Kellermayer group.

Cell culture phalloidin staining

Citoszkeleton rodamin-falloidin festse Pufferek: 1. PBS 10 mM K2HPO4/KH2PO4, pH 7.4 140 mM NaCl 1 liter 8.18 g

Ksztsi javaslat: a) 500 ml 20 mM K-foszft puffer ksztse mono- s dibzikumbl (pH 7.4). b) 500 ml 20 mM Kfoszft oldathoz hozzadni a 8.18 g NaCl-t, majd 1 literre feltlteni vzzel. 2. Paraformaldehid-PBS (2%) (friss) Paraformaldehid 100 ml-re feltlteni PBS oldattal 3. Triton-PBS (0.1 %) Triton trzsoldat (vizes, 10%) 100 ml-re feltlteni PBS oldattal 100 ml 2g 100 ml 0.1 ml

4. Ethanolamine (MW 61.08) 100 ml 10 mM ethanolamine 60 l 100 ml-re feltlteni PBS oldattal (100 ml PBS-hez hozzpipettzni 60 l etanolamint) 5. PBS-BSA 1 % BSA 100 ml-re feltlteni PBS oldattal 25 ml 0.25 g

6. TRITC-phalloidin (friss) 2 ml 200 nM (0.2 M) TRITC-phalloidin 2 ml PBS-BSA oldathoz hozzpipettzni a megfelel mennyisg TRITC-phalloidint (pl. 100 M TRITC-phalloidin esetn 4 l TRITC-phalloidin 2 ml PBS-BSA-ba). Lpsek: 1. Sejtekkel bevont fedlemez mossa elmelegtett PBS-sel. 2x 2. Moss Tritonnal 30 perc szobahn. 3. Moss PBS-sel 2x. 4. Moss paraformaldehiddel, 15 perc szobahn 5. Moss PBS-sel 2x. 6. Moss etanolaminnal 5 perc szobahn. 7. Moss PBS-sel 2x. 8. Fests TRITC-phalloidinnel 20 perc szobahn. 9. Moss PBS-sel 3x 5 perc. Opcionlis: 10. Dehidrls felszll alkoholsorban 11. Moss dietilterrel 2x. 12. Az utols teres moss utn az tert a mintn hagyni, a mintt rszlegesen lefedni (hogy terg_z alakuljon ki). 13. A mintt lassan kell kiszrtani.