REVISIN EN NEUROCIENCIA

De la energtica a la neurotransmisin: el adenosn trifosfato y sus receptores

F. Galindo, A. Flores
FROM ENERGETICS TO NEUROTRANSMISSION: ADENOSINE TRIPHOSPHATE AND ITS RECEPTORS Summary. Introduction and aims. Adenosine triphosphate (ATP) is a substance that has stood out for being an energy donor, but today we know that it also has other functions. By activating a large variety of receptors that are widely distributed throughout the nervous system, ATP plays a role in neurotransmission, neuromodulation, apoptosis, cell proliferation and differentiation, pain, and so forth. Aims. The aim of this study is to carry out a review of ATP receptors, their contribution to the correct functioning of neuronal circuits, and their involvement in the development of certain diseases. Development. The issue is approached from different perspectives, such as the structure of ATP, its metabolism through ecto-ATPases and their main metabolite, adenosine, in addition to a detailed description of each of the purinergic receptors whose existence has been internationally accepted. We also examine how ATP and its receptors are involved in the structures of the nervous system, and more especially those that correspond to the sensory systems. Conclusions. The fact that purinoceptors are so widely distributed makes them worthy of a detailed examination. This new family of receptors promises to be a new diagnostic and therapeutic tool that enables us to approach certain aspects of the neurosciences from a new angle, by taking into account a new protagonist, ATP, in the generation of events that upset health. [REV NEUROL 2006; 43: 667-77] Key words. Adenosine. ATP. Ecto-ATPases. Neurodevelopment. Neuromodulation. Pain. Purinergic receptors. Sensory systems.

ESTRUCTURA Y FUNCIN DEL ADENOSN TRIFOSFATO Los seres vivos requieren de la continua utilizacin de energa para tres principales propsitos: la realizacin de trabajo mecnico en la contraccin muscular u otros movimientos celulares, el transporte activo de iones y molculas, y la sntesis de macromolculas y otras biomolculas a partir de precursores ms simples. El principal donador de energa en la mayora de los procesos que la requieren es el adenosn trifosfato (ATP) [1]. El ATP es un nucletido constituido por una adenina, una ribosa y una unidad trifosfato (Fig. 1). Constituye una molcula rica en energa debido a que su unidad trifosfato contiene dos enlaces fosfoanhdrido. Una gran cantidad de energa se libera cuando el ATP se hidroliza a adenosn difosfato (ADP) y ortofosfato (Pi) o cuando se hidroliza a adenosn monofosfato (AMP) y pirofosfato (PPi). El ATP es el principal donador inmediato de energa en los sistemas biolgicos. En una clula tpica, la molcula de ATP se consume dentro del primer minuto que sigue a su formacin, por lo que el movimiento, el transporte activo, la amplificacin de seales y los procesos de biosntesis pueden ocurrir slo si el ATP se regenera continuamente [1]. Junto al papel clsico que el ATP desempea en el metabolismo celular donde acta como un cofactor enzimtico y como una fuente de energa a travs de su enlace fosfato [1], tambin funciona como un mensajero extracelular mediante la activacin de una familia de receptores de superficie celular conocidos como P2 [2].
Aceptado tras revisin externa: 21.06.06. Laboratorio de Neurobiologa. Instituto de Fisiologa. Universidad Autnoma de Puebla. Puebla, Mxico. Correspondencia: Dra. Amira Flores Urbina. Laboratorio de Neurobiologa. Instituto de Fisiologa. Universidad Autnoma de Puebla. Avda. 14 sur, 6301 Col. San Manuel. Apdo. Postal 406. 72001 Puebla, Mxico. Fax: (52222) 2 29 55 00 (ext. 7323). E-mail: aflores@siu.buap.mx 2006, REVISTA DE NEUROLOGA

El uridn trifosfato (UTP), un nucletido pirimdico, al igual que los nucletidos ADP y uridn difosfato (UDP), puede modular la funcin celular mediante la activacin de los receptores P2. Por ello, el ATP y otros compuestos pricos y pirimdicos desempean un importante rol en diversas funciones celulares, como la neurotransmisin excitatoria, la funcin pulmonar, la nocicepcin, la audicin, la apoptosis y la agregacin plaquetaria [3-6]. Metabolismo Existen diferentes tipos de enzimas localizados en la superficie celular con la capacidad de hidrolizar los nucletidos extracelulares (Fig. 2). Estas enzimas incluyen las ectoalcalino fosfatasas, capaces de liberar fosfatos inorgnicos de una variedad de componentes orgnicos (degradacin de nucletidos 5-tri, di y monofosfato y ecto-5-nucleotidasa, que cataliza la hidrlisis de nucletidos 5-monofosfatos a un nuclesido). La actividad ATPasa tambin se ha hallado en asociacin con molculas de adhesin celular. En general, estas enzimas pueden agruparse en dos familias: E-NTPasa y PDNP [8]. La primera familia tambin se conoce como ectoapirasa, NTPasa o E-ATPasa (Tabla I), y la segunda, como ectofosfodiesterasa/pirofosfatasa, PC-1 o fosfodiesterasa/nucletido pirofosfatasa (PDNP). Sin embargo, no todos los miembros de la familia E-NTPasa son ectoenzimas. Existen formas solubles que pueden ser liberadas por las clulas [9] y se conocen como exoenzimas [8]. Las fosfodiesterasas pertenecientes a la familia PDNP son diferentes de las fosfodiesterasas intracelulares y tienen la capacidad de hidrolizar enlaces fosfodister y enlaces pirofosfato de nucletidos y cidos nucleicos. Se ha sugerido, incluso, que estas enzimas tienen la capacidad de hidrolizar diadenosn polifosfatos [8]. Estudios bioqumicos indican que las enzimas encargadas de hidrolizar el ATP extracelular a adenosina se encuentran muy cercanas unas de otras, lo que permite una rpida ruptura del ATP extracelular. Sus principales caractersticas son la activacin por Ca2+ y Mg2+, la hidrlisis no especfica de diferentes

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nucletidos tri o difosfatos, y su nula sensibilidad a los inhibidores de ATPasas intracelulares. La ecto-ATPasa, como la que se aprecia en la figura 3, es una glicoprotena con dos dominios transmembrana y un gran dominio extracelular, el cual incluye todos los carbohidratos y el sitio o sitios activos; posee tambin un pequeo dominio intracelular que corresponde al carboxilo terminal de aproximadamente 10 aminocidos de tamao [9]. Las ectonucleotidasas desempean dos papeles principales en la transmisin sinptica: Inactivan a los nucletidos liberados y, as, limitan su actividad de manera temporal y espacial. Tienen la capacidad de producir nuclesidos, como es el caso de la adenosina [10]. Adenosina En condiciones fisiolgicas, la adenosina se forma intra y extracelularmente de manera constante. La adenosina generada intracelularmente es transportada al espacio extracelular por difusin facilitada. En algunos tejidos se encuentran protenas transportadoras que son capaces de mantener altas concentraciones de adenosina en contra de un gradiente de concentracin. Estas protenas de transporte se han clonado y se conocen como ENT1, ENT2, CNT1 y CNT2 [11]. La desfosforilacin de AMP extracelular a adenosina, mediada por ecto-5-nucleotidasas (Fig. 2), es el ltimo paso en la cadena enzimtica que cataliza la rotura de nucletidos como el ATP a adenosina. Estas enzimas son esenciales para la produccin de adenosina a partir del ATP liberado en condiciones fisiolgicas [12]. La va cataltica completa se lleva a cabo en unos cientos de milisegundos y el paso limitador de esta va parece ser la desfosforilacin de AMP a adenosina por la ecto-5-nucleotidasa [13]. En los ltimos aos se ha observado la presencia de una 5nucleotidasa soluble de estructura desconocida que se libera junto con el ATP por la estimulacin de terminales nerviosas simpticas, y que participa en la hidrlisis extracelular del ATP a adenosina [8]. Cuando los niveles de adenosina en el espacio extracelular son altos, es transportada dentro de clulas por medio de transportadores (Fig. 3) y es fosforilada a AMP por la adenosincinasa o degradada a inosina por la adenosindesaminasa [14]. ATP En 1972, Burnstock propuso que el ATP era una sustancia liberada de nervios no adrenrgicos y no colinrgicos, ya que la respuesta a la administracin de ATP en el msculo liso mimetiza la respuesta de la estimulacin ner-

Adenina

Fosfatos

Ribosa

Figura 1. La molcula de ATP se encuentra conformada por una base prica (adenina), un azcar (ribosa) y tres grupos fosfatos en cuyos enlaces se almacena una gran cantidad de energa, la cual se libera al romperse los enlaces y es empleada por la clula en diferentes procesos.

Figura 2. Diferentes vas que el ATP extracelular puede seguir y mecanismo enzimtico que participa en su metabolismo. El ATP activa a los receptores P2X y P2Y localizados en la membrana celular y es hidrolizado a adenosina (Aden) por diferentes ectoenzimas. La adenosina acta sobre receptores P1 o bien es llevada intracelularmente a travs de un transportador de nuclesidos (NT); ya en el interior de la clula, la adenosina puede ser fosforilada por una adenosincinasa (AK) y formar ATP , o bien degradada a hipoxantina (HX) a travs de la adenosindesaminasa (ADA).

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cin al proponer que exista una familia de receptores capaz de responder a estos compuestos; en general, un receptor se nombra con base en su ligando natural, por lo que los receptores para los nucletidos purnicos y nuclesidos se conocen como purinoceptores [11]. Sin embargo, debido a que tambin pueden responder a pirimidas, se considera ms correcto llamarlos receptores P1 y P2 [21]. Receptores P1 Este receptor tiene la capacidad de responder principalmente a la adenosina. Los subtipos de este receptor se designan como A1, A2 y A3, y stos pueden a su vez se subdividen, como en el caso del receptor A2 en A2A y A2B. Estos datos concuerdan con lo recomendado por el comit para la nomenclatura de receptores y clasificacin de frmacos de la Unin Internacional de Farmacologa (IUPHAR), pero conforme avancen las investigaciones, nuevos subtipos de receptores podrn agregarse a esta clasificacin. Figura 3. Modelo de ecto-ATPasa muscular de pollo. El nmero y posicin de los puentes Todos los receptores a adenosina presentan disulfuro se desconoce, pero se sabe de su presencia debido a la estabilidad y resistencia de una estructura general que los podra colocar este enzima a la protelisis. El sitio activo de la ATPasa se cree que se encuentra en la mitad que corresponde al N-terminal por su homologa a otros enzimas que hidrolizan ATP . dentro de la familia de los receptores a la rodopsina, que a su vez pertenece a la superfaTabla I. Diferentes enzimas que participan en el metabolismo del ATP exmilia de los receptores acoplados a protenas G. El receptor A2 tracelular y sustancias a las que dan origen. se ha definido en funcin de su capacidad de interactuar con la protena G estimuladora (Gs). El receptor A1 se ha demostrado Ecto-ATPasa ATP ADP + Pi que se acopla con protenas G inhibitorias, como Gi-1, Gi-2, y Ecto-ADPasa ADP AMP + Pi G0 [22]. El receptor A3 tambin se encuentra acoplado a una protena Ecto-ATPasa-difosfohidrolasa (apirasa) ATP AMP + 2Pi Gi [23]. Hasta hace algunos aos se consideraba el efecto antaEctoadenilatocinasa (miocinasa) ATP + AMP 2ADP gnico de las metilxantinas sobre estos receptores, pero ahora este criterio no puede tomarse como una seal universal de que Ecto-5'-nucleotidasa AMP Adenosina + Pi participa el receptor a adenosina. Actualmente, el bloqueo por Ectoalcalinofosfatasa ATP ADP AMP metilxantinas de una respuesta determinada es altamente sugeAdenosina + 3Pi rente de la participacin de los receptores para adenosina, aunque la falta de inhibicin no puede tomarse como concluyente de que estos receptores no se encuentren participando [24]. viosa [15]. El primer sitio en donde se localizaron los cuerpos celulares de las neuronas purinrgicas fue en la pared intestinal, Receptores P2 en particular en el plexo de Auerbach [15]. Se demostr la libe- Las primeras observaciones de los efectos fisiolgicos del ATP racin conjunta de ATP y de catecolaminas en glndulas supra- y de sus anlogos las proporcionaron Burnstock et al en 1985 rrenales [16] y, aos ms tarde, en nervios simpticos [17]. [25]. Tras analizar varios sistemas, lograron discriminar dos claSilinsky et al concluyeron que el ATP se liberaba junto con la ses principales de receptores P2, los receptores P2X y P2Y. acetilcolina (ACh) de los nervios frnicos de la rata [18]. En 1974, Existe evidencia de que los receptores P2X representan una Dowdall et al comunicaron la presencia de vesculas que coal- familia de canales inicos activados por ligando, con permeabimacenaban ATP y ACh en una terminal de tipo colinrgico [19]. lidad a Na+, K+ y Ca2+ [26]. Los P2Y son receptores acoplados Existe cierto desconocimiento en cuanto a la cantidad exac- a protenas G, a menudo relacionados con la activacin de fosta de neurotransmisor dentro de una vescula o en un quantum folipasa C y, por ende, a la formacin de inositol 1,4,5-trifosfaliberado; lo que s est claro es que los nucletidos se almace- to (IP3) [27], aunque se han propuesto otros mecanismos adicionales como la generacin de AMP cclico y la movilizacin de nan en un rango milimolar [20]. cido araquidnico [2]. RECEPTORES PURINRGICOS La clasificacin de los receptores debe realizarse basndose en informacin farmacolgica y estructural, pero no siempre se encuentran disponibles ambas partes y estos receptores no son la excepcin. En 1978, Burnstock hizo una importante contribuReceptores P2X Los receptores P2X pertenecen a una familia de al menos siete protenas (P2X1-P2X7), se localizan a lo largo de todo el organismo y se expresan de manera abundante en el sistema nervioso [28-30].

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El rango de identidad entre las subunidades (P2X1-P2X7) se encuentra entre el 26 y el 47%, con una longitud que oscila entre los 379 y los 595 aminocidos, siendo el P2X6 el ms pequeo, y el P2X7 el de mayor tamao. Estas subunidades presentan dos dominios transmembrana de suficiente longitud como para cruzar la membrana celular, colocando la mayor parte de la protena del lado extracelular [28,31], la cual forma un asa de aproximadamente 270 residuos, con el grupo amino y carboxiloterminal en el lado citoplasmtico (Fig. 4). La presencia de varios residuos de cistena en esta asa forma puentes disulfuro, los cuales pueden ser importantes al estabilizar el sitio de unin a los ligandos, una situacin parecida a lo que sucede con los receptores nicotnicos en la denominada asa CysCys [30-32]. Como otros canales inicos, los receptores P2X son protenas oligomricas compuestas de ms de una subunidad por receptor, pero el nmero de subunidades por receptor an no est del todo claro. Las evidencias a favor de un trmero como unidad mnima para los Figura 4. Modelo propuesto para una subunidad del receptor P2X. Los dos dominios transreceptores P2X se apoya en estudios electro- membrana (M1 y M2) se encuentran unidos por una asa extracelular muy larga y los grupos fisiolgicos [33], aunque existe la posibilidad amino y carboxilo terminal se localizan en la parte intracelular. de que algunos receptores puedan estar intebilidad al calcio es mucho menor a la que presenta el recepgrados por ms subunidades, en particular el receptor P2X2 [34]. Todos los receptores P2X presentan un canal con casi igual tor P2X1 [40]. permeabilidad a Na+ y K+, pero mayor para el Ca2+ [35]. La per P2X2/6. Se encontr que los receptores P2X2 y P2X6 comeabilidad de Ca2+ a travs de estos receptores es, probableinmunoprecipitaron despus de su expresin en clulas mente, un importante componente de la respuesta fisiolgica, y HEK293 [41]. Las caractersticas de este receptor se han por esta razn, la entrada de elevadas cantidades de este in a estudiado en oocitos y la principal diferencia que presentan travs de ellos puede contribuir a la patologa asociada con esestos receptores con el receptor P2X2 reside en el hecho de que la suramina origina una inhibicin de la corriente de tos receptores (Tabla II). manera bifsica: un componente muestra una alta sensiReceptores P2X heteromricos bilidad similar a la del receptor P2X2, en el rango nanomolar, mientras que el otro componente resulta menos sensible P2X2/3. En ciertas neuronas sensoriales, clulas de ganglio simptico y neuronas cerebrales, las acciones del ATP son (~ 2 mol) [42]. mimetizadas por el ,-meATP, lo que indicara la partici P2X4/6. La principal evidencia funcional que indica la coexpresin de estos receptores es que la corriente provocada pacin del receptor P2X3; sin embargo, no presenta la desensibilizacin rpida que lo caracteriza [37]. El receptor por ATP es menor en oocitos a los cuales se les inyect solaP2X2/3 responde al ,-meATP con corrientes sostenidas mente el ARNm de P2X4, que la provocada por aquellos a tras la aplicacin repetida de dicho frmaco en intervalos los cuales se les inyect el ARNm de P2X4 y de P2X6 [43]. Este receptor presenta pocas diferencias fenotpicas compamenores de 5 minutos entre una aplicacin y otra. Presenta rado con el receptor P2X4, lo que dificulta el estudio de las una alta sensibilidad al bloqueo por 2,3-O-(2,4,6-trinitropropiedades del receptor P2X4/6 cuando dentro del mismo fenil)-ATP (TNP-ATP) y PPADS [38]. sistema se encuentran las formas homomricas de los recep P2X1/5. Las subunidades P2X1 y P2X5 pueden estar coinmunoprecipitadas [39] y se han comunicado las propiedades de tores P2X4 y P2X6. este receptor heteromrico en oocitos y en clulas HEK [39,40]. Se ha observado que este receptor presenta una co- Subtipos del receptor P2Y rriente sostenida cuando es activado por ,-meATP, carac- Estos receptores son metabotrpicos y miembros de la superfaterstica que no presenta ninguno de los receptores que lo milia de receptores acoplados a protenas G. Presentan siete forman cuando se encuentran en su forma homomrica. La dominios transmembrana con el aminoterminal localizado en el corriente originada por este receptor es inhibida tanto por el lado extracelular, y el grupo carboxilo, en la porcin intraceluincremento como por la disminucin del pH extracelular, y lar. Los sitios de unin al agonista se han identificado en el terse ve poco afectada por la elevacin en la concentracin del cer, sexto y sptimo dominio transmembrana [44]. La familia de calcio extracelular. La sensibilidad a la suramina y al PPADS los receptores P2Y muestra una lenta respuesta a los agonistas y resulta similar a la que presentan los receptores que lo for- esto se debe a que sus acciones las llevan a cabo a travs de sisman cuando se expresan de manera separada. La permea- temas de segundos mensajeros [2,27] (Tabla III).

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Tabla II. Algunas caractersticas de las subunidades que conforman los receptores P2X. Estas siete subunidades son las nicas aceptadas por la IUPHAR y su homologa oscila entre el 26 y el 47% (tomado y modificado de [28-31,36,37]). Subunidad P2X1 P2X2 P2X3 P2X4 P2X5 P2X6 P2X7 N. de aminocidos 399 472 397 388 417 379 595 Desensibilizacin Rpida Lenta Rpida Lenta Lenta Lenta Lenta Agonistas 2-MeSATP ATP > ,-meATP > ADP ATP = ATPS = 2-MeSATP > ,-meATP = -meATP 2-MeSATP >> ATP > ,-meATP > ATPS > 2-deoxi-ATP> CTP ATP = 2-MeATP > ATPS >> ADP ATP = ATPS = 2-MeSATP ATP = 2-MeATP > 2-cloroATP = ADP BzATP >> ATP Antagonistas Suramina, PPADS, TNP-ATP , MRS2220, NF023 Suramina, PPADS, NF023 Suramina, PPADS, TNP-ATP , NF023 Suramina, PPADS, NF023 Suramina, PPADS, NF023 Suramina, PPADS, NF023 Calmidazolium, KN-04, KN-62

ATP: adenosn trifosfato; ADP: adenosn difosfato; 2-MeSATP: 2-metiltio-ATP; ,-meATP: ,-metileno-ATP; ATPS: adenosn 5-O-(-3-tiotrifosfato); -meATP: -metileno-ATP; PPADS: piridoxal-fosfato-6-azofenil 2,4-disulfonato.

Tabla III. Algunas caractersticas de los receptores P2Y actualmente aceptados por la IUPHAR (tomado y modificado de [45-52]). Receptor P2Y1 P2Y2 P2Y4 P2Y6 P2Y11 P2Y12 P2Y13 P2Y14 Protena G acoplada Gq/11 Gi/o, Gq/11 Gq/11 Gq/11 Gq/11, Gs Gi Gi Gi/o Segundo mensajero IP3/DAG IP3/DAG IP3/DAG IP3/DAG IP3/DAG, AMPc AMPc AMPc Agonistas 2-MeSATP = ATP >ADP ATP UTP > ATPS >> 2-MeSATP UTP = UDP >> ATP UDP >> UTP > ATP = ADP ATP > 2-MeSATP >>> ADP 2-MeSADP > ADP ADP = 2-MeSADP UDP-glucosa > UDP-galactosa UDP-cido glucurnico UDP-N-acetilglucosamina Antagonistas Suramina, reactivo azul 2, MRS2179 Suramina PPADS Suramina, reactivo azul 2 Suramina, reactivo azul 2 MRS2229, AR-C69931MX

IP3: inositol 1,4,5-trifosfato; DAG: diacilglicerol; AMPc: adenosn monofosfato cclico; UTP: uridn trifosfato; UDP: uridn difosfato; 2MeSADP: 2-metiltio-ADP .

ATP Y SU PARTICIPACIN EN EL SISTEMA NERVIOSO Se ha observado una importante expresin y distribucin tanto de los receptores P2X como de los P2Y en el sistema nervioso central. Los receptores P2X se han localizado en la corteza cerebral, el hipocampo, la habnula, la sustancia negra pars compacta, el ncleo hipotalmico ventromedial y arcuato [53], los ncleos paraventricular y supraptico [54], el ncleo trigeminal mesenceflico, el complejo vagal dorsal y los ncleos del tracto solitario [55], siendo el receptor P2X2 el que principalmente se ha localizado en estas regiones. Empleando hibridacin in situ para ARNm [30,56] se encontr una fuerte expresin del receptor P2X4 en el cerebelo y en la mdula espinal de la rata. Tambin se present una importante inmunorreactividad en reas como la corteza cerebral, el hipocampo, el tlamo y el tallo cerebral. Utilizando microscopa electrnica se ha llegado a la conclusin de que los receptores P2X1-6 se expresan principalmente en las neuronas, mientras que el receptor P2X7 se localiza en las clulas de la gla, linfocitos y macrfagos, lo que apoya el posible papel de este receptor en actividades de repa-

racin tras la lesin del sistema nervioso por inflamacin o infarto [57,58]. Los receptores P2Y tambin se encuentran en el sistema nervioso, en particular, los receptores P2Y1 y P2Y11, los cuales se hallaron en grandes cantidades [59]. El ARNm del receptor P2Y1 fue altamente expresado en los ganglios basales, el hipocampo, el cerebelo y varias regiones de la corteza cerebral. Empleando tcnicas de inmunohistoqumica se detect la participacin del receptor P2X12 en clulas gliales [60], mientras que el ARNm del receptor P2X13 se detect en diferentes regiones cerebrales, como el tlamo, el ncleo caudado, la sustancia negra, el hipocampo y el cerebelo [51]. Nocicepcin Los efectos del ATP se han relacionado con la nocicepcin, en particular, su accin sobre la activacin de receptores P2X. Es importante recordar que grandes cantidades de ATP pueden liberarse desde el espacio intracelular como resultado de lesin tisular, tumores, inflamacin, migraa o distensin visceral, por lo que la activacin de estos receptores seguramente contribuye a la sensacin de dolor que ocurre en esas circunstancias.

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En diversos estudios se ha observado que el ATP tiene la capacidad de activar neuronas sensoriales primarias. Desde 1977, Bleehen et al observaron que la administracin de dosis bajas de ATP (1-3 mol) produca dolor [61]. Jahr et al brindaron la evidencia de que tanto las neuronas sensoriales como las neuronas del asta dorsal de la mdula espinal podan ser despolarizadas por ATP [62], y se ha encontrado que la administracin de ATP en terminales nerviosas nociceptivas provoca la liberacin de glutamato y la generacin de corrientes excitatorias postsinpticas (EPSC) en neuronas del asta dorsal de la mdula espinal [63]. En humanos, la inyeccin intracutnea de ATP en elevadas concentraciones provoc la activacin de una subpoblacin de fibras nociceptoras tipo C, incluyendo las unidades mecanoinsensibles [64]. Tambin se observ que la administracin de un agonista de los receptores P2X gener una respuesta de hiperalgesia trmica cuando se inyect en la superficie plantar de la rata; adems, la coadministracin de noradrenalina y -meATP ocasion una importante facilitacin en la produccin de hiperalgesia trmica, semejante a lo que ocurre cuando se administra de manera conjunta -meATP y 5-HT, lo que implica la participacin del sistema nervioso autnomo [65]. Consistente con la expresin predominante de los receptores P2X1, P2X2 y P2X3 en las neuronas pequeas del ganglio de la raz dorsal de la mdula espinal, estos receptores tambin se han encontrado en fibras nociceptivas de la superficie del asta dorsal [66]. Algunas neuronas del ganglio nodoso muestran una lenta desensibilizacin a la aplicacin de -meATP, al contrario de lo encontrado con el receptor P2X3 expresado en oocitos de Xenopus, cuyas neuronas muestran una rpida desensibilizacin. La coexpresin de P2X2 y P2X3 origina un canal inico con desensibilizacin lenta [67], lo que confirma la presencia de canales heteromultimricos que se pueden presentar en subconjuntos de neuronas sensoriales. Nakatsuka et al, trabajando con cortes de mdula espinal de rata y utilizando la tcnica de patch-clamp en la configuracin de clula completa, encontraron que la activacin de los receptores P2X al aplicar -meATP incrementa hasta en un 80% la liberacin de glutamato de las clulas del asta dorsal y es predominante en las sinapsis sensoriales primarias de las lminas II y V, lo que sugiere que los receptores que podran estar participando seran P2X3 y P2X2/3 [6]. El dolor vascular presente en la angina de pecho, la migraa, la lumbalgia y el dolor plvico en las mujeres suceden durante la fase de hiperemia reactiva que sigue al vasoespasmo local. En esta situacin, grandes cantidades de ATP se liberan del endotelio vascular, que acta sobre los receptores P2Y en el epitelio, lo que provoca la liberacin de xido ntrico y vasodilatacin [68]. Burnstock propuso que, en la microcirculacin, el ATP difunda a travs de las clulas endoteliales para activar las terminales nociceptivas de las fibras sensoriales localizadas en la adventicia [69]. Vestbulo y audicin La participacin del ATP extracelular en el odo interno fue comunicada por Bobbin et al en 1978 [70] y es a partir de ese momento cuando se intenta dilucidar la importancia de esta sustancia en la fisiologa del odo interno; sin embargo, la mayor parte de los esfuerzos se han dirigido hacia la fisiologa auditiva, dejando atrs la parte vestibular.

Estudios electrofisiolgicos, farmacolgicos, bioqumicos y de marcadores para calcio indican la presencia de receptores P2X y P2Y en la cclea, especficamente en el rgano de Corti [71], y en clulas ciliadas externas aisladas de diferentes especies [72,73]; adems, se ha demostrado la presencia de ATP en los compartimientos endolinfticos y perilinfticos de la cclea [74]. Robertson et al, utilizando diferentes agonistas y antagonistas de los receptores P2, sugirieron que el ATP, a travs de sus receptores, podra modular la actividad de las fibras aferentes cocleares al afectar la funcin de la sinapsis entre la clula ciliada y la fibra aferente [75]. El efecto del ATP extracelular en las clulas ciliadas aisladas de la cresta del cobayo sugiere que el ATP controla directamente la entrada de Ca2+ hacia la ciliada [76]. En 1994, Aubert et al, trabajando con el canal semicircular de la rana, sugirieron que el ATP poda participar modulando la fisiologa vestibular y tales efectos podran estar mediados por un receptor P2Y [77]. Glioglio et al brindaron las primeras evidencias que demostraban la presencia de actividad ecto-ATPasa en los tejidos vestibulares [78]. En nuestro laboratorio recientemente estudiamos el efecto del ATP y su anlogo, el -meATP, sobre la descarga basal de las aferentes vestibulares durante el desarrollo embrionario, y observamos que estos compuestos ocasionaron un incremento en la frecuencia de descarga de las aferentes que fue dependiente de la concentracin y de la edad; las preparaciones obtenidas de embriones de 15 y 17 das de desarrollo fueron las que mostraron la mayor respuesta ante la microinyeccin de ATP y su anlogo, en comparacin con los embriones de 19 y 21 das [79]. Estos experimentos confirman la participacin de los receptores purinrgicos en etapas tempranas de desarrollo, en donde su presencia podra resultar fundamental para la completa maduracin del sistema. Retina En la retina se ha observado que los receptores P2 participan de muy diferentes maneras. Se cree que los receptores P2Y estn envueltos en los cambios estructurales de las clulas fotorreceptoras bovinas [80] y en el incremento de las concentraciones intracelulares de Ca2+ en la retina de embriones de pollo [81]. Trabajos realizados con cortes de retina de rata adulta demostraron que las ondas de Ca2+ originadas en las clulas de Mller fueron provocadas por varios agonistas purinrgicos, lo que indic la presencia de receptores P2Y1 en las clulas gliales de la retina [82]. Tambin se demostr que los receptores P2Y1, P2Y2, P2Y4 y P2Y6 se expresan en la retina de la rata y presentan un patrn de distribucin que vara en las diferentes capas de la retina [83]. Ishii et al brindaron la evidencia de que los receptores P2X1 y P2X7 se expresan en la retina del mono y que se encuentran asociados a las neuronas [84]. El receptor P2X7 se encontr en clulas horizontales y ganglionares. Por otra parte, el receptor P2X1 est distribuido de manera muy cercana a las dendritas de las clulas amcrinas, que son dopaminrgicas. Lo anterior sugiere que las clulas dopaminrgicas son presinpticas a los sitios en donde se encontr inmunorreaccin para los receptores P2X1. Este asepcto coincide con el hecho conocido de que las neuronas dopaminrgicas pueden liberar ATP como un cotransmisor [84].

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La administracin de UTP en la retina de embriones de pollo in vitro en etapas tempranas del desarrollo acelera la mitosis en la zona ventricular y lo contrario sucede cuando se aplica suramina, lo que indica la participacin de los receptores P2Y en esta respuesta, siendo la concentracin intracelular de Ca2+ ([Ca2+]i) un factor determinante en la regulacin de la mitosis en las clulas de esta regin [85]. Estudios recientes indican que la distribucin, la funcin y las caractersticas generales de los receptores P2 pueden cambiar durante las enfermedades oftlmicas, como sucede en la vitreorretinopata proliferativa en donde existe una sobreexpresin de los receptores P2X7 en las clulas de Mller [86] o en la enfermedad provocada por el virus Borna donde se han observado alteraciones electrofisiolgicas de los receptores purinrgicos [87]. Olfato Hasta hace algunos aos, la participacin del ATP y otros nucletidos en la fisiologa del olfato consista principalmente en ser precursores de segundos mensajeros. De esta manera, el esquema inicial de eventos presentes en la olfacin slo inclua el GTP y el ATP como elementos clave en la activacin de protenas G y de la adenilatociclasa, ya que an no se tena idea de que los receptores para nucletidos podan estar presentes a este nivel [88]. Aos ms tarde, usando RT-PCR (transcriptasa inversa-reaccin en cadena de la polimerasa) y mtodos inmunohistoqumicos, Hegg et al localizaron en el epitelio y en el bulbo olfatorio la expresin de los receptores P2X2 y P2Y2 [89]. Estos autores demostraron que la activacin de los receptores purinrgicos suprima la sensibilidad del olfato, lo que sugera que el incremento en el [Ca2+]i se encontraba mediando esta disminucin; sin embargo, el mecanismo preciso de este efecto an se desconoce. En un estudio realizado en rata se demostr que el ATP intracelular disminua de manera significativa cuando el epitelio olfatorio era daado por fumar, probablemente debido a la liberacin de ATP por las clulas lesionadas; ello provocara un incremento en los niveles extracelulares de ATP, el cual, al disminuir la sensibilidad de las clulas olfatorias, podra funcionar como un nuevo mecanismo de neuroproteccin [90]. Gla Todas las clulas de la gla tienen la capacidad de activarse cuando existe alguna lesin en el sistema nervioso central. La estimulacin de los receptores P2 localizados en la gla puede provocar su activacin, lo que tambin depender del nivel y la duracin de la exposicin al ATP. La manera en cmo esto sucede se puede dividir en tres etapas: En condiciones fisiolgicas, existe un rpido, pequeo y transitorio incremento en los niveles de ATP que principalmente activa a los receptores P2Y y rpidamente desensibiliza a los P2X. La activacin de los receptores P2Y1 localizados en los astrocitos ocasiona la propagacin de las ondas de Ca2+, que funcionan como una va de procesamiento paralelo que acopla las funciones de las neuronas y la gla. En esta etapa, las clulas gliales sufren una segunda activacin ocasionada por una mayor y ms prolongada exposicin al ATP extracelular, lo cual a su vez provoca un mayor incremento en el [Ca2+]i de la gla. Ello es suficiente para provocar que los astrocitos liberen ATP y cido araquidnico, ocasionando que la seal se difunda y se magnifique en el resto de las clulas gliales.

Slo en respuesta a muy altas concentraciones de ATP se provoca una respuesta en los receptores P2X que no se desensibilizan o saturan en estas condiciones, y es entonces cuando las clulas gliales alcanzan una tercera etapa de activacin en respuesta a una lesin, que genera muerte celular, importantes fenmenos inflamatorios y la produccin de una extensa escara glial, lo cual evita el subsiguiente crecimiento axonal. En resumen, el ATP liberado por los astrocitos y las cascadas de sealizacin provocadas por l pueden ser el paso crtico en el inicio y propagacin de la respuesta a la lesin entre las clulas de la gla [91]. Gracias al empleo de tcnicas moleculares se ha logrado caracterizar a los subtipos de receptores P2 que se expresan en la lnea celular N9 de la microgla. Bianco et al han concluido que todos los receptores P2 estn presentes en estas clulas [92], y de ellos, los subtipos P2X7, P2Y2/4, P2Y6, P2Y12/13 y P2Y14 estuvieron acoplados a incrementos en la [Ca2+]i. Esta lnea celular presenta un perfil de receptores P2 comparable al encontrado en clulas de microgla obtenidas de embriones de roedor, lo que a su vez permite establecer que las clulas N9 son un buen modelo de estudio para entender la participacin de los compuestos purinrgicos en la regulacin de la microgla [92]. Neuromodulacin Estudios realizados in vitro en clulas obtenidas de sistema nervioso central y perifrico, y lo comunicado en trabajos realizados in vivo, han brindado evidencias de que las seales desencadenadas por ATP y adenosina contribuyen a modular la liberacin de algunos neurotransmisores como la ACh, la noradrenalina, la serotonina, la dopamina y el glutamato [93-97]. Los mecanismo a travs de los cuales se lleva a cabo esta modulacin pueden ser los siguientes: la activacin de los receptores P2X permite que el Ca2+ ingrese en la clula, lo que a su vez incrementa la [Ca2+]i y favorece la liberacin del neurotransmisor. En el caso de los receptores P2Y, cuando stos se estimulan, se generan segundos mensajeros a travs de la activacin de protenas G. La formacin de IP3 y la movilizacin de Ca2+ pueden estimular una variedad de vas de sealizacin que incluyen la proteincinasa C (PKC), la fosfolipasa A2 (PLA2), los canales de K+ dependientes de Ca2+, la xido ntrico sintasa y la generacin de xido ntrico. El diacilglicerol (DAG), a su vez, puede tambin estimular la PKC, que activa, entre otras, las proteincinasas activadas por mitgenos (MAPK) y favorece el flujo de Ca2+ al interior de la clula va canales de Ca2+ activados por voltaje. Otra manera de actuar es mediante la inhibicin de la adenilatociclasa con el consecuente decremento en los niveles de AMPc. Como se puede apreciar, son muy variados los caminos que los receptores purinrgicos pueden emplear para llevar a cabo sus acciones, siendo stas slo algunas de las muchas vas que pueden activarse tras su estimulacin [2]. Neurodesarrollo Una creciente evidencia sugiere que las seales purinrgicas participan en el desarrollo embrionario. Los receptores purinrgicos han mostrado ser uno de los primeros receptores funcionales en la membrana de las clulas del embrin de pollo durante la gastrulacin, cuando el ATP induce una rpida acumulacin de IP3 y una movilizacin de Ca2+ de manera semejante a la provocada por la ACh [98]. Kidd et al comunicaron la

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expresin del receptor P2X3 en diversas estructuras cerebrales de la rata en los perodos embrionario y neonatal, pero no en el de la rata adulta [99]. Empleando tcnicas de inmunohistoqumica, Cheung et al encontraron, en embriones de rata en el estadio E11-E11.5, la presencia del receptor P2X3 en la porcin del tubo neural que formar el postencfalo [100]. En los embriones de E14.5, muchas estructuras que se localizan en el sistema nervioso central que se ha diferenciado del tubo neural, muestran una importante inmunorreaccin al receptor P2X3; sin embargo, en las ratas en estadios posnatales, la expresin de estos receptores fue menor hasta que, en el da 16 posnatal, escasos ncleos mostraron la presencia de este receptor. El resto de los receptores P2X no estuvo presente en el tubo neural ni en los ganglios sensoriales en el perodo embrionario comprendido entre E11 y E12.5 [100]. Un estudio realizado por Fu sobre los efectos del ATP en el desarrollo de la sinapsis neuromuscular en clulas en cultivo de Xenopus, encontr que la aplicacin de ATP a esta sinapsis ocasionaba un aumento en la amplitud y frecuencia de la corriente sinptica espontnea [101]. Tambin se observ que el ATP potenciaba la respuesta a ACh en la membrana muscular, lo cual sugera que la liberacin de ATP de las terminales nerviosas podra favorecer la respuesta a la ACh en las clulas musculares en desarrollo durante la fase temprana de la sinaptognesis [101]. Conducta Tambin se ha podido comprobar que el ATP participa en ciertos aspectos del comportamiento. La estimulacin de los receptores P2 localizados en el ncleo accumbens de la rata, tras la microinyeccin de 2-MeSATP, se caracteriz por una actividad locomotora ms consistente y prolongada cuando el animal se encontraba en un ambiente nuevo [102]. En otros aspectos del comportamiento, como la alimentacin, se cree que ADP y ATP facilitan la decisin del animal de ingerir alimentos a travs de una va que favorece la presencia de dopamina en el ncleo accumbens; adems, la administracin de PPADS por microdilisis suprime la liberacin de dopamina secundaria al deseo de alimentarse, as como tambin el tipo y la cantidad de alimento que se ingiere [103]. Se ha observado que los antagonistas de los receptores de glutamato provocan un intenso impulso por comer debido principalmente a una inhibicin de receptores NMDA y no NMDA en el ncleo accumbens, por lo que la reduccin de los niveles de glutamato podra tener un efecto directo sobre la ingesta de alimentos [104]. En ratas sometidas a un estado prolongado de privacin alimenticia se increment el ARNm del receptor P2Y1 en la regin del ncleo accumbens, que podra ser secundario a una reducida estimulacin de ste, lo cual se correlaciona con una disminucin en la liberacin de dopamina en ratas bajo las mismas condiciones [105]. Se puede asumir, entonces, que estos cambios adaptativos en la expresin de los receptores P2 tienen el objetivo de incrementar su sensibilidad para responder ante estmulos motivacionales, como la comida [105].

Participacin de los receptores para ATP en algunas enfermedades Los receptores para nucletidos y nuclesidos participan en enfermedades del sistema nervioso central y perifrico. Se ha observado que puede existir una liberacin masiva de ATP a consecuencia de estrs metablico, isquemia o traumatismo cerebral, lo cual provoca incrementos en la [Ca2+]i secundarios a la activacin de los receptores purinrgicos; ello puede desencadenar mecanismos de apoptosis o necrosis [106]. Trabajando con clulas granulosas de cerebelo, Amadio et al llegaron a la conclusin de que el ATP acta como un mediador de la muerte neuronal debido a que ocasiona inflamacin celular, liberacin de deshidrogenasa lctica y fragmentacin nuclear, por lo que se considera que el ATP liberado a causa de una lesin puede participar en eventos neuronales degenerativos [107]. Cuando se lesionan las neuronas de la mdula espinal, se incrementa la expresin del receptor P2X7; sin embargo, cuando este receptor se bloquea, se favorece la recuperacin funcional y disminuye la muerte celular en la zona peritraumtica [108]. La oclusin de la arteria cerebral media en la rata tambin provoc una mayor expresin del receptor P2X7 en las neuronas de la regin perifrica al infarto; adems, la microscopa electrnica revel que estos receptores se concentraron en la membrana nuclear de estas neuronas [58]. La muerte celular por isquemia es un proceso prolongado que origina mecanismos apoptticos, los cuales muy probablemente se encuentran mediados por el receptor P2X7. Estos hallazgos indican que, quiz, la interferencia del sistema ATPrgico excitatorio podra proveer neuroproteccin en los casos de isquemia cerebral. La activacin del receptor P2X7 puede inducir apoptosis, lo que facilita la embriognesis y elimina clulas cancergenas o infectadas, siendo Ca2+ un mediador de la apoptosis inducida por ATP [109]. Se ha observado que este receptor tiene la peculiaridad de formar poros en la membrana plasmtica tras la continua presencia del agonista, lo que incrementa la permeabilidad no slo para Ca2+, sino tambin para otros cationes [110]. CONCLUSIONES El descubrimiento del ATP, realizado en 1929, se debe a Fiske y Subbarow en Estados Unidos y Lohmann en Alemania [111], que de manera independiente y con cierta rivalidad lograron localizarlo en extractos de msculo esqueltico. Nunca imaginaron que la parte energtica era solamente una de las mltiples funciones que realiza en los diferentes organismos en donde se ha encontrado. Hoy da, conscientes de su participacin extracelular, de la existencia de sus receptores y de su amplia distribucin en el sistema nervioso, resulta fundamental llegar al completo entendimiento de su estructura, comportamiento y participacin en condiciones de salud y de enfermedad. Cuando se comprendan por completo, podr aprovecharse su potencial teraputico, bloquendolos en situaciones en donde su activacin sea daina y promoviendo su funcionamiento cuando puedan resultar de utilidad para mejorar la salud.

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RECEPTORES DE ATP

DE LA ENERGTICA A LA NEUROTRANSMISIN: EL ADENOSN TRIFOSFATO Y SUS RECEPTORES Resumen. Introduccin y objetivo. El adenosn trifosfato (ATP) es una sustancia que se ha distinguido por ser un donador de energa, pero hoy en da se tiene conocimiento de que sus funciones van ms all. A travs de la activacin de una gran variedad de receptores ampliamente distribuidos en el sistema nervioso, el ATP participa en la neurotransmisin, la neuromodulacin, la apoptosis, la proliferacin y diferenciacin celulares, el dolor... Objetivo. Realizar una revisin de los receptores para ATP, de su contribucin al correcto funcionamiento de los circuitos neuronales, y de la participacin en el desarrollo de algunas enfermedades. Desarrollo. Se aborda el tema desde diferentes perspectivas, como la estructura del ATP, su metabolismo a travs de ecto-ATPasas y su principal metabolito, la adenosina, as como una descripcin detallada de cada uno de los receptores purinrgicos existentes y que se han aceptado internacionalmente; se revisa cmo el ATP y sus receptores participan en estructuras del sistema nervioso, principalmente las correspondientes a los sistemas sensoriales. Conclusiones. La amplia distribucin de los purinoceptores invita a explorarlos de manera detallada. Esta nueva familia de receptores promete constituir una nueva herramienta diagnstica y teraputica que permita abordar aspectos de las neurociencias con un nuevo enfoque, considerando la participacin de un nuevo protagonista, el ATP, en la generacin de sucesos que alteran la salud. [REV NEUROL 2006; 43: 667-77] Palabras clave. Adenosina. ATP. Dolor. Ecto-ATPasas. Neurodesarrollo. Neuromodulacin. Receptores purinrgicos. Sistemas sensoriales.

DA BIOENERGTICA NEUROTRANSMISSO: A ADENOSINA TRIFOSFATO E OS SEUS RECEPTORES Resumo. Introduo e objectivo. A adenosina trifosfato (ATP) uma molcula que se distinguiu pelo seu potencial energtico. No entanto, actualmente sabemos que as suas funes so bem mais vastas. Atravs da activao de uma grande variedade de receptores amplamente distribudos no sistema nervoso, a ATP participa na neurotransmisso, na neuromodulao, na apoptose, na proliferao e diferenciao celular, nas vias da dor... Objectivo. Efectuar uma reviso sobre os receptores da ATP, do seu contributo para o correcto funcionamento dos circuitos neuronais, e da sua participao no desenvolvimento de algumas doenas. Desenvolvimento. Fez-se a abordagem do tema sob diferentes perspectivas: a estrutura molecular da ATP, o seu metabolismo via ecto-ATPases e o seu principal metabolito, a adenosina; assim como uma descrio pormenorizada de cada um dos receptores purinrgicos existentes internacionalmente aceites. Fez-se a reviso de como a ATP e os seus receptores participam nas estruturas do sistema nervoso, principalmente nas vias sensoriais. Concluses. A ampla distribuio dos receptores purinrgicos convida sua explorao detalhada. Esta nova famlia de receptores promete constituir uma nova ferramenta de diagnstico e teraputica permitindo abordar aspectos das neurocincias sob uma nova perspectiva, considerando a interveno de um novo protagonista, a ATP, na origem de acontecimentos que alteram a sade. [REV NEUROL 2006; 43: 667-77] Palavras chave. Adenosina. ATP. Dor. Ecto-ATPases. Neurodesenvolvimento. Neuromodulao. Receptores purinrgicos. Sistemas sensoriais.

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