Crecimiento Bacteriano

Ilse Valderrama Heller, 2008

 FISIOLOGIA BACTERIANA
CRECIMIENTO Y RECUENTO SUSTAMCIAS ANTIMICBROBIANAS NUTRICION Y METABOLISMO RECOMBINACION GENETICA

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FASES DEL CRECIMIENTO

CUANDO INTRODUCIMOS UNA POBLACION DE MICROORGANISMOS DENTRO DE UN MEDIO DE CULTIVO LIQUIDO, CADA ORGANISMO PRESENTA CUATRO FASES DE CRECIMIENTO TIPICAS: FASE LAG(latencia) FASE LOGARITMICA (LOG) FASE ESTACIONARIA FASE DE MUERTE. ESTAS CUATRO FASES FORMAN LA CURVA ESTANDAR DEL CRECIMIENTO BACTERIANO CRECIEMIENTO EXPONENCIAL N CELULAS : 1 2 3 4 8 EXPONENTE 20 21 22 23 24

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Fase exponencial o logartmica (log): aumento regular de la poblacin que se duplica a intervalos regulares de tiempo (G). Los Bllactamicos actuan en esta fase

Fase estacionaria: cese del crecimiento por agotamiento de nutrientes, por acumulacin de productos txicos, etc. N|cel.nuevas=ncel.que mueren

Fase de declinacin o muerte: el nmero de clulas que mueren es mayor que el nmero de clulas que se dividen.cel. viables

Fase de latencia: perodo de adaptacin , gran actividad metablica, clulas no se dividen (min-horas )

Las propiedades de un microorganismo dependern de la fase de la curva en que se encuentren (la produccin de antibiticos se lleva a cabo en la fase estacionaria).
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MEDIDAS DEL CRECIMIENTO MICROBIANO:

se mide siguiendo los cambios en el numero de celulas o el peso de la biomasa celular. el clculo del nmero de clulas que existen en una suspensin se puede llevar a cabo mediante el recuento celular (microscopa, nmero de colonias), masa celular (peso seco, medida del nitrgeno celular, turbidimetra) o actividad celular (grado de actividad bioqumica en relacin al tamao de la poblacin). todos estos mtodos se clasifican en dos apartados: mtodos directos y mtodos indirectos.

recuentos pueden clasificarse en:

directos e indirectos
viables o totales
existen diversos mtodos tales como: recuento directo al microscopio recuento en placas mtodo de las diluciones turbidimetra numero mas probable filtracin Ilse Valderrama Heller, 2008

RECUENTOS DIRECTOS VIABLES SALES DE TETRAZOLIUM TOTALES FILTRO MEMBRANA BREED

PETROFHAUSSEN EPIFLUORESCENCIA

INDIRECTOS VIABLES NMP RECUENTO EN PLACA

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DILUCIONES:

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SUSTANCIAS ANTIMICROBIANAS
AGENTE ANTIMICROBIANO: SUSTANCIA QUIMICA QUE DESTRUYE O INHIBE LA PROLIFERANCION DE LOS MICROORGANISMOS
PRODUCTO NATURAL SINTESIS QUIMICA

PRODUCTO NATURAL: ANTIBIOTICOS LOS CUALES EN SU MAYORIA SON PRODUCIDOS POR MICROORGANISMOS.

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EFECTO BACTERIOSTATICO
SE OBSERVA CUANDO SE INHIBE LA PROLIFERACION PERO NO TIENE LUGAR LA MUERTE CELULAR. UN AGENTE BACTERIOSTATICO: INHIBE LA SINTESIS DE PROTEINAS ACTUA UNIENDOSE A LOS RIBOSOMAS PUEDE ACTUAR EL EFECTO DILUCION EJEMPLO: Streptomicina, Tetraciclina, Cloramfenicol Tetraciclinas y estreptomicinas (30S) Cloramfenicol (50S)
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AGENTES BACTERICIDAS
EVITAN LA PROLIFERACION E INDUCEN LA MUERTE, PERO NO TIENE LUGAR LA LISIS O RUPTURA CELULAR. SE UNEN MUY INTIMAMENTE CON SUS BLANCOS CELULARES Y NO PUEDEN ELIMINARSE POR DILUCIN. SON EJEMPLO DE ESTOS AGENTES LOS METALES PESADOS. Ejemplos: cido Nalidxico, Rifampicina

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AGENTES BACTERIOLITICOS

INDUCEN LA MUERTE POR LISIS CELULAR. ESTO SE OBSERVA EN LA DISMINUCION DEL NUMERO DE CELULAS O EN LA TURBIDEZ, DESPUES QUE SE AGREGA EL BACTERIOLITICO PENICLINA : SINTESIS DE PARED AGENTES QUE ACTUAN A NIVEL DE MEMBRANA: KOH, ALCOHOLES, DETERGENTES Inhibicin de la sntesis de la pared celular: Cicloserina, Penicilina Alteracin de la permeabilidad de la membrana: Anfotericina B, Polimixina, Nistatina
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AGENTES : quimioterapeticos
TOXICIDAD SELECTIVA: EL AGENTE ES MAS EFECTIVO CONTRA EL MICROBIO QUE CONTRA EL HUESPED ANIMAL O VEGETAL. CUANDO OCURRE LO ANTERIOR EL AGENTE RECIBE EL NOMBRE DE QUIMIOTERAPEUTICO. EL EFECTO DE UN AGENTE ANTIMICROBIANO SE PUEDE ESTUDIAR CON LA AYUDA DE: CONCENTRACION MINIMA INHIBITORIA CMI ANTIBIOGRAMA ESPECTRO DE ACCION

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CMI

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ANTIBIOGRAMA

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Zona de Inhibicin 0 a 10mm de dimetro 10 a 15mm de dimetro 15 a 25mm de dimetro

Sensibilidad de la cepa Resistente Medianamente resistente Sensible

25mm o ms de dimetro

Muy sensible

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 Resistencia Antibitica Natural o Adquirida Cromosmica o Plasmdica (Transposones) Mecanismos de Resistencia: Trastornos de la Permeabilidad Alteraciones del Sitio Blanco Hidrlisis Enzimtica

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EFECTO DE LOS FACTORES AMBIENTALES SOBRE EL CRECIMIENTO

No todos los microorganismos responden de la misma manera a los factores ambientales, lo que para unos puede ser beneficioso para otros es perjudicial Los requerimientos para el crecimiento microbiano se pueden dividir en dos categoras:

FISICOS:
TEMPERATURA pH PRESION OSMOTICA

QUIMICOS:
AGUA FUENTE DE C Y DE N SUSTANCIAS MINERALES OXIGENO FACTORES ORGANICOS DE CRECIMIENTO

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TEMPERATURAS CARDINALES: T MAXIMA, T OPTIMA Y T MINIMA

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REQUERIMIENTOS FISICOS
de acuerdo al rango de temperatura tenemos : psicrofilos, mesofilos y termofilos.

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pH:acidfilos(0 y 5.5ph), alcalfilos(8.5y11.5) y

neutrofilos(5.5 y 8.0)

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DISPONIBLIDAD DE AGUA

Todos los organismos requieren H2O para vivir. Halfilos: microorganismos que viven en altas concentraciones de sales.algunas bacterias se han adaptado muy bien a ambientes con altas concentraciones de sal (nacl): halotolarentes,(toleran conentraciones de nacl) y los halfilas ( requieren nacl para su crecimiento, moderados(6-15%) y extremos(15-30% nacl). Osmfilos: microorganismos que viven en altas concentraciones de azcares.
Xerfilos: microorganismos que viven en ambientes secos.

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Crecimiento aerbico y anaerobico

Crecimiento de algunas bacterias depende de la presencia de oxigeno (aerobias y facultativas) Otras mueren (anaerobicas) La utilizacion de O2 genera productos toxicos como superoxido y H2O2 Algunos mo aerobios y facultativos poseen enzimas superoxido dismutasa y catalasa para detoxificar estos productos
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Presencia de O2

Aerobios

Anaerobios (ausenciaO2)

Microaerofilos Requiere(1-15%)

Facultativos
No requieren crecen mejor en presencia de O2

Obligados O2(21%)

Aerotolerantes No requieren crecen peor en O2

Extrictos, obligados O%, letal

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RADICALES LIBRES SUPEROXIDO

Enzimas que actan sobre especies moleculares derivadas del oxigeno

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FISIOLOGIA CELULAR
ESTUDIA LOS PROCESOS VITALES DE LA CELULA MICROBIANA

SE AGRUPAN EN TRES FUNCIONES VITALES QUE SON:

NUTRICION

RELACION
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REPRODUCCION

Nutrientes
1- Fuente de energa luz qumica

2- Macronutrientes H K O Mg C Na N 95% Ca S Fe P 3- Micronutrientes (elementos traza) Co, Zn, Mo, Cu, Mn, Ni, Se, W 4- Factores de crecimiento Vitaminas Purinas y pirimidinas Ilse Valderrama Heller, 2008 Aminocidos

DIVERSIDAD METABLICA
Todos los organismos
Quimiotrofos
Fuente de Energa: Comp. Qumicos

Fototrofos
Fuente de energa: luz

Quimiolitotrofos

Quimioorganotrofos

Quimiolitotrofos
C = CO2

Mixotrofos
C = orgnico

Fotoheterotrofos
C = CO2

Fotoautotrofos
C = orgnico

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Tipos nutricionales
FUENTE DE ENERGIA FOTOTROFOS QUIMIOTROFOS AUTOTROFOS HETEROTROFOS FUENTE DE ENERGIA Fotoautrotofos Fotohetertrofos Quimioautotrofos quimioheterotrofos Luz Luz Qumica Qumica Ilse Valderrama Heller, 2008 LUZ QUIMICA FUENTE DE CARBONO

CO2 COMPUESTOS ORGANICOS FUENTE CARBONO CO2 Compuestos orgnicos CO2 Compuestos orgnicos

METABOLISMO

Visin simplificada del metabolismo celular

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etapas del metabolismo

METABOLISMO Actividades relacin, nutricin y reproduccin

REQUERIMIENTOS materiales(nutrientes) fuerza conductora(ATP y poder reductor) plan (organizacin) ATP fosforila. n. sustrato quimiosmosis Poder reductor rxn redox NAD NADP

1.mecanismos de entrada

ANABOLISMO sntesis

CATABOLISMO degradacin

2.reacciones catablicas 3.biosntesis 4. polimerizacin 5.ensamblaje

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METABOLISMO

METABOLISMO ANAEROBIO

METABOLISMO AEROBIO

Respiracin anaerobia

Fermentacin

Respiracin aerobia glicolisis ciclo Krebs ruta pentosa fosfato

lctica

alcoholica

12 metabolitos precursores ATP Poder reductor

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Mecanismos de obtencin energa

quimioheterotrofos

autrotofos

Fermentacin

respiracin

quimioautrotofos

fotoautrotofos

Fotosntesis oxigenica

Fotosntesis anoxigenica

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Generacin de ATP
1.- Fosforilacin a nivel de sustrato 2.- Fosforilacin oxidativa (Transporte de electrones):

ADP + Pi + E

ATP + H2O

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FLUJO ENERGETICO Y DE CARBONO

ALTERNATIVAS DE GENERACION DE LA ENERGA

1. Respiracin aerbica Comp. orgnico CO2

Flujo de C

ATP

Flujo de e-

Biosntesis

O2
2. Respiracin anaerbica Comp. orgnico
Flujo de e-

CO2
Flujo de C

ATP
NO3S0
Ilse Valderrama Heller, 2008 4

Biosntesis SO
-2

aceptores orgnicos de e-

3. Metabolismo quimiolitotrfico CO2

Flujo de eFlujo de C

ATP
NO3S0 SO4-2 O2 Biosntesis

4. Metabolismo fototrfico

LUZ

ATP + CO2
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BIOSINTESIS

I . CATABOLISMO DE CARBOHIDRATOS

Visin general de la respiracin y la fermentacin

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Resumen de la respiracin aerbica en procariontes

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Catabolismo de protenas, carbohidratos y lpidos

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Fermentacin

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FERMENTACION
a) Utiliza una fuente de energa en ausencia de un aceptor externo de electrones b) El donador de e se oxida por completo y despus de algunos intermedios queda reducido

TIPOS DE FERMENTACIONES a) F. Alcohlica b) F. Homolactica c) F. Heterolactica hexosa CO2 + etanol ac. lctico etanol, CO2 d) F. Propinica e) F. Ac. mixta lactato hexosa Propionato (acetato, CO2) Butanol Propionibacterium Clostridium propionicum Enterobacterias 2,3 butanodiol acetato, formato, lactato, succinato E. Coli, Shigella Salmonella Levaduras Zymomonas

hexosa ac. lctico hexosa

Streptococcus Lactobacillus Leuconostoc

f) F. Ac. butrica

hexosa

Butirato

Clostridium butiricum

Acetato, H2 + CO2 g) F. Butanlica hexosas butanol Clostridium butiricum

Acetato, acetona, etanol Ilse Valderrama Heller, 2008

GENETICA MICROBIANA
los procesos moleculares responsables de la proliferacion celular pueden dividirse en diversos estadios tales como los que siguen.

replicacion transcripcin traduccin

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LA INFORMACION CONTENIDA EN EL DNA ES EL PLAN MAESTRO DEL

METABOLISMO. LA INFORMACION GENETICA PASA DEL DNA AL RNA QUE DIRIGE LA SINTESIS DE PROTEINAS. POR LO
TANTO EL DNA METABOLISMO. DIRIGE TODO EL

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Los RNAm en procariontes son policistrnicos, lo cual no ocurre en eucariontes

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REPLICA EN PLACA: TECNICA PARA IDENTIFICAR Y AISLAR CEPAS MUTANTES

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Mutantes auxotroficas, que desarrollan un requerimirnto nutricional por mutacin

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PRUEBA DE AMES
determina, por seleccin directa, la capacidad de un compuesto mutagnico para producir reversiones, mutaciones que revierten la mutacin original, produciendo una auxotrofia y permitiendo a la cepa crecer en ausencia de histidina.
se mezcla el compuesto qumico a evaluar con hgado de rata macerado, una fuente rica en enzimas que convierten algunos compuestos qumicos inocuos en carcingenos. Si un compuesto qumico da negativo en la prueba de Ames, probablemente ser inocuo.

Si es positivo, es con certeza mutagnico y probablemente carcingeno.

Aproximadamente, el 90% de los compuestos qumicos que se dan como mutagnicos en la prueba de Ames, tambin son carcingenos en las posteriores pruebas con animales.

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PRUEBA DE AMES

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Intercambio gentico

Conjugacin Transformacin transduccin

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PROCESO CONJUGACION

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TRANSFORMACION

FIJACION DNA LIBRE

PASO DE CADENA DNA

CADENA SIMPLE SE RECOMBINA CON REGIONES HOMOLOGO DEL DNA BACTERIANO

CELULA TRANSFORMADA

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Transduccin generalizada, particulas con DNA hospedador

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FAGOS TEMPERADOS O LISOGENICOS

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Ciclo ltico
Fijacin Penetracin Eclipse Ensamblaje Liberacin
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Muchas gracias por su atencin!

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