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-Histologa: Definicin: La Histologa (del griego hists "tejido") es la ciencia que estudia todo lo referente a los tejidos que conforman un individuo, tomando en consideracin su estructura microscpica, su desarrollo y sus funciones. La Histologa tambin se ha denominado anatoma microscpica.

La Biologa Celular es una rama de la Citologa que estudia ms especficamente las clulas, en lo que atae a su estructura, composicin qumica y las funciones que se derivan de ella; as como tambin el funcionamiento de los sistemas celulares y sus mecanismos de regulacin y control.

Uno de los principales objetivos de la Histologa moderna es permitirle al estudiante la comprensin de la estructura microscpica de las clulas, tejidos y rganos, al mismo tiempo que se relaciona la morfologa con la funcin e incluyendo aspectos de biologa celular y molecular (1).

Todos los seres vivos estn constituidos por clulas, pequeos compartimientos que contienen sustancias qumicas en una solucin acuosa y delimitados por una membrana. Las clulas estn compuestas a partir de molculas, dispuestas en diferentes niveles de organizacin y al cooperar entre ellas conforman los organismos vivos, desde los ms simples hasta los ms evolucionados, como el ser humano.

1.2.-Limitaciones para el estudio de las clulas y tejidos: Las clulas son muy pequeas y complejas, caractersticas stas que dificultan observar su estructura y descubrir su organizacin molecular y ms difcil an, comprender el funcionamiento de sus diversos constituyentes. Lo que podamos conocer de las clulas depender de los instrumentos disponibles y adecuados para observar y analizar, tanto clulas individualizadas (Biologa Celular) como los tejidos y rganos (Histologa). Las tcnicas de laboratorio son cada vez ms especficas y actualizadas; de all que para familiarizarse con los conceptos, es necesario conocer los mtodos empleados para el estudio de las clulas y tejidos.

Una clula animal tpica, cuyo dimetro aproximado puede estar entre los 10 y 25 micrmetros (m), es mucho ms pequea que una partcula que pueda ser observada a simple vista por el ojo humano. Se tuvo que esperar entonces a principios del siglo XIX la aparicin de instrumentos

pticos, buenos microscopios fotnicos, para descubrir que los tejidos vegetales y animales estaban constituidos por agregados de clulas, independientes desde el punto de vista estructural, pero interrelacionadas funcionalmente.

Las clulas no son solamente minsculas, tambin son incoloras y translcidas en su mayora. Dilucidar este hecho permiti el desarrollo de un surtido de tcnicas colorantes que aseguraran un contraste suficiente para poder visualizar las clulas en toda su estructura y complejidad, y ms adelante, en el siglo XX, la observacin de detalles de la ultraestructura de los componentes ms finos del citoplasma, gracias al empleo de la microscopa electrnica.

La observacin de las clulas permite estudiar principalmente la estructura; aunque tambin a partir de hallazgos en las micrografas, que son imgenes estticas, se puede inferir sobre alguna actividad celular o proceso fisiolgico. Las clulas no pueden sobrevivir si son separadas del organismo al cual pertenecen, por lo que ameritan condiciones especiales para poder subsistir o perpetuarse y de la simple observacin se puede pasar a una intervencin activa, tales como el aislamiento y cultivos celulares, tcnicas estas que permiten obtener datos relacionados directamente con las actividades fisiolgicas de las clulas y sus relaciones con el entorno.

1.3.-Unidades de medida empleadas en microscopa: Una unidad de medida es una cantidad estandarizada de una determinada magnitud fsica. Para determinarla se emplea el Sistema Internacional de Unidades (SI) tambin conocido como sistema mtrico, que es el ms ampliamente usado. Este sistema se origin a partir del antiguo sistema mtrico decimal mks (metro-kilogramo-segundo), el cual fue mejorado. Fue creado en 1960 por la Conferencia General de Pesas y Medidas, celebrada en Paris (26, 27, 28).

La longitud es una magnitud creada para medir la distancia entre dos puntos y su unidad es el metro. La palabra metro proviene de la palabra griega metron (?t???). Se representa con la letra m.

Submltiplos del metro:

-decmetro (dm): 10-1 metros. -centmetro (cm): 10-2 metros. -milmetro (mm): 10-3 metros. -micrmetro (m): 10-6 metros. -nanmetro (nm): 10-9 metros. -angstrom (): 10-10 metros. -picmetro (pm): 10-12 metros. -femtmetro o fermi (fm): 10-15 metros. -attmetro (am): 10-18 metros. -zeptmetro (zm): 10-21 metros. -yoctmetro (ym): 10-24 metros.

Conocer las unidades de medida de longitud es relevante para el estudiante de medicina, porque entre otras cosas, algunas de ellas se emplean en la microscopa:

El micrmetro (m) es la unidad de longitud equivalente a una millonsima parte de un metro, abreviado (plural latino: micra). Tambin conocido como micrn.

El nanmetro (nm) es la unidad de longitud que equivale a una milmillonsima parte de un metro. Utilizada adems para medir las longitudes de onda de las radiaciones electromagnticas, la luz entre ellas. Esta unidad se ha hecho importante en campo de la Nanotecnologa, disciplina que estudia materiales cuyas dimensiones son en el orden de escasos nanmetros.

 El ngstrm () es la unidad de longitud empleada principalmente para expresar longitudes de onda, distancias moleculares y atmicas. Su nombre viene dado por el fsico sueco Anders Jonas ngstrm. Actualmente su uso en microscopa es restringido, en cierto modo ha sido sustituido por el nanmetro.

Equivalencias: Relaciones entre las diferentes unidades de medida empleadas en microscopa: 1 mm = 1000 m 1 m = 1000 nm 1 nm = 10 1 = 0.1 nm 1 = 0.0001m

1.4.-Dimensiones de las clulas y sus constituyentes: Por qu es importante conocer el tamao y dimensiones de las clulas y sus estructuras? En el estudio histolgico se hace necesario estar al tanto de las caractersticas estructurales normales de las clulas y tejidos que ellas conforman. La forma caracterstica de las clulas, sus dimensiones, dimetros y tamao, entre otras variables, se constituyen en puntos de referencia al momento de estudiar tejidos que presentan cambios morfolgicos. Si se conoce lo normal, se estar en capacidad de identificar algn cambio en dicho patrn. Tal es el caso de la Anatoma Patolgica, disciplina que estudia todos los aspectos morfolgicos de las enfermedades,

0fundamentalmente a nivel celular y tisular. Estas transformaciones son analizadas con diversos procedimientos, que actualmente incluyen desde la visin ocular directa (macroscpica), la microscopa ptica y la ultraestructura, hasta la patologa molecular.

El tamao de la clula est relacionado con la funcin que ella desempea y es una de las variables morfolgicas que con frecuencia se ve afectada cuando la clula presenta alteraciones patolgicas. Por ejemplo, en tejidos cancerosos se observa la hipertrofia, que consiste en un aumento en el tamao mas no en el nmero de las clulas que forman el tejido (29). Generalmente el tamao es constante para cada estirpe (o tipo) celular e independiente del tamao del individuo; una clula del rin de un humano es del mismo tamao que la clula equivalente del rin de un ratn; sin embargo, el rin humano es ms grande porque posee mayor nmero de clulas.

Se denomina tcnica histolgica al conjunto de operaciones a que se somete una materia organizada (tejido biolgico), a fin de que sea posible su estudio por medio del microscopio, posibilitando la observacin de estructuras no visibles al ojo humano.1

ndice [ocultar] 1 Pasos de la tcnica histolgica 1.1 Obtencin del material histolgico 1.2 Fijacin 1.3 Lavados 1.4 Deshidratacin 1.5 Aclaramiento 1.6 Infiltracin 1.7 Inclusin 1.8 Microtoma 1.9 Tincin 1.10 Observacin

2 Vase tambin 3 Referencias 4 Enlaces externos [editar]Pasos de la tcnica histolgica

Obtencin del material histolgico para estudiar Proceso de fijacin Lavados Deshidratacin Aclaramiento Infiltracin Inclusin Microtoma Tincin Observacin (Este ltimo no es considerado como un paso de la tcnica histologica por varios autores) [editar]Obtencin del material histolgico Los tejidos se pueden obtener de diferentes formas:

Biopsia - Biopsa excisional - Biopsia incisional - Biopsa endoscpica - Biopsia colposcpica - Puncin aspiracin con aguja fina (PAAF) - Biopsia por puncin con aguja gruesa (Tru-cut)

Abiopsia Necrociruga (llamada vulgarmente autopsia) [editar]Fijacin

En este paso el tejido obtenido se coloca en una sustancia fijadora para evitar los cambios postmortem. Unos de los fijadores ms usado es el formol al 10% (formaldehido). En el caso de que utilicemos ms adelante el microscopio electrnico, usaremos glutaraldehdo (para protenas) u osmio (para lpidos).

[editar]Lavados Se debe lavar el tejido para quitar el exceso de fijador.

[editar]Deshidratacin Suena incoherente que se deba lavar el tejido y despus deshidratarlo. El exceso de fijador al momento de la infiltracin, incluso en la microtoma, podra afectar los cortes histolgicos, y por ello se debe lavar. La deshidratacin se hace empleando diferentes soluciones de alcohol de concentracin creciente.

[editar]Aclaramiento En este paso se sustituye el alcohol por un disolvente de parafina. El ms usado es el xilol (xileno) ya que como la muestra est deshidratada, el xilol entrar hasta lo ms profundo del tejido. Tambin el tejido pierde color y adquiere un tono acaramelado.

[editar]Infiltracin En este paso la muestra se coloca en parafina lquida, cabe mencionar que se debe usar parafina histolgica. Como se ha dicho en el paso anterior el tejido est completamente lleno de xilol, ahora debido a smosis sale el xilol y entra la parafina.

La deshidratacin, aclaramiento e infiltracin pueden ser realizadas manualmente pero hoy en da se realizan de modo automtico en mquinas especficas.

[editar]Inclusin Aqu se forman bloques de parafina dentro de los cuales estn las muestras a estudiar. Tambin hay maquinas especializadas para la inclusin en parafina de tejidos. Despus de su inclusin y posterior secado, estos se deben poner a enfriar en un congelador para su posterior corte.

[editar]Microtoma Se realizan cortes histolgicos muy delgados segn lo requerido o la costumbre del laboratorio donde se realice la tcnica. Los cortes van desde 0,5 micras hasta 8 u 10 micras. Los cortes se echan al bao de flotacin y se pescan con un portaobjetos, se marcan con la fecha, el tipo de tejido y la tincin con que se van a procesar. El ngulo de corte entre el cuchillo del microtomo y el bloque ha de estar entre 10 y 15. Una vez realizado el corte se da un bao de agua destilada, para que la parafina se estire. Un buen corte histolgico debe tener un grosor aproximado de 3-5 micras para que sea fcilmente atravesado por la luz.

[editar]Tincin Hay muchos tipos de tinciones para diferenciar en los tejidos las diferentes estructuras o sustancias.

La tincion ms usada o tambin llamada "de rutina" es la de hematoxilina y eosina (H&E). Se usa un colorante llamado hematoxilina que tie las sustacias cidas o que las contengan, como el ncleo que contiene cido desoxirriboncleico (ADN) La eosina amarillenta tie las estructuras bsicas como el citoplasma y dems orgnulos eosinoflicos de la clula.

Como se mencion anteriormente hay muchas tinciones Otros ejemplos son:

Masson PAS Perls Plata metenamina Warthin-Starry Ziehl-Neelsen Van Gieson

Azul alcian Sudn III Rojo Congo [editar]Observacin Como se menciono al principio algunos autores no consideran la observacin como un paso de la tcnica histolgica sino el objetivo final de la misma. Como se puede deducir, se observa la laminilla al microscopio y se busca lo que se necesite ver para llegar a un diagnostico.

La tcnica histolgica es muy empleada en laboratorios y hospitales. Permite hacer diagnsticos de distintas enfermedades, como para saber si un tumor es maligno o beningno, etc.

[editar]Vase tambin

Histologa [editar]Referencias

Tcnica histolgica. Dr. Gabriel Magarios. Dermatologa en red. Histologa: Mtodos e instrumentos de estudio de la Histologa. Parte I: Tcnica histolgica, Gua de actividad N1 (2005) Prof. titular: Dra. O. Z. de Gorodner, Prof. adjunta: Dra. R. R. de Godoy, Facultad de Medicina de la Universidad Nacional del Noreste. [editar]Enlaces externos

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