................

52
2. 2 Concentraia critic micelar a colatului de sodiu (CMC)................................... 53
2.2.1Obinerea soluiei de colat de sodiu................................................................ 53
2.2.2 Metode de msurare a concentraiei critice micelare..................................... 53
2.2.3 Determinarea concentraiei critice micelare n sisteme care conin colat de
sodiu.......................................................................................................................

54
2.3 Parametri termodinamici de micelizare a colatului de sodiu................................ 57
2.3.1 Deducerea parametrilor termodinamici......................................................... 57
2.3.2 Pregtirea subfazelor...................................................................................... 58
2.3.3 Metode de determinare a tensiunii interfaciale.............................................. 59
2.3.4 Determinarea parametrilor termodinamici ai adsorbiei colatului de sodiu
la interfaa benzen/ ap...........................................................................................

59
2.4 Concluzii................................................................................................................ 65
2.5 Bibliografie............................................................................................................ 65
3
3. Studiul cinetic al reaciei de autoasamblare n cazul unor molecule biologic active
la interfaa lichid/lichid...................................................................................................

67
3.1 Modele teoretice pentru adsorbie.......................................................................... 68
3.1.1 Cinetica de adsorbie controlat de difuzie.................................................... 68
3.1.2 Cinetica de adsorbie Langmuir..................................................................... 69
3.2 Tensiunea interfacial i adsorbia........................................................................ 70
3.2.1 Tensiuni interfaciale dinamice....................................................................... 71
3.2.2 Elaborarea unei noi ecuaii a cineticii controlate de difuzie......................... 76
3.2.3 Dinamica de adsorbie a dibucainei, tetracainei i a acidului stearic la
interfaa benzen/ap................................................................................................

80
3.3 Mecanismul de adsorbie la interfaa ulei/ap....................................................... 85
3.4 Concluzii................................................................................................................ 88
3.5 Bibliografie............................................................................................................ 89
4.Structur molecular i proprieti de monostrat : modelare i experiment.................. 92
4.1 Caracteristici de suprafa ale unor carotenoide etalate la interfaa aer/ap.
Abordare experimental i computaional.................................................................

92
4.1.1 Obinerea filmelor de carotenoide................................................................. 92
4.1.2 Calcul HMO, SCF-MO ( AM 1 i PM3 ). Momente de dipol....................... 94
4.1.2.1 Calcule HMO......................................................................................... 94
4.1.2.1.1Nivele energetice obinute.............................................................. 95
4.1.2.1.2 Gradul de delocalizare a legturilor ............................................ 97
4.1.2.1.3.Densitatea de sarcin electronic i distane internucleare............. 97
4.1.2.1.4 Momente de dipol din date HMO................................................... 99
4.1.2.2 Calcule SCF MO.................................................................................... 101
4.1.3 Descrierea izotermelor de compresie............................................................ 103
4.1.4 Geometrie molecular. mpachetare n monostrat......................................... 104
4.2 Caracterizarea fizico-chimic a unor filme de dipalmitoil fosfatidil colin
(DPPC) pe substrat de aluminiu..................................................................................

110
4.2.1 Izoterme de compresiune............................................................................... 111
4.2.2 Structuri ale fazelor din filme Langmuir de DPPC studiate prin AFM......... 113
4.2.2.1 Prepararea probelor LB.......................................................................... 113
4.2.2.2 Analiza imaginilor AFM obinute...................................................... 113
4.2.2.2.1 Filme LB de DPPC pur................................................................... 114
4.2.2.2.2 Filme mixte de DPPC i P.............................................................. 118
4.3 Concluzii................................................................................................................ 122
4.4 Bibliografie............................................................................................................ 123
5. Obinerea i caracterizarea fizico-chimic a unor structuri supramoleculare formate
din metale nobile i compui biologic activi....................................................................

126
5.1 Funcionalizarea nanoparticulelor de metale nobile.............................................. 126
5.2 Obinerea soluiilor coloidale de metale nobile..................................................... 128
5.2.1Obinerea soluiei coloidale de aur.................................................................. 128
5.2.2 Obinerea soluiei coloidale de argint............................................................ 128
5.3 Metode de caracterizare fizico-chimic a sistemelor care conin nanoparticule
de aur............................................................................................................................

129
5.3.1Caracterizarea soluiei coloidale de aur.......................................................... 130
5.3.1.1 Imagini TEM.......................................................................................... 130
5.3.1.2 Spectre UV-VIZ..................................................................................... 131
5.3.2 Interaciuni cu soluii de aminoacizi.............................................................. 131
5.3.2.1 Spectre UV-VIZ..................................................................................... 131
4
5.3.2.2 Imagini TEM.......................................................................................... 138
5.3.2.3 Imagini AFM.......................................................................................... 138
5.4 Metode fizico-chimice de caracterizare a sistemelor ce conin nanoparticule de
argint...........................................................................................................................

142
5.4.1 Caracterizarea soluiei coloidale de argint..................................................... 142
5.4.1.1 Spectre UV-VIZ..................................................................................... 142
5.4.1.2 Imagini TEM.......................................................................................... 142
5.4.2 Interaciunea solului de argint cu acidul -lipoic........................................... 143
5.4.2.1 Spectre UV-VIZ..................................................................................... 144
5.4.2.2 Imagini TEM.......................................................................................... 144
5. 5 Concluzii............................................................................................................... 145
5. 6 Bibliografie........................................................................................................... 146
6. Autoasamblarea unor proteine globulare sau fibroase............................................... 150
6.1 Proteina principal ( PAC) de rezerv provenit din celulele aleurone din
smna de orz.............................................................................................................

150
6.1.1 Despre proteina de rezerv, PAC................................................................... 150
6.1.2 Prepararea i investigarea probelor................................................................ 151
6.1.3 Caracterizarea proteinei PAC........................................................................ 152
6.2 Sisteme formate din albumin seric bovin i melatonin. Simularea unor
fenomene interfaciale de la nivelul biomembranelor..........................................

156
6.2.1 Despre melatonin i albumin seric bovin................................................ 156
6.2.2 Prepararea i caracterizarea probelor............................................................. 157
6.2.3 Interaciuni moleculare specifice care apar ntre albumin seric bovin i
melatonin..............................................................................................................

157
6.3 Morfologia colagenului i a unor medicamente anti-cancer asamblate pe
mica.............................................................................................................................

160
6.3.1 Despre colagen i medicamentele anti-cancer.............................................. 160
6.3.2 Prepararea i investigarea probelor............................................................... 162
6.3.3 Morfologia colagenul i a unor medicamente anti-cancer............................. 163
6.4 Concluzii................................................................................................................ 168
6.5 Bibliografie............................................................................................................ 170
7. Structura chimic i morfologic a granulelor de amidon........................................... 173
7.1 Caracterizare chimic............................................................................................ 173
7.2 Caracterizare structural i morfologic............................................................... 174
7.2.1 Imagistica AFM............................................................................................. 174
7.2.1.1 Prepararea probelor AFM....................................................................... 174
7.2.1.2 Imagini AFM......................................................................................... 175
7.2.2 Imagistica SEM.............................................................................................. 184
7.2.2.1 Prepararea probelor SEM....................................................................... 184
7.2.2.2 Imagini SEM.......................................................................................... 184
7.3 Concluzii................................................................................................................ 187
7.4 Bibliografie............................................................................................................ 188
8. Formarea i caracterizarea fizico-chimica a unor structuri supramoleculare formate
din compusi biologic activi..............................................................................................

190
8.1. Structuri supramoleculare formate din quercetin i -ciclodextrin................... 190
8.1.1. Obinerea complexului de incluziune format din quercetin i -
ciclodextrin ..........................................................................................................

193
8.1.1.1 Metode de preparare............................................................................... 193
8.1.2 Metode de caracterizare fizico-chimic........................................................ 195
8.1.2.1. Caracterizarea complexului de incluziune format din quercetin i -
5
ciclodextrin....................................................................................................... 197
8.1.2.1.1. Spectroscopia FTIR ..................................................................... 197
8.1.2.1.2. Calorimetria de baleiaj diferenial (DSC) ................................... 199
8.1.2.1.3 Difractometria de raze X a pulberilor............................................ 202
8.1.2.1.4 Determinarea gradului de cristalinitate.......................................... 203
8.1.2.2. Complexul de incluziune i geometria de asamblare supramolecular. 206
8.1.3. Morfologie i structur................................................................................ 209
8.1.4 Concluzii........................................................................................................ 214
8.1.5 Bibliografie.................................................................................................. 215
8.1.6. Termodinamica formrii complexului de incluziune dintre -ciclodextrin
i quercetin............................................................................................................

218
8.1.6.1.Constanta de echilibru din date spectroscopice UV-VIZ ......................
218
8.1.6.2. Estimarea experimentala a constantei de echilibru ............................. 219
8.1.6.3. Caracteristicile termodinamice ale complexarii -ciclodextrinei cu
quercetina ..........................................................................................................

232
8.1.6.4. Concluzii............................................................................................... 232
8.1.6.5. Bibliografie........................................................................................... 232
8.2. Structuri supramoleculare formate din -ciclodextrin i acid -lipoic .. 235
8.2.1. Prepararea complexului solid prin coprecipitare.......................................... 236
8.2.2. Metode de caracterizare a complexului de incluziune format din acid -
lipoic i -ciclodextrin.........................................................................................

236
8.2.2.1. Spectroscopie n infrarou................................................................... 236
8.2.2.2. Calorimetrie diferenial de baleiaj.......................................................
8.2.2.3. Difractometrie de raze X.......................................................................
237
237
8.2.3. Caracterizarea fizico-chimic a complexului de incluziune format din acid
-lipoic i -ciclodextrin.......................................................................................

237
8.2.3.1 Concluzii................................................................................................ 240
8.2.3.2 Bibliografie .......................................................................................... 240
8.2.4 Structura reelei cristaline format din complexul de incluziune, acid lipoic
i -ciclodextrin....................................................................................................

242
8.2.4.1 Complexul de incluziune, acid lipoic i -ciclodextrin........................ 242
8.2.4.2. Determinarea structurii cristaline a complexului de incluziune
-CD-LA. .........................................................................................................

243
8.2.4.2.1 Indexare i construirea modelului.................................................. 243
8.2.4.2.2 Rafinarea Rietveld a modelului structurii cristaline ..................... 244
8.2.4.3. mpachetarea molecular i legturi de hidrogen n complexul de
incluziune -CD-acid lipoic (1:1) ....................................................................

246
8.2.4.4. Modul de incluziune i conformaia oaspetelui..................................... 249
8.2.4.5. Concluzii............................................................................................... 253
8.2.4.6. Bibliografie............................................................................................ 253
9. Concluzii generale........................................................................................................ 255
10. Diseminarea rezultatelor tiinifice... 262
10.1 Lucrri tiinifice originale i cri publicate.................................................. 262
10.2 Participri la conferine i simpozioane naionale i internaionale.................... 264
Bibliografie general........................................................................................................ 266


6


INTRODUCERE

Chimia structurilor supramoleculare a fost definit foarte sugestiv de ctre un prim
lider promotor al domeniului, J ean-Marie Lehn, laureat al Premiului Nobel din anul 1987, n
felul urmtor: chimia ansamblurilor moleculare i a legturii intermoleculare. La nceput
prin compui supramoleculari s-au subneles numai structuri de tip host-guest, n zilele
noastre tot n aceast categorie se ncadreaz dispozitivele i mainile moleculare, structurile
formate prin auto-asamblare i auto-organizare i domeniul nu se poate separa clar de cel al
nanoparticulelor.
Scopul cercetrilor tiinifice prezentate n aceast lucrare de doctorat const n
captarea de informaii moleculare, studiind prin diferite metode fizico-chimice (capitolul
1) diverse sisteme supramoleculare care se formeaz prin auto-asamblarea unor molecule
biologic active (capitolele 2-9).
Att moleculele biologic active alese ct i metodele de studiu folosite au fost foarte
variate, ncercnd s acoperim domenii de interes tiinific ct mai fierbini. Astfel, n
capitolul 2 s-a studiat micelizarea n sisteme bifazice care conin colatul de sodiu i
comportamentul acestuia la interfaa lichid-lichid. Alte molecule biologic active studiate au
fost acidul stearic i anestezicele locale, dibucaina i tetracaina (capitolul 3). Studiul
autoorganizrii acestor molecule la interfaa lichid-lichid a permis deducerea mecanismului
formrii unor suprastructuri moleculare cunoscute n literatura de specialitate sub numele de
filme Gibbs. Capitolul 4 cuprinde studiul unor nanostructuri formate din carotenoide la
interfaa aer-ap i din dipalmitoil fosfatidil colin pe suport de aluminiu. n capitolul 5, prin
studiul interaciunii unor amino acizi i a acidului -lipoic cu nanoparticule de metale nobile,
cum ar fi aurul i argintul, s-a urmrit modelarea structurilor supramoleculare care pot lua
natere prin contactul materiei vii cu metale nobile. Structurile supramoleculare formate din
proteine de origin vegetal sau animal prin interaciuni cu hormoni i medicamente
anticancerigene au fost discutate n capitolul 6. Morfologa i structura agregatelor naturale
din amidon a fost studiat prin AFM n capitolul 7. Capitolul 8 este consacrat structurilor
formate prin reacii host-guest ntre - ciclodextrin i quercetin precum i ntre -
ciclodextrin i acidul -lipoic.
7
Structurile supramoleculare se formeaz fr a implica ruperi sau formri de legturi
covalente (concluzii generale, n capitolul 9). S-a folosit un numr mare (12) de metode i
tehnici fizico-chimice prezentate succint n capitolul 1 i care sunt descrise n patru cri de
specialitate la care autorul tezei de doctorat este co-autor (capitolul 10). Cercetrile originale
cuprinse n teza de doctorat sunt publicate n 15 articole, din care 13 n reviste cotate ISI
(capitolul 10).

CUVINTE CHEIE

Sisteme supramoleculare nanostructurate
Compusi biologic activi
Interfee fluide
Auto-organizare n monostrat
Auto-organizare n faz apoas
Filme subiri
8

2. FORMAREA I CARACTERIZAREA FIZICO-CHIMICA A
UNOR MICELE ALE COLATULUI DE SODIU N SISTEME
BIFAZICE

2.1 RELAII NTRE STRUCTURA CHIMIC I PROPRIETILE
SUPERFICIALE N SISTEME CARE CONIN COLAT DE SODIU

Datorit structurii moleculare (Fig.2.1.1), srurile biliare prezint o suprafa polar
cu grupri hidrofile, i anume hidroxil, i o suprafa nepolar care conine segmente de
hidrocarbur ale nucleului steroidic rigid nepolar i o grupare carboxilat. Dup cum se
observ, molecula conine trei grupri hidroxil, situate de aceeai parte a moleculei i acestea
formeaz un triunghi n partea hidrofil din nucleul steoridic. Distana dintre aceste trei
grupri OH este de 5 .


Fig. 2.1.1. Structura molecular a acidului colic (3, 7, 12-trioxicolanic)

2.2 CONCENTRAIA CRITIC MICELAR A COLATULUI DE SODIU (CMC)
2.2.3 Determinarea concentraiei critice micelare n sisteme care conin colat de
sodiu
Valorile tensiunii interfaciale (), la interfaa tetraclorur de carbon/ap, determinate
utiliznd metoda picturii atrnate [3, 4], sunt prezentate n fig.2.2.1, n funcie de logaritm
din concentraia de NaC. Intersecia celor dou poriuni liniare permite deducerea CMC.


9


Fig.2.2.1. Tensiunea interfacial () Fig.2.2.2. Tensiunea interfacial ()
msurat utiliznd metoda picturii atrnate folosind metoda Wilhemy, n funcie ca
funcie de logaritm din concentraia de NaC de concentraia molar (c) a NaC

Reprezentarea conductanei echivalente ( A) vs. c , rdcina ptrat din concentraia
de NaC, este dat n fig. 2.2.3. Dup cum se observ, la CMC apare o schimbare brusc de
pant. Turbiditatea ( ) n funcie de concentraia analitic de NaC este prezentat n figura
2.2.4. Apar dou poriuni liniare care se intersecteaz la CMC.

Fig. 2.2.3. Conductana echivalent ( A) Fig.2.2.4. Turbiditatea ( )
vs. c de NaC n funcie de concentraia molar de NaC

10


Valorile CMC deduse din datele noastre experimentale sunt prezentate n Tab. 2.2.1.
n acest tabel sunt prezentate i date din literatur. Din acestea s-au calculat maximul de
adsorbie i valorile ariei moleculare, date n Tab. 2.2.2.

Tabelul 2.2.1. Valorile CMC pentru soluii apoase de NaC
temperatura CMC Metoda
(
0
C) (mM/l)
referine
Volumului picturii 22 5,55 n[123]n]
Plcuei 20 5,31 [124]
Conductometric 23 5,18 [123]
Turbidimetric 22 4,91 [123]
Difuziei luminii 20 20 [94]
Solubilizrii 20 13 [92]
Tensiunii superficiale 20 5 [96]
Tensiunii superficiale 22 4,9 [90]
Tensiunii superficiale 22 3,25 [90]

Tabelul 2.2.2 Maximul de adsorbie i aria molecular a NaC la interfaa lichid/lichid
Interfaa
2 10
, 10

I cm mol x
m

A
0
,
2
/molecul
CCl
4
/ap 1,92 86,8
Benzen/ap 1,05 158,4


2.3 PARAMETRI TERMODINAMICI DE MICELIZARE A COLATULUI DE
SODIU
2.3.1 Deducerea parametrilor termodinamici
Tensiunea interfacial ( , mN/m) la interfaa benzen/soluie apoas de surfactant a
fost msurat n funcie de temperatur la mai multe concentraii de surfactant, n jurul
concentraiei critice micelare (CMC). Sunt obinui parametri termodinamici care
caracterizeaz att adsorbia surfactantului ct i micelizarea lui.
11

2.3.4 Determinarea parametrilor termodinamici ai adsorbiei colatului de sodiu la
interfaa benzen/ap
Din valorile tensiunii interfaciale reprezentate n funcie de temperatur i
concentraie s-a putut evalua variaia de entropie asociat cu adsorbia per mol de surfactant
(
1
/ I As , entropia de adsorbie). Aceastaare valori pozitive i scade foarte mult la m
1
<CMC.
Aceast discontinuitate la CMC, indic la 298 K o entropie de micelizare destul de mic La
temperaturi mai mari, entropia de micelizare devine negativ.
S-a constatat c geometria i hidrofilicitatea colatului au un efect considerabil
asupra proprietilor filmelor adsorbite de colat de sodiu i asupra comportamentului de
formare de micele.


12
3. STUDIUL CINETIC AL REACIEI DE AUTOASAMBLARE N
CAZUL UNOR MOLECULE BIOLOGIC ACTIVE LA INTERFAA
LICHID/LICHID

Unul dintre obiectivele acestui studiu este acela de a dezvolta un model cinetic i de
a-l aplica n cazul adsorbiei unor compui biologic activi, de exemplu dou anestezice locale
(dibucaina i tetracaina), din soluii apoase la interfaa cu benzenul pur. Un obiectiv major al
acestei cercetri const n elucidarea adsorbiei unui alt compus biologic activ, si anume un
acid gras (acidul stearic) din faza organic (benzenic) la interfaa cu apa, acidul stearic fiind
considerat un model simplu de compus lipidic.
3.2.1 Tensiuni interfaciale dinamice
Valorile tensiunii interfaciale dinamice pentru adsorbia celor dou anestezice la
interfaa benzen-ap, mpreun cu valorile de echilibru, sunt prezentate n Tab.3.1.
Tabelul 3.1. Tensiunile interfaciale dinamice (mN/m) la interfaa benzen/ap
Dibucaina Tetracaina
C
o
, mol dm
-3
Anestezice
t, min
0.001 0.005 0.010 0.001 0.005 0.010
1 31.9 28.7 26.4 32.8 31.1 29.9
2 31.1 27.1 24.3 31.9 30.5 28.9
3 30.2 25.4 22.2 31.7 29.2 27.5
4 29.7 24.6 20.8 31.3 28.7 27.0
5 29.2 23.5 20.0 31.1 28.2 26.2
6 28.8 23.1 19.2 30.8 27.7 25.9
7 28.4 22.1 18.6 30.7 27.5 25.3
8 28.1 21.9 18.2 30.5 27.2 25.1
9 27.8 21.2 17.5 30.3 27.0 24.7
10 27.5 20.9 17.3 30.1 26.7 24.5
11 27.3 20.4 16.8 30.0 26.6 24.3
12 27.0 20.1 16.6 29.9 26.4 24.0
13 26.9 19.7 16.2 29.8 26.3 23.9
14 26.6 19.4 16.0 29.6 26.1 23.8
15 26.5 19.2 15.8 29.5 26.0 23.7
26.0 18.6 15.6 29.3 25.6 23.3

13
Pentru a testa validitatea ecuaiei cinetice (3.7) [177], a fost calculat membrul stng al
ecuaiei, notat cu y, folosind valorile experimentale prezentate n Tab. 3.1, precum i
valorile lor de echilibru
e
, corespunznd la = t , i lund m mN
o
/ 7 . 34 = . Folosind
ecuaiile cinetice, s-au evaluat valorile constantelor relative de adsorbie i desorbie date n
Tab. 3.3.
Tabelul 3.3. Constantele relative deadsorbie i desorbie
Biocompusul

I /
1
k
dm
3
mol
-1
min
-1

I /
2
k
min
-1
r k
1
/k
2

mol
-1
dm
3

Dibucaina 7.250 0.1590 0.9914 45,6
Tetracaina 4.990 0.1490 0.9988 33,5
Acid stearic 0,212 0,0392 0,9990 5,4

Pentru o mai bun corelaie a datelor experimentale s-a propus un nou model teoretic i o
nou ecuaie cinetic, bazat pe ecuaia de difuzie a lui Ward i Tordai asociat cu ecuaia de
stare bidimensional van der Waals [177].

3.3 MECANISMUL DE ADSORBIE LA INTERFAA ULEI/AP
Pentru a oferi o imagine mai bun asupra mecanismului de adsorbie, n Fig. 3.14, am
reprezentat variaia de energie (E) n funcie de distana la interfaa (Z) i am ilustrat barierele
enegetice pentru procesul de adsorbie i desorbie la interfaa lichid-lichid.


Fig.3.14 Relaia dintre bariera de adsorbie E
1
(adic energia de activare de adsorbie),
bariera de desorbie E
2
(adic energia de activare de desorbie) i energia de adsorbie (E
a
)

14
Forele motrice pentru adsorbia anestezicelor (molecule solubile n ap) sunt
interaciunile hidrofobe dintre lanurile hidrofobe penetrate i faza de ulei, care sunt nsoite
de creterea de entropie a sistemului cauzat de distrugerea structurii ordonate a moleculelor
de ap, format n jurul lanurilor hidrofobe din faza apoas.
Din contra, fora motrice pentru adsorbia acidului stearic (un component practic
insolubil n ap) este schimbarea de entalpie a sistemului datorat hidratrii gruprii cap
polare hidrofile cnd se imerseaz n faza apoas [190].


15
4. STRUCTUR MOLECULAR I PROPRIETI DE
MONOSTRAT : MODELARE I EXPERIMENT
S-au determinat caracteristicilede monostrat a trei pigmeni carotenoidici (Fig. 4.1.1)
[207, 208].

Figura 4.1.1 Structura molecular a carotenoidelor: ,-caroten-4-on (echinenon, ECH),
,-caroten-4,4-dion (cantaxantin , CAN) i 4,4 '-diapo -, -caroten-4, 4'-dial ( denumit
deasemenea 4,4-diapolicopendial, APO)

4.1.2 Calcul HMO, SCF-MO (AM 1 i PM 3 ). Momente de dipol
4.1.2.1.4 Momente de dipol din date HMO

Am utilizat calcule simple HMO pentru sistemul de electroni delocalizai al celor
trei molecule [207]. Din densitatea electronilor i ordinul legturilor s-a realizat estimarea
momentelor de dipol n cazul diferitelor legturi, pe baza unor presupuneri logice. n timp ce
pentru legturile de tip CC s-au luat n considerare numai momente dipol de tip , pentru
legturi de tip CO s-a inclus i o component . Aceste momente de dipol ale legturilor
individuale au fost compuse vectorial (vezi Fig.4.1.9 pentru compunerea momentelor de dipol
pentru primele trei legturi), ncepnd cu legtura CO, despre care se presupune c este
orientat orizontal direct pe substratul de ap, presupunnd totodat c unghiurile legturilor
din sistemul conjugat sunt de 120
o
(hibridizare trigonal pentru toi atomii C i O).
16

Figura 4.1.9.Compunerea dipol momentelor pentru primele 3 legturi i descompunerea
momentului de dipol total n componente orizontale i verticale. Simboluri: cercuri negre-
atom de C(sp
2
); cercuri gri-atom de C(sp
3
); cercuri albe-atom de O(sp
2
).

4.1.2.2 Calcule SCF MO
S-au efectuat calcule MO mai complexe, referitor la toi electronii ( i ) pentru cele
trei carotenoide (ECH, CAN i APO) toate n forma trans. Calculele s-au efectuat la nivelul
Hartree-Fock restricionat (RHF) prin utilizarea a dou metode semi-empirice SCF MO:
Modelul Austin 1 (AM1) i Modelul Parametric PM3, cu ajutorul pachetului de software
HyperChem7.5. Ele au fost de asemenea folosite la estimarea momentelor de dipol.
4.1.3 Descrierea izotermelor de compresie
S-au nregistrat izotermele de compresie ale celor trei carotenoide (ECH, CAN i
APO) etalate la interfaa aer/ap (Fig.4.1.10). Avnd ca punct de plecare aceste izoterme de
compresie, s-au stabilit caracteristicile superficiale, i anume: presiune de colaps
c,
modul
de compresie superficial C
s
-1
, i parametri de interaciune A
o (
Tabelul 4.1.1).
4.1.4 Geometrie molecular. mpachetare n monostrat
Componenta orizontal a momentului de dipol n cazul primelor trei legturi din
sistemul conjugat
h3
, adic momentul de dipol al grupului principal, scade n ordinea
ECH>CAN>APO, asemntor cu valorile i C
s
-1
stabilite experimental, fiind o msur
pentru fora de atracie intermolecular, i C
s
-1
modulul de compresiune superficial.

17

Figura 4.1.10. Izoterme de compresie: presiune superficial funcie de arie molecular pentru
carotenoidele ECH, CAN i APO

Tabelul 4.1.1. Caracteristicile superficiale a celor trei carotenoide studiate

Carotenoid
C

( )
1
m mN
1
S
C
( )
1
m mN
30
10
( )
2
m N
'
0
A
( )
2
nm
ECH 32 151 9.02 0.438
CAN 36 145 8.74 0.432
APO 32 95 6.71 0.392

Fig.4.1.11. arat geometriile optimizate aa cum rezult din calcule PM3 n planul
primelor dou axe ineriale.
Calculele semi-empirice SCF-MO n cazul celor trei carotenoide studiate duc la
rezultate generale asemntoare cu cele indicate de calculele HMO. Momentele de dipol ale
grupelor polare se coreleaz cu caracteristicile termodinamice de suprafa urmrite. n cazul
moleculelor de echinenon (ECH) i cantaxantin(CAN), orientarea molecular n
monostratul condensat este considerat perpendicular pe interfaa aer/ap i monostratul care
rezult din aceast mpachetare molecular este destul de rigid, pe cnd moleculele APO au o
orientare diferit i compresibilitate ridicat. Aceste molecule sunt deviate din poziia
vertical, adic nclinate pentru a diminua unghiul legturii C=O cu linia de contact aer/ap
(4.1.15). Unghiul ar trebui s fie de aproximativ 40
o
.

18




Figura 4.1.11. Geometrii optimizate (calc. PM3) pentru moleculele celor trei carotenoide



Fig. 4.1.15 Orientarea moleculelor de APO la interfaa aer/ap

19
4.2 CARACTERIZAREA FIZICO-CHIMIC A UNOR FILME DE DIPALMITOIL
FOSFATIDIL COLIN (DPPC) PE SUBSTRAT DE ALUMINIU
Pentru modelarea membranelor s-au folosit diferite modele printre care monostraturile
de dipalmitoilfosfatidilcolin, DPPC, denumite i nanostraturi, veziculele lipidice sau
lipozomii i filmele Langmuir-Blodgett (LB) studiate prin diferite tehnici: tehnica Langmuir,
tehnica Langmuir-Blodgett (LB) asociat cu microscopia de for atomic (AFM).
Nanostraturile Langmuir de DPPC n absena i prezena procainei (P) la interfaa aer/ap au
fost studiate folosind izotermele de compresiune. Filmele Langmuir-Blodgett transferate pe
suport de sticl acoperit cu aluminiu au fost vizualizate prin spectroscopie de for atomic
(AFM), de ex. Fig. 4.2.4 [249, 571]. Analiza imaginilor AFM relev diferenele dintre
suprafeele filmului LB de DPPC pur i DPPC cu P, sugernd faptul c exist o modificare a
compoziiei suprafeei.

Fig.4.2.4 Imaginile AFM bidimensionale (2D) topografice (A) i de faz (B) ale filmelor LB
de DPPC pur transferate pe suport de aluminiu la tranziia de faza principal la 8 mN/m; aria
scanat 2x2m
2
. Imaginea C reprezint profilul seciunii transversale de-a lungul sgeii din
fig.A. Imaginea AFM topografic 3D (D) a imaginii 2D (fig.A).
20

Structurile experimentale ale filmului LB colapsat vizualizate cu AFM i profilul
seciunilor transversale pot fi explicate sugestiv cu ajutorul modelului de colaps prin nucleaie
i creterea nucleelor. Imaginile AFM ale DPPC cu P relev asocierea acestora n particule
slab agregate la colaps avansat fa de cazul filmului de DPPC pur.
Studiile noastre au artat de asemeea, o stabilitate pe termen lung a filmelor de DPPC
pur i a filmelor de DPPC cu P transferate pe suport de aluminiu. Aceast stabilitate ridicat
poate include interaciunea dintre moleculele de DPPC i dintre DPPC i P plus interaciunea
dintre suportul de aluminiu i moleculele formatoare de film.

21
5. OBINEREA I CARACTERIZAREA FIZICO-CHIMIC A
UNOR STRUCTURI SUPRAMOLECULARE FORMATE DIN
METALE NOBILE I COMPUI BIOLOGIC ACTIVI
S-a realizat sinteza unor soluii coloidale connnd nanoparticule de aur [328] i de
argint [329].

5.3 METODE DE CARACTERIZARE FIZICO-CHIMIC A SISTEMELOR CARE
CONIN NANOPARTICULE DE AUR
Att soluiile coloidale coninnd doar nanoparticule de metal nobil, ct i cele la care
s-au adugat biomolecule (aminoacizi, acid lipoic) au fost caracterizate prin spectroscopie
UV-VIZ, microscopie electronic de transmisie (TEM) i AFM.

5.3.2.1 Spectre UV-VIZ


Fig.5.3.7. Spectrul optic al soluiei coloidale de aur cu soluie de histidin 0,01 M n
diferite raporturi (a) i cu soluii de histidin de diferite concentraii (b) [328]
n spectrele UV-VIZ se remarc benzile caracteristice rezonanei plasmonilor de
suprafa (SPR) ai nanoparticulelor metalice, iar adugarea biomoleculelor duce la o
deplasare a maximelor benzilor spre lungimi de und mai mare, cu att mai pronunat, cu ct
interaciunea este mai puternic. Autoagregarea nanoparticulelor mediat de biomolecule se
reflect printr-o lrgire a benzilor de absorbie i o delasare batocrom pronunat (Fig.
5.3.7.}
Legarea aminoacizilor cu interfaa nanoparticulei de aur se poate realiza prin funcia
amino, sau n cazul celor coninnd sulf, prin intermediul acestui atom.
22
5.4.1.2 Imagini TEM
Imaginile TEM vizualizeaz nanoparticulele metalice i agregatele formate din aceste
particulen prezena biomoleculelor (Fig. 5.4.6).


Fig.5.4.6. Imagini TEM alenanoparticulelor de argint cu acidul -lipoic. Barele din
imagini corespund la 5 m (a), 2 m (b), 200 nm (c) i 100 nm (d) [329]


Fig. 5.3.17. Diagram Venn grupnd aminoacizii n funcie de proprietile lor (adaptat dup
[45]). A alanin, CS-H cistein, CS-S cistin, D acid asparagic, E acid glutamic, F
fenilalanin, G glicin, H histidin, I izoleucin, K lizin, L leucin, M metionin,
N asparagin, P prolin, Q glutamin, R arginin, S serin, T treonin, V valin,
W triptofan, Y tirozin.
23
Pentru a raionaliza comportarea aminoacizilor cercetai fa de nanoparticulele de
aur, folosim o diagram Venn (Fig. 5.3.17), care grupeaz aminoacizii dup proprietile lor.
Aminoacizii pentru care s-a gsit c interacioneaz puternic cu nanoparticulele de aur i
iniiaz agregarea lor au fost notate cu +, iar cei care au produs doar uoare deplasri ale
benzii de absorbie UV-VIZ, cu -.
Un mecanism posibil pentru legarea unui aminoacid la nanoparticula de aur i
formarea de agregate de particule este prezentat pentru cistein n Fig.5.3.18.

a b

Fig. 5.3.18. Un model pentru legarea cisteinei la nanoparticula de aur acoperit cu
citrat (a) i pentru formarea de legturi ntre nanoparticule de aur (b)

24
6. AUTOASAMBLAREA UNOR PROTEINE GLOBULARE SAU
FIBROASE

6.1. PROTEINA PRINCIPAL (PAC) DE REZERV PROVENIT DIN
CELULELE ALEURONE DIN SMNA DE ORZ
Scopul acestui studiu este acela de a cerceta autoasamblarea straturilor de protein
PAC adsorbit pe suport solid. Atenia principal se ndreapt spre determinarea structurii de
suprafa a straturilor uscate de protein i apariia de nanoparticule de protein n interiorul
straturilor de protein. Structura straturilor de protein adsorbit pe sticl a fost studiat n
funcie de timpul de adsorbie, de concentraia proteinei, pH i fora ionic. Din cte
cunoatem, acesta este primul studiu cu privire la adsorbia proteinei PAC pe suport solid i
include detalii la scar nanometric asupra structurii straturilor de protein PAC [359].
Proteina PAC prezint o structurare unic n filmul adsorbit pe suportul de sticl investigat la
AFM. Un asemenea proces de structurare molecular i supramolecular poate s apar n
interiorul vacuolelor care stocheaz proteinele n procesul de dezvoltare a grunelor din
cereale.

6.2 SISTEME FORMATE DIN ALBUMIN SERIC BOVIN I MELATONIN.
SIMULAREA UNOR FENOMENE INTERFACIALE DE LA NIVELUL
BIOMEMBRANELOR
Se urmrete determinarea efectelor melatoninei asupra filmelor auto-asamblate de
albumin seric bovin (BSA) adsorbite la interfaa aer/soluie apoas, aproape de pH-ul
fiziologic [337]. Datele noastre experimentale, care arat c melatonina interacioneaz
specific cu BSA. Melatonina crete presiunea interfacial a filmelor de BSA adsorbite,
exercitnd un substanial efect de stabilizare asupra filmelor interfaciale de BSA
autoasamblate la interfaa aer/ap. Rezultatele noastre confirm att implicarea melatoninei
n interaciuni specifice cu BSA, ct i efectul ei remarcabil asupra stabilizrii compuilor
biologici la interfee fluide.

25
6.3. MORFOLOGIA COLAGENULUI I A UNOR MEDICAMENTE ANTI-CANCER
ASAMBLATE PE MICA
Autoasamblrile colagenului de tip I (COL) din tendonul lui Achille de bovin cu unele
medicamente anti-cancer, precum 5-fluorouracil (FLU) sau doxorubicina (DOX), pe substrat
de mic, au fost investigate folosind microscopia de for atomic (AFM) [576]. Imaginile
AFM arat diferite morfologii ale auto-asamblrilor formate din COL, COL-FLU i COL-
DOX (Fig. 8). Datele sugereaz c medicamentele anticancer conduc la formarea
autoasamblrilor de COL cu un grad mare de stabilitate, prezentnd un nivel nalt de ordine,
la nivel nanometric n cazul straturilor adsorbite pe suprafa de mic. Interaciunea acestor
autoasamblri cu suprafaa de mic este puternic, iar interaciunile specifice dintre molecule
n interiorul straturilor auto-asamblate ar putea fi explicat prin intermediul legturilor de
hidrogen, dar nu se poate exclude nici mecanismul de simpl nglobare a moleculelor de
medicament n matricea de colagen.


Figura 8. Filmul de colagen mixat cu 5-fluorouracil pe mic. A)topografie 2D; B) imagine de
faz; C) topografie 3D; D) Seciune transversal de-a lungul sgeii n Fig. 8A. Aria scanat
0,5 m x 0,5 m.

26
7. STRUCTURA CHIMIC I MORFOLOGIC A GRANULELOR DE
AMIDON

7.2.1.2 Imagini AFM
Microscopia de for atomic (AFM) a fost folosit pentru a investiga micro i
nanostructurile granulelor de amidon din porumb cultivat n Romnia [432, 433].
Dimensiunea, forma i morfologia de suprafa a granulelor de amidon nativ din porumb sunt
ilustrate prin astfel de imagini O selecie a imaginilor AFM ale granulelor de amidon din
porumb compactate n tablete este prezentat n Fig. 1, iar a celor ntinse ca film subire n
Fig. 7. Din imaginile AFM, topografiile 2D (Figura 1a, 7a) i topografiile 3D (Figura 1d, 7d)
precum i din imaginile de faz (Figura 1b, 7b) i imaginile de amplitudine (Figura 1c, 7c), se
poate observa structurarea superficial a granulelor de amidon, n special prezena ieiturilor
(noduli sau particule mici rotunjite sau alungite).



a b c

d


e
Figura 1. Imagini AFM ale amidonului din porumb compactat n tablet.
Aria scanat 20 m x 20 m. a) imagine topografic 2D; b) imagine de
faz; c) imagine de amplitudine;d) imagine topografic 3D; e) seciune
transversal de-a lungul sgeii n panoul a.
27
Structurile de suprafa investigate prin imagistica AFM, precum nodulii ieii n afar
de pe suprafaa granulelor de amidon, au diverse dimensiuni, aflate ntr-un spectru larg de
valori, de la 30 nm la 80 nm. In mod frecvent, particule fine s-au autoasamblat pe suprafaa
granulei n aranjamente destul de puternice, formnd iruri.
Organizarea superficial a granulei de amidon este probabil constituit din blocuri, ca
elemente structurale, care au fost deja propuse pentru asocierea i clusterizarea moleculelor
elicoidale de amilopectin nuntrul granulei de amidon i pe suprafaa acesteia. Noi sugerm
c cele mai mici particule care au fost vizualizate ar putea de asemenea s corespund
clusterilor individuali ai amilopectinei, ceea ce este n acord substanial cu modelul de cluster
propus i cu conceptul blocurilor admise in literatura de specialitate. Existena unor zone
destul de netede cu o rugozitate superficial sczut ori zone mai rugoase pe granulele de
amidon este confirmat.





a b c

d


e
Figura 7. Imagini AFM ale amidonului din porumb ntins ca i film
subire. Aria scanat 1 m x 1 m. a) imagine topografic 2D; b) imagine
de faz; c) imagine de amplitudine; d) imagine topografic 3D; e)
Seciune transversal de-a lungul sgeii n panoul a.
.
28
7.2.2 Imagistica SEM
7.2.2.2 Imagini SEM
Imagini SEM ale granulelor de amidon din cartof depuse n film subire, examinate
folosindtehnica SEI, sunt prezentate n Figura 8 pentru diverse arii de msurare. Imaginile
analoage pentru granulele de amidon din porumb sunt date n Fig. 9.


Figura 8. Granule de amidon din cartof (proba 1) vizualizate cu ajutorul SEM (SEI),
Lungimea barelor : 50 m (a); 10 m (b); 5 m (c); 5 m (d).

Din msurarea unui numr mare de particule (cteva sute), folosind SEM,
dimensiunea medie (echivalent cu diametrul granulelor) i abaterea standard (SDEV) au fost
calculate, mpreun cu unele valori extreme ale granulelor. Histogramele care prezint
distribuia dup mrime a granulelor de amidon, obinute din imaginile SEM, sunt date n
Figura 10. Distribuia dup mrime este similar n cazul celor dou probe, adic nu exist
diferene semnificative ntre granulele de amidon din cartof (Fig. 10a) i porumb (Fig. 10b).
Din aceste histograme a fost dedus granulometria probelor de amidon.

29

Figura 9. Granule de amidon din porumb (proba 2) vizualizate cu ajutorul SEM (SEI),
Lungimea barelor : 50 m (a); 10 m (b); 5 m (c); 5 m (d).


a. b.
Figura 10. Histogramele distribuiei dup mrime a granulelor n cazul amidonului din
cartof, proba 1 (a) i a amidonului din porumb proba 2 (b) n filme subiri

Astfel, unele tipuri de amidon din Romnia au fost investigate pentru prima dat n
literatura de specialitate, folosind imagistica SEM, i granulometria lor a fost stabilit din
histogramele rezultate din msurarea dimensiunii granulelor. S-a putut realiza de asemenea o
comparare a morfologiei granulelor de amidon romnesc cu alte feluri de amidon publicate.

30
8. FORMAREA I CARACTERIZAREA FIZICO-CHIMICA A
UNOR STRUCTURI SUPRAMOLECULARE FORMATE DIN
COMPUSI BIOLOGIC ACTIVI

8.1. STRUCTURI SUPRAMOLECULARE FORMATE DIN QUERCETIN I -
CICLODEXTRIN [489-496]
8.1.2 Metode de caracterizare fizico-chimic
8.1.2.1. Caracterizarea complexului de incluziune format din quercetin
(Q) i -ciclodextrin (-CD)

8.1.2.1. 1. Spectroscopia FTIR
n regiunea spectral dat n Fig.8.1.1, frecvena de ntindere O-H pe |-CD, localizat
la 3380 cm
-1
, este deplasat la 3412 cm
-1
pentru compuii co i fd. Probabil c unele legturi
de hidrogen sunt rupte. Este clar din Fig.8.1.2 c grupa C=O este implicat n procesul de
complexare, frecvena ei de ntindere fiind deplasat de la 1664 la 1660 cm
-1
pentru compuii
fd i co. Aceasta subliniaz faptul c grupa C=O (grupa cetonic), de la C4 al scheletului
quercetinei, este implicat n legturi de hidrogen la complexarea dintre Q i -CD.

4000 3500 3000 2500
0,0
0,4
0,8
1,2
A
b
s
o
r
b
a
n
c
e

(
a
.
u
.
)
Wavenumber (1/cm)
Quercetin
co
|-CD
pm
fd
3408
3324
3380
3412

Fig. 8.1.1. Spectre FTIR ale quercetinei i -ciclodextrinei pure i pentru compuii de
incluziune ai Q cu |-CD, pentru domeniul spectral 4000-2500 cm
-1
. Simboluri: coprecipitat
(co), liofilizat (fd) i amestec fizic (pm).

31
1700 1650 1600 1550
0. 0
0. 4
0. 8
1. 2
A
b
s
o
r
b
a
n
c
e

(
a
.
u
.
)
W a ve n u mb e r (1 /c m)
Q u e rc e tin
c o
| - C D
p m
f d
1664
1660
C =C
C =O

Fig. 8.1.2. Spectre FTIR ale quercetinei i -ciclodextrinei pure i pentru compuii de
incluziune ai Q cu |-CD, pentru domeniul spectral 1725-1550 cm
-1
.

8.1.2.1. 2. Calorimetria de baleiaj diferenial (DSC)
Curba DSC pentru -ciclodextrin prezint un pic endoterm larg (Fig.8.1.3)
pentru domeniul de temperatur de la cca. 74 la 118
o
C, cu o temperatur a picului de cca.
95,8 1,6
o
C. S-a calculat entalpia, H, de cca. 209,3 8,6 J/g i ea corespunde
dezhidratrii i pierderii moleculelor de ap prin evaporare, din umiditatea rezidual existent
(sub 100
o
C), ca i din cele incluse n cavitate (peste 100
o
C). De la 290
o
C n sus exist un nou
pic endoterm, corespunznd topirii, urmate de descompunerea -ciclodextrinei.

Fig.8.1.3: Termograme DSC, flux de cldur (efecte endoterme: n jos, mW, n funcie de
temperatur, grade Celsius, C) pentru compuii puri, -ciclodextrin (-CD) i quercetin (Q)
dihidrat, i compuii de incluziune Q: -CD obinui prin metodele de preparare:
coprecipitare (co) i liofilizare (fd) i pentru amestecul fizic Q: -CD (pm).
32

Curba DSC a quercetinei, un compus dihidrat, prezint dou procese endoterme.
Primul este un pic endoterm destul de larg la cca. 122,7 1,3
o
C i corespunde pierderii apei
legate (entalpie 254,2 8,8 J /g). Al doilea profil endotermprezint o temperatur a picului
de 319,9 0,8
o
C i este legat de topirea compusului Q anhidru. Entalpia de 81,2 1,3 J /g i
corespunde topirii compusului Q, urmat probabil de descompunerea sa.
Termograma amestecului fizic de Q i -CD prezint dou endoterme largi ntre 60 i
100
o
C, datorate pierderii moleculelor de ap nelegate i o alta pentru domeniul de temperaturi
de la 103 la 140
o
C, corespunznd moleculelor de ap legate, cu valori H de cca. 25,65,3
J /g i de aproximativ 64 10 J /g, respectiv. A treia endoterm, mai larg, ncepe la 287
o
C i
corespunde topirii amestecului fizic de Q i -CD, urmat de descompunerea sa.
Curba DSC a compusului de incluziune coprecipitat din Q i -CD prezint dou
endoterme largi. Primul pic este caracterizat printr-o temperatur a picului de 91,17
o
C i H
de 68 8.3 J /g, iar al doilea pic are temperatura picului de 116,25
o
C i H de 42,2 7,8 J /g.
Ambele picuri corespund la pierderea moleculelor de ap. Picul de topire a quercetinei
dispare din profilul termic, iar la cca. 280
o
C ncepe descompunerea complexului de
incluziune.
Termograma compusului de incluziune al quercetinei i -CD, obinut prin metoda
liofilizrii prezint un singur pic endoterm slab, la 109,26
o
C cu H de 27,1 8,2 J /g
corespunznd pierderii moleculelor de ap. Decompunerea acestui complex ncepe la cca.
300
o
C, prezentnd o stabilitate termic mai bun dect pentru complexul quercetin: -CD
(co), indicmd c cea mai bun metod pentru prepararea complexului de incluziune ete prin
liofilizare.
Aceste constatri ar putea fi considerate ca o eviden a interaciunilor moleculare
dintre componentele Q i -CD n complexul de incluziune, confirmnd astfel formarea
complexului.
8.1.2.1. 3 Difractometria de raze X a pulberilor
n Fig.8.1.4 sunt prezentate spectrele de difracie a razelor X n pulberi, pentru -CD,
quercetin i pentru complecii lor de incluziune, pentru raportul molar 1: 1, preparai prin
dou metode diferite, prin liofilizare (fd, Fig.8.1.4a) i prin frmntare (kn, Fig.8.1.4b).
33

a. b.
Fig. 8.1.4. Spectre de difracie a razelor X n pulberi pentru -CD, Q i compusul lor de
incluziune Q: -CD, obinut prin tehnica (a) liofilizrii (fd) i (b) frmntrii (kn).
.
Se poate vedea c difractogramele de raze X au trsturi diferite pentru ambii
compui de incluziune, cel de coprecipitare (co) i de liofilizare (fd), fa de compuii iniiali
(Q i CD). Aceste constatri confirm formarea complecilor de incluziune ai Q i CD prin
ambele tehnici co i fd.

8.1.2.2 Complexul de incluziune i geometria de asamblare
supramolecular

Geometria complexului a fost optimizat folosind algoritmul de mecanic molecular
al programului HyperChem . Dup cum se poate vedea n Fig.8.1.6, gruprile cetonice (C=O
la C4 ale inelului C al quercetinei) pot participa la formarea unei legturi de hidrogen cu
gruparea de hidroxil primar situat pe cavitatea de -CD.


34

Fig.8.1.6: Model molecular propus pentru complexul de incluziune format din quercetin i
-ciclodextrin

8.1.3. Morfologie i structur
Quercetina, -CD i complecii lor de incluziune sunt investigai i
caracterizai folosind imagini TEM, SEM i AFM i astfel sunt identificate agregate de
diferinte dimensiuni Imaginile TEM (Fig.8.1.8) indic o organizare aleatoare a asociaiilor
supramoleculare alungite destul de liniare ale moleculelor de quercetin, care se extind la sute
de nanometri (Fig.8.1.8b) sau chiar extinse la civa m. Toi complecii de incluziune ce
conin -CD i Q (obinui prin frmntare, co-precipitare i frmntare, co-precipitare sau
tehnici de liofilizare) prezint o tendin de a forma aproape acelai tip de aranjamente n fire
ca i n cazul quercetinei pure, dup cum se evideniaz din msurtori TEM.

b) d)
Fig. 8.1.8. Imagini TEM pentru quercetin (b) i complexul de incluziune Q: -CD obinut
prin liofilizare (fd) (d).

35

a) b)

c) d)
Fig. 8.1.9. Imagini SEM pentru quercetin (a), -CD (b) complexul de incluziune Q: -CD
obinut prin frmntare sau frmntare i coprecipitare (c) complexul de incluziune Q: -CD
obinut prin liofilizare (d); Lungimea barei este 1 m.

n imaginile SEM (Fig. 8.1.9), complecii de incluziune formai de -CD i Q (Fig.
8.1.9c i d) prezint particule cu o morfologie comparabil, practic independent de modul de
preparare (frmntare, respectiv liofilizare n Fig. 8.1.9d). Morfologia i forma acestor
particule sunt total diferite de a celor corespunznd componenilor puri, quercetin sau -CD,
relevnd o structur diferint n faz solid datorat interaciunilor moleculare din reeaua
complecilor de incluziune, n acord total cu observaiile TEM.

8.1.6.2. Estimarea experimental a constantei de echilibru
Cteva din spectreleUV-VIS pentru soluiile alcoolice apoase de quercetin cu CD n
diferite proporii, sunt date n Fig.8.1.13. pentru pH = 3. n toate soluiile apar dou picuri, cu
maxime la 372 i 255 nm. Absorbana la maxime prezint o tendin general cresctoare cu
creterea concentraiei de CD. S-au folosit trei medii apoase diferite i anume: pH 3,
netamponat (pH 5.5) i pH 7.4, pentru a varia condiiile de mediu i interaciunea dintre
moleculele de CD i Que.
36
200 250 300 350 400 450 500
0.0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1.0
a.
A
b
s
o
r
b
a
n
t
a
,

u
.
a
.
Lungimea de unda, nm
Que
CD0.1
CD0.5
CD1.5
CD2
CD2.5
CD3
CD4
CD5
CD6
CD7
CD8

200 250 300 350 400 450 500
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
b.
A
b
s
o
r
b
a
n
t
a
,

u
.
a
.
Lungimea de unda, nm
Que
CD0.1
CD0.5
CD1.5
CD2
CD2.5
CD3
CD4
CD5
CD6
CD7

Fig.8.1.13. Spectre optice ale soluiilor de Que 0.04 mM cu coninut variabil de CD, la pH =
3 (tampon citrat), la 2 min. dup amestecare (a) i dup 24 h (b).

Constanta de echilibru K a formrii complexului molecular host-guest s-a evaluat folosind
metoda Benesi-Hildebrand n 4 variante [566], pentru cele dou picuri de absorbie. n
Tabelul 8.1.2, sunt rezumate valori ale constantei de echilibru obinute de noi prin diferitele
metode grafice.

Tabelul 8.1.2. Valori estimate pentru constanta de echilibru de legare pentru complexul
CD-Que
Metoda Banda de abs. 371 nm Banda de absorbie 256 nm
pH = 3, dup 2 min. din ec.(2)
pH = 3, after 24 h
din ec. (1)
din ec. (2)
din ec. (3)
din ec. (4)
Media
Media din 2 max
pH = 5.5
din ec. (1)
din ec. (2)
din ec. (3)
din ec. (4)
Media
Media 2 max
300 (r =0,558)

725 50 (0,996)
760 100 (0,995)
750 70 (0,967)
810 100 (0,995)
750 150
820

710 70 (0,990)
610 100 (0,990)
740 90 (-0,928)
680 110 (0,990)
680 150
650
150 (r =0,434)

1100 250 (0,931)
650 170 (0,973)
1040250 (0,768)
810 220 (0,973)
900 400


570 170 (0,858)
530 160 (0,959)
670 190 (-0,711)
710 210 (0,959)
620 230

37
La pH 7,4 ionizarea parial a quercetinei i stabilitatea scazut a formei ei anionice
mpiedic estimarea unor valori K sigure. Din valorile estimate ale constantelor de legare K,
se poate calcula energia liber Gibbs (entalpia liber) de formare [524, 525] pentru complexul
molecular host-guest. Valorile obinute din aceast relaie sunt: -16,6 kJ /mol (pH =3), -16,0
kJ /mol (pH =5,5).


8.2. STRUCTURI SUPRAMOLECULARE FORMATE DIN -
CICLODEXTRIN I ACID LIPOIC

8.2.3. Caracterizarea fizico-chimic a complexului de incluziune format din acid
-lipoic (LA) i -ciclodextrin [533-536]
- Spectroscopie FTIR

Fig. 8.2.2 Spectre FTIR aleacidului lipoic i -ciclodextrinei pure i pentru compuii de
incluziune ai LA cu |-CD, pentru domeniul spectral 3800-2700 cm
-1
. Simboluri: coprecipitat
(co), liofilizat (fd).

Frecvena de ntindere a grupei O-H, localizat a ~3392 cm
-1
n -CD pur, este
deplasat la 3386 (produs co) i 3383 cm
-1
(produs fd), respectiv datorit creterii numrului
de legturi de hidrogen n cursul procesului de complexare. Nu se poate neglija nici
expulzarea moleculelor de ap din cavitatea -CD.
38
n regiunea spectral 1800-1500 cm
-1
apar de asemenea modificri n urma
complexrii.
-
as
(C=O) a acidului lipoic este deplasat la frecven mai nalt, probbil din cauza
distrugerii structurii cu legturi puternice de hidrogen din substana necomplexat, dup
formarea compusului de incluziune cu -ciclodextrina.
- (OH) (modul de ncovoiere) de la -CD este deplasat la o frecven mai joas, ceea ce s-
ar explica prin formarea de noi legturi de hidrogen ntre -CD i LA

8.2.4 STRUCTURA REELEI CRISTALINE FORMAT DIN
COMPLEXUL DE INCLUZIUNE, ACID LIPOIC I -
CICLODEXTRIN


Figure 8.2.4.3. Spectre de difracie n pulberi ale complexului de incluziune (1:1) -CD-LA ;
spectru experimental (x x x x), spectrul calculat final dup rafinare (linie) i diferena spectru
experimental- calculat (linie, jos).
Pentru construirea modelului complexului de incluziune s-au folosit structurile de
referin din Cambridge Structural Database [557-559].
39
8.2.4.3. mpachetarea molecular i legturi de hidrogen n complexul de
incluziune -CD-acid lipoic (1:1)

Tabel 8.2.4.2. Caracteristicile moleculei de -CD. D= distane ntre atomii
O4(G
n
)O4(G
n+1
); =unghiuri ntre atomii O4(G
n-1
)O4(G
n
)O4(G
n+1
); d=abateri de la
planul celor mai mici ptrate prin cei apte atomi O4(G
n
); =unghi diedru ntre planul
O4(G
n
) i planul celor mai mici ptrate prin C2(G
n
),C3(G
n
), C5(G
n
) i O5(G
n
); D3=distane
intramoleculare ntre atomii O3(G
n
)O2(G
n+1
). Unghi de torsiune
a
=O5(G
n
)-C5(G
n
)-
C6(G
n
)-O6(G
n
) i
b
=C4(G
n
)-C5(G
n
)-C6(G
n
)-O6(G
n
).
Reziduu D() () d() () D3()
a
( )

b
()
G1 5.44(4) 128.0(9) 0.123(14) 66.3(5) 3.10(3) 93.1(18) -135.2(19)
G2 5.58(4) 127.8(7) -0.07(3) 88.7(10) 2.52(4) -104(3) 29(3)
G3 5.38(5) 101.8(7) 0.12(3) 89.0(13) 3.23(4) -120(4) 11(4)
G4 4.71(5) 153.8(10) 0.30(4) 81.9(11) 2.90(4) -38(3) 93(3)
G5 5.22(5) 129.2(9) -0.63(3) 69.7(11) 3.33(3) -157(3) -33(4)
G6 5.55(3) 98.8(6) 0.41(3) 88.3(11) 2.74(3) -168(3) -45(3)
G7 4.42(3) 150.8(7) 0.00(3) 76.0(11) 2.99(2) -54(4) 75(4)

Cei apte atomi de O4(Gn) glicozidici din -CD-LA (1:1) formeaz un heptagon
distorsionat, avnd n vedere abaterile mari ale distanelor interatomice (4.42 5.58 ) i ale
unghiurilor interatomice (99 154) (Tab. 8.2.4.2) de la valorile de 4.38 i 128.6 dintr-un
heptagon ideal nedistorsionat.
Cele apte uniti de glucoz au conformaii scaun uor distorsionate cu unghiuri theta
de ncreire ntre 0 7
o
, provenind din modelul -CD folosit pentru a construi compusul de
incluziune -CD-LA.
Atomii de oxigen O6 din G
2
, G
3
, G
4
, G
6
, G
7
sunt n afara cavitii ciclodextrinei, iar
atomii O6 din G
1
i G
5
sunt ndreptai spre cavitatea macrociclului i ngusteaz fee opuse
ale feei primare a -CD.
n general, se formeaz legturi de hidrogen cu O6(G
n
) din moleculele vecine de
ciclodextrin, dac atomii O6(G
n
) sunt n aceeai poziie ca i planul C2C3C5O5. Faptul c
niciun atom de oxigen O6 din complexul de incluziune -CD-LA nu satisface aceste criterii
explic prezena unei singure legturi de H ntre O6(G
4
) O6(G
7
) ai ciclodextrinelor vecine
i implicarea lor extensiv n legturi de hidrogen intramoleculare (Tab. 8.2.4.3).
40
Tabel 8.2.4.3. Lungimile legturilor de hidrogen intramoleculare. Primul indice se refer la
notaia uzual pentru unitatea glicozidic, ca n Fig. 8.2.4.1. Al doilea indice corespunde
numrului unitii glicozidice n macrociclul |-CD.
Grupe OH primare
ale |-CD
Grupe OH secundare
ale |-CD
Atomi
legai
Lungi-
me ()
Atomi
legai
Lungime
()
O
62
O
43
2.32 O
22
O
31
3.10
O
62
- O
53
2.45 O
23
- O
32
2.52
O
63
O
44
2.75 O
25
O
34
2.90
O
63
O
54
2.70 O
27
O
36
2.74
O
64
O
45
2.84 O
21
O
37
2.99
O
65
O
46
2.88

O
65
O
56
2.38

O
66
O
47
2.71

O
66
O
57
2.44

O
67
O
57
2.83

Ciclodextrinele sunt mpachetate n aranjament tip canal, cap-la-cap, moleculele de
ciclodextrin foremaz dimeri tubulari n care muchiile lor primare sunt legate ntre ele
printr-o legtur de hidrogen i puine contacte intermoleculare O6 O6 apropiate. Cele
dou muchii secundare ale fiecrui dimer sunt de asemenea implicate n dou interaciuni
prin legturi de H cu muchiile secundare ale dimerilor adiaceni.
Trei molecule de ap (O71 O73) contribuie la legturile de H dintre feele primare
ale dimerilor -CD, iar o molecul de ap (O74) la legtura de H a dimerilor corespunznd
feelor secundare. mpachetarea tip canal a moleculelor de CD cu molecule de ap prezente
ntre straturile de CD este artat n Figura 8.2.4.5.

8.2.4.4. Modul de incluziune i conformaia oaspetelui.

Molecula LA este inclus n cavitatea ciclodextrinei prin muchia primar (faa ngust)
cu inelul pentaatomic aproape de planul macrociclului O4(G
n
). Atomul de S4 al moleculei-
oaspete LA este localizat la o distan d = 0.406(15) de acest plan. Molecula LA este
conectat printr-o legtur de hidrogen C-HO de molecula de ciclodextrin n care este
docat, iar oxigenul ei carboxilic O11 este legat printr-o legtur de hidrogen de una dintre
41
moleculele de ap (O72).
n plus, oxigenul carboxilic O11 al LA este n contact strns cu glucoza G
2
a unei
molecule vecine de ciclodextrin. Vzute din josul axei b, dou molecule LA nrudite prin
simetrie au catenele lor de acid gras n afara cavitii hidrofobe a CD i ele umplu spaiul
dintre CD-urile uor deplasate ale unui dimer (Fig. 8.2.4.4b, 8.2.4.5b).


(a) (b)

(c)

Fig. 8.2.4.4. mpachetarea molecular a dimerilor |-CD cu acid lipoic (LA) inclus, vzut de-
a lungul axei a (a), axei b (b) i axei c (c), respectiv. Atomii de H i atomii de O ai apei au
fost exclui pentru claritate.

mpachetarea tip canal a complexului de incluziune a LA n -CD este stabilizat de
legturi de hidrogen oaspete-gazd i prin contacte strnse, interaciunile intermoleculare -
CD - -CD i legturile de H implicnd moleculele de ap.


42

(a)

(b)
43

(c)
Fig. 8.2.4.5. mpachetarea molecular a complexului de incluziune |-CD-LA, vzut de-a
lungul axei a (a), axei b (b) i respectiv axei c (c). Atomii de H au fost exclui pentru
claritate.


44
9. CONCLUZII GENERALE
- Tensiunea interfacial n sistemele bifazice (benzen-ap), n prezena colatului de sodiu
(NaC) a fost msurat n funcie de concentraia de surfactant la diferite temperaturi i s-
au determinat concentraia critic micelar i parametri termodinamici ai adsorbiei. Din
analiza datelor experimentale, s-a constatat c geometria i hidrofilicitatea colatului au un
efect considerabil asupra proprietilor filmelor adsorbite de colat de sodiu i asupra
comportamentului de formare a micelelor cu impact major asupra stabilitii sistemelor
micelare.
- Mecanismul de adsorbie pentru dou anestezice locale, dibucaina i tetracaina i pentru
acidul stearic a fost studiat din soluie apoas la interfaa ulei-ap Pentru a descrie
cinetica lor de adsorbie a fost dezvoltat un nou model teoretic i a fost propus o nou
ecuaie cinetic de adsobie controlat prin difuziune. Aceste cercetri originale
demonstreaz diversitatea posibilitilor de analiz a suprastructurilor moleculare
orientate n filme de tip Langmuir.
- Calculele semi-empirice SCF-MO (AM1 i PM3) n cazul celor trei carotenoide studiate
duc la rezultate generale asemntoare cu cele indicate de calculele HMO. Momentele de
dipol calculate ale grupelor polare au fost corelate cu caracteristici termodinamice de
suprafa i s-au tras concluzii privind orientarea molecular n monostratul condensat
- Stabilitatea filmelor Langmuir mixte de DPPC cu procain la interfaa aer/ap, mult
crescut n comparaie cu nanostraturile pure de DPPC, ceea ce se reflec nvaloarea
ridicat a presiunii de colaps a filmului mixt
- Suprafaa filmelor LB de DPPC pur i n amestec cu procaina, transferate pe suport de
aluminiu a fost pentru vizualizat prin AFM, n premier mondial. Ele ofer modele
pentru biomembranele celulare. Stabilitatea ridicat a filmelor LB i a nanostraturilor
Langmuir poate fi folositoare n diferite aplicaii n medicin, farmacie i biologie.
- Au fost obinute i caracterizate prin spectrometrie UV-Viz i imagini TEM soluii
coloidale stabile de aur i argint. Prin intermediul acestor tehnici s-au pus n eviden
autoagregarea / autoasamblarea nanoparticulelor de metale sub influena unor compui
biologic activi (aminoacizi).
- Datele noastre arat c legarea aminoacizilor la nanoparticule de aur poate duce la auto-
asambluri bine organizate, n special pentru aminoacizii care posed grupri funcionale
n plus, precum amino, imidazol, tiol sau tioeter, pe lng funcia amino din poziia
.oAfinitatea nanoparticulelor de aur fa de aminoacizi poate duce la dezvoltarea unor
45
noi metode de detecie n scopuri analitice, de diagnostic medical i biosenzori, ca i la
posibile aplicaii n sisteme de eliberare controlat a medicamentelor, ca i pentru sinteza
de biomateriale nanostructurate cu importante implicaii n nanotiin i nanotehnologie.
- Filme de protein de stocare provenit din celulele aleurone din orz (PAC) au fost
studiate prin adsorbie pe suport solid, prin AFM. Imaginile AFM arat detalii
nanometrice de pe suprafaa filmelor de protein.care pot sugera existena unei ordini la
distan, datorate efectelor electrostatice i atraciei dintre suport i protein. Proteina
PAC globular poate fi un punct de plecare pentru generearea de noi materiale
supramoleculare, necesare n nanobiotehnologia molecular i biomimetica membranei
naturale.
- Studiind efectul melatoninei asupra proteinei BSA la interfee fluide, de tipul aer/soluii
apoase, s-a gsit c melatonina exercit un substanial efect de stabilizare asupra filmelor
interfaciale de BSA autoasamblate la interfa. Ea se poate deci comporta ca un agent
protector asupra macromoleculelor in vitro i n vivo prin interaciuni fizico-chimice
specifice cu biomoleculele, precum BSA, i/sau cu ansamblele lor biologic active. n
consecin, melatonina poate facilita inhibiia peroxidrii biomoleculelor prin creterea
stabilitii ansamblelor supramoleculare.
- Tehnica AFM permite vizualizarea acestor asamblrilor dintre colagen i medicamentele
anticancer i determinarea morfologiei lor i a rugozitii de suprafa. Aceste sisteme ar
putea fi de asemenea adecvate pentru realizarea unor suprafee biologice cu aplicaii
biomedicale, de eliberare a medicamentelor la locul lor de aciune i de construcie a
unor biosenzori.
- Prin vizualizare AFM, pe suprafaa granulelor de amidon din porumb au fost gsite
numeroase structuri, ieituri - protruzii (particule), pori sau zone joase i crpturi, ele
avnd un domeniu larg de dimensiuni. Apariia protruziilor mici i sferice poate fi pus
n legtur cu moleculele puternic ramificate de amilopectin, ceea ce este n acord cu
modelul blocurilor (blocklets). Particule mai mari au fost de asemenea vizualizate,
reprezentnd diferite asociaii de amilopectin i amiloz i alte componente de pe
suprafaa granulei.
- Investigarea probelor de amidon din porumb i cartof folosind microscopia electronic de
baleiaj, a evideniat forma, morfologia de suprafa i dimensiunea granulelor de
amidon. Pornind de la imaginile SEM a fost determinat distribuia granulelor dup
dimensiune i comparat pentru diferite probe. Aceste investigaii vor contribui la
46
caracterizarea granulelor de amidon, folosite ca materie prim pentru producia de
materiale plastice biodegradabile.
- Complecii de incluziune ai quercetinei (Q) i -ciclodextrinei ( CD) au fost formai prin
tehnici de coprecipitare i liofilizare, care au fost optimizate pentru o complexare ct mai
bun. FTIR, difracia de raze X i DSC sunt metode adecvate i complementare care
ofer dovada ncapsulrii moleculare a Q n nanocavitatea de -CD, n stare solid.
- Un model pentru complexul de incluziune al Q cu -CD obinut prin modelarea
molecular sugereaz c quercetina este nchis n nanocavitatea hidrofobic a -CD, n
principal prin interaciunea gruprii sale cetonice de la C4 cu gruprile OH ale
nanocavitii de -CD. Imaginile TEM, SEM i AFM au fost folosite pentru a evidenia
schimbrile n aspectul fizic, pornind de la compuii iniiali puri, Q i -CD, la
complecii de incluziune obinui n stare solid prin diverse metode.
- Rezultatele obinute pot reprezenta o contribuie direct la ncapsularea molecular a
quercetinei n -ciclodextrin, care poate mbunti stabilitatea quercetinei i
biodisponibilitatea, lund n considerare faptul c quercetina este un supliment
nutriional important cu beneficii demonstrate asupra sntii.
- Cercetrile spectroscopice asupra complexului molecular host-guest (stoichiometrie 1:1)
dintre CD i Que permit estimarea constantei de echilibru de formare, K, n soluie
apoas de diverse pH-uri i de aici a energiei liber Gibbs i a entalpiei de formare a
complexului de incluziune din substantele initiale pure. Valoarea negativ, G
0
, se
datoreaz variaiei de entalpie, contribuia entropiei nefiind esenial. Fora motrice
principal pentru formarea complexului ar putea fi legat de nlocuirea moleculelor de
ap din cavitatea hidrofob a -CD (host: molecule gazd) cu moleculele-oaspete (guest)
de quercetin.
- Compusul de incluziune dintre acidul -lipoic i -ciclodextrin s-aobinut prin tehnica
de liofilizare i prin coprecipitare. Cercetrile DSC relev o bun a stabilitate termic a
compusului de incluziune. Impreun cu nvestigaiile FTIR ele demonstreaz existena
interaciunilor moleculare LA i -CD, susinnd astfel formarea complexului.
- Structura cristalin a reelei generat de complexul de incluziune, format de LA i -CD,
este descifrat pentru prima oar n literatura de specialitate, n aceast tez de doctorat.
Structura cristalin este obinut din date de difracie de raze X pe pulberi (XRPD), cu
rezoluie nalt, cu surs de raze X de laborator, combinate cu tehnici de rafinare
avansate a datelor.
47

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

[3] E. Chifu, "Chimia Coloizilor i a Interfeelor", Editori: M. Tomoaia-Cotisel, I. Albu, A.
Mocanu, M. Salajan, E. Gavrila, Cs. Racz, Presa Universitar Clujean, Cluj-Napoca, 2000,
pp. 400.

[4] E. Chifu, M.Tomoaia-Cotisel, I.Albu, A.Mocanu, M.Salajan, Cs. Racz, V.D.Pop,
Metode Experimentale in Chimia si Biofizica Coloizilor i a Interfeelor, Presa
Universitara Clujeana, Cluj-Napoca, 2004, pp. 175.
[90] D. M. Small, Physical Chemistry of Cholanic Acids in "The Bile Acids - Chemistry,
Physiology and Metabolism, Eds., P. P. Nair, D. Kritchevsky, Plenum Press, New York,
1971, p. 255.

[92] J . Ulmius, G. Lindblom, H. Wennerstrom, L. B. J ohansson, K. Fontell, O. Soderman,
G. Arvidson, Biochemistry, 21, 1553, 1982.

[94] S. Ross, J . P. Olivier, J. Phys. Chem., 63, 1671,1959.

[96] R. Zana, D. Guveli, J . Phys. Chem., 89, 1687,1985

[123] J. Zsak, A. Mocanu, Cs. Rcz, K. Rcz, E. Chifu, Stud. Univ. Babe-Bolyai, Chem., 42 (1-2),
37, 1997.

[124] J. Zsak, M. Tomoaia-Cotisel, A. Mocanu, Cs. Rcz, E. Chifu, J. Romanian Colloid and
Surface Chem. Assoc., 2 (3-4), 37, 1997.

[177] M.Tomoaia-Cotisel, J .Zsako, A.Mocanu, M.Salajan, Cs. Racz, S.Bran., E.Chifu, Stud.
Univ. Babes-Bolyai, Chem., 48 (1), 201, 2003.

[190] G. Tomoaia, M. Tomoaia-Cotisel, Cs. Racz, C. Ispas, C. Floare, Stud. Univ. Babes-
Bolyai, Chem., 50 (1), 47, 2005.

[207] M. Tomoaia-Cotiel, Cs. Racz, G. Tomoaia, C. Floare, R. Totos, L. Bobos, O. Pascu
and A. Dumitru, Stud. Univ. Babes-Bolyai, Chem., 50 (1), 39, 2005.

[208] O. Horovitz, G. Tomoaia, Cs. Racz, A. Mocanu, L. Bobos, M. Tomoaia-Cotisel,
Central European Journal of Chemistry ,4 (3), 489, 2006.

[249] M. Tomoaia-Cotisel, V-D. Pop, Gh. Tomoaia, A. Mocanu, Cs. Racz, C.R. Ispas, O.
Pascu, O.C. Borostean, Stud. Univ. Babes-Bolyai, Chem., 50 (1), 23, 2005.

[328] O. Horovitz, A. Mocanu, Gh. Tomoaia, M. Crisan, L.-D. Bobos, Cs. Racz, M.
Tomoaia-Cotisel, Stud. Univ. Babes-Bolyai, Chem., 52 (3), 53, 2007.

[329] O. Horovitz, M. Tomoaia-Cotisel, Cs. Racz, Gh. Tomoaia, L.-D. Bobo, A. Mocanu,
Stud. Univ. Babes-Bolyai, Chem., 54 (3), 89, 2009.

[337] A.Mocanu, G.Tomoaia, M.Tomoaia-Cotisel, Cs. Racz, C.R. Ispas, J . Zsako, Stud.
Univ. Babes-Bolyai, Chem., 49 (1), 29 (2004).
48

[359] M. Tomoaia-Cotisel, A. Tomoaia-Cotisel, T. Yupsanis, Gh. Tomoaia, I. Balea, A.
Mocanu and Cs. Racz, Rev. Roum. Chim., 51, 1201, 2006.

[432] M. Tomoaia-Cotisel, N. Cioica, C. Cota, Cs. Racz, I. Petean, L. D. Bobos, A. Mocanu,
O. Horovitz, Stud. Univ. Babes-Bolyai, Chem., 55 (2), 313, 2010.

[433] M. Tomoaia-Cotisel, Cs. Racz, N. Cioica, C. Cota, I. Petean, L.D. Bobos, A. Mocanu
and O. Horovitz, Healthy Nutrition and Public Health, IC-HNPH 2011, Transilvania
University of Brasov, Romania, May 13-16, 2011.

[489] I. Bratu, Gh. Tomoaia, Gh. Borodi, I. Daian, Cs. Racz, A. Mocanu, I. Kacso, Sz. Santa,
M. Tomoaia-Cotisel, The fifth Conference Isotopic and Molecular Processes, PIM 2007,
Cluj-Napoca, September 20-22, 2007.

[491]. Gh. Borodi, I. Bratu, Cs. Racz, Gh. Tomoaia, I. Daian, Sz. Santa, A. Mocanu, I. Kacso,
M. Tomoaia-Cotisel, The fifth Conference Isotopic and Molecular Processes, PIM 2007,
Cluj-Napoca, September 20-22, 2007.

[492] M. Tomoaia-Cotisel, Cs. Racz, Gh. Borodi, Gh. Tomoaia, I. Bratu, I. Kacso, Sz. Santa,
A. Mocanu, The 15th International Cyclodextrin Symposium, Vienna, May 9-12, 2010.

[494] Cs. Racz, Gh. Borodi, Gh. Tomoaia, I. Bratu, I. Kacso, A. Mocanu, M. Tomoaia-
Cotisel,The 15th international cyclodextrin symposium, Vienna, May 9-12, 2010.

[495]. Cs. Rcz, M. Tomoaia-Cotiel, in the International Conference, Helthy Nutrition and
Public Helth, IC-HNPH-2011, Transilvania University Brasov, Romania, May 13-16, 2011.

[496] Cs. Racz and Maria Tomoaia-Cotisel, The 10
th
International Conference on Colloid and
Surface Chemistry, Dunarea de jos University of Galati, Galati, June 9-11, 2011.

[524] M. Tomoaia-Cotisel, O. Horovitz, A. Mocanu, I. Albu, Cs. Racz, Termodinamica
Chimica in Aplicaii Numerice, Diagrame i Teste, Presa Universitar Clujean, Cluj-
Napoca, 2007, pp. 210.

[525] M. Tomoaia-Cotisel, O. Horovitz, A. Mocanu, I. Albu i Cs. Racz, Termodinamica
Chimica in Aplicaii Numerice, Diagrame i Teste, Editia a II-a, revzut i adugit, Presa
Universitar Clujean, Cluj-Napoca, 2008, pp. 226.

[533] Cs. Racz, I. Bratu, Gh. Borodi, Gh. Tomoaia, M. Tomoaia-Cotisel, A. Mocanu, I.
Kacso and Sz. Santa, The 2
nd
International Conference - Advanced Spectroscopies on
Biomedical and Nanostructured Systems, Cluj-Napoca, NANOSPEC, September 3-6, 2006.

[534] I. Bratu, Gh. Borodi, Cs. Racz, Gh.Tomoaia, M.Tomoaia-Cotisel, A. Mocanu, I. Kacso
and Sz. Santa, The First International Symposium on Supramolecular Chemistry, Faculty of
Chemistry and Chemical Engineering, Cluj-Napoca, April, 12-15, 2007.

[535] Cs. Racz, I. Albu, M. Tomoaia-Cotisel, A. Mocanu, Micro Symposium In
memoriam Profesor Mathe, Faculty of Chemistry and Chemical Engineering, Cluj-Napoca,
19 May, 2007.
49

[536] Gh. Borodi, Cs. Racz, Sz. Santa, I. Bratu, I. Kacso, A. Mocanu and M. Tomoaia-
Cotisel, The Conference Processes in Isotopes and Molecules, PIM 2011, Cluj-Napoca,
September 29-October 1, 2011.

[557] F. H. Allen, O. Kennard, Chem. Des. Autom. News, 8, 31, 1993.

[558] T. Steiner, J . Koellner, J. Am. Chem. Soc. 114, 5122, 1994.

[559] R.M. Stroud, C.H. Carlisle, Acta Cryst. B, 28, 307, 1972.

[566] Cs. P. Racz, R.-D. Pasca, Sz. Santa, I. Kacso, A. Mocanu, O. Horovitz and M.
Tomoaia-Cotisel, Rev. Chim. (Bucuresti), 62 (10), 2011 (in press).

[571] M. Tomoaia-Cotiel, Gh. Tomoaia, Cs. Racz, A. Mocanu, C.R. Ispas, M.I. Sljan,
I.Hlciug, Proceedings of the 8
th
Symposium on Colloid and Surface Chemistry, Galai,
J une 3-5, 2005, 4 pages.

[576] L.-D. Bobos, Gh. Tomoaia, Cs. Racz, A. Mocanu, O. Horovitz, I. Petean, M. Tomoaia-
Cotisel, Stud. Univ. Babes-Bolyai, Chem., 53 (4), 99-110 (2008).