Nombre de la prctica: Extraccin de ADN Nombre de los alumnos:

Diana Jazmn De Dios Hernndez. Sayde Estefania Abreu Ovando. ngel Cadena Garca. Tahiri Martnez Nez. Francisco Melo Hernndez.

Licenciatura:
Medicina. A

Fecha de la prctica:
23 de Noviembre 2011

Nombre del catedrtico:

QFB. Mara del Roci Galvn Garca.

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Extraccin de ADN
Objetivos:
El estudiante utilizar una tcnica sencilla para la extraccin de ADN de un tejido animal.

Introduccin:
La extraccin de ADN requiere una serie de etapas bsicas: En primer lugar tiene que romperse la pared celular y la membrana plasmtica para poder acceder al ncleo de la clula. A continuacin debe romperse tambin la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Los jabones utilizados como lavavajillas emulsionan los lpidos de las membranas celulares y las rompen. La sal evita la unin de las protenas al ADN. Para aislar el ADN hay que hacer que precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el agua. Adems de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solucin acuosa.

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 Materiales:
Materiales Portaobjetos Cubreobjetos Varilla de vidrio Mortero y pistilo Vaso precipitado 100 mL. Vaso precipitado 50 mL. Vaso precipitado 5 mL. Propipeta Probeta 50 mL. Pipeta Pasteur Bulbo Matraz aforado 20 mL. Esptula Gasa Cantidades

1 1 2 2 2 1 2 3 1 1 1

Maquinaria y Equipo Microscopio ptico Balanza Granataria

Reactivos Hgado de pollo Colorante bsico (verde de metilo, azul de metileno, eosina o pironina) Alcohol 96 NaCl 2 M SDS Arena

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 Procedimiento:
1. Triturar medio hgado de pollo en un mortero. Aadir arena para que al triturar se puedan romper las membranas y queden los ncleos sueltos. 2. Aadir al triturado, 50 mL. De agua. Remover hasta hacer una especie de papilla. 3. Filtrar varias veces sobre una tela para separar los restos de tejidos que hayan quedado por romper. 4. Medir el volumen del filtrado con una probeta. 5. Aadir al filtrado un volumen igual de NaCl 2 M. con esto conseguimos producir el estallido de los ncleos para que queden libres las fibras de cromatina. 6. Aadir 1 mL. De SDS, para que se quede el ADN libre de las protenas que tiene asociados. 7. Aadir 50 mL. De alcohol de 96. Hacerlo de forma que el alcohol resbale por las paredes del vaso y se formen dos capas. En la interfase, precipitado el ADN. 8. Introducir una varilla de vidrio e ir removiendo en la misma direccin. Sobre la varilla se van adhiriendo unas fibras blancas, visibles a simple vista, que son el resultado de la agrupacin de muchas fibras de ADN. 9. Realizar una tincin especifica de ADN, tomando una muestra de las fibras que se van depositando sobre la varilla de vidrio y depositarlas sobre un portaobjetos. 10. Teir durante unos minutos con un colorante bsico (verde de metilo, azul de metileno, eosina o pironina). 11. Observar al microscopio.

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 Observaciones:
El producto ligero obtenido de la extraccin no es ADN puro, ya que, entremezclado con l, hay fragmentos de las otras sustancias. Una extraccin profesional se realiza aadiendo enzimas que fragmentan las molculas de ARN y que impiden que se unan al ADN. Aunque en esta ocasin no pudimos observar en el microscopio la pequea hebra, observamos una ligera fibra en la varilla de vidrio, la cual miramos al microscopio y no observamos nada, pero aprendimos el procedimiento.

Cuestionario:
Para qu sirve el NaCl 2 M? Para romper la membrana del ncleo y salgan las fibras de cromatina. Qu tipo de detergente es el SDS? Es un detergente tensoactivo o tambin conocido como surfactantes. Qu otros detergentes podemos utilizar?

Conclusiones:

Bibliografa:

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Pgina 6