PROCESOS DE FERMENTACIN

NDICE:
1.- INTRODUCCIN. 2.- MATERIAS PRIMAS Y MEDIOS DE CULTIVO. 4.- CINTICA DE LAS REACCIONES. 5.- SISTEMAS DE FERMENTACIN.

1.- Introduccin.

1.- INTRODUCCIN.
1.1.- Concepto de fermentacin. 1.2.- Importancia de la fermentacin en la biotecnologa alimentaria. 1.3.- Ejemplos.

1.1.-Concepto de fermentacin

Proceso de fermentacin:
MICROORGANISMO

MICROORGANISMOS Bacterias, levaduras , hongos

MEDIO DE CULTIVO

CO2

CONDICIONES AMBIENTALES

PRODUCTO Intra o extra celular

1.2.- Importancia de la fermentacin en la biotecnologa.

Procesos de fermentacin en alimentos:

Naturales o espontneas (fermentacin del

cacao,ensilado, pozol). Inoculadas ( vino, yogurt, tempeh).

Procesos de fermentacin en medios de cultivo: Produccin de biomasa (protena unicelular, levadura de pan, levadura de cerveza). Obtencin de metabolitos primarios ( alcohol, cidos orgnicos) y secundarios ( enzimas, polisacridos).

1.3.- Ejemplos.(I)

TIPOS DE FERMENTACIN DE VARIOS MICROORGANISMOS:

Fermentacin Productos Organismos Alcohlica Etanol + CO2 Levadura(Sccharomyces) cido lctico c. lctico Bacterias del cido lctico cido mixto c. lctico,actico,etanol, CO2, H2 Bacterias entricas(Escherichia, salmonella) butanediol Butanediol, c. lctico, actico, etanol, CO2, H2 Bacterias entricas(Aerobacter, Serratia) cido buritico c. burtico, actico, CO2, H2 Clostridios(Clostridium butyricum) Acetona- butanol Acetona, butanol, etanol Clostridios(Clostridium acetobutylicum) cido propinico c. propinico Levadura(Sccharomyces)

1.3.- Ejemplos.(II)

Fermentacin etlica:
Se transforman los azcares de las uva en etanol, debido a la

accin de las levaduras.

1.3.- Ejemplos.(III)

Levaduras saccharomyces cerevisiae (principales

responsables de la fermentacin alcohlica)

1.3.- Ejemplos.(IV)

Fermentacin lctica:

2.- Materias primas y medios de cultivo.

2.- MATERIAS PRIMAS y MEDIOS DE CULTIVO.

2.1.- Criterios utilizados en la formulacin del medio. 2.2.- Preparacin del sustrato. 2.3.- Medios de fermentacin microbiana. 2.4.- Medios de cultivo de clulas animales. 2.5.- Medios de cultivo para el crecimiento de clulas vegetales. 2.6.- Mantenimiento y esterilizacin.

2.1.- Criterios utilizados en la formulacin del medio.(I)

CARACTERSTICAS DE LOS MEDIOS DE CULTIVO:

Contener los elementos para la sntesis celular y para la

formacin de producto Medio ambiente favorable para el crecimiento y/o formacin del producto. Econmicamente rentable. Mxima produccin. Adaptacin constante al proceso de fermentacin.

2.1.- Criterios utilizados en la formulacin del medio.(II)

Recuperacin del producto. Eliminacin de la represin catablica. Materiales de fcil disposicin en cantidad suficiente. Bajos costes de transporte. Impedir que las impurezas dificulten la recuperacin de

producto.

2.1.- Criterios utilizados en la formulacin del medio.(III)

INFLUENCIAS DEL MEDIO :

1.- En el crecimiento celular. 2.- En el procesado posterior. 3.- En la fisiologa y morfologa de los microorganismos.

2.1.- Criterios utilizados en la formulacin del medio.(IV)

1.- INFLUENCIA DEL MEDIO EN EL CRECIMIENTO

CELULAR.

Los microorganismos necesitan:

Carbono Nitrgeno Minerales Factores de crecimiento Agua Oxgeno(aerobios)

Microorganismos

Biomasa Biosntesis y mantenimiento celular

Condiciones medioambientales: pH, Temperatura...

2.1.- Criterios utilizados en la formulacin del medio.(IV)

2.1.- Criterios utilizados en la formulacin del medio.(V)

Elementos en el medio:Similar a la composicin elemental de los microorganismos.

C 45 H 7 O 33 N 10 S 2,5 Cu, Mn,Co,Mo,B.... Trazas

La cantidad de carbono necesaria en condiciones aerobias, se

determina por el coef. de rendimiento de biomasa:

c

Biamasa producida( g ) Substrato carbono utilizado( g )

Factores de crecimiento: aminocidos, vitaminas o nucletidos.(Por necesidad p para aumentar la velocidad de crecimiento)

2.1.- Criterios utilizados en la formulacin del medio.(VI)

2.- INFLUENCIA EN EL PROCESADO POSTERIOR:

proceso de recuperacin ms caro y

Subproductos

complejo. (Procesos de purificacin de productos y

tratamiento de desechos).

Necesidad de adicionar antiespumantes Problemas en el procesado de productos asociados con el crecimiento microiano

2.1.- Criterios utilizados en la formulacin del medio.(VII)

3.- INFLUENCIA DEL MEDIO EN LA FISIOLOGA Y MORFOLOGA DE LOS MICROORGANISMOS. Las condiciones relacionadas con el medio que han demostrado tener influencia en la morfologa :
Viscosidad
pH Cationes divalentes

Polmeros aniticos

Morfologa

Agentes quelantes

Presencia de slidos

Agentes tensoactivos

2.1.- Criterios utilizados en la formulacin del medio.(VIII)

PH:Las hifas del P. Chrysogenum se vuelven ms cortas y gruesas a

medida que el pH es ms alcalino, forman grnulos.

2.1.- Criterios utilizados en la formulacin del medio.(IX)

CATIONES DIVALENTES: inducen el crecimiento en forma de grnulos, sus efectos pueden contrarrestarse con AGENTES QUELANTES. La presencia de cationes influye en la floculacin de las levaduras (importante en su sedimentacin y eliminacin en la produccin de bebidas alcohlicas no destiladas). El manganeso afecta a la composicin celular de la pared celular de A. Niger. AGENTES TENSOACTIVOS: Algunos aumentan la velocidad de secreccin de los enzimas microbianos extracelular. NITRGENO: niveles bajos inducen la formacin de esporas. AMINOCIDOS: niveles elevados inhiben la formacin de esporas.

2.1.- Criterios utilizados en la formulacin del medio.(X)

CONTROL DEL PROCESO:VARIABLES. 1.-PH 2.-ESPUMA 3.-OXGENO 4.-TEMPERATURA 5.-REGULACIN DE LA FORMACIN DE PRODUCTO.

2.1.- Criterios utilizados en la formulacin del medio.(XI)

1.-PH:

Control necesario para el desarrollo celular y formacin de producto. Control de forma indirecta o de forma directa:

Directamente (Aadiendo agentes tamponantes):

Fosfato inorgnico pH entre 6.0 y 7.5. cidos orgnicos pH bajos. Carbonato clcico frente a la produccin de cidos. Hidroxisales, amoniaco, cidos sulfrico y clorhdrico.

Indirectamente ( mediante un balance equitativo entre las fuentes de carbohidrato y nitrgeno). Los carbohidratos bajan el pH (formacin de cidos orgnicos). Asimilacin del nitrato alcalinidad. DESVENTAJAS: Efectos represivos sobre la formacin del producto.

2.1.- Criterios utilizados en la formulacin del medio.(XII)

2.- ESPUMA:

ORIGEN: Desnaturalizacin de las protenas en la interfase gas- lquido. PROBLEMAS: Ascender hasta ocupar totalmente la cabeza del fermentador. Evacuar parte del contenido del aparato por la salida del aire. SOLUCIN: Antiespumantes ( agentes tensoactivos que reducen la tensin superficial de las espumas hasta dispersarlas ). Rompedores mecnicos.

2.1.- Criterios utilizados en la formulacin del medio.(XIII)

ANTIESPUMANTES:
Eficacia (Depende de las condiciones de fermentacin): Composicin del medio, cepas microbianas, etapa de crecimiento, configuracin de las vas de aireacin y del fermentador. Seleccin y cantidad del antiespumante: Procedimientos de ensayo y error. Uso de soportes(aceites orgnicos y minerales) Cantidad de antiespumante mnima ( afecta a la velocidad de transferencia de oxgeno hasta u 50%) No deben ser txicos ni peligrosos, esterilizables por el calor y baratos.

2.1.- Criterios utilizados en la formulacin del medio.(XIV)

3.- OXGENO.

Requerimientos en procesos aerobios. Influencia sobre los procesos metablicos. Velocidad de absorcin especfica de oxgeno

concentracin de oxgeno disuelto Antioxidantes como proteccin del producto.

2.1.- Criterios utilizados en la formulacin del medio.(XV)

4.-TEMPERATURA:
Temperatura ptima para la produccin celular

o de metabolitos. Uso de termostatos

2.1.- Criterios utilizados en la formulacin del medio.(XVI)

5.-REGULACIN DE LA FORMACIN DEL PRODUCTO.

PERCUSORES INDUCTORES incorporarse al medio el inductor especfico mediante adiciones continuas o discontinuas INHIBIDORES: minimizar la formacin de otros intermedios metablicos. Prevenir el metabolismo posterior al producto deseado Ejemplos: Fuente de N utilizable rpidamente inhibe la produccin de algunos antibiticos. El cido fenilactico es el ppal percusor en la produccin de bencilpenicilina por fermentacin.

2.- MATERIAS PRIMAS y MEDIOS DE CULTIVO.

2.1.- Criterios utilizados en la formulacin del medio. 2.2.- Preparacin del sustrato. 2.3.- Medios de fermentacin microbiana. 2.4.- Medios de cultivo de clulas animales. 2.5.- Medios de cultivo para el crecimiento de clulas vegetales. 2.6.- Mantenimiento y esterilizacin.

2.2.-Preparacin del sustrato.

OBJETIVOS:
Evitar el desarrollo de patgenos y alterantes para prolongar

la vida del alimento.

Favorecer el desarrollo de los microorganismos deseados.

Hacer accesible el sustrato a los microorganismos que deben

llevar a cabo la transformacin.

Mejorar la textura, el aroma o el sabor del producto final.

EJEMPLOS:
Adicin de protenas durante la fabricacin del yogurt. Prensado de la uva( se favorece el acceso al sustrato).

2.- MATERIAS PRIMAS y MEDIOS DE CULTIVO.

2.1.- Criterios utilizados en la formulacin del medio. 2.2.- Preparacin del sustrato. 2.3.- Medios de fermentacin microbiana. 2.4.- Medios de cultivo de clulas animales. 2.5.- Medios de cultivo para el crecimiento de clulas vegetales. 2.6.- Mantenimiento y esterilizacin.

2.3.-Medios de fermentacin microbiana.( I )

Los compuestos petroqumicos ( hidrocarburos, alcoholes y cidos) Cuando el petrleo era barato no mucha extensin. En la actualidad: materias primas renovables que contienen azcar y almidn y menos grasas y aceites. Futuro: los productos de la hidrlisis de la lignocelulosa las materias primas ms importantes en los procesos de la fermentacin .( La lignocelulora representa el 50% de la produccin anual mundial de biomasa).

2.3.-Medios de fermentacin microbiana.( II )

CARBOHIDRATOS:
ALMIDN: es el ms importante actualmente .

En forma de granos o raices, enteros o molidos, de plantas como el maz, arroz, trigo , patatas y mandioc como almidn purificado, modificado o como dextrinas. CELULOSA: Presente en la madera combinado con la hemicelulosa y la lignina en forma de lignocelulosa La lignina hace a la celulosa resistente al ataque microbiano No son rentables los mtodos qumicos y enzimticos que convierten la lignocelulosa en azcares fermentables. ( Para obtener championes y substrato para producir enzimas celulolticas)

2.3.-Medios de fermentacin microbiana.( III )

SACAROSA:

En forma cristalina o en forma bruta como zumos o melazas ( subproducto de la manufactura de azcares ms barato vara su composicin , causando problemas en la reproductibilidad de la fermentacin). LACTOSA:

En el suero de la leche ( 4% al 5%). La baja concentracin, , caro su transporte.Solo se utiliza en lugares prximos a la factora de quesos proveedora.

GLUCOSA: Se obtiene a partir de la conversin enzimtica directa del almidn. Glucosa refinada, en forma de jarabe o cristalina para productos de mayor valor. ACEITES VEGETALES ( de soja, palma y semillas de algodn como

complemento delos carbohidratos), METANOL, ETANOL......

2.3.-Medios de fermentacin microbiana.( IV )

NITRGENO:
Fuentes: amoniaco, nitratos, urea, y el nitrgeno presente en los

cereales y races y sus subproductos. Los aminocidos purificados como percusores.

SUBSTRATOS COMPLEJOS:
Son una fuente barata de carbono, nitrgeno y otros nutrientes. Presentes en plantas enteras y subproductos vegetales, animales

y microbianos.

2.3.-Medios de fermentacin microbiana.( V )

Substratos complejos utilizados en los medios de fermentacin microbiana.

FUENTE Cereales enteros
INGREDIENTES PROT. CARBOH. GRASA FIBRA CENIZA

Subpr.derv. plantas

Subp. deriv.animales

Subp deriv microorganismos

Cebada Cebada malteada Maiz Avena Arroz Trigo Melazas Pulpa de remolacha Pulpa de agrios (seca) Harina de germen de maiz Salvado de arroz Harina integral de soja Sangre Harina de pescado Harina de hueso Hidrolizado de levaduras

11,5 13,0 9,9 12,0 13,0 8,2 3,0 8,9 6,0 22,6 13,0 42,0 80,0 72,0 50,0 52,5

68,0 70,0 69,2 54,0 65,0 69,0 54,0 59,1 62,7 53,2 45,0 29,9 2,5 0,0

1,8 2,0 4,4 4,5 2,0 1,9 0,4 0,6 3,4 1,9 13,0 4,0 1,0 7,5 8,0 0,0

7,0 3,5 2,3 12,0 10,0 2,6 18,3 13,0 9,5 14,0 6,0 1,0 1,0 3,3 1,5

2,5 2,5 1,3 4,0 4,5 1,8 9,0 3,1 6,9 3,3 16,0 6,5 3,0 31,0 10,0

2.- MATERIAS PRIMAS y MEDIOS DE CULTIVO.

2.1.- Criterios utilizados en la formulacin del medio. 2.2.- Preparacin del sustrato. 2.3.- Medios de fermentacin microbiana. 2.4.- Medios de cultivo de clulas animales. 2.5.- Medios de cultivo para el crecimiento de clulas vegetales. 2.6.- Mantenimiento y esterilizacin.

2.4.-Medios de cultivo de clulas animales.(I)

SUEROS UTILIZADOS
mamfero .

Suero fetal de ternera como medio de cultivo de clulas de

INCONVENIENTES: Existencias limitadas y alto precio.

Sueros de ternera, ternera recin nacida y caballo.

FORMAS DE UTILIZAR LOS SUEROS:

Suero entre un 5-10% del volumen del medio de cultivo, puede

reducirse al 1-2%.

2.4.-Medios de cultivo de clulas animales.(II)

FUNCIONES DEL SUERO EN LOS MEDIOS DE CULTIVO.

la funcin celular. Suministra los factores necesarios para la unin al soporte. Acta como agente tamponante. Se une e inactiva o secuestra compuestos txicos. Contienen protenas ligadoras que estabilizan y/o transportan nutrientes y hormonas a la clula. Suministra nutrientes para el metabolismo de la clula. Contiene inhibidores de proteasas. Contiene elementos traza ( Selenio..)

Proporciona hormonas y factores de crecimiento necesarios para

2.4.-Medios de cultivo de clulas animales.(III)

TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO:

BASALES Y BME :(medio basal de Eagle), muy usado en el cultivo
de clulas de mamfero( especie humana, bovina, equina...)

Tiene concentraciones elevadas de los nutrientes ms comunes. Ideales para estimular la proliferacin.

SUPLEMENTADOS CON NUTRIENTES

INTERMEDIOS:

Para el crecimiento de clulas de mamferos secundarios y de lneas celulares inmortales. Para que los cientficos investiguen los procesos en cultivos celulares con el mnimo de influencias extraas. Fcil aislamiento y purificacin de productos .

QUIMICAMENTE DEFINIDOS (medios sin suero):

2.- MATERIAS PRIMAS y MEDIOS DE CULTIVO.

2.1.- Criterios utilizados en la formulacin del medio. 2.2.- Preparacin del sustrato. 2.3.- Medios de fermentacin microbiana. 2.4.- Medios de cultivo de clulas animales. 2.5.- Medios de cultivo para el crecimiento de clulas vegetales. 2.6.- Mantenimiento y esterilizacin.

2.5.-Medios de cultivo de clulas vegetales.(I)

COMPOSICIN QUMICA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO DE CLULAS VEGETALES:

Fuente de carbono orgnico.

El ms comn la sacarosa, tambin mono y disacridos como glucosa, fructosa, maltosa y lactosa. Nitratos, a veces tambin sales amnicas. Algunas clulas necesitan nitrgeno orgnico en aminocidos ( positivo en las primeras etapas del crecimiento microbiano).

Fuente de nitrgeno.

Sales orgnicas. Reguladores del crecimiento.

Hormonas vegetales (auxinas, que inducen la divisin celular). Citoquininas ( Regulacin del crecimiento en plantas).

2.- MATERIAS PRIMAS y MEDIOS DE CULTIVO.

2.1.- Criterios utilizados en la formulacin del medio. 2.2.- Preparacin del sustrato. 2.3.- Medios de fermentacin microbiana. 2.4.- Medios de cultivo de clulas animales. 2.5.- Medios de cultivo para el crecimiento de clulas vegetales. 2.6.- Mantenimiento y esterilizacin.

2.6.-Mantenimiento y esterilizacin.(I)
1.- MANTENIMIENTO DE LOS MEDIOS .

El medio de almacenamiento y subcultivo de cepas industriales clave debe ser diseado para: Conserve las caractersticas necesarias que permitan la capacidad de produccin particular.

Minimicen la variacin gentica.

POR QU UTILIZAR MEDIOS DE MANTENIMIENTO?

CEPAS

METABOLITOS TXICOS

EFECTOS DESESTABILIZANTES

2.6.-Mantenimiento y esterilizacin.(II)
2.- ESTERILIZACIN DE CULTIVOS.

OBJETIVOS:
Evitar el desarrollo de microorganismos patgenos. Evitar el desarrollo de microorganismos alterantes. Incrementar la reproducibilidad del proceso (rendimiento, pureza y

tiempo de produccin).

MTODOS DE ESTERILIZACIN:
Calor hmedo (autoclave o chorro de vapor). Calor seco Radiacin ( Rayos X ,UV) Esterilizacin qumica con lquidos o gases. Filtracin (filtros de superficie o de profundidad). Nuevos mtodos ( altas presiones, campos elctricos)

2.6.-Mantenimiento y esterilizacin.(III)

DONDE SE CONTROLA LA ESTERILIDAD?

Mantener la pureza del inculo. Esterilizar el medio de cultivo y los aditivos. Esterilizar el material en contacto con el medio ( recipiente,

fermentador, vlvulas y conductos)

Esterilizar los gases entrantes y salientes. Manterner las condiciones aspticas durante la

manipulacin.
Contruccin apropiada del biorreactor para su

esterilizacin y para la prevencin durante la fermentacin.

2.6.-Mantenimiento y esterilizacin.(IV)

2.6.-Mantenimiento y esterilizacin.(IV)
TIPOS DE ESTERILIZACIN.
ESTERILIZACIN DISCONTINUA T 121C Tiempos de esterilizacin mayores(2-3h) Calentamiento por inyeccin de vapor o intercambiadores de calor Alto consumo de energa. Alteracin y destruccin de nutrientes. ESTERILIZACIN CONTINUA 20-30 segundos a 90-120 C 30-120 segundos a 140C 20-30 segundos refrigeracin Calentamiento por inyeccin de vapor o intercambiadores de calor Formacin de sales insolubles Tamao de la partcula restringida a 1-2 mm

Cintica del crecimiento

3.1-Qu entendemos por crecimiento? 3.2-Conceptos bsicos 3.3-Formas de medicin del crecimiento 3.4-Crecimiento en cultivo intermitente Fases del crecimiento 3.5-Factores que afectan al crecimiento

3.1-Crecimiento
El crecimiento se puede considerar como el aumento ordenado de todos los constituyentes qumicos de un organismo. En organismos unicelulares el crecimiento conduce a un aumento en el nmero de clulas ms que un aumento en el tamao celular

3.- CINETICA DEL CRECIMIENTO DE LOS MICROORGANISMOS

3.2-Conceptos bsicos
Generacin (n)
Es el nmero de divisiones celulares que ocurren en un determinado tiempo en un cultivo microbiano

Velocidad de crecimiento: vc =

Es el cambio en el nmero de generaciones por unidad de tiempo

Tiempo de generacin
Es el tiempo requerido para que a partir de una clula se formen dos, o sea el tiempo requerido para duplicar el nmero de clulas de una poblacin

El crecimiento puede ser : -A nivel de individuos dentro de poblacin CICLO CELULAR -Crecimiento de poblaciones celulares CICLO DE CRECIMIENTO

S Cerrados

S abiertos viable

Clula microbiana

no viable

Ciclo celular: fisin binaria

Gemacin, ej. levaduras

Crecimiento de poblaciones
Crecimiento exponencial: es el tipo de crecimiento de una poblacin donde el nmero de clulas se duplica cada cierto tiempo

3.3- Formas de medicin del crecimiento microbiano

3.3.1- Peso seco celular 3.3.2- Absorcin 3.3.3- Peso hmedo 3.3.4- Volumen 3.3.5- Nmero de clulas 3.3.6- Mediciones fsicas

3.3.1- Peso seco celular

Consiste en dejar secar volmenes conocidos de cultivo celular lentamente hasta que alcancen peso cte. Se mide en g/l En ocasiones para concentrar las clulas se usa el centrifugado o filtrado segn la dificultad. Es el mas usado Desventaja: pueden dar grandes errores en caso de absorcin de humedad por las clulas secas.

3.3.2- Absorcin
Consiste en el uso de celdas espectrofotomtricas pues las clulas desvan la luz q llega al detector y esa desviacin est relacionada con el n de clulas presentes (o tambin puede relacionarse con la densidad ) en la muestra segn la Ley de Beer

3.3.3- Peso hmedo

Consiste en una centrifugacin o filtracin seguida del pesado. Este proceso es extrarrpido, hay necesidad de estandarizar el proceso ya que se mide tanto el agua intracelular como el extracelular ocasionando errores considerables.

Recuento de viables Filtracin por membrana

3.3.4- Volumen
Consiste en la centrifugacin en tubos graduados de tal forma q me permitan determinar el volumen de clulas empacadas. Es un mtodo bastante inexacto especialmente para pequeos cambios de la poblacin celular

3.3.5- Recuento de clulas por cmara de Petroff-Hausser

Muestra de cultivo diludo en cmara de volumen pequeo y conocido (2,5x10-7 ml), recuento de clulas en numerosos cuadrados de la cmara. Promedio de clulas contenidas en dicho volumen se expresa por ml de muestra (alto error experimental). Desventaja: no se pueden distinguir clulas viable y no viables

3.3.6- Mediciones fsicas

El crecimiento de clulas origina la generacin de calor la cual est relacionada con la concentracin de biomasa. Es un proceso rpido y no necesita de muestreo. Se usa para el caso de biorreactores , pues sino las variaciones de calor generado son pequeas para poder ser mediadas adecuadamente.

3.4- Crecimiento en cultivo intermitente

El cultivo intermitente representa el crecimiento en un sistema cerrado. Cuando un medio se inocula con clulas, tiene lugar una secuencia de eventos llamado ciclo de crecimiento. Representaremos el peso seco celular (X) en g/l contra el perodo de incubacin en horas (h):

Crecimiento de un microorganismo en medio de cultivo lquido

1- Fase de latencia 2- Fase exponencial 3- Fase estacionaria 4- Fase de muerte

Fases de crecimiento
Fase lag - las clulas se adaptan al nuevo ambiente, aun no
se dividen

Fase exponencial (log) velocidad mxima de crecimiento

bajo condiciones particulares, tiempo de generacin mnimo

Fase estacionaria sta se caracteriza por ningn

crecimiento neto. De echo el crecimiento puede estar ocurriendo, pero esta equilibrado por la rapidez de muerte o lisis celular.

Fase de muerte - velocidad de muerte celular > velocidad

de divisin celular

Cintica de crecimiento en cultivo intermitente

El crecimiento microbiano unicelular es autocataltico, es decir la vc es proporcional a X ya presente. De modo q durante el crecim exponencial, X aumenta como sigue: Xo 2Xo 4Xo 8Xo nXo El intervalo de tiempo se llama tiempo de duplicacin (td), de manera que n despus del tiempo t vale t/td y X vale Xo* 2 t/td

Representacin aritmtica y exponencial del crecimiento

3.5- Factores que afectan a la rapidez de crecimiento

Los factores que intervienen son: - concentracin de substrato - temperatura - pH - actividad de agua - potencial redox,concentrac de oxigeno - radiacin - presin hidrosttica

Efecto de la temperatura
Cada microorganismo tiene una temperatura de crecimiento adecuada Si consideramos la variacin de la velocidad de crecimiento (m) en funcin de la temperatura de cultivo, podemos observar una temperatura mnima por debajo de la cual no hay crecimiento (dX/dt = 0); a temperaturas mayores se produce un incremento lineal de la velocidad de crecimiento con la temperatura de cultivo hasta que se alcanza la temperatura ptima a la que m es mxima. Por encima de esta temperatura ptima, la velocidad de crecimiento decae bruscamente ( 0) y se produce la muerte celular.

Tipos de microorganismos segn la temperatura

Tipode microorg T mnima T ptima T mxima

Psicrfilo -5 +5 12 15 Psicrtrofo -5 +5 25 30 Mesfilo 5 15 30 45 Termfilo 40 45 55 75

15 - 20 30 - 35 35 - 47 60 - 90

Veloc de crecimiento

Grfica

Psicrfilos
Mesfilos

Termfilos

20

40

60

80

Temperatura (C)

Efecto del pH
Es un parmetro crtico en el cultivo de microorganismos ya que estos slo pueden crecer en un rango estrecho de pH fuera del cual mueren rpidamente. El pH intracelular es ligeramente superior al del medio que rodea las clulas ya que, en muchos casos, la obtencin de energa metablica depende de la existencia de una diferencia en la concentracin de protones a ambos lados de la membrana citoplsmica.

Aspectos sobre el pH
Cada tipo de microorganismo tiene un rango de pH en el que puede vivir adecuadamente, fuera de este rango muere. Los rangos de pH tolerables por diferentes tipos de microorganismos son, tambin, distintos. El pH interno en la mayoria de los microorganismos est en el rango de 6.0 a 7.0.

Actividad del agua

Se denomina actividad de agua a la relacin entre la presin de vapor de agua del substrato de cultivo (P) y la presin de vapor de agua del agua pura (P0): P
aw= P0

Efecto de la radiacin
Las radiaciones ultravioleta (uv), Rayos X y radiacin producen efectos esterilizantes (destruccin de microorganismos) al alterar las protenas, membranas, cidos nucleicos y al generar radicales libres del tipo OH y H. El procedimiento es similar al descrito para el uso de altas temperaturas. Hay que considerar, sin embargo, los poderes de penetracin de los diferentes tipos de radiacin. As, por ejemplo, la radiacin uv tiene un poder de penetracin muy bajo y, por consiguiente, se utiliza para esterilizar superficies, mientras que la radiacin X o la tiene poderes de penetracin mucho mayores.

Presin hidrosttica
Las altas presiones inhiben el crecimiento de los microorganismos La razn por la que las altas presiones inhiben el crecimiento no est clara, aunque se ha visto que se detiene la sntesis de protenas y los procesos catablicos. El efecto de la presin sobre el crecimiento de los microorganismos tiene importancia en el desarrollo de sistemas de eliminacin de microorganismos en alimentos y en la consideracin de los microorganismos que participan en procesos en los que aumenta la presin.

Potencial redox: Concentracin de oxgeno

Este es otro factor determinante del crecimiento y del metabolismo del cultivo. El potencial redox del medio de cultivo nos indica su capacidad para aceptar o donar electrones, esto es: sus caractersticas oxidantes o reductoras. Uno de los factores que intervienen en el potencial redox, aunque no el nico, es la concentracin de oxgeno [O2]. Hay microorganismos que requieren ambientes oxidantes para crecer, mientras que otros necesitan ambientes reductores.

Continuacin

En general, cuando un microorganismo requiere un ambiente oxidante se dice que desarrolla un metabolismo oxidativo (o respirativo) mientras que los microorganismos que requieren ambientes reductores (o menos oxidantes) realizan un metabolismo fermentativo. Un microorganismo es aerobio cuando necesita oxgeno para vivir y es anaerobio cuando o bien no lo necesita o bien cuando muere en presencia de oxgeno (anaerobios estrictos como los clostridios). Por otra parte, hay microorganismos que pueden desarrollar ambos tipos de metabolismo

4. Sistemas de Fermentacin

Sistemas de Fermentacin

Son formas diferentes de cultivo de microorganismos con el fin de obtener un rendimiento deseado La velocidad o la calidad del producto son los objetivos del estudio de la cintica del crecimiento

Factores que Influyen en el Crecimiento

Son comunes para todos los sistemas:

Concentracin de substrato Temperatura pH Concentracin alta de substrato o de producto

Consumo de Nutrientes y Formacin de Producto

Relacionamos el consumo de substrato y la formacin de producto con el crecimiento de material para cada uno Las concentraciones iniciales de substrato o producto, pueden condicionan la rapidez del crecimiento

Consumo de Nutrientes y Formacin de Producto

Para el Crecimiento
Acumulacin total = crecimiento desaparicin

Para el consumo de Substrato

Acumulacin de substrato = alimentacin de substrato

crecimiento formacin de producto requerimientos para el mantenimiento

Para la formacin de producto

Acumulacin de producto = formacin - destruccin

Rendimientos de Biomasa y Producto

Muestran en cada caso la cantidad de biomasa o producto producido dependiendo de la cantidad de substrato
Se definen como la cantidad de biomasa o producto formado por unidad de substrato

Sistemas Discontinuos

Se considera un sistema cerrado, para todo menos para la aireacin Tiene una cantidad limitada de medio
Se aade todo el substrato al principio de la fermentacin

Cintica de un Sistema Discontinuo

La concentracin de biomasa por unidad de tiempo es: x XR = (SR s)

x = concentracin celular en un tiempo t XR = inculo o concentracin celular inicial = rendimiento para el substrato limitante (g de biomasa por g de substrato consumido) s = concentracin de substrato en el tiempo t SR = concentracin inicial de medio

Sistema Discontinuo

Ciclo de Fermentacin discontinuo

Sistemas Discontinuos Alimentados a Intervalos

El substrato se va aadiendo a intervalos durante el proceso Es una variacin del sistema discontinuo Tiene ventajas con respecto al sistema discontinuo convencional. Evita procesos de represin y reduce la viscosidad del medio Inconvenientes: el crecimiento eficiente tiene lugar durante una pequea fase del proceso

Sistemas Continuos

Sistemas abiertos, en los que el medio se va aadiendo de un modo continuo a reactor Se va eliminando medio fermentado del centro de la fermentacin Podemos distinguir dos modalidades:
Quimiostato Turbidostato

Sistemas Continuos

Es bsico controlar que el volumen de biorreactor sea constante Existen diferentes formas de conseguir esto, puede ser mediante un tubo de sobreflujo, o mediante el mantenimiento de la velocidad de bombeo igual a la rapidez de flujo de entrada de medio

Sistemas Continuos

La concentracin de biomasa viene dada por: KsD x = SR max - D

X = concentracin de biomasa en un estado estacionario = rendimiento para el substrato limitante (g de biomasa por g de substrato consumido) Ks = constante inicial SR = concentracin inicial de medio D = velocidad especfica de crecimiento max = velocidad mxima de crecimiento

Quimiostato

Suministramos nutriente esencial limitante a medida que va siendo necesario. Se va eliminando biomasa para formarse biomasa nueva. La densidad y rapidez de crecimiento se mantiene constante, debido a que la cantidad de substrato y de producto tambin se mantienen constantes.

Quimiostato

Esquema del fermentador

Quimiostato

La rapidez de crecimiento depende del tipo de nutriente limitante

Carbono

Nitrgeno
Fsforo Vitamina

Los dems nutrientes esenciales estn presentes en exceso.

Turbidostato

El producto no se saca del reactor Tenemos un circuito de reflujo, que acoge el producto cuando hay exceso, de ese modo se mantiene constante la velocidad La cantidad de producto que hay en el reflujo, determina la cantidad de medio que se aade al biorreactor

Turbidostato

Esquema del turbidostato

Sntesis de Metabolitos Secundarios

Existen productos cuya sntesis no est relacionada con el crecimiento, estos se denominan METABOLITOS SECUNDARIOS No se puede relacionar su formacin con el crecimiento porque no existe relacin. Los mas famosos son los Antibioticos