Mikroskopska laboratorijska tehnika u medicini

(Preparat 627) Fiksiranje: Tkivo se fiksira se u 4% formalinu,koji se pravi uzimanjem konc. 35-40% vodenog rastvora formaldehida,zatim se razblai 1:9 sa destilovanom vodom ili esmuom(bolje tvra voda).Uzima se 50ml formaldehida i dolije do 500ml u menzuru. Tkivo se ubaci u posudu i nalijemo formalin 10 delova vie,i ostavimo da stoji minimum 24h do 48h...i tako fiksiran,oznaen preparat u formalinu moe da stoji decenijama. Dehidratacija: Za istiskivanje vode iz preparata koristimo 96% i apsolutni alkohol ( etanol ), a zatim xilol da izvue etil-alkohol napolje. Kalupljenje: Preparat stavljamo u plasticnu posudi i prelijemo parafinom i ostavimo u termostatu,da parafin prodre u tkivo.Zatim napravimo modlicu u koju stavimo preparat i prelijemo parafinom,i preko njega postavimo papiri sa oznakom preparata.Ostavimo da se preparat stegne u kalupu,dok dobije oblik kocke. Seenje: Preparat secemo na mikrotomu(mikroton-rotacioni i klizni).Oni imaju nekoliko konica,prvo seemo na 1mikron i pribliavamo svakim obrtom...iseak uzimamo mokrom etkicom i prebacimo ga u vodeno kupatilo(zagrejano na 48 Co ).Premaemo preko dlana belance,prevuemo ploicu preko belanca,a zatim pecamo preparat u vodi.45min preparat stoji u termostatu. Ex tempore preparat: Krioton-KRIOCUT - isei tkivo direktno pristiglo sa operacije, tako sto zamrznemo na -28 Co ...i zatim se magnetom fiksira i see..alkohol,xilol,1 min svuda..stavimo pokrovnu ljuspicu i spreman preparat.Sve ukupno traje 15min! Bojenje: U I xilol 20min,pa u II xilol 20min,ovim ubrzavamo proces skidanja parafina,a zatim ispiramo sa etanolom III i IV po 20 min...i ocedimo...V destilovanom vodom isperemo 2-3min...VI bojimo u Hematoxilinu 1,5-2min (boji ljubiasto bazofilno jedarce,hromatinski materijal,ako je sve due drimo preparat uronjen)...VII 1,5-2min drimo u vodi esmui(tvrda) jer skida viak hematoxilina...VIII uronimo u Eozin 2-3min...pa po 5-10min redom u IX etanol,X etanol,XI etanol,XII xilol-etanol,XII xilol,XIII xilol...ocedimo... Okrenemo ploice ka sebi i stavimo preko pokrovnu ljuspicu na koju je naneta kap kanadskog balzama(koji ako je vrst razreujemo sa xilolom) - ema bojenja-

xilol-20min

xilol-20min

Etanol-20min

Etanol-20min

Des.H2O 2-3min

Hematoxilin 1,5-3min

esmua 1,5-2min Xilol-etanol 10min

Eozin 2-3min Xilol 10min

Etanol 10min

Etanol 10min

Etanol 10min

Xilol 10min