Determinarea concentraiei unor substane biologice

folosind refractometrul

Noiuni teoretice
La suprafaa de separaie a dou
substane cu indici de refracie diferii, raza de
lumin i modific direcia de propagare
suferind fenomenul de refractie, conform legii
refractiei (1). Pentru un unghi de inciden
oarecare i, putem scrie :
n
1
sin i = n
2
sin r (1)
Rezulta din legea enuntata, ca atunci
cand raza luminoasa trece dintr-un mediu mai
dens optic (I) in altul mai putin dens (II), ea se indeparteaza de
normala. Pentru o anumita valoare a unghiului de incidenta, numit
unghi de icidenta mai mare decat l, raza luminoasa nu mai patrunde
in al doilea mediu, ci se reflecta total in primul mediu. Unghiul limit
depinde numai de indicii de refracie ai substanei.
Dac se cunoate indicele de refracie al uneia dintre substane,
msurnd unghiul limit se poate afla indicele de refracie al altor
substane.
Pentru n
1
< n
2
avem :

1
2
sin
n
n
l = (2)
Razele refractate ptrund n mediul cu indice de refracie n n
intervalul delimitat de unghiul limit. Razele refractate nu ptrund n
afara unghiului limit astfel c ntre cele dou domenii exist un
contrast puternic.









Cnd un fascicul de lumin ptrunde ntr-o prism cu unghiul
de refringen A i indicele de refracie n (fig.2) prin faa BC, acesta
sufer un fenomen de reflexie total pe faa BA i prsete prisma
prin faa AC. Se pot scrie relaiile:

Fig. 1

C
i
1
i
3
I
3
I
1
I
2
A
B
r



Fig. 2
r i n
l A i
sin sin =
=
(3)

r l A n sin ) sin( =

si
n
n
l
x
= sin
De asemenea, se tie c pentru valori mici ale unghiului de
referin A, deviaia prin prism poate fi scris:
) 1 ( = n A o (4)

Dac pe faa prismei cade un fascicul de lumin alb, aceasta
sufer fenomenul de dispersie, adica indicele de refractie al
materialului rismei variaza in functie de lungimea de unda a radiatiei
ce traverseaza prisma.
Pentru spectrul vizibil i corpuri transparente, dependena n =
n () este dat de relaia lui Cauchy
2 4 2

b
a
c b
a n + ~ + + + = (4)
Se definete dispersia total o
t
prin diferena deviaiilor razelor
violete i roii (razele limit ale spectrului vizibil).
) (
C F C F t
n n A = = o o o (7)
unde: n
F
este indicele de refractie pentru linia albastra din spectrul
H
2
cu
F
= 4861 .
n
C
este este indicele de refractie pentru linia rosie din
spectrul H
2
cu
C
= 6563 .
n
D
este este indicele de refractie pentru linia galbena din
spectrul Na cu
D
= 5893 .

Se definete dispersia medie o
m
ca fiind deviaia razei galbene
(linia D din spectrul atomului de Na) cu
D
= 5893 :
) 1 ( =
d m
n A o (8)
Raportul o
m
/o
t
se numete putere dispersiva:
C F
D
n n
n 1
= v (9)
iar 1/ v se numete putere dispersiv:
Dac se exprim dispersia n raport cu liniile Fraunhofer; F
(linia albastr din spectrul H
2
) C (linia roie din spectrul H
2
cu D
(linia galben din spectrul Na) puterea dispersiv calculat astfel se
numete numrul lui Abbe.

Metoda refractometrului Zeiss.

Funcionarea refractometrului se bazeaz pe fenomenul de
reflexie total. Prisma refractometrului este format din dou
jumti ntre care se introduce substana de analizat ntins ntr-un
strat uniform.














Mersul razelor de lumin este prezentat n figurile 3.a i 3.b.
Cele dou jumti de prism sunt legate solidar cu luneta i cu
microscopul ataat compartimentului gradat astfel c acestea se
rotesc mpreun n jurul axei perpendiculare pe axa lunetei. Atunci
cnd raza de lumin sufer o reflexie total pe faa prismei, ea
prsete prisma astfel c partea superioar a prismei prin care
iese lumina rmne luminoas n timp ce partea inferioar a prismei
va fi ntunecat. Pentru evitarea dispersiei se folosete lumina
monocromatic.
Refractometrul Zeiss prezint avantajul c se poate lucra cu
el n lumin alb. Pentru eliminarea dispersiei, refractometrul este
dotat cu o prism Amici care joac rolul de compensor i prin care
razele de lumin ptrund nainte de a intra n lunet. n lumin alb,
limita de separare ntre zona luminoas i zona ntunecat nu este
net, ci colorat. Compensorul elimin coloraia i limita de separare
dintre cele dou zone apare exact n locul n care se afl atunci
cnd se folosete lumina monocromatic a unei lmpi de Na. n felul
acesta pe scara gradat se citete direct indicele de refracie al
lichidului n lumina galben a liniei de Na. Pentru aflarea numrului
lui Abbe, se calculeaz valoarea n
F
n
C
cu relaia:
B A n n
C F
o + = (10)
unde A, B i o sunt valori ce se gsesc n tabele i depind de poziia
compensorului fa de prism i de valoarea n
D
.



S

S
*
*


a) b)
Fig. 3

1. Determinarea puterii de dispersie

Modul de lucru

1. Se repet operaiile 1 8 pentru fiecare substan. Din tabelul
anexat se iau prin interpolare valorile A, B i o n funcie de valorile
n
D
i Z citite.
2. Se calculeaz puterea de dispersie cu ajutorul relaiilor 9 si 10.

Nr.crt. Subst. n
D

D
n Z
Z
A B o v








2. Variaia indicelui de refracie n funcie de concentraie.
Construirea curbei de etalonare.

Scopul lucrrii const n studierea dependenei indicelui de
refracie n funcie de concentraie. Totodat se construiete curba
de etalonare n vederea determinrii unor concentraii necunoscute
ale unor soluii.

Aparate i metode
Refractometrul Zeiss
Soluii de concentraii diferite

Modul de lucru

1. Se deschide blocul prismelor i se cur cu alcool. Se
etaloneaz refractometrul cu ap distilat (concentratie de zahar
zero).
2. Cu pipeta se pune o pictur din lichidul studiat i se nchide
blocul prismelor.
3. Se regleaz oglinda concav pentru iluminarea optim a
cmpului lunetei. Se regleaz poziia prismei laterale pentru
iluminarea optim a scalei.
4. Se rotete blocul prismelor pn cnd limita de separaie
ajunge la intersecia firelor reticulare.
5. Cu ajutorul lamei compensatoare se elimin coloraia de la
limita de separaie prin rotirea butonului corespunztor plasat n
partea dreapt a refractometrului i se noteaz valoarea unghiului Z.
6. Se verific poziia limitei de separaie.
7. Pe scala gradat se citete n dreptul reperului valoarea
indicelui de refracie n
D
cu o precizie de trei zecimale i se trece n
tabel.
8. Se introduc pe rnd toate soluiile studiate ncepnd cu
concentraia cea mai mic, inclusiv soluia de concentraie
necunoscut i se noteaz n tabel valorile n
D
corespunztoare.
7. Se reprezint grafic n
D
= f(c%). Curba de etalonare se
traseaz sub forma unei linii continue, printre puncte.
8. Din curba de etalonare se determin concentraia
necunoscut cunoscnd indicele de refracie.

Nr.crt. Subst. c (%) n
D D n
n
o