Laboratorio de Microbiologa

PRCTICA NO.6 ANALISIS MICROBIOLOGICO DE HECES ( COPROCULTIVO)

OBJETIVO.
El alumno manejar los procesos microbiolgicos para la realizacin de coprocultivos. Comprender los momentos en los cuales debe como mdico recurrir a sta tcnica. Identificar y diferenciar las bacterias patgenas de la flora normal del tracto gastrointestinal. morfologa microscpica de las Enterobacterias es muy similar entre ellas y no permitira una diferenciacin entre ellas. C). Cultivo: Se deposita la muestra con un asa sobre un medio slido y se procede por estra mltiple, se incuba a 37oC por 24 a 48 horas D). Medios de cultivo: Agar sangre, Agar desoxicolato, EMB, Mac Conkey, SS, etc. . La tcnica de coprocultivo que aqu se describe es un procedimiento de rutina para aislar Salmonella, Shigella , y cepas comensales y patgenas de Escherichia coli.(en sta prctica no analizaremos crecimiento de Yersinia enterocoltica . Para aislar Staphylococcus aureus es recomendable aadir una placa de agar sal y manitol, y para aislar Candida albicans otra de agar Sabouraud. E). Flora normal y patgena.

FUNDAMENTO TERICO.
El tracto gastrointestinal contiene una flora normal muy diversa, pero pertenecen a una sola familia de bacterias, las Enterobacterias. A). Recoleccin de la muestra: Para enfermedades gastrointestinales es preferible el examen de heces frescas o tambin un raspado del ano con hisopo. La muestra debe ser refrigerada si no se va a cultivar enseguida. B). Examen directo: No es muy recomendable antes del cultivo, debido a que la FLORA NORMAL Bacteroides fragilis. Lactobacilus spp.( anaerobios). Clostridium perfringens Peptostreptococcus spp. Proteus spp. Candida spp. Pseudomona spp.

FLORA PATGENA Salmonella typhi Salmonella spp. Shigella spp. Escherichia coli (enterotoxina). Klebsiella spp. Yersinia enterocoltica. Vibrio cholerae. ___________________________________________ ___________________________________________ ___________________________________________ ______ 2.- Cmo se manifiesta clnicamente la salmonelosis no tifoidea? ___________________________________________ ___________________________________________ ___________________________________________ ___________________________________________ __________________ 3.- Tiene algo que ver para la salmonelosis no tifoidea el echo de que el paciente tenga VIH? ___________________________________________ ___________________________________________ ___________________________________________ ___________________________________________ __________________

CASO CLINICO

Paciente de 35 aos de edad, sexo masculino, serologa positiva para VIH conocida desde 4 aos antes, el motivo de la consulta fue por fiebre y repercusin general. Ingres al hospital relatando una historia de 1 mes de evolucin caracterizada por anorexia, decaimiento, prdida progresiva de peso, sensacin febril, diarreas lquidas intermitentes, sin sangre ni moco, no acompaadas de dolor abdominal. Al realizar tincin de Gram encontramos bacilos gram negativos y el crecimiento del coprocultivo en agar SS fue positivo presentando colonias circulares de coloracin negra. PREGUNTAS EXPLORATORIAS: 1.- Cules son los microorganismos selectivamente crecen en el agar SS? que

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4.- Investiga cmo se manifiesta la gastroenteritis aguda en un paciente? ___________________________________________ ___________________________________________ ___________________________________________ ___________________________________________ __________________

MATERIAL. RECIPIENTE ESTERIL DE BOCA ANCHA ( O HISOPO ESTERIL CON MEDIO DE TRANSPORTE) Cajas Petri con Agar Sangre. Cajas Petri con Agar Salmonella-Shigella (SS). Cajas Petri con Agar MacConkey. Tubos de ensaye con rosca conteniendo un hisopo estril. Mecheros Meker. Mechero Bunsen. Asa de Nicromo. Equipo de Tincin de Gram. Portaobjetos. Material Biolgico. Muestra de materia fecal.

TCNICA. 1. Mtodo para el aislamiento microorganismos en material fecal. de EXAMENES DE LOS CULTIVOS. Agar MacConkey: Caractersticas: Es un medio moderadamente selectivo. Las sales biliares y el cristal violeta inhiben a la mayora de las bacterias Gram-positivas y a algnas Gramnegativas. La fermentacin de lactosa hace virar el indicador a rojo. Aspecto de las colonias: Los fermentadores tpicos de lactosa ( E. coli, Klebsiella y Enterobacter ) dan colonias rosas o rojas rodeadas de un halo de sales biliares precipitadas. Las fermentadoras dbiles o lentas de lactosa (Citrobacter, Serratia) pueden dar colonias incoloras a las 24 hrs. Y rosadas a las 48 hrs. Proteus, Salmonella, Shigella y Yersinia, dan colonias incoloras. Enterococcus forma pequeas colonias. Agar Salmonella Shigella (SS): Caracterstsicas: Es un medio selectivo para Salmonella y Shigella. La alta concentracin de sales biliares y citrato inhibe todas las bacterias Gram- positivas y

A). Toma con el asa estril un poco de materia fecal y depositarla cerca de la orilla de cada una de las placas. (Agar sangre, , MacConkey, SS) B). Proceder al aislamiento por el mtodo de estra cruzada (mltiple). C). Incubar a 37oC por 24 a 48 horas. D). Interpretar los resultados , anotando las caractersticas morfolgicas de cada colonia diferente que haya crecido. E). Hacer un frotis de cada colonia diferente, y teirlo con Gram.

OBSERVACIONES:

Las muestras para coprocultivo deberan tomarse antes de administrar antibiticos y preferentemente antes de tomar antidiarreicos. Indicar siempre el juicio diagnstico de presuncin y si el paciente es menor de un ao. Solicitar las investigaciones especiales, especialmente para (S.aureus). En el caso de bsqueda de portadores de Salmonella, se deber fundamentar adecuadamente el pedido y se necesitan 3 muestras negativas para asegurarse que el paciente no es portador.

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Laboratorio de Microbiologa muchas Gram- negativas, incluidos los coliformes. La fermetacin de lactosa hace virar el rojo neutro a rojo. El SH2 formado a partir del tiosulfato da un precipitado negro al reaccionar con hierro. Aspecto de las colonias. Los fermentadores de lactosa estn bastante inhibidos y dan colonias rojas. Las colonias de Salmonella aparecen sin inhibir, transparentes con el centro negro. Las especies de Shigella son mas o menos inhibidas y dan colonias transparentes sin centro negro. Las colonias de Proteus son similares a las de Salmonella. Agar EMB (eosina y azul de metileno): Caractersticas: Es un medio selectivo, utilizado para aislar bacilos RESULTADOS.
1. Morfologa macro y microscpica de bacterias aisladas de materia fecal. Mac Conkey CARACTERSTICA RESULTADO TAMAO FORMA ELEVACIN MARGEN COLOR SUPERFICIE DENSIDAD CONSISTENCIA OLOR PIGMENTACIN SS CARACTARSTICA TAMAO FORMA ELEVACIN MARGEN COLOR SUPERFICIE DENSIDAD CONSISTENCIA OLOR PIGMENTACIN RESULTADO

entricos Gram Negativos permite la diferenciacin de bacterias fermentadoras de lactosa de las no fermentadoras. Este medio permite diferenciar Salmonella y otros organismos lactosa negativos de organismos coliformes. Las colonias de Salmonella y Shigella son traslcidas, de color mbar o incoloras. Los coliformes que utilizan lactosa y/o sacarosa producen colonias de color azul o negro con centros oscuros y brillo metlico. Otros coliformes como Enterobacter presentan colonias mucosas de color rosa. Las cepas de Enterococcus faecales son parcialmete inhibidas.

CARACTERSTICA TAMAO FORMA ELEVACIN MARGEN COLOR SUPERFICIE DENSIDAD CONSISTENCIA OLOR PIGMENTACIN

EMB RESULTADO

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Escriba el diagnstico presuntivo de la muestra analizada. ___________________________________________________________________________________

SIGNIFICADO CLINICO . Los medios menos selectivos com o Mac Conkey permiten apreciar la composicin de la microbiota normal aerobia facultativa. En un sujeto sano debe predominar E. coli, con pequeos porcentajes de otras enterobacterias: Klebsiella, Enterobacter y Proteus. En Mac Conkey suelen detectarse tambin enterococos ( como pequeas colonias incoloras). Si se busca Salmonella y no se detect en el primer cultivo, se sembrarn nuevas placas. En el caso de Salmonella es necesaria la confirmacin serolgica, y si se sospecha de una gastroenteritis por E. coli debe determinarse si se ha aislado una cepa patgena, mediante serologa u otras tcnicas.

La presencia abundante de Candida albicans, Staphilocuccus aureus y Pseudomona aeruginosa en la materia fecal, se considera patgena si al paciente se le ha suministrado antibiticos previo. Estos medicamentos alteran la flora habitual cambiando el ambiente, de manera tal que los microorganismos que normalmente eran inocuos; se tornan patgenos. La mayora de las diarreas son transitorias (1-30 das), se han reportado casos de sntomas persistentes hasta de 10 meses, la etiologa del agente detectado en dichos casos ha sido la Shigella flexneri

CUESTIONARIO.
1. Explique por qu razn no podemos descartar que un paciente sea portador de Salmonella si en el primer cultivo obtuvimos un resultado negativo para ste microorganismo? ___________________________________________ ___________________________________________ ___________________________________________ ___________________________________________ ___________________________________________ ___________________________________________ ___________________________________________ ___________________________________________ ____________________________________ 2. Por qu es necesario refrigerar las muestras de heces fecales si van ha ser tratadas posteriormente? ___________________________________________ ___________________________________________ ___________________________________________ ___________________________________________ ___________________________________________ ___________________________________________ ___________________________________________

___________________________________________ ____________________________________ 3. Qu medios de cultivo se utilizaran si desearamos aislar Yersinia enterocoltica? ________________________________________ ________________________________________ ________________________________________ ________________________________________ ________________________________________ ________________________________________ ________________________________________ ________________________________________ ________________________________________ ____________________ 4. Por qu es tan difcil el aislamiento de Yersinia sp? ___________________________________________ ___________________________________________ ___________________________________________ ___________________________________________ ___________________________________________ ___________________________________________ ___________________________________________ ___________________________________________ ____________________________________ 5. Por qu se debe tomar la muestra antes de la administracin de antibiticos? ___________________________________________ ___________________________________________

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EVIDENCIAS SI NO

1.- Formato completo 2.- Prctica realizada 3.-Resultados de la prctica completos 4.-Material y equipo limpio 5.- Revisin bibliogrfica

OBSERVACIONES Y CONCLUSIONES. ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ________________________
INSTRUCCIONES: Marque con una paloma para indicar que el alumno realiz la actividad y con una X que no la realiz. Participacin individual Nombre A B C D E

A) Al realizar la prctica toma en cuenta las medidas de seguridad. B) Demuestra habilidad y destreza al manejar el material de laboratorio. C) Al preguntarle sobre el tema, fundamenta correctamente su respuesta. D) Coopera con el resto del equipo para que todos realicen su prctica. E) Al trmino de la prctica elimina o conserva adecuadamente su material y la muestra.

Evaluacin del trabajo en equipo

EQUIPO SI NO

Planificamos el trabajo Distribuimos bien las actividades El resultado fue el esperado

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