Professional Documents
Culture Documents
, n care:
M
v
cantitatea de mal verde necesar pentru 100 kg materie prim amidonoas, n kg;
C
a
cifra de amilaz, constant specific pentru fiecare tip de materie prim ( de exemplu, C
a
= 1054 pentru
porumb i C
a
= 1001 pentru gru);
A coninutul n amidon al materiei prime , n %;
activitatea -amilazic a malului verde n SKB.
Plecnd de la aceast formul, Pieper a ntocmit tabele care indic cantitile optime de mal verde
pentru diferite materii prime amidonoase, n funcie de coninutul de amidon i de activitatea -amilazic.
Exemplu de calcul. Pentru un porumb cu 60% amidon i un mal verde cu activitatea -amilazic de 50 uniti
SKB, cantitatea de mal verde necesar va fi:
M
v
=
50 100
60 1054
n care:
- No numr celule inocul;
- N numrul de celule rezultate prin nmugurire.
- Constanta vitezei de reproducere:
V =
) ( 2 lg
lg lg
to t
No N
t
n
= ,
n care:
- t timpul de cultivare
- Timpul necesar pentru un ciclu de reproducere sau timpul de generaie :
g =
v n
t 1
= ,
n care:
g - timpul de generaie, pentru dublarea numrului de celule;
n numr de diviziuni;
v constanta vitezei de reproducere.
Timpul de generaie pentru Saccharomyces cerevisiae la temperatura de 30
0
C este de 2 ore (Prescott,
L.M., 1990).
Dup introducerea inoculului, cnd n mediu exist o cantitate suficient de oxigen, drojdiile pot
produce oxidarea glucidelor fermentescibile pn la produii finali ai respiraiei i are loc nmulirea celulelor.
Apoi procesul de respiraie se reduce i se intensific procesul fermentativ, iar celulele existente cresc n
dimensiuni i n celule se acumuleaz glicogen.
Pentru stabilirea vitezei de nmulire se calculeaz coeficientul Km care exprim numrul de celule noi
ce se formeaz pentru fiecare celula existent, n timp de o or cu relaia :
39
K
m
=
1 2
1 2
) log (log 3 , 2
t t
N N
n care:
N
1
- numr iniial dup inoculare (la timpul t
1
);
N
2
- numr de celule format n mediu n perioada t
2
-t
1
.
La cultivarea drojdiilor n plmezi de melas s-a constatat n condiii practice o anomalie n
desfurarea logaritmic a curbei de dezvoltare, drojdia nmulindu-se prin impulsuri ritmice.
n cazul proceselor continue, rata de cretere a celulelor de drojdie, dup Monod i Maxon (1955), se
exprim prin relaia:
=
B dt
db 1
- ,
unde,
- rata de cretere specific;
- rata de diluie sau fracia volumic de lichid care prsete vasul n unitatea de timp ;
db/dt - procentul de drojdie nou din cantitatea constant B n vasul de multiplicare.
Cercetrile au permis stabilirea unor ecuaii matematice i a relaiilor dintre urmtorii factori care se iau
n considerare la calculul multiplicrii drojdiei:
- coeficientul de multiplicare;
- modulul (factorul) de cretere orar;
- viteza de asimilare a zahrului.
Coeficientul de multiplicare este un prim factor. Dac se noteaz cu A masa de drojdie care se afl la un
moment dat n mediu, viteza de nmulire n acel moment este Ar, n care r este un factor constant al condiiilor
specifice de mediu, denumit coeficient de multiplicare. Coeficientul r se exprim n grame de celule noi formate
ntr-o or din gramele de celule de drojdie ce se aflau n mediu. Cantitatea de drojdie, care se afl n mediu, dup
o perioad t de multiplicare, poate fi calculat dup urmtoarea ecuaie:
t r
e A A
=
0
n care:
A - masa brut a drojdiei produs n timpul t, n grame;
A
0
- masa drojdiei cuib, n grame;
e - baza logaritmic Neperian egal cu 2,3718;
r - coeficientul de multiplicare.
Prin derivarea acestei ecuaii poate fi obinut viteza de nmulire care este:
Ar e A r
dt
dA
n
= =
0
Deseori, se aplic ecuaia Michaelis-Menten pentru descrierea comportrii microorganismelor n
decursul dezvoltrii drojdiei. Ea se exprim prin relaia:
S K
S
s
m
+
=
n care:
- factorul de dezvoltare;
m
- factorul de dezvoltare maxim;
S - este concentraia mediului;
K
s
- este constanta de saturaie, respectiv concentraia mediului la jumtatea factorului de dezvoltare.
Constantele au fost determinate experimental n medii de glucoz. Astfel Hartree (1948) a gsit pentru
m
valori de 0,37 ore i pentru k, valori de 3,6*10
-4
M la temperatura de 30
0
C i pH de circa 4.
Modulul orar de cretere (H) este un factor cu valoare practic pentru calculul creterii orare n greutate
a unei cantiti de drojdie supus multiplicrii. Dac presupunem c modulul orar H = 1,2 aceasta nseamn c 1
g de drojdie crete la 1,2 g ntr-o or, la 1,2 kg la 2 ore, 1,2
t
n t ore. Prin urmare:
t t r
H A e A =
0 0
Egalnd ecuaiile 1 i 2 rezult c:
t
H A A =
0
sau:
t n
H e =
Prin logaritmare obinem:
( ) ( )
t t r
H e ln ln =
sau:
40
r
e H =
Numeroase cercetri care s-au efectuat cu privire la randamentele maxime de drojdie ce se pot obine
din zahrul coninut de melas, au evideniat c n cele mai bune condiii drojdia folosete pentru nmulirea ei
2/3 din carbonul moleculei de hexoz, iar restul de 1/3 pierzndu-se sub form de dioxid de carbon. Deci, o
drojdie de panificaie cu 27% substan uscat conine 12,7% carbon. Un gram de zahr invertit conine 0,4 g
carbon, din care, dac se folosesc numai 2/3 pentru formarea celulelor noi de drojdie, rezult c pentru 0,127 g
carbon, care se gsesc ntr-un gram de drojdie, sunt necesare 0,476 g hexoz.
Viteza de asimilare a zahrului n t ore de la nceperea procesului de multiplicare este dat de derivata:
t r
e A r
dt
dV
=
0
476 , 0 , unde:
r A e A r
t r
=
0
r A
dt
dV
= 476 , 0
Pentru obinerea de randamente maxime n drojdie este necesar ca n plmad concentraia de zahr s
fie sczut, aceasta realizndu-e prin adaosuri progresive de melas cu un debit orar corelat cu necesitile de
multiplicare ale drojdiilor. Este indicat ca n orice moment din perioada alimentrii, zahrul din plmad s fie
consumat nainte de sosirea poriunii urmtoare de melas, dac se ignor aceast condiie, excesul de zahr se
pierde sub form de alcool.
( )
361
1 476 , 0
100
92 , 1
0
=
=
e
A kg drojdie de nsmnare
Dac valoarea factorului r este cunoscut, cantitatea corect de drojdie de nsmnare se determin din
ecuaia
( ) 1 476 , 0
0
=
t r
e A G ,
unde G este masa zahrului asimilat n t ore. Spre exemplu, dac o plmad trebuie s fie alimentat cu 1000 kg
zahr din melas n 12 ore i s-a determinat factorul r = 0,16, rezult c sunt necesare: cantitatea iniial de zahr
la timpul zero trebuie s fie de 0,476 x r x A
0
= 27,5 kg/h (sau 55 kg melas tip 50%). Cantitatea de zahr i
implicit de melas preparat crete progresiv, astfel c n a 6-a or este de 0,476 x r x A
0 x
e
0,96
= 71,8 kg/h, iar n
ora a 12-a, spre exemplu de 0,476 x r x A
0
x e
1,92
= 188 kg/h.
Un calcul mai simplu const n stabilirea necesarului de zahr, care trebuie s se adauge n plmad
orar, n baza modulului orar de cretere H. n cazul exemplului menionat mai sus:
175 , 1
16 , 0
= = = e e H
r
kg
Cele 361 kg drojdie cuib vor spori la 361 x H n prima or, deci n prima or se vor forma 632 kg
drojdie. Aceasta necesit pentru multiplicare 0,476 x 632 = 301 kg zahr.
8.2.2. Drojdia de cultur Saccharomyces cerevisiae
Se urmrete obinerea n laborator a unor culturi de celule ct mai omogene, n ceea ce privete
metabolismul, randamentul, viteza de nmulire, capacitatea de reproducere i calitatea produsului finit.
nmulirea culturilor se efectueaz treptat, primele faze realizndu-se n laborator i n continuare, n staia de
culturi pure a productorului de drojdie de panificaie.
Meninerea puritii se realizeaz prin izolarea de celule individuale din culturi ce s-au comportat bine,
din probe preluate din ultima faz de multiplicare. Pentru izolarea de celule se practic, n funcie de mediul
nutritiv, metode cu substrat lichid (Lindner i Hansen) i metode cu substrat solid (Koch i Hansen).
Dup izolare se trece la verificarea puritii culturilor izolate, vizual cu ajutorul microscopului i prin
nsmnri pe suprafaa mediului nutritiv, solidificat n plci Petri. Prin controlul vizual al eprubetei, se poate
observa uniformitatea creterii i prezena indicatorilor morfologici caracteristici pentru specia izolat. Prin
control microscopic, n preparate umede se observ forma celulelor i absena microorganismelor de
contaminare.
Cultura pur de laborator se analizeaz i din punct de vedere al aspectului, a numrului de celule
moarte, pentru a avea sigurana c este corespunztoare. Drojdia pur trebuie s fie sedimentat ntr-un strat
compact pe fundul vasului; cnd drojdia este rspndit n masa lichidului i aglomerat n flocoane vizibile,
denot faptul c mediul de cultur a fost contaminat. Celulele de drojdie moarte se identific cu ajutorul metodei
de colorare cu soluie de albastru de metilen.
n vederea asigurrii de parametri ct mai uniformi n decursul multiplicrii n producie, este necesar
conservarea culturilor pure de drojdii. n momentul constatrii unor fenomene de degenerare, de contaminare sau
apariiei de mutante care modific nsuirile drojdiilor, precum i a unei proporii prea mari de celule moarte, se
procedeaz la schimbarea culturii. Un laborator specializat n prepararea, conservarea i livrarea de culturi pure
dispune de o micotec cu o gam larg de tulpini de drojdii cu caracteristici bine cunoscute, care le livreaz la
cererea productorilor de drojdie de panificaie.
Dintre tehnicile aplicate pentru conservarea culturilor pure, bazate pe prelungirea fazei staionare de
cretere i evitarea etapei de declin, se cunosc urmtoarele:
41
- repicarea periodic prin transfer de celule din eprubeta cu cultura pur n care mediul nutritiv este
epuizat, n eprubeta cu mediul nutritiv steril cu compoziie similar. Metoda necesit un mare volum de
munc, prezint risc de contaminare i este greu de realizat atunci cnd numrul du culturi este mare;
- prelungirea intervalului ntre dou repicri prin scderea vitezei de metabolism a celulelor se poate
realiza prin:
- meninerea culturilor la temperaturi sczute, n condiii de refrigerare sau congelare;
- privarea de oxigen: cultura dezvoltat n mediu solidificat se acoper cu un strat de ulei de parafin
steril, prevenindu-se n acest fel i uscarea mediului;
- reducerea umiditii mediului conduce la trecerea celulelor n stare de anabioz care poate fi meninut
timp ndelungat fr a se produce modificri intracelulare, ireversibile;
- pstrarea culturilor n stare liofilizat, este tehnica cea mai rspndit i avantajoas deoarece
prelungete cel mai mult intervalul de conservare a culturilor, fr s produc modificri ale
proprietilor lor fiziologice (Dan, V., 1999).
Scopul selecionrii unei tulpini de drojdie este obinerea n laborator a unor culturi pure de celule ct
mai omogene, n ceea ce privete metabolismul, randamentul, viteza de nmulire, capacitatea de reproducere i
calitatea produsului finit.
Principalele condiii pe care trebuie s le ndeplineasc o cultur pur de laborator, destinat fabricrii
drojdiei de panificaie sunt urmtoarele (Dan, V., 1999):
- s posede o capacitate mare de fermentare, indiciu c tulpina de drojdie conine tot complexul enzimatic.
Aceasta este o proprietate complex i reflect activitatea combinat a produselor mai multor gene. Foarte
important pentru industria panificaiei este utilizarea de drojdii cu potenial nalt de fermentare a maltozei;
- s posede o rat de cretere i randament pe medii cu noi surse de carbon;
- s fie pur din punct de vedere microbiologic;
- s fie viguroas pentru a rezista diferitelor microorganisme de contaminare;
- s suporte o concentraie ct mai mare de sruri, dat fiind compoziia melasei;
- s fie acomodat la anumite doze de conservani, care s inhibe microorganismele de contaminare;
- s posede rezisten la congelare i uscare;
- s-i pstreze proprietile biotehnologice timp ndelungat. Aceast proprietate este condiionat genetic.
Selecionarea const n izolarea unei singure celule, creia i se creeaz apoi condiii de multiplicare
pn la obinerea unei cantiti ce este testat ntr-o staie pilot, n vederea stabilirii nsuirilor care caracterizeaz
tulpina respectiv de drojdie. Dac aceasta prezint caracteristicile dorite, devine una din tulpinile de baz, care
se multiplic n fazele de laborator i apoi se introduce n fabric. Productorii de drojdie de panificaie acord o
atenie deosebit conservrii n condiiile impuse a tulpinii de drojdie, ca aceasta s fie ferit de contaminare i
pstrat la temperatura prescris pentru a evita apariia unor mutaii care ar influena negativ calitatea i
randamentul drojdiei finite.
n prezent, datorit cunotinelor din domeniul geneticii s-au pus bazele ameliorrii drojdiilor industriale
i modalitilor practice de mbuntire a calitilor lor prin inducerea, identificarea, izolarea i caracterizarea
unor mutante i linii cu proprieti biologice i economice superioare, obinerea unor hibrizi i recombinai prin
tehnici de inginerie genetic i fuziune de protoplati.
Aprecierea concentraiei de celule de drojdie din medii lichide prin metode directe. Pentru aprecierea
numrului de celule de drojdie aparinnd speciei Saccharomyces cerevisae n medii de multiplicare sau de
fermentare i evaluarea vitezei de cretere se pot folosi metode de numrare directe cu ajutorul camerelor de
numrare. De exemplu, se poate utiliza camera Thoma. Aceast camer prezint o reea cu suprafaa de 1 mm
2
divizat n 400 microcelule elementare i o adncime de 0,1 mm nct volumul suspensiei de celule pentru
numrat corespunztor unei microcelule este de 1/4000 mm
3
.
Relaia de calcul folosit n determinri va fi:
N= n x 4 x 10
6
x K
n care:
- n = numr mediu de celule/microcelule;
- 4.10
6
= factor de transformare n cm
3
a volumului microcelulei elementare;
- k = factor de diluie(facultativ);
- N = numr celule/cm
3
suspensie).
Determinarea viabilitii celulelor de drojdie. Metoda se aplic frecvent pentru evaluarea calitii
drojdiei comprimate, a strii fiziologice i determinarea procentual a celulelor autolizate, a influenei unor
factori de mediu asupra activitii fiziologice a celulei de drojdie. n principiu, metoda se bazeaz pe faptul c
celulele de drojdie neviabile fie n urma procesului de autoliz fie a unui factor exterior ce produce modificri
ireversibile n structura proteinelor, i pierd proprietile fermentative. Prin suspendarea celulelor de drojdie n
soluie diluat de albastru de metilen (1:10.000 n citrat de sodiu 2%), celulele inactive fiziologic, se vor colora
n albastru deoarece n urma inactivrii reductazelor, nu se mai produce trecerea colorantului n forma sa de
leucoderivat incolor, aa cum are loc n celula vie, activ. Cu ajutorul camerei Thoma se poate face numrarea
separat a celulelor neviabile (autolizate), din total celule i exprimarea lor procentual / cm
3
sau grame drojdie
comprimat.
42
8.2.3. Multiplicarea drojdiei n laborator
Multiplicarea celulelor de drojdiei se efectueaz n dou etape, n laborator i apoi n fabric.
Se pleac de la o cultur pur de drojdie obinut la un institut specializat sau chiar n laboratorul
fabricii prin metoda izolrii n picturi sau n plci. Cultura de drojdie de baz se pstreaz pe must de mal cu
agar la ntuneric i la temperaturi sczute de 25
0
C lundu-se toate msurile de a o feri de contaminare cu
microorganisme strine.
Multiplicarea culturii de drojdie n laborator are loc n patru faze, folosindu-se ca mediu de cultur must
de mal. n prima faz se prepar cultura de drojdie ntr-o eprubet de 20 ml, n care se introduce mediul nutritiv
care se solidific n plan nclinat i se nsmneaz drojdia cu vrful de platin al ansei preluat din tulpina
selecionat. Din aceast eprubet se nsmneaz n vase Erlenmayer cu creterea succesiv a volumului de
must de mal, n trei faze, la intervale de 24 de ore.
La sfritul multiplicrii se obine cultura pur de drojdie de laborator care servete pentru nsmnarea
n primul vas de multiplicare a drojdiei n secia de culturi pure.
8.2.4. Multiplicarea drojdiei n fabric
Multiplicarea n fabric are loc n cinci faze, primele dou faze n vase de multiplicare n staia de
culturi pure, iar urmtoarele trei faze n linuri de multiplicare. Principalii parametri tehnologici n procesul de
multiplicare a drojdiilor de panificaie. Staia de culturi pure a fabricii asigur multiplicarea n dou trepte, n
vase metalice, cu creterea succesiv a volumului de 510 ori. Ca mediu nutritiv se folosete o soluie apoas de
melas cu adaos de substane nutritive, denumit plmad. Pentru realizarea unei culturi viguroase, se urmrete
multiplicarea celulelor de drojdie, concomitent cu o fermentaie alcoolic, ntr-un mediu cu a aciditate ridicat.
Pentru faza I de multiplicare a drojdiei se utilizeaz vase de multiplicare, confecionate din cupru,
prevzute cu racord de ap, abur, aer, gur de vizitare cu capac, robinet de prelevare probe, conduct de
eliminare CO
2
, cu o capacitate de 300500 l/buc.
Vasul de multiplicare este mai nti curat, splat i sterilizat cu abur i formalin, dup care se prepar
mediul nutritiv, conform reetei de fabricaie, corecia de pH realizndu-se cu H
2
SO
4
concentrat, pn la un pH
de 4,05,0. Plmada obinut se sterilizeaz cu abur direct timp de o or, dup care se rcete cu ajutorul
sistemului exterior de rcire la 2832
0
C, apoi se nsmneaz plmada cu cultur pur de laborator.
Multiplicarea are loc prin fermentare aerob cu formare de alcool, vasul fiind nchis cu capac. n timpul
perioadei de fermentare din dou n dou ore se execut controlul temperaturii, gradului Balling, aciditii i
examenul microscopic al plmezii.
Coninutul vasului este trecut integral prin conducta de legtur, sterilizat cu abur n prealabil, n vasul
din faza a II-a culturi pure fabric cu o capacitate de 10002500 l.
Plmada pregtit conform reetei de fabricaie se sterilizeaz cu abur direct timp de o or. Se rcete
plmada la 2832
0
C i se nsmneaz cu drojdie din faza I de multiplicare. Cultura pur de fabric obinut
este folosit integral pentru nsmnarea n cea de-a treia faz de multiplicare a drojdiei.
Vasele sunt prevzute cu evi exterioare perforate 3, prin care se poate introduce ap rece sau cald
pentru temperarea plmezii i cu evi perforate n interior 4 prin care se poate introduce abur pentru sterilizarea
mediului ct i aer comprimat n timpul multiplicrii drojdiei.
Vasele mai sunt prevzute cu racorduri pentru introducerea mediului nutritiv 5, racordul de nsmnare
cu cultur pur de laborator 6, guri de vizitare 7, supape de suprapresiune 8 i de vacuum 9, manometre 10,
termometre 11, robinete de prelevare probe 12 i conducte de evacuare a dioxidului de carbon 13 care ptrund n
vasele de ap 14. Apa de rcire ce se prelinge pe pereii exteriori este colectat i evacuat din jgheabul 15.
Cultura de drojdie obinut n primul vas este trecut prin conducta 16 n cel de-al doilea vas, iar cultura pur
rezultat din acest vas trece prin conducta 17 n secia de producie (Hopulele, T., 1980).
Drojdia obinut n staia de culturi pure este multiplicat n continuare n fabric n 24 faze, n funcie
de tehnologia i utilajele folosite. Se practic procese cu plmezi de melas diluat (1/181/25) sau concentrat
(1/51/10) i tehnici de multiplicare discontinu sau continu. Randamentele obinute difer n funcie de
caracteristicile materiilor prime, a culturii de drojdie i a tehnologiei aplicate. n unele cazuri se urmrete
producerea concomitent de drojdie comprimat i de alcool etilic. Spre deosebire de primele dou faze n care
mediul nutritiv este introdus la nceputul multiplicri integral n vasul de multiplicare, la multiplicarea drojdiei n
fazele IIIIV, alimentarea cu melas i substane nutritive se realizeaz n mod continuu, dup diagrame de
alimentare prestabilite, care trebuie respectate cu strictee.
n faza a III-a de multiplicare, capacitatea linurilor este de circa 10 ori mai mare dect a vaselor folosite
n faza a II-a (725 m
3
). Capacitatea util reprezint numai 75% din cea total, restul de 25% fiind afectat pentru
sistemul de aerare ct i pentru spuma format.
nainte de utilizare linurile se cur, se spal cu soluie de sod caustic 24% i n final se face o
sterilizare combinat cu abur i soluie de formalin 510% timp de circa o or. Se introduce apoi ap n lin pn
la 50% din capacitatea util a acestuia, se adaug 1/3 din melasa pregtit i o parte din substanele nutritive. Se
omogenizeaz prin barbotare de aer i se nsmneaz cu drojdie rezultat din faza a II-a de multiplicare.
n timpul multiplicrii, spuma se combate cu substane antispumante care se introduc direct n plmad.
Se respect diagrama orar de alimentare cu melas i substane nutritive a linului de multiplicare.
Indiferent de tehnologia aplicat, n instalaii de mare capacitate, plmada de drojdie rezultat n treapta
a III-a de multiplicare este supus concentrrii cu separatoare centrifugale nainte de nsmnare pentru
43
urmtoarea etap de multiplicare. Totodat, se corecteaz pH-ul i se pstreaz laptele de drojdie obinut n
recipiente rcite la temperatura de 46
0
C.
Multiplicarea drojdiei n faza a IV-a are loc n linuri asemntoare din punct de vedere constructiv cu
faza a III-a, avnd ns capacitatea de 56 ori mai mare (40100 m
3
). n aceast faz se obine drojdia cuib sau
drojdia maia folosit pentru nsmnarea mediului nutritiv din ultima faz de multiplicare (faza a V-a).
Condiiile de multiplicare a drojdiei n aceast faz sunt mai favorabile dect n
fazele precedente:
- concentraia i aciditatea mediului sunt mai reduse;
- aerarea mediului este mai intens;
- procentul de alcool din plmad este foarte redus.
Pentru stabilirea cantitii necesare de melas pentru aceast faz este necesar s se in seama de
raportul de diluie, care reprezint raportul dintre cantitatea de melas nediluat (tone) i volumul final al
plmezii exprimat n m
3
. n faza a IV-a de multiplicare raportul de diluie trebuie s fie de circa 1/18. De
exemplu, pentru o capacitate util a linului de 75 m
3
necesarul de melas va fi 75:18 = 4,166 tone.
Dup ce linul a fost splat i sterilizat se introduce ap n proporie de circa 30% din volumul util, peste
care se adaug 15% din cantitatea de melas pregtit i 33% din cantitatea de substane nutritive pregtite sub
form de soluie, se omogenizeaz prin barbotare de aer i se face nsmnarea prin conducta de legtur cu
plmada de drojdie din faza a III-a. Restul de melas i substane nutritive din reeta de fabricaie se adaug n
timpul multiplicrii drojdiei. Astfel, n prima or de multiplicare nu se adaug melas i substane nutritive,
drojdia aflndu-se n faza latent a ciclului vital. Din acest motiv i debitul de aer este mai redus de 50 m
3
/m
3
plmad i or.
ncepnd din ora a doua, cnd drojdia intr n faza logaritmic de multiplicare, ncepe adugarea de
melas i substane nutritive n cantiti din ce n ce mai mari, dup o diagram prestabilit. n aceast perioad
de multiplicare intens a drojdiei se folosete un debit maxim de aer de 100 m
3
/m
3
plmad i or. n ultima or
nu se mai efectueaz alimentarea cu melas i substane nutritive, debitul de aer scade la valoarea iniial, drojdia
fiind lsat s se maturizeze.
Plmada de drojdie rezultat din faza a IV-a nu se nsmneaz ca atare n faza a V-a, ci sub form de
lapte de drojdie obinut prin separare centrifugal i pstrat pn la folosire, la temperatura de 04
0
C n
colectoare de depozitare. Laptele de drojdie obinut mai este denumit impropriu i maia, deoarece el servete la
nsmnarea plmezilor din faza a V-a de multiplicare.
n aceast ultim faz de multiplicare a drojdiei se obine aa numita drojdie de vnzare. Multiplicarea
are loc n linuri identice ca n faza a IV-a, folosindu-se circa 80% din capacitatea total de fermentare pentru
drojdia de vnzare, restul de 20% utilizndu-se pentru obinerea drojdiei maia. Astfel la intervale de 23 zile
unul sau dou linuri sunt folosite pentru producerea drojdiei maia.
n ultima faz de multiplicare se asigur cele mai bune condiii de mediu pentru dezvoltarea drojdiei,
concentraia i aciditatea plmezii fiind mai reduse dect n faza a IV-a de multiplicare. Se urmrete obinerea
unei puriti microbiologice crescute a plmezii i a unor randamente maxime.
n faza a V-a de multiplicare raportul de diluie este de 1/25. Se introduce la nceput ntreaga cantitate
de ap n linul de multiplicare, adugnd apoi 8% din melasa necesar i 14% din cantitatea de substane
nutritive, apoi se respect diagramele orare de alimentare stabilite.
Din colectorul de depozitare maia se nsmneaz linul de multiplicare din faza a V-a cu o porie de
maia egal cu sau 1/5 din volumul total rezultat de maia i se omogenizeaz plmada prin barbotare cu aer.
Astfel, cu o maia se pot nsmna concomitent 4 sau 5 linuri de faza a V-a. n timpul multiplicrii se controleaz
orar concentraia, aciditatea i temperatura, efectundu-se coreciile necesare, iar la dou ore se efectueaz i un
control microscopic al drojdiei.
8.2.5. Linurile de multiplicare a drojdiei
Linurile de multiplicare a drojdiei n diferite faze, denumite i fermentatoare, constituie utilajele
principale folosite la fabricarea drojdiei de panificaie. Ele pot fi confecionate din tabl de oel antiacid, oel
inoxidabil sau chiar din oel obinuit protejat n interior cu un lac acidorezistent.
Linurile pot avea form cilindric sau paralelipipedic. Forma cilindric permite o distribuie mai
uniform a aerului n plmad i o curire mai uoar, fiind astfel cea mai des ntlnit. Linurile de form
paralelipipedic permit o utilizare mai bun a spaiului de la fermentare. Schematic un lin clasic de multiplicare a
drojdiei prevzut cu un sistem static de aerare se prezint n figura 22.
Sistemul de aerare este format dintr-o conduct central vertical pentru intrarea aerului care este n
legtur cu o conduct orizontal amplasat la fundul linului, n care sunt nfiletate o serie de evi perforate,
dispuse pe toat suprafaa fundului linului astfel nct s permit o distribuie ct mai fin i mai uniform a
aerului n mediu, de care depinde n cea mai mare msur gradul de utilizare a oxigenului i deci consumul
specific de aer. Orificiile de distribuie a aerului au un diametru de 0,40,5 mm, distana dintre ele este de circa 4
mm i sunt amplasate pe partea lateral a evilor perforate. Acestea sunt prevzute la capete cu capace nfiletate,
care se pot scoate pentru curire i splare.
O importan deosebit are sistemul constructiv al instalaiei de aerare, solubilizarea oxigenului n mas
variind de peste 10 ori la diversele instalaii, funcie de particularitile constructive (Anghel, I. et al., 1991).
Progrese importante n tehnica aerrii au fost realizate dup elaborarea de instalaii rotative. Dintre instalaiile
44
care s-au impus n practic, se pot enumera: inferatorul, aeratorul Vogelbusch, sistemul de aerare cu jet adnc
(VB-IZ), sistemul de aerare Frings.
Prin folosirea sistemelor dinamice de aerare s-au putut utiliza la multiplicarea drojdiilor plmezi mult
mai concentrate dect n cazul procedeului clasic, obinndu-se n final randamente superioare de biomas de
drojdie de 45 ori mai mare.
Linurile moderne de fermentare sunt prevzute cu instalaii complexe de automatizare, care permit
reglarea automat a alimentrii cu melas i substane nutritive, a debitului de aer, apei tehnologice, antispumant,
msurarea i reglarea automat a pH-ului plmezii i a temperaturii n lin, prin variaia debitului de ap de rcire.
ntruct multiplicarea drojdiei este un proces exoterm, eliberndu-se 25003500 kcal/kg s.u. de drojdie,
este necesar o rcire corespunztoare a plmezii care se poate realiza cu ajutorul serpentinelor de rcire, a unor
baterii de evi demontabile verticale aezate n interiorul linului sau prin stropire exterioar. Att sistemul de
distribuire a aerului ct i cel de rcire sunt construite din eav de cupru.
Datorit aerrii intense i a substanelor coloidale din melas, n timpul multiplicrii drojdiei se
formeaz cantiti mari de spum, pentru combaterea creia se utilizeaz dou grupe de procedee:
- procedee mecanice, care se bazeaz pe folosirea unor sprgtoare de spum;
- procedee chimice, care utilizeaz pentru distrugerea spumei substane cu aciune antispumant.
n fabricile de drojdie spuma se combate de obicei prin folosire de substane antispumante.
8.2.6. Factorii care influeneaz calitatea drojdiei n fazele de multiplicare
8.2.6.1. Efectul presiunii osmotice
Drojdiile se dezvolt n condiii bune, cnd mediul n care se afl are o presiune osmotic ct mai
apropiat de aceea din interiorul celulei (izotonie). Schimbrile brute i importante ale presiunii osmotice a
mediului pot provoca dereglarea funciilor compensatoare de adaptare ale membranei citoplasmatice i chiar
lezri ale peretelui celular, ce pot duce la moartea fiziologic a celulei. n medii cu presiune osmotic ridicat,
bogate n glucide sau sruri (medii hipertonice), celulele sunt silite s realizeze n interiorul lor o contrapresiune
osmotic echivalent, lsnd s treac n mediu o proporie corespunztoare de ap.
Cnd celulele se gsesc n medii cu presiune osmotic inferioar celei a coninutului vacuolelor, n ap
de exemplu, din aceeai necesitate a realizrii unei contrapresiuni osmotice echivalente, accept ptrunderea de
ap din mediul extern. Drept urmare, turgescena celulelor crete pn cnd presiunea intracelular depete
rezistena peretelui, care plesnete. Fenomenul de turgescen duce astfel la distrugerea celulelor. Prin
deshidratarea drojdiilor, n celule se mrete concentraia n substane i crete presiunea osmotic, ce exercit
influen asupra proceselor fermentative. La mrirea concentraiei n substane ncepe frnarea proceselor
biochimice ale celulei i la un anumit nivel ncepe ocul osmotic (Dan,V., 1999).
8.2.6.2. PH-ul mediului
Drojdiile se dezvolt n limite largi de pH, pentru c au capacitatea s se adapteze la unele modificri
ale mediului de cultivare. Astfel, dac pH-ul mediului este mai acid dect valoarea optim pentru cretere, n
celul devin active enzimele decarboxilaze, cnd pH-ul este mai bazic, dect valoarea optim, devin active
dezaminazele. n aceste condiii, produsele rezultante din aminoacizi sub aciunea catalitic a acestor sisteme
enzimatice tind s realizeze neutralizarea i reprezint sisteme tampon al efectului nociv al pH-ului. Dup
epuizarea stocului de aminoacizi, aciunea pH-ului duce la moartea celulelor, ca rezultat al unui dezechilibru,
prin modificarea schimburilor osmotice ntre celul i mediu.
Efectul pH-ului mediului nutritiv asupra multiplicrii drojdiilor este cunoscut de mult timp i valorificat
n practic. Aciunea sa asupra celulelor de Saccharomyces cerevisiae a fost studiat de muli cercettori. La un
pH = 7,5 intensitatea de respiraie i randamentul de cretere este cu 60100 % mai mare dect la pH = 4 n
diverse medii nutritive cu glucoz la 30
0
C. Cu scderea pH-ului n mediul nutritiv se stimuleaz ptrunderea
protonilor n celule. La un pH = 3,5 i cantiti suficiente de sruri de potasiu n mediu nutritiv, crete pH-ul
intracelular, ajungnd la valorile de 7,5. Variaia pH-ului intracelular are o importan deosebit la reglarea
glicolizei i a respiraiei celulelor de drojdie (Anghel, I. et al., 1991).
Valoarea optim a pH-ului la cultivarea drojdiei Saccharomyces cerevisiae oscileaz ntre 4,55,8, dei
drojdiile sunt mult mai active ntr-un mediu care are o valoare a pH-ului de 77,5. Celulele de drojdii n acest
domeniu se gsesc n stare fiziologic bun i se nmulesc rapid. De nivelul de pH n timpul cultivrii drojdiilor,
depinde randamentul i calitatea produselor finite. n practic, dezvoltarea drojdiilor se realizeaz n mediu acid,
concentraia mai mare n hidrogen fiind un mijloc de combatere a microorganismelor de contaminare.
Domeniul de pH n care drojdia se poate multiplica este influenat de compoziia mediului i de
coninutul n alcool al acestuia. ntr-un mediu de fermentare cu 4,5 % alcool, drojdiile pot s acioneze pn la
pH = 1,8. La un coninut de 5,56 % alcool, valoarea minim a pH-ului suportat de drojdii este de 2,3, iar la un
coninut de 8,512,5 % alcool, limita inferioar a pH-ului la care drojdia poate aciona este de 3,5, ritmul de
cretere la acest pH fiind ncetinit. n afar de aceasta, n intervalul de pH 33,5 se afl punctul izoelectric al
unor substane colorante din melas, care sunt absorbite de ctre celulele de drojdie (Anghel, I. et al., 1991).
Schimbarea regimului de pH exercit aciune asupra activitii enzimelor, asupra ptrunderii
substanelor nutritive n celula de drojdie i se intensific respiraia. Brusc se frneaz schimbul de aminoacizi n
celula de drojdie, scade cantitatea de biomas rezultat, se nrutete calitatea drojdiei. Valorile extreme de pH
(medii puternic acide sau puternic alcaline) provoac denaturarea ireversibil a enzimelor.
45
Sunt date care arat c mrirea pH-ului provoac creterea activitii enzimelor, care particip la
formarea poliglucidelor, solubile n acizi. Sinteza maxim a trehalozei s-a observat la cultivarea drojdiei
Saccharomyces cerevisiae n mediul cu pH 4,55,0.
La fabricarea drojdiei de panificaie se scade pH-ul la valori de circa 4, n primele faze de multiplicare
(faza I si a II-a), urmrindu-se o acumulare de biomas celular activ. n continuare, pe msura progresrii
numrului de faze de multiplicare, pH-ul crete pn la valoarea de 5,5.
Coninutul n azot al componentelor nutritive contribuie la normalizarea pH-ului mediului. Din sulfatul
de amoniu, drojdia asimileaz NH
3
i elibereaz n mediu acid sulfuric. Adaosul de ap amoniacal neutralizeaz
acidul sulfuric, compenseaz pH-ul, i, n acelai timp, furnizeaz drojdiei necesarul de azot.
Corectarea pH-ului n industria drojdiei de panificaie cu ajutorul acidului lactic este mai favorabil
celulelor de drojdie. Mai puin favorabil acioneaz acidul fosforic i acidul clorhidric, iar acidul sulfuric este pe
ultimul loc. La acidifierea cu acid lactic s-a obinut o drojdie cu putere de cretere de 10 minute, biomasa 32
gdm
-3
i o activitate maltazic de 304 U.A.
8.2.6.3. RH-ul mediului
Drojdiile prezint diferite grade de sensibilitate la potenialul de oxidoreducere. Dintre substanele care
ajut la meninerea unui potenial de oxidoreducere redus, sunt acidul ascorbic, glucidele reductoare i
substane ce conin grupele - SH. Fiecare sistem biologic are n compoziia sa, att substane oxidante ct i
reductoare, nct valoarea potenialului de oxidoreducere, este n funcie de raportul ntre ele i mai depinde de
tensiunea de oxigen i de valoarea pH. La modificri ale rH-ului se pot produce modificri n metabolismul
celular, sau n cazul unor valori limit, este oprit creterea.
8.2.6.4. Temperatura
Temperatura este, din punct de vedere al procesului de biosintez desfurat la scar industrial, unul
dintre parametrii fizici cei mai importani, implicat profund, prin efectele sale, n optimizarea procesului.
Variaiile temperaturii au efect asupra randamentului de transformare a substratului n produsul dorit, asupra
cerinelor nutritive ale drojdiei, compoziiei biomasei obinute i vitezei de cretere (Anghel, I. et al., 1991).
n cursul evoluiei, celulele de drojdie au suferit numeroase adaptri, nct n lumea microbian,
drojdiile se multiplic la temperaturi variate n limite foarte largi.
Drojdia Saccharomyces cerevisiae aparine grupului mezofil, temperatura optim oscileaz ntre 26
0
C i
36
0
C. Datele din literatura de specialitate arat c, drojdia de panificaie cu puterea de cretere cea mai bun se
obine la temperatura de 30
0
C.
Deplasarea cu cteva grade n jurul temperaturii optime de cretere influeneaz nu numai randamentul
n biomasa obinut i viteza de cretere, dar i compoziia biochimic a celulei de drojdie. Datele din literatur
publicate arat c variaiile de temperatur afecteaz multe procese metabolice din celul, precum i compoziia
biomasei n proteine i lipide, coninutul n ARN al celulei (Hunter i Rose, 1972). Raportul dintre coninutul n
ARN al drojdiilor i viteza lor de cretere se mrete la scderea temperaturii.
Temperatura procesului de cultivare condiioneaz coninutul n lipide din compoziia membranelor
celulare. Astfel, membrana drojdiilor psihrofile conine n cantiti mai mari acizi grai polinesaturai, cele
termofile, acizi grai mononesaturai, iar cele mezofile acizi mono- i polinesaturai.
Celulele de drojdie pot suporta temperaturi foarte sczute, pn aproape de zero absolut. Ele
supravieuiesc mai uor la rece ntr-un mediu uscat, dect ntr-unul umed. S-a observat c prin scderea
temperaturii sub limita inferioar de 0
0
C se constat o reducere a vitezei de metabolism. Astfel, prin scderea cu
10
0
C sub temperatura minim are loc o scdere cu 50% a vitezei de metabolizare a substanelor nutritive.
Aceast scdere de activitate se explic prin faptul c, prin reducerea temperaturii are loc o pliere a lanurilor
proteice i mascarea centrilor activi ai enzimelor nct acestea nu mai fac legtura cu substratul i nu mai
ndeplinesc funcia de biocatalizatori. La temperaturi sczute, se produc pierderi de ap intracelular, drojdiile
trec n stare latent de via, cnd metabolismul se desfoar foarte lent i pot rmne viabile timp ndelungat.
Prin congelare, drojdiile se pot pstra timp nelimitat, deoarece cantitatea de ap liber n exteriorul i interiorul
celulei se reduce, trecnd n stare solid i numai o parte rmnnd disponibil pentru a fi folosit de celule, nct
activitatea celulei este oprit. Campbell a descoperit c o congelare a drojdiei Saccharomyces cerevisiae
suspendat n ap la -30
0
C sau -50
0
C a distrus 4894 % din celule. Dezgherile i ngherile repetate au
provocat moartea celulelor de drojdie. Aceste rezultate au fost confirmate de Baum cu o cultur pur de
Saccharomyces cerevisiae. Efectele multiple ale ngherii asupra celulelor de drojdie au fost descrise de
Mazur(1966).
Scderea temperaturii de cultivare de la 30
0
C la 15
0
C contribuie la mrirea coninutului de lipide, la
30
0
C el este de 12 %, iar la 15
0
C este de 14,5 %. La Saccharomyces cerevisiae, prin scderea temperaturii de
cretere mai jos de optim, se mrete cantitatea de proteine i acizi ribonucleici, iar cantitatea total de glucide
ale celulei scade, n principal, prin scderea coninutului de trehaloz (Cern, V.G., 1975).
S-a constatat c drojdia obinut la temperaturi sczute (2930
0
C) este mai bogat n azot i fosfor i
mai rezistent la pstrare. La temperaturi ridicate se nrutete brusc calitatea produciei, ca o consecin a
faptului c poate avea loc, ocazional, multiplicarea drojdiilor atipice i a microbiotei bacteriene.
Microorganismele contaminante consum substratul, destinat pentru drojdie, ceea ce conduce la scderea
randamentului.
46
Obinerea drojdiei de panificaie la temperaturi mai ridicate de 30
0
C se face cu acumulare n celula de
drojdie a trehalozei. Acumularea maxim de trehaloz n celule s-a obinut prin cultivarea drojdiei la temperaturi
de 40
0
C. Creterea n continuare a temperaturii nu numai c a oprit considerabil multiplicarea drojdiei, dar a
provocat i scderea cantitii de trehaloz n celule. Mrirea cantitii de trehaloz n celule la temperaturi
ridicate de cretere este nsoit de scderea glicogenului.
Viteza de acumulare a alcoolului, de asemenea, crete cu mrirea temperaturii, atinge un maxim la
40
0
C, dup aceea scade brusc la creterea mai departe a temperaturii.
Creterea temperaturii de cultivare duce la reducerea randamentului n drojdie ca rezultat al scderii n
umiditate i ca o consecin, mrirea consumului de substane nutritive la fermentare. Prin ridicarea temperaturii
de cretere se nrutete aprovizionarea celulei cu acizi, se mrete excreia aminoacizilor liberi n lichidul
cultural i de asemenea crete necesitatea drojdiilor n vitamine. Acest fapt poate provoca modificarea
coeficientului economic.
n domeniul de temperatur supraoptimal, creterea este concurat de moartea microorganismelor.
Moartea celulelor de drojdie la temperaturi supramaximale se datoreaz denaturrii termice a proteinelor i
enzimelor celulare, nct activitatea de metabolism este oprit i se produce moartea fiziologic a celulei fr s
aib loc distrugerea fizic.
Liza drojdiilor este o funcie puternic dependent de temperatur, fiind caracterizat prin valori ale
energiei de activare de 7090 kcal/mol.
8.2.6.5. Umiditatea
Apa este important pentru celula de drojdie nu numai pentru c este principalul constituent din punct
de vedere cantitativ, ea reprezentnd circa 80% din greutatea celulei vii, ci i pentru c ndeplinete urmtoarele
funcii (Pirt,1975):
- ca reactant chimic prezent n celul, apa particip la reaciile de hidroliz;
- acioneaz ca solvent pentru metaboliii intracelulari;
- rol mecanic important n meninerea formei i dimensiunilor celulei impuse de presiunea hidrostatic care ia
natere n interiorul celulei;
- ndeplinete o funcie structural n hidratarea proteinelor i a altor componente celulare.
De exemplu, de gradul de hidratare a mitocondriilor depinde intensitatea proceselor de fosforilare
oxidativ care au loc n aceste organite. Apa particip direct la formarea citoplasmei celulare, de a crei stare
depinde funcia sa fiziologic. Formeaz legturi de H i particip la structura unor compui macromoleculari
(Anghel, I. et al., 1993).
Unele reacii chimice, biochimice, enzimatice i n special microbiologice sunt strns corelate cu
umiditatea substratului. n condiiile n care umiditatea scade, se reduce viteza de metabolism, enzimele trec n
stare inactiv i celulele de drojdie se menin viabile n stare de anabioz.
Drojdiile pot folosi numai apa liber, nelegat de componenii chimici ai mediului i nu pot folosi apa
legat chimic sau fizic. Drojdiile necesit, pentru o dezvoltare normal, o cantitate de ap liber care s asigure
un transfer corespunztor al substanelor nutritive n celul. Marea majoritate a drojdiilor nu pot s se dezvolte n
medii cu indice de activitate al apei (a
w
) inferior valorii 0,90, dar exist i drojdii osmotolerane care rezist la
presiuni osmotice mai ridicate corespunztoare unui a
w
= 0,60 (Dan, V., 1999).
8.2.6.6. Concentraia n oxigen i influena asupra bioenergeticii levuriene
Drojdiile de panificaie sunt facultativ anaerobe, ele sunt capabile de activitate vital n condiii
anaerobe i aerobe.
Viteza de respiraie se msoar n cantitatea de oxigen absorbit de substana uscat a drojdiei, i notat
2 O
Q ,iar viteza de fermentare reprezint cantitatea de dioxid de carbon degajat la 1 g substan uscat drojdie
ntr-o or. n condiii aerobe, aceast valoare s-a notat
V
CO2
Q , iar n anaerobioz (n atmosfer de azot) -
N
CO2
Q .
n condiii aerobe se produce efectul Pasteur care s-a notat PE, realizndu-se blocarea fermentrii n favoarea
respiraiei. Gradul de blocare depinde, ntr-o msur considerabil, de caracteristicile culturii i se exprim prin
egalitatea:
100
Q
Q Q
PE
N
CO
V
CO
N
CO
2
2 2
=
Drojdiile, n funcie de condiiile de cultivare, aerobe sau anaerobe, pot suferi modificri morfologice
ale celulei. n condiii de anaerobioz celulele nu sunt capabile s sintetizeze tipul de citocromi -a
1
, a
3,
b, c
1
, se
dezechilibreaz transportul electronilor n lanul respirator i scade activitatea enzimelor respiratorii. n condiii
de cretere n anaerobioz, n celule nu se produce sinteza acizilor grai nesaturai i a ergosterolului
(Novakovskaia, S.S., Sisatkii, I.I., 1980).
Pentru funcionarea normal a lanului respirator i desfurarea activitii enzimelor respiratorii
mitocondriale e necesar prezena n mitocondrii a unei cantiti definite de lipide, care s conin acizi grai
nesaturai.
Alternana condiiilor anaerobe de cultivare cu cele aerobe la Saccharomyces cerevisiae duce la
formarea tuturor componentelor celulare, activarea enzimelor respiratorii i biosinteza mitocondriilor.
47
n ultimii ani s-au obinut date despre faptul c, pe lng oxigen, asupra creterii drojdiilor influeneaz
i ceilali componeni ai amestecului gazos. La nlocuirea treptat a azotului din aer cu CO
2
(concentraia n
oxigen rmnnd constant), se reduce cantitativ biomasa rezultat i coninutul n azot al biomasei se mrete.
Dac n experiena de control (pentru aerare s-a ntrebuinat aer), biomasa de drojdie rezultat a fost de 0,502
g/1g zahr consumat i coninutul n azot total n biomas a fost de 8,8 % la s.u., atunci prin nlocuirea a 20 %
azot din aer cu CO
2
, datele corespondente obinute au fost 0,472 g/1g zahr consumat i 9,55 % azot total
(Tuliakov, V.S. et al., 1980).
8.2.6.7. Aerarea i agitarea mediului
n procesul de biosintez, aerarea urmrete asigurarea continu a celulei cu oxigen, eliminarea
dioxidului de carbon format care are efect inhibitor asupra procesului de multiplicare, transportul rapid la celule
a substanelor nutritive adugate i meninerea celulelor n stare de suspensie (Stoicescu, A., 1985).
Asigurarea necesitii drojdiilor cu oxigenul din aer reprezint o etap de consum energetic mare n
cadrul procesului tehnologic care se reflect n final asupra avantajelor economice n producia de drojdie. S-a
stabilit c, o cauz important a scderii de randament este insuficienta aerare a mediului de cultur
(Dmitriev,D., 1983). La fabricarea drojdiei, consumul de aer este prevzut ca o norm de producie de consum,
la volumul mediului cultural i este de 50100 m
3
/1m
3
plmad.
Problema principal este asigurarea continu a celulei de drojdie cu oxigen dizolvat n lichid. S-a luat n
considerare, c la 1 kg de melas cu un coninut n zahr de 50 % sunt necesari aproximativ 19 m
3
aer.
Randamentul maxim n drojdie s-a obinut, cnd pentru fiecare gram de zahr folosit a corespuns 1,6 g (i mai
mult) oxigen. La reducerea cantitii de oxigen drojdia obinut scade proporional.
Alimentarea cu aer n vasul de cultivare trebuie s se realizeze n concordan cu alimentarea cu zahr i
se urmrete viteza de multiplicare a drojdiei. Perturbarea regimului de aerare brusc, schimb mersul procesului
de dezvoltare al drojdiei, n direcia metabolismului anaerob, cu formare de alcool i ali produi secundari.
Producerea de biomas scade brusc. n prezena oxigenului n exces ritmul multiplicrii celulelor ncepe s
scad, iar randamentul se reduce prin mrirea consumului de zahr i formare de CO
2
.
Rolul oxigenului este difereniat n funcie de procedeele de multiplicare a drojdiilor. Dac prin metoda
static, la cultivarea drojdiilor fr aerare artificial sau cu o slab aerare, drojdia obinut a constituit 1012 %
din greutatea materiilor prime consumate i durata multiplicrii drojdiilor a fost de aproximativ 20 h sau chiar
mai mult, atunci prin metoda cu aerare-agitare, n mediu diluat, drojdia obinut a ajuns la 165 % calculat la
greutatea zahrului sau pn la 100 % din greutatea melasei i ciclul complet de multiplicare a drojdiei a durat
811 h. Consumul de aer a fost de 100 m
3
/h la 1 m
3
plmad, iar cantitatea de oxigen utilizat de 69 % din
cantitatea total. Consumul de oxigen la 1 g drojdie pentru celulele tinere a fost de 80100 mg/h, pentru cele mai
n vrst 4060 mg/h. Necesitatea mrit a celulelor tinere n oxigen este determinat de formarea substanelor
fr azot din celulele de drojdie.
S-a stabilit c pentru fiecare concentraie de plmad exist un optim al aerului adugat. Surplusul de
oxigen din mediu nu mrete cantitatea de biomas obinut, ns intensific procesele de oxidare, mrete
potenialul de oxidoreducere.
La adugarea n mediul sintetic de reductori (0,02% acid tioglicolic sau 0,1% Na
2
S
2
O
3
) se mrete
viteza de multiplicare. n consecin, pentru o aerare oarecare, este necesar att prezena oxigenului ct i
prezena substanelor reductoare, care scad potenialul oxidoreductor al mediului. Este evident c, acest lucru
este n legtur cu activitatea enzimelor. Se tie c, de exemplu, reductorii (Na
2
S i alii) mresc activitatea
coenzimei A. Celulele de drojdie, crescute n condiii aerobe, spre deosebire de cele crescute anaerob, nu numai
c sunt mai puin bogate n glicogen, metacromatine i compui azotai, dar au, de asemenea, mas mai redus.
Dac 1 miliard de celule crescute n condiii anaerobe, cntresc 7090 mg, n condiii de aerobioz cntresc 20
sau 25 mg, cel mult 50 mg. n consecin, celulele meninute n condiii de fermentare au masa de 23 ori mai
mare dect celulele n condiii de respiraie.
Cantitatea insuficient de aer pentru nmulire, conduce la mrirea numrului de celule mici n partea a
doua a procesului de cultivare.
La cultivare pe agitator rotativ creterea vitezei de aerare poate fi mrit prin agitare. Maxon i Johnson
au determinat eficiena aerrii, exprimat n milimoli de oxigen, raportat la litru i or, n funcie de debitul de
aer i de agitarea mediului, la variaii ale turaiei agitatorului ntre 550 i 1660 rot/min.
Unele cercetri recente recomand recircularea aerului la fabricarea drojdiei de panificaie, deoarece
crete randamentul printr-o mai bun folosire a substanelor nutritive ale mediului i d o intensificare a
proceselor de multiplicare a celulelor de drojdie. n afar de aceasta, recircularea aerului mbuntete un indice
foarte important pentru activitatea drojdiei, activitatea maltazic. Eficiena recirculrii aerului s-a exprimat prin
creterea procentului de celule nmugurite, numrate la un interval de dou ore pentru fiecare generaie
(Dmitriev, A.D., 1982).
O importan deosebit o reprezint calitatea aerului, care poate fi o surs de contaminare n fazele de
multiplicare a drojdiilor. De aceea este necesar operaia de filtrare/sterilizare a aerului nainte de utilizarea lui n
procesul tehnologic.
8.3. SEPARAREA I SPLAREA BIOMASEI DE DROJDIE
48
Se realizeaz cu ajutorul separatoarelor centrifugale, de regul n dou sau trei trepte de separare,
obinndu-se n final un lapte de drojdie concentrat, care este apoi rcit n schimbtoare de cldur cu plci, pn
la temperatura de 24
0
C i pstrat n colectoare de depozitare.
La sfritul ultimei faze de multiplicare se obine o plmad fermentat, n care celulele de drojdie se
afl n suspensie, concentraia n drojdie a plmezii variaz n funcie de calitatea melasei i de procedeul
tehnologic folosit.
n cadrul procesului tehnologic clasic de fabricare a drojdiei se ajunge la o concentraie de 4250 g
drojdie cu 27% s.u. la litru de plmad. Prin folosirea sistemelor dinamice de aerare concentraia plmezii n
drojdie atinge valori de 45 ori mai mari.
Prin separarea i splarea laptelui de drojdie se urmrete concentrarea drojdiei din plmad ntr-un
volum mai mic i ndeprtarea resturilor de plmad n scopul mbuntirii aspectului comercial i a
conservabilitii produsului.
Separarea drojdiei se efectueaz cu ajutorul separatoarelor centrifugale cu talere tip Alfa Laval sau
Westfalia cu turaii de 40005000 rot./minut i capaciti cuprinse ntre 10 i 100 m
3
plmad/or.
n practic, operaia se realizeaz n dou sau trei trepte de separare i splare, cea mai utilizat fiind
separarea n trei trepte. n prima treapt de separare, n funcie de concentraia iniial a plmezii, laptele de
drojdie se concentreaz pn la 150200 g/l. nainte de trecerea la treapta urmtoare de concentrare este necesar
o rcire i diluare cu ap, folosind n acest scop ejectoare. Cantitatea de ap necesar este de 48 ori mai mare
dect cea de lapte de drojdie.
n treapta a doua de separare se poate obine o concentraie de 300400 g/l. Acest proces se repet n
treapta a treia, obinndu-se n final un lapte de drojdie cu o concentraie de 600800 g/l.
Laptele de drojdie concentrat este rcit n schimbtoare de cldur cu plci pn la temperatura de
24
0
C i pstrat n colectoare de depozitare. Prin rcire procesele vitale din celula de drojdie sunt ncetinite i
este frnat dezvoltarea i activitatea microorganismelor de contaminare.
Pregtirea separatoarelor i a instalaiei pentru un ciclu de separare const n: demontarea acestora,
splarea cu peria a fiecrui taler cu o soluie de fosfat trisodic sau sod caustic, urmeaz cltirea cu ap curat
pentru desfundarea duzelor. De asemenea, se spal i se cltesc cuvele pentru colectarea laptelui separat, precum
i pompele i conductele aferente instalaiei.
Colectoarele pentru lapte de drojdie sunt confecionate din oel inoxidabil, prevzute cu manta dubl de
rcire, agentul frigorific fiind apa rcit i cu agitatoare acionate electric n vederea omogenizrii.
n timpul depozitrii se controleaz la intervale de timp de 4 ore temperatura laptelui de drojdie care
trebuie s se menin la 24
0
C.
8.4. FILTRAREA LAPTELUI DE DROJDIE
Laptele de drojdie nu poate fi comercializat ca atare att datorit faptului c este uor expus la
contaminarea cu microorganisme strine care i micoreaz conservabilitatea ct i datorit greutii n
manipulare. Din aceste motive laptele de drojdie este supus n continuare operaiei de filtrare i presare, prin care
drojdia se concentreaz n substan uscat ocupnd un volum de circa dou ori mai redus. Aceast operaie
tehnologic se realizeaz n practic cu ajutorul filtrelor-pres (cu rame i plci) i a filtrelor rotative sub vid.
Procesul de filtrare cu ajutorul filtrelor pres se desfoar astfel:
- nainte de utilizare, filtrul-pres este splat cu ap, montat i sterilizat cu abur timp de 1530 minute fr
pnz;
- se strng n pachet compact ramele acoperite cu pnz i plcile fiecrei prese folosind compresorul de ulei;
- laptele de drojdie rcit, este introdus cu ajutorul unei pompe printr-un canal central n spaiul pe care l
formeaz ramele mrginite de pnze filtrante, drojdia rmne n spaiul pe care l formeaz rama, iar apa
trece prin pnz i se scurge la canal;
- filtrarea dureaz 1530 minute, pn cnd nu se mai observ evacuarea apei;
- la sfritul operaiei se desfac treptat ramele i plcile, se detaeaz cu ajutorul unor cuite drojdia
comprimat, care se colecteaz ntr-un crucior;
- la intervale de timp de circa o sptmn pnzele colmatate se spal mai nti cu jet de ap i cu peria i apoi
cu ajutorul unei maini de splat pnze i se trec n usctorul de pnze.
Drojdia comprimat rezultat la sfritul presrii are un coninut ridicat n substan uscat de 3035%,
ns folosirea filtrelor-pres prezint dezavantajul unei productiviti sczute i a unui volum mare de munc.
Fabricile moderne de drojdie utilizeaz filtre rotative sub vid, care folosesc drept strat filtrant amidonul.
Cu acest filtru se mbuntete considerabil substana uscat a produsului finit (de la 27% s.u. la obinerea
drojdiei cu filtre-pres s-a ajuns la 3337% s.u.). Prin nglobarea de clorur de sodiu n laptele de drojdie i
splarea acestuia, s-a putut mri coninutul de substan uscat al drojdiei la peste 30%, prin eliminarea apei
extracelulare, cu mrirea concomitent a plasticitii.
8.5. MODELAREA I AMBALAREA DROJDIEI PRESATE
Modelarea i ambalarea drojdiei presate se realizeaz n prezent cu maini automate de construcie
special, utiliznd hrtie parafinat sau sulfurizat cu film de celofan. Pentru a se obine consistena necesar
modelrii este necesar s se adauge o anumit cantitate de ap, ulei comestibil sau ali plastifiani. Pentru
pstrarea culorii drojdiei se mai pot aduga cantiti mici de polialcooli (de exemplu, glicerin, inozitol) sau
49
substane emulsionante (lecitin, stearai i oleanai ai glicerinei i glicolului), iar pentru protecia mpotriva
dezvoltrii mucegaiurilor se pot aduga cantiti mici de alcool etilic, propilic, butilic sau amilic.
8.6. DEPOZITAREA I LIVRAREA DROJDIEI DE PANIFICAIE
Atunci cnd livrarea drojdiei nu se realizeaz imediat, lzile sau cutiile de carton cu drojdie trebuie
depozitate ntr-o ncpere rcit la temperatura de 04
0
C i umezeal relativ a aerului de 6570%. Lzile sau
cutiile de carton sunt aezate pe stelaje sau palei n form de fagure, cu locuri pentru circulaia aerului.
Transportul drojdiei la beneficiari se poate face cu mijloace de transport obinuite pe distane mici, iar
pe distane mai mari n vagoane sau mijloace auto izoterme. Livrarea se efectueaz pe arje, n ordinea fabricrii,
prin reluarea lzilor sau cutiilor de carton de pe palet, pe band i evacuate la rampa pentru ncrcarea
mijloacelor de transport.
8.7. DROJDIA DE PANIFICAIE PRODUS FINIT
Cunoaterea compoziiei chimice a drojdiei de panificaie este important pentru stabilirea cantitilor
de substane nutritive necesare pentru multiplicarea drojdiei n diferite faze ct i modul lor de adugare, n
vederea obinerii de randamente maxime n drojdie i pentru nelegerea proceselor care au loc n timpul pstrrii
drojdiei n calup.
Se apreciaz c, aproximativ 94% din substana uscat a drojdiei este alctuit din principalele
elemente: carbon, hidrogen, oxigen i azot, care sunt reprezentate de glucide (glicogen, gume, hemiceluloze),
proteine, acizi nucleici, baze organice, lipide, substane minerale, vitamine i enzime. Coninutul n carbon al
unei drojdii cu 27% s.u. este de aproximativ 12,7% i servete ca baz pentru calculul necesarului de glucide
pentru acumularea biomasei de drojdie.
Aproximativ 70% din azotul total al drojdiei este inclus n proteine, 810% n baze purinice, 4% n
pirimidine, restul fiind format din produse solubile ca aminoacizi i nucleotide. Plecnd de la coninutul n azot
al drojdiei se stabilete necesarul de substane cu azot pentru corectarea melasei care este deficitar n azot.
Drojdia conine i cantiti importante de vitamine, n special din grupul B. Substanele minerale se
gsesc fie n combinaii anorganice sau intr n compoziia unor substane organice, aflndu-se deci ca electrolii
n soluie sau sub form de complexe coloidale.
Valoarea energetic : 350430 KJ/100 g.
Biomasa unui gram de drojdie comprimat conine aproximativ 10 miliarde de celule.
n cursul procesului de fabricare a drojdiei de panificaie, concomitent cu multiplicarea celulelor
aparinnd culturii pure, n diferite faze ale fluxului tehnologic se pot dezvolta i alte microorganisme, care
mresc gradul de contaminare a produsului finit i determin reducerea calitilor tehnologice i
conservabilitatea drojdiei comprimate.
Pentru a preveni multiplicarea microorganismelor contaminante, se impune un control microbiologic
riguros pe faze de producie, prin studiul gradului de igien i detectarea contaminanilor ce pot proveni din
sursele prezentate n figura 24.
Drojdia de panificaie produs finit trebuie s prezinte urmtoarele caracteristici biotehnologice:
- putere de fermentare max. 70 minute;
- umiditate max. 76%;
- durabilitate la 35
0
C min. 5 zile;
- durabilitate la 04
0
C min. 10 zile.
9. FABRICAREA DROJDIEI USCATE DE PANIFICAIE
Datorit consumului neuniform de drojdie pe parcursul anului s-au cutat metode de conservare pe o
durat mai ndelungat a drojdiei prin uscare sau congelare.
Dei s-au obinut unele rezultate n conservarea drojdiei prin congelare la temperaturi sczute de circa
15
0
C n tunele, care permite prelungirea duratei de pstrare pn la 69 sptmni, acest procedeu este mai puin
folosit att datorit faptului c drojdia trebuie imediat folosit dup decongelare ct i a preului de cost al
drojdiei mai ridicat cu 1020%.
Principala metod de conservare a drojdiei o reprezint uscarea pn la o umiditate de 7,59%, n
condiii speciale care s nu afecteze prea mult capacitatea de dospire a drojdiei. La o umiditate de peste 9%
drojdia nu este conservabil intrnd n autoliz, iar la o umiditate sub 7% are loc o deshidratare ireversibil a
coloizilor i astfel i pierde mult din puterea de fermentare.
n comparaie cu drojdia comprimat, folosirea drojdiei uscate prezint urmtoarele avantaje:
- se poate conserva un timp mai ndelungat (612 luni) n comparaie cu drojdia comprimat (1040 zile);
- se poate pstra i transporta la temperaturi mai ridicate, chiar la temperatura mediului ambiant, necesitnd
un spaiu mult mai redus;
- prin uscarea surplusului de drojdie se poate asigura o producie constant a fabricilor de drojdie i pot fi
satisfcute necesitile n perioadele vrfurilor de consum de drojdie.
Uscarea drojdiei se efectueaz n condiii speciale, urmrindu-se pstrarea nsuirilor de panificaie
iniiale ale drojdiei. Pentru uscarea drojdiei se folosesc mai multe procedee de uscare: sub vid, cu aer cald, pe
valuri, prin liofilizare i fluidizare, care influeneaz mai mult sau mai puin viabilitatea celulelor de drojdie.
Procedeul cel mai rspndit de uscare este cel n curent de aer cald.
Procesul tehnologic de obinere a drojdiei uscate de panificaie cuprinde patru etape principale:
- fabricarea drojdiei umede de panificaie;
50
- granularea drojdiei umede;
- uscarea drojdiei;
- ambalarea i depozitarea drojdiei uscate de panificaie.
Pentru obinerea drojdiei uscate active se recomand utilizarea de tulpini de drojdie speciale pentru
acest scop, care s acumuleze peste 12% trehaloz raportat la substana uscat i un coninut n azot de peste 7%
la substana uscat. Se aleg tulpini de drojdie cu celule mai mici, cu un coninut mai redus de ap intracelular i
cu o capacitate de fermentare mai mare dect culturile folosite pentru producerea drojdiei comprimate, dei
aceste tulpini conduc la randamente mai sczute n drojdie.
Biomasa de drojdie obinut pentru a fi uscat trebuie s aib o putere de fermentare de 5560 de
minute i o conservabilitate de minimum 72 ore, la 35
0
C. Biomasa de drojdie destinat uscrii trebuie splat
mai bine pentru a reduce coninutul n sruri reziduale rezultate dintr-un tratament cu acid al laptelui de drojdie
sau prin tratarea cu NaCl a laptelui nainte de filtrare, pentru reducerea cantitii de ap extracelular.
Granularea biomasei umede se efectueaz cu scopul de a mri suprafaa de eliminare a apei n timpul
uscrii i pentru obinerea unui produs cu umiditate omogen distribuit. Granularea se face cu ajutorul
granulatoarelor sau extruderelor, care funcioneaz pe principiul mainii de tocat carne. Drojdia este mrunit
sub form de vermiceli prin trecerea ei printr-o sit cu orificii de 1,52 mm. Exist i maini care transform
drojdia n granule rotunde. Drojdia astfel mrunit, care ocup un volum de circa dou ori mai mare dect masa
sa, este ncrcat ntr-un strat subire cu grosimea de 23 cm, n tvile usctorului de drojdie.
Uscarea biomasei granulate se face n curent de aer cald, la temperaturi care s nu depeasc 40
0
C.
Viteza de eliminare a umiditii din drojdie depinde de: umiditatea relativ i temperatura aerului cu care se face
uscarea, viteza aerului cald n usctor, dimensiunea granulelor de drojdie, grosimea stratului de granule, etc.
Uscarea granulelor de drojdie se poate face discontinuu, fr amestecarea materialului supus uscrii
(usctoare cu zone), cu amestecarea granulelor n timpul uscrii (instalaii de uscare cu tambur rotativ) i
continuu, n strat staionar (usctoare-tunel) sau n usctoare n strat fluidizat.
n practic se folosete cel mai mult usctorul cu zone (tip Schilde) cu capacitatea de 3040 kg drojdie
uscat/or.
Instalaia de uscare este alctuit din tunelul de uscare n care se gsesc patru rnduri de rame pe care se
sprijin cte patru site/ram pe care se aeaz sub form de vermiceli. Sitele se aeaz pe rame care se introduc i
se scot din usctor pe patru rnduri cu ajutorul unui dispozitiv special. Dup introducerea sitelor n usctor acesta
se nchide i se ncepe introducerea aerului cald pe la partea inferioar, care trece prin site i se elimin prin
coul de evacuare.
Uscarea se ncepe la o temperatur mai sczut de 32
0
C, dup care se ridic treptat temperatura pn la
45
0
C pe msur ce se elimin apa din drojdie. n timpul uscrii, sitele cu drojdie sunt trecute treptat, la intervale
de 1015 minute, din zonele superioare cu temperatur mai sczut spre zonele inferioare mai calde. Procesul de
uscare dureaz 60 minute, rezultnd o drojdie uscat cu umiditatea de 7,59,5% i 34 % celule moarte.
Usctorul cu zone prezint dezavantajul unei productiviti sczute i a unei distribuii neuniforme a
aerului cald, ceea ce face ca i uscarea drojdiei s fie neunifom. De asemenea nu se poate face o reglare cu
exactitate a temperaturii aerului de uscare.
Rezultate mai bune se obin prin folosirea usctoarelor tunel cu funcionare continu, care permit o mai
bun reglare a debitului de aer, a temperaturii i umezelii relative a acestuia.
Drojdia uscat are o umiditate de 7,59,5%, un procent de celule moarte de 34%, iar capacitatea de
fermentare de 5560 minute.
Ambalarea drojdiei uscate se face n ambalaje de 57 g drojdie uscat pentru uzul casnic, de 1 kg pentru
mica industrie i n ambalaje mai mari pentru fabrici de pine. Drojdia uscat ambalat n cantiti mici se
realizeaz n atmosfer de gaz inert (azot) sau sub vid, ceea ce i asigur o conservabilitate ridicat de 11 ani.
La fabricarea drojdiei uscate este necesar s se realizeze un control periodic al capacitii de fermentare
att a drojdiei umede ct i a drojdiei uscate produse.
Drojdia uscat se utilizeaz n panificaie dup o prealabil reactivare timp de 3080 minute ntr-o
suspensie de fin de gru la temperatura de 3743
0
C, cnd drojdia i reia activitatea fermentativ normal
(Hopulele, T., 1980).
BIBLIOGRAFIE SELECTIV
1. Anghel, I., 1984 Drojdiile, Editura Academiei R.S.R., Bucureti
2. Anghel, I., et al., 1985 Protoplatii model experimental pentru studii de biologie celular i molecular,
Editura Tehnic, Bucureti
3. Anghel, I., et al., 1989 Biologia i tehnologia drojdiilor, vol.I, Editura Tehnic, Bucureti
4. Anghel, I., et al., 1991 Biologia i tehnologia drojdiilor, vol.II, Editura Tehnic, Bucureti
5. Anghel, I., et al., 1993 Biologia i tehnologia drojdiilor, vol.III, Editura Tehnic, Bucureti
6. Bahrim, G., 1999 Microbiologie tehnic, Editura Evrika, Brila
7. Anghel, I., Mitrache, L., 1995 Lecii de genetic, Editura Scaiul S.R.L., Bucureti
8. Banu, C., et al., 1993 Progrese tehnice, tehnologice i tiinifice n industria alimentar, vol.II, Editura
Tehnic, Bucureti
9. Banu, C., et al., 1998 Manualul inginerului de industrie alimentar, vol. I, Editura Tehnic, Bucureti
51
10. Banu, C., et al., 1999 Manualul inginerului de industrie alimentar, vol. II, Editura Tehnic, Bucureti
11. Banu, C., et al., 2000 Biotehnologii n industria alimentar, Editura Tehnic, Bucureti
12. Banu, C., et al. Aditivi i ingrediente pentru industria alimentar, Editura Tehnic, Bucureti
13. Borha, V.M., Segal, B., 1988 Alcoolul etilic carburant, Editura Tehnic, Bucureti
14. Cojocaru, C., 1969 Procedee tehnologice n industria fermentativ, Editura Tehnic, Bucureti
15. Cyimesi, J., Solyan, L., et al., 1979 Manualul industriei drojdiei i alcoolului, Editura Agricol, Budapesta
16. Dabija, A., 2000 Biotehnologie de fabricare industrial a drojdiei cu activitate enzimatic superioar,
Tez de doctorat, Universitatea din Galai
17. Dabija, A., 2001 Drojdia de panificaie. Utilizri perspective, Editura Tehnic-INFO, Chiinu
18. Dan, Valentina, 1991 Controlul microbiologic al produselor alimentare, Universitatea Galai, 1991
19. Dan, V., et al., 1995 Memorator drojdii, Universitatea din Galai
20. Dan, V., 2001 Microbiologia alimentelor, Editura Alma, Galai
21. Ioancea, L., et al., 1986 Maini, utilaje i instalaii n industria alimentar, Editura Ceres, Bucureti
22. Hopulele, T., 1980 Tehnologia berii, spirtului i a drojdiei, vol. II, Universitatea din Galai
23. Jcanu, V., 1986 Operaii i utilaje n industria alimentar, Universitatea din Galai
24. Konovalov, S.A., 1980 Biochimia drojdiei, Moscova
25. Leonte, M., 2000 Biochimia i tehnologia panificaiei, Editura, Crigarux, Piatra Neam
26. Macovei, V. M.. 2000 Caracteristici termofizice pentru biotehnologie i industrie alimentar, tabele i
diagrame, Editura Alma, Galai
27. Mencinicopschi, Gh., et al., 1987 Biotehnologii n prelucrarea produselor agroalimentare, Editura Ceres,
Bucureti
28. Novakovskaia, S.S., iakii, I.I., 1980 ndrumar n producia drojdiei de panificaie, Picevaia
promlennosti, Moscova
29. Oancea, I., 1974 Aspecte ale metabolismului unor substane fermentescibile la drojdii, Tez de doctorat,
Universitatea Galai
30. Raicu, P., Badea, E., 1986 Cultura de celule i biotehnologiile moderne, Editura tiinific i
Enciclopedic, Bucureti
31. Raicu, P., 1990 Biotehnologii moderne, Editura Tehnic, Bucureti
32. Renescu, I., et al., 1987 Lexicon ndrumar pentru industria alimentar, vol. I, Editura Tehnic,
Bucureti
33. Renescu, I., et al., 1988 Lexicon ndrumar pentru industria alimentar, vol. II, Editura Tehnic,
Bucureti
34. Rotaru, V., Filimon, N., 1976 Tehnologii n industria alimentar fermentativ, Editura Didactic i
Pedagogic, Bucureti
35. Sasson, Al., 1988 Biotehnologiile sfidare i promisiuni, Editura Tehnic, Bucureti
36. Sasson, Al., 1993 Biotehnologii i dezvoltare, Editura Tehnic, Bucureti
37. Segal, B., et al., 1986 Metode moderne de mbuntire a calitii i stabilitii produselor alimentare,
Editura tehnic, Bucureti
38. Segal, R., 1998 Biochimia produselor alimentare, Vol. I i II, Editura Alma, Galai
39. Spencer, J., Spencer, D.M., 1990 Yeast technology, Springer Verlag, Berlin
40. Stoicescu, A., 1984 Cercetri privind formarea alcoolilor superiori n principalele procese fermentative,
Tez de doctorat, Universitatea Galai
41. Zarnea, G., et al., 1983 Bioingineria preparatelor enzimatice microbiene, Editura Tehnic, Bucureti
42. Zimmermann, F.K., Entian, K.D., 1997 Yeast sugar metabolism. Biochemistry, Genetics, Biotechnology
and Applications, Technomic Publishing Co. Inc., Pennsylvania, USA