APA N SISTEMELE BIOLOGICE Noiuni de fizic molecular a lichidelor Fore i legturi intermoleculare n lichide.

Moleculele lichidelor interacioneaz n general prin fore de tip Van de Waals. Legturile Van der Waals se ntlnesc n cazul dipolilor electrici. ntr-un dipol electric centrul sarcinilor pozitive nu coincide cu cel al sarcinilor negative. Moleculele pot fi dipoli instantanei pentru un interval de timp foarte scurt, dar, prin mediere n timp, acest comportament dipolar dispare n cazul moleculelor perfect simetrice. n general, moleculele se pot comporta ca dipoli permaneni sau indui (n prezena unor cmpuri electrice exterioare moleculele nepolare pot deveni dipoli indui). Dintre dipolii permaneni se pot meniona apa, lipidele, proteinele etc.

Fig. 1 Interaciile Van der Waals pot fi, n funcie de caracterul dipolului, de tip: - dipol instantaneu - dipol instantaneu; - dipol instantaneu - dipol permanent; - dipol permanent - dipol permanent. Energia acestui tip de legturi este proporional cu 1/r6 (r- distana dintre molecule), iar fora cu 1/r7. Un alt tip de legturi ntlnite la lichide sunt cele coordinative (mai puternice). n acest caz exist o suprapunere parial a norilor electronici ai moleculelor. ntre moleculele lichidelor exist i fore de repulsie datorate respingerii sarcinilor de acelai fel. Aceste fore sunt proporionale cu 1/r13. n funcie de natura legturilor pe care le conin, lichidele sunt: - simple (conin numai legturi Van der Waals - exemplu, alcoolul); - complexe (n afara legturilor van der Waals conin i alte legturi, mai ales de tip coordinativ - exemplu, apa). Un grup special l constituie cristalele lichide n care legturile intermoleculare realizeaz structuri ordonate unidimensional i chiar bidimensional, extinse pe distane mari. Modele moleculare ale strii lichide - Modelul cinetico-molecular - lichidele sunt considerate gaze foarte comprimate (sunt aplicabile numai lichidelor formate din molecule monoatomice). - Modelul cristalin - lichidul este format din celule identice coninnd cte o molecul care se mic n celul, independent de micrile celorlalte molecule. Exist celule ocupate i neocupate (goluri). Molecula poate trece dintr-o celul ocupat ntr-un gol. Are loc o migrare a golurilor. - Modelul vacanelor fluidizate (Eyring) se refer la existena unor goluri numite vacane fluidizate. Acestea se mic n lichid la fel ca moleculele de gaz perfect (agitaie 1

termic). Numrul vacanelor pe unitatea de volum este egal cu numrul de molecule de gaz perfect pe unitatea de volum, n aceleai condiii de presiune i temperatur. Aceste modele se pot aplica, ntr-o oarecare msur, numai lichidelor simple. Apa este un lichid complex pentru care au fost elaborate modele speciale. Structura i proprietile cristalelor lichide Printre lichidele complexe exist lichide care au proprieti comune strii lichide i solide - acestea sunt cristalele lichide. Exemple de cristale lichide sunt: mielina din esutul nervos, esteri ai colesterolului, spunuri etc. Cristalele lichide sunt substane organice la care tranziia solid - lichid nu se face direct, ci prin faze intermediare, stabile, n care substana este anizotrop, numite mezofaze sau faze mezomorfe. Proprietile cristalelor lichidelor sunt date de orientarea spaial a moleculelor sau a unor agregate moleculare care trebuie s ndeplineasc anumite condiii: - s fie alungite i s conin pri aezate ntr-un plan (ciclul benzenic) - s aib un trunchi rigid, format din legturi duble sau triple care s defineasc axa lung a moleculei; - s conin dipoli electrici permeni sau indui; - s aib grupri dipolare slabe aezate la extremitile moleculei Aceste condiii sunt ndeplinite de trei tipuri de structuri moleculare i anume: - molecule organice mici: esterii colesterolului; - agregate elicoidale lungi: ADN i unele virusuri; - structuri asociate formate din molecule i ioni; aceste structuri sunt amestecuri de amfolii (molecule cu un capt hidrofob i altul hidrofil) cu solveni polari (apa, de exemplu), obinndu-se o orientare a gruprilor hidrofile i hidrofobe, la o anumit concentraie, rezultnd o structur ca a membranei celulare. n funcie de modul n care apar mezofazele exist: - cristale lichide termotrope, care se obin ntr-un anumit domeniu de temperatur; - cristale lichide liotrope, care se obin numai la anumite concentraii, intervalul de temperatur fiind mai larg.

Fig. 2 Membranele celulare au caracteristicile unor cristale lichide liotrope. Cristalele lichide termotrope sunt clasificate astfel (Fig 2): - nematice (nema - fir) - moleculele sunt orientate dup o anumit direcie (ca nite bastonae) - acestea nu prezint activitate optic; - smectice (smectos -spun) - moleculele se dispun dup dou direcii, formnd straturi moleculare suprapuse. Moleculele sunt dispuse perpendicular pe strat. Din aceast clas face parte mielina. -colesterice - se formeaz straturi suprapuse n care moleculele sunt paralele ntre ele i cu planul stratului; de la un plan la altul ele sunt ns rotite cu un anumit unghi. Sunt optic active. O proprietate important a cristalelor lichide colesterice este, deci, activitatea optic, care se intensific n prezena cmpurilor electrice. Moleculele se comport ca dipoli care se orienteaz n cmp. Dac liniile de cmp electric sunt perpendiculare pe planul de polarizare a luminii, cristalele plasate n cmp electric, care 2

absorb lumina polarizat, apar negre. Pe baza acestei proprieti, ele sunt folosite n sistemele de afiare a datelor. Cristalele colesterice si schimb culoarea n funcie de intervalul de temperatur (au proprieti termooptice) i de aceea sunt folosite n termografie (la msurarea temperaturii). Fenomene la nivelul interfeelor Interfa - suprafaa care separ dou faze aflate n contact. O interfa are tendina de a avea o suprafa minim (n baza principiului de minim, orice sistem tinde s-i minimizeze energia potenial) astfel nct, tangenial la suprafaa ei, se exercit o tensiune interfacial. n cazul lichid-gaz, aceasta se numete tensiune superficial. O mrime caracteristic pentru aceasta este coeficientul de tensiune superficial : = dF/dl (fora pe unitatea de contur) sau: = -dL/dS (lucrul mecanic necesar pentru a mri stratul superficial cu o unitate; semnul minus apare datorit conveniei de semne: lucrul mecanic efectuat asupra sistemului este negativ, iar mrirea suprafeei cu o unitate presupune efectuarea de lucru mecanic asupra sistemului). La dizolvarea n ap a unor substane poate s apar una dintre urmtoarele trei situaii, datorit structurii substanei respective i a caracterului hidrobob sau hidrofil, implicit a modului n care aceast substan interacioneaz cu moleculele de ap: - tensiunea superficial s rmn constant atunci cnd solvitul nu modific forele intermoleculare datorit faptului c se ncadreaz n reeaua de legturi de hidrogen a apei (zahrul n ap) - tensiunea superficial crete uor ca n cazul soluiilor de electrolit la care exist o interaciune puternic ntre ionii dizolvai i dipolii apei, ceea ce duce la creterea forelor intermoleculare din lichid, crescnd astfel tensiunea superficial. n acelai timp ionii sunt atrai n interiorul lichidului, concentraia lor n stratul superficial fiind mic, aadar putem concluziona c creterea tensiunii superifciale este nesemnificativ. - tensiunea superficial scade. Este cazul substanelor care conin grupri hidrofobe acestea ptrunznd ntre moleculele de ap i micornd astfel forele intermoleculare. Se numesc substane tensioactive. Simultan cu aceste procese de ptrundere ntre moleculele stratului superficial, tot datorit caracterului lor hidrofob, sunt expulzate ctre suprafaa liber, concentraia lor aici crescnd semnificativ, determinnd astfel o scdere important a tensiunii superficiale. Substanele tensioactive pot fi ordonate conform legii lui Traube, care arat c tensioactivitatea unei substane este cu att mai pronunat cu ct aceast substan conine mai multe grupri hidrofobe, iar n cadrul aceleiai serii organice, tensioactivitatea crete cu lungimea catenei, n cazul acizilor grai, cu gradul de nesaturare. Unul dintre efectele tensiunii superficiale este ascensiunea (depresiunea capilar). Fenomenele capilare sunt foarte importante ntr-o serie de procese biologice (ascensiunea sevei, accidente vasculare de tipul emboliilor gazoase - ptrunderea de gaze n snge poate bloca capilarele). Rolul fenomenelor superficiale la nivelul alveolelor pulmonare. Surfactantul pulmonar Alveolele pulmonare din jurul unei bronhiole au n medie o raz (dac le considerm sferice) de 0.05 - 0.1 mm. Alveolele pulmonare sunt n numr de circa 100 de milioane, iar suprafaa total pe care o ocup este de 100 m2 (prin comparaie, 3

pielea are 2 m2). Deci, prin acestea se realizeaz cel mai important contact cu aerul atmosferic. Suprafaa alveolelor variaz n cursul ciclului respirator cu cca. 7 m2. Peretele intern al unei alveole este acoperit de un film lichid foarte subire (0,5 m). ntre aer i acesta exist o tensiune superficial. Apare deci o diferen de presiune n interior, conform legii Laplace: p = 2/r

Fig. 3 Pentru ap, la o raz cum este cea a alveolelor, p 12 - 24 Torr. n realitate p sunt doar de civa Torr. Aceast discrepan se datoreaz existenei unui agent tensioactiv - surfactant pulmonar - avnd drept cel mai important constituent o fosfolipid, care reduce tensiunea superficial. Rolul acestui agent tensioactiv este acela de a face ca p s nu varieze prea mult n cursul ciclului respirator, mpiedicnd golirea complet a alveolelor mici n cele mari (din cauza p 1/r, la contracie presiunea ar tinde s creasc n cazul n care coeficientul de tensiune superficial ar fi constant). Prin aciunea agentului tensioactiv este posibil egalizarea presiunii la o valoare medie pentru alveolele de dimensiuni diferite, care trebuie s funcioneze simultan. Absena sau insuficiena acestui agent tensioactiv poate duce la grave accidente respiratorii. Structura i proprietile moleculei de ap O molecul de ap - H2O - conine 2 atomi de hidrogen i un atom de oxigen, dispui ca n Fig. 4. Oxigenul este legat covalent de cei doi atomi de hidrogen, unghiul dintre legturi fiind 1050, iar lungimea legturii de 0,99 . Electronii moleculei de ap, n total 10, sunt repartizai n modul urmtor (Fig. 4): - 2 electroni n apropierea oxigenului; - 2 perechi care se rotesc pe dou orbite aflate n plan perpendicular pe planul moleculei de ap, avnd nucleul de oxigen n focare. Acetia se numesc electroni neparticipani deoarece nu particip la legtura covalent; - 2 perechi de electroni care se rotesc pe dou orbite ce nconjoar legtura dintre oxigen i hidrogen, n planul moleculei de ap (planul format de cele trei nuclee). Prin aceti electroni se realizeaz legtura covalent. Aceast dispunere a orbitelor determin structura tetraedric a moleculei de ap, cu nucleul oxigenului n centru i cei doi protoni, respectiv cele dou perechi de electroni neparticipani n vrfuri (Fig.4).

Fig. 4

Structura molecular a apei solide i a apei lichide Legtura de hidrogen Distribuia asimetric a electronilor, cu o densitate maxim n apropierea nucleului de oxigen, determin o separare parial a centrelor sarcinilor pozitive, respectiv negative. n timp ce centrul de mas al sarcinilor pozitive este aproximativ la mijlocul distanei dintre cei doi protoni, cel al sarcinilor negative este n zona oxigenului. Molecula de ap se comport, deci, ca un dipol, avnd un moment dipolar de 1,858 Debye 6,2 10-30 Cm. De aceea, molecula de ap se orienteaz n cmp electric i apa are o constant dielectric mare. n acelai timp, ntre moleculele de ap apar legturi Van der Waals de tip dipol permanent - dipol permanent. Prin forele de atracie care apar ntre extremitile moleculelor cu sarcini de semn opus, se produce o apropiere a moleculelor i o suprapunere parial a norilor electronici, electronii neparticipani ai unei molecule se pot roti i n jurul unui nucleu de hidrogen al altei molecule. Apare o legtur de hidrogen (punte de hidrogen) ntre dou molecule vecine. Aceast legtur este o legtur coordinativ, n care distana dintre nucleul de oxigen al unei molecule i nucleul hidrogenului din cealalt molecul este de 1,76 . Apare un comportament cooperativ, n sensul c, legarea unei molecule faciliteaz legarea alteia etc. O molecul de ap poate lega coordinativ alte 4 molecule (figura). Pe baza acestei legturi se formeaz structuri supramoleculare (gheaa - stare cristalin, apa lichid microcristalin cu diferite grade de asociere).

Fig. 5 Proprietile fizice ale apei. Apa are proprieti fizice speciale, care se explic prin caracterul ei dipolar i prin capacitatea de a forma legturi de H. Dintre cele mai importante pentru sistemele biologice se pot meniona: - cldur specific mult mai mare dect cea a oricrei substane solide sau lichide; este foarte important n procesele de termoreglare la nivelul organismului viu. De exemplu, eforturi musculare intense ar putea duce la o supranclzire. -conductibilitate termic de cteva ori mai mare dect cea a majoritii lichidelor : amortizor termic al apei n organism; - cldur latent de vaporizare mult mai mare dect a altor lichide: factor determinant al homeotermiei (rcirea corpului prin evaporare pulmonar i transpiraie); - densitate maxim la 40C - important pentru viaa acvatic; - constant dielectric foarte mare - favorizeaz disociaia electrolitic; 5

- tensiune superficial mare (fenomene interfaciale, capilaritate). Modele ale structurii apei n starea lichid. Trecnd de la starea solid caracterizat printr-o reea cristalin de prisme hexagonale (Fig. 6) (fiecare molecul coordineaz alte 4 molecule), n starea lichid, apa capt o structur complex, n care existena legturilor de H i confer anumite proprieti speciale.

Fig. 6 Pentru a le explica s-au elaborat cteva modele care, ns, nu reuesc s clarifice complet caracteristicile i proprietile apei. Ele pot fi utile pentru o descriere a comportamentului apei n unele situaii. Dintre acestea: - Modelul reelei cristaline parial distruse - datorit agitaiei termice, unele legturi de H se rup - apar domenii microcristaline ntre care circul moleculele libere. ntre 00 - 40C densitatea crete datorit ptrunderii moleculelor de ap i printre ochiurile microreelelor intacte. - Modelul grmezilor temporare - se bazeaz pe ipoteza cooperativitii legturilor de H. Formarea unei legturi de H faciliteaz formarea altora i invers, ruperea faciliteaz desprinderea altor molecule. Apa - grmezi de molecule, formarea i distrugerea lor succedndu-se cu mare rapiditate . - Modelul clatrailor - n anumite condiii o molecul de ap se poate comporta ca o molecul hidrofob, devenind centrul unui dodecaedru cu fee pentagonale, n colurile cruia se afl molecule de ap - clatrat (Fig. 7).

Fig. 7 - Modelul legturilor flexibile - rearanjarea moleculelor de ap se face nu prin ruperea, ci prin ndoirea legturilor de H. Structura molecular a soluiilor apoase Modificarea structurii apei n prezena solviilor Prin dizolvarea unei substane n ap (solventul cel mai rspndit), structura acesteia se poate modifica, n funcie de tipul solvitului, indiferent dac ntre moleculele acestuia i moleculele apei exist sau nu interaciuni.

Electroliii - se disociaz la dizolvarea n ap n ioni negativi i pozitivi, fenomen favorizat de constanta dielectric mare a apei (r = 80). Electroliii tari sunt complet disociai. Ionii astfel formai atrag dipolii apei, astfel c un ion pozitiv atrage polul negativ (Fig. 8) i invers.

Fig. 8 Apar structuri radiale (cu simetrie sferic) - apa devenind ap de hidratare. Procesul se numete solvatarea (hidratarea) ionilor. Acest tip de ap are proprieti diferite de cele ale apei obinuite: densitatea apei crete prin electroconstricie, se modific temperaturile de solidificare i fierbere, constanta dielectric etc. Moleculele capabile de legturi de H, ca i cele cu moment dipolar permanent, se integreaz cu uurin n reeaua apei (zaharoza) fr a produce modificri prea mari de structur. Moleculele fr moment dipolar permanent interacioneaz cu moleculele de ap prin legturi Van der Waals slabe de tip dipol permanent- dipol instantaneu. Moleculele de acest tip sunt numite molecule hidrofobe. Sistemul ap solvit, n acest caz, tinde spre minimizarea energiei sale libere - deci spre realizarea unui numr maxim de legturi ntre componente. Moleculele hidrofobe nu pot realiza legturi cu moleculele de ap i, de aceea, un mod de a realiza ct mai multe legturi este mrirea numrului de legturi de H ntre moleculele de ap din jurul moleculelor hidrofobe. Se formeaz structuri cristaline (12 fee pentagonale - dodecaedre, 16 - hexacaidecaedre) numite clatrai, n centrul crora se afl cte o molecul hidrofob. Apa capt o structur asemntoare gheii - ap de clatrare. Un alt mod de mrire a numrului de legturi se realizeaz prin apropierea moleculelor hidrofobe una de alta. Apar legturi hidrofobe care nu sunt rezultatul vreunei atracii, ci al lipsei de afinitate pentru ap. Legturile hidrofobe sunt foarte importante n realizarea structurii spaiale a macromoleculelor dizolvate n ap. Moleculele amfifile (cum sunt proteinele i acizii nucleici) conin att grupri polare (hidrofile) ct i nepolare (hidrofobe). Gruprile hidrofile vor forma legturi prin atracii electrostatice, iar cele hidrofobe se apropie unele de celelalte, realiznd legturi hidrofobe. n felul acesta macromoleculele i organizeaz att propria structur, ct i pe cea a moleculelor de ap din jur (se formeaz apa de hidratare i apa de clatrare). Aceasta ap de structur se numete ap legat (Fig. 9)

Fig. 9

Disocierea apei H2O H+ + OHProtonul se poate lega de H2O sau poate trece de la o molecul la alta (are o mare mobilitate): pH -ul H+ + H2O H3O+ (hidroniu)

Gradul de disociere al apei pure la 250C: [H+] = [OH-] = 10-7 moli/l Logaritmul cu semn schimbat al concentraiei ionilor de H se numete pH: pH = 7 (neutru), <7 (acid), >7 (bazic). n organism valoarea medie a pH -ului este 7,4. O substanta tampon pastreaza pH-ul constant, chiar la adaugarea unor cantitati mari de acizi sau baze. O astfel de substan tampon este sngele cu seroproteinele avand rol activ. Structura i rolul apei n sistemele biologice Organismul uman are un mare coninut n ap (65-70%). O mare parte a apei din organism manifest proprieti fizice deosebite: se evapor foarte greu, nghea la temperaturi mult sub 00C, nu dizolv cristaloizii, nu particip la osmoz - aceasta este apa legat. Problema apei n structurile vii nu este complet elucidat. Existena apei legate se explic prin prezena unui mare numr de specii moleculare, macromoleculare i ionice, care structureaz apa din jur. O mare parte a apei intracelulare prezint un grad superior de odonare. Aceast ordonare are un rol important n desfurarea proceselor celulare (excitaie, contracie, diviziune, secreie etc). O serie de studii au artat ca apa este compartimentalizat: exist ap liber, ap parial legat i ap legat, fiecare din aceste compartimente avnd proprieti specifice. Dat fiind importana apei n desfurarea proceselor biologice, exist un mare numr de tehnici care permit studiul proprietilor acesteia n organismul viu. Tehnici fizice de studiu al apei n sistemele biologice Clasificare: 1. Tehnici distructive 2. Tehnici nedistructive 8

1. Tehnici distructive - Tehnicile de congelare sunt utilizate pentru determinarea punctului de nghe: apa legat nghea la temperaturi mai sczute dect apa liber. - Tehnicile de deshidratare permit studiul compartimentalizrii apei: se pierde nti apa liber i apoi cea legat. 2. Tehnici nedistructive - Spectrofotometria n IR (infrarou) poate da informaii privind micarea moleculelor de ap legat prin reeaua de ap lichid. - Calorimetria indic modificarea capacitii calorice a apei n funcie de gradul ei de organizare. - Msurarea relaxrii dielectrice: orientarea dipolilor apei n cmp electric poate da indicaii cu privire la interaciile cu diferite tipuri de solvii. - RMN (rezonana magnetic nuclear) poate da informaii despre starea apei (structurii ei) prin msurarea timpilor de relaxare magnetic nuclear (nucleul atomic - dipol magnetic - tranziiile cuantice ale momentelor magnetice n cazul nucleelor de H2 depind de starea liber sau legat a moleculelor de ap. Constanta de timp de revenire dintr-o stare excitat - timp de relaxare). Tomografia RMN permite stabilirea unor modificri patologice ale structurrii apei. - Deuterizarea prin nlocuirea apei (H2O) cu ap grea (D2O) se produc diverse modificri n structura i funcia unor biosisteme. Legturile de deuteriu sunt mai puternice dect legturile de hidrogen - crete gradul de ordonare n interiorul unor structuri (de exemplu macromolecule). Deuterizarea induce: blocarea transportului activ prin membrane, dispariia contractilitii, inhibarea diviziunii celulare. Aceste efecte se numesc efecte izotopice i ele sunt funcie de gradul de deuterizare. Se poate studia compartimentalizarea apei constantele de vitez ale diferitelor procese n care este implicat apa difer n apa grea de cele care au loc n apa normal.