Roteiro de Prtica de bioqumica: ENZIMAS

PROPRIEDADES DA UREASE 1 - REAO DA UREASE COM O BIURETO TCNICA Tubo 1. 3 gotas de soluo de urease + 1 mL de biureto Tubo 2. 1 mL de biureto Comparar as cores dos dois tubos. Explicar. 2 - TESTE DE ATIVIDADE Pela ao da urease a uria se converte em amnia e cido carbnico CO (NH2)2 + 2 H2O H2 CO3 H2O + CO2 H2CO3 + NH3

A ao enzimtica da urease pode ser demonstrada fazendo-a reagir com uma soluo de uria fracamente tamponada a pH 7,0 contendo o indicador vermelho de fenol (amarelo 7,0 8,6 vermelho). Sob a ao da enzima formar amnia suficiente par sobrepujar a ao do tampo e o pH subir. A cor da soluo ento mudar de amarelo para vermelho. TCNICA Pipetar 1,5 mL de soluo de uria (0,4M, pH 7,0) num tubo de ensaio e adicionar 3 gotas de soluo de urease. Misturar. Observar a mudana de colorao aps 3 minutos. 3 - ESPECIFICIDADE A urease especificada pelo seu substrato, a uria. Podemos demonstrar isso, reagindo-a com derivados da uria, como exemplo tem a tiouria (NH 2 - CS NH2). TCNICA Em um tubo adicione 1,5 mL de soluo de tiouria (0,4M, pH 7,0) + 3 gotas de soluo de urease e compare com o tubo do teste de atividade (reao 2). Explicar o que ocorreu. 4 - DESNATURAO PELO CALOR TCNICA Misturar num tubo de ensaio 1 mL de gua destilada com 3 gotas de soluo de urease. Levar ao banho-maria a 100C durante 5 minutos. Pipetar em outro tubo 1,5 mL de soluo de uria e adicione 0,5 mL da soluo de urease fervida. Aguardar 5 minutos. Comparar com o tubo do teste de atividade (reao 2). Explicar. 5 - INIBIO POR SAIS DE MERCRIO Os grupos (-SH) sulfidrlicos so essenciais para a atividade da urease. Eles podem manter ou talvez constitua parte do centro ativo da enzima. Se forem oxidados a enzima se tornar inativa. 2(-SH) + HgCl2 S - Hg - S + 2HCl

Realizar os testes abaixo: TUBOS 1 2 UREASE 3 gotas 3 gotas GUA 1 mL 1 mL HgCl2 5% 5 gotas URIA 1,5 mL 1,5 mL COLORAO