Spectroscopis method The presence of aromatic amino acid residus results in proteins showing an absorption maximum at 280 nm and

comparison of the absorbance value of a test solution with that of standart solution provides a sensitive method of quantitation. This cannot be considered to be an absolute method of quantitation because variations in the amino acid content mean that value for absorption coefficients vary from one protein to another. Figure 11.7 shows the absorption spectra of several amino acids vary it is the cumulative effect which results in all proteins showing an absorption maximum at 280 nm. At this wavelength tryptophan has the highest molar absorption coefficient and contributes most to the absorbance valeu recorded. Absorption in the region of 220 nm due to the peptide bone has been used in the quantitation of proteins but many other compounds also absorb at this wavelength and as a result such method suffer from a considerable degree of interfeence.a reagent for the detection of phenolic groupd known as the folin and ciocalteu reagent was used in the quantitation of proteins by Lowry (1951). In its simplest form the reagent detect tyrosine residues due to their phenolic nature but the sensitivity of the method was considerably improved by the incorporation of cupric ions. A copper protein complex produced using a dilute version of the biuret reagent causes the reduction of the phospotungstic and phosphomolybdic acids, the main constituens of the follin and ciocalteu reagent, to tungsten blue and molybdenum blue. The precise composition of these compounds is not known but they show broad absorption peaks in the red portion of the visible spectrum (600-800 nm). Approximately 75% of the reduction which occurs is due to the copper protein complex while tyrosine (and to a lesser extent, tryptophan) residues are responsible for the remainder. Follin and ciocalteuss reagent is of complex composition and is prepared by the reflux heating of sodium tungstate and sodium molybdate with orthophosphoric acid. Other ingredients have been used in order to improve the stability of the reagent which is normally pale yellow and of limited shelf life. Because of the complexity of preparation it is advisable to purchase the reagent The method is more sensitive than the biuret method and has an analytical range from 1o to 1.0 mg of protein. Using the method outlined below this is equivalent to sample concentrations of between 20 mg and 2.0 g. The relationship between absorbance curve is necessary. The method is also subject to interference from simple ions, such as potassium and magnesium, as well as by various organic compounds, such as tris buffer and EDTA (ethylenediamonatetraacetic acid). Phenolic compounds present in the sample will also react and tgis may be of particular significance in the analysis of plant exracts. Alkaline copper reagent Copper sulphate 20 ml 20 mg

Sodium potassium tartrate Sodium carbnate 20 g Sodium hydroxide 40 g Method 6.0 ml alkaline copper reagent,

0,5 ml sample Mix and allow to stand for 10 min and add 0.5 ml follin and ciocalteus reagent Mix and allow to stand for 30 min Maesure absorbance at 600 nm

Translate pake bing

Metode Spectroscopis Kehadiran hasil residus asam amino aromatik di protein menampilkan penyerapan maksimum 280 nm dan perbandingan nilai absorbansi solusi pengujian dengan solusi standart menyediakan metode kuantisasi sensitif. Ini tidak dapat dianggap sebagai metode yang mutlak kuantisasi karena variasi dalam mean konten asam amino yang nilai koefisien penyerapan bervariasi dari satu protein lain. 11,7 gambar menunjukkan garis-garis spektrum penyerapan asam amino beberapa bervariasi ini adalah efek kumulatif yang mengakibatkan semua protein menampilkan penyerapan maksimum di 280 nm. Pada gelombang ini triptofan memiliki koefisien penyerapan molar tertinggi dan paling berkontribusi value absorbansi direkam. Penyerapan di sekitar 220 nm karena tulang peptida telah digunakan dalam kuantisasi protein tetapi juga menyerap banyak senyawa lain pada gelombang ini dan akibatnya metode tersebut menderita dari tingkat yang cukup interfeence.a reagen untuk deteksi fenolik groupd dikenal sebagai reagen folin dan ciocalteu digunakan dalam kuantisasi protein oleh Lowry (1951). Dalam bentuk yang paling sederhana reagen mendeteksi residu tirosin karena sifat zat fenolik tetapi sensitivitas metode jauh meningkat oleh penggabungan ion tembaga. Kompleks protein tembaga yang dihasilkan menggunakanlarutan encer reagen biuret menyebabkan penurunan phospotungstic dan asam phosphomolybdic, constituens utama pereaksi follin dan ciocalteu, biru tungsten dan molibdenum biru. Komposisi tepat dari senyawa ini tidak diketahui tetapi mereka menunjukkan penyerapan luas puncak di bagian

merah yang terlihat spektrum (600-800 nm). Sekitar 75% pengurangan yang terjadi adalah karena tembaga protein kompleks sementara tirosin (dan untuk tingkat yang lebih rendah, triptofan) residu bertanggung jawab untuk sisanya. Follin dan ciocalteus di reagen komposisi yang kompleks dan disiapkan oleh pemanasan refluks dan tungstate natrium, natrium molibdat dengan asam fosfor. Bahan-bahan lain telah digunakan untuk meningkatkan stabilitas reagen yang kuning biasanya pucat dan batas rak hidup. Karena kompleksitas dari persiapan disarankan untuk membeli reagent Metode yang lebih sensitif daripada metode biuret dan analisis berkisar 1o-1,0 mg protein. Menggunakan metode yang diuraikan di bawah ini setara dengan sampel konsentrasi antara 20 mg dan 2.0 g. Hubungan antara absorbansi kurva diperlukan. Metode ini juga tergantung pada gangguan dari ion sederhana, seperti kalium dan magnesium, dan juga oleh berbagai macam senyawa organik, seperti tris buffer dan EDTA (ethylenediamonatetraacetic asam). Senyawa fenolik yang hadir dalam sampel juga akan bereaksi dan tgis mungkin makna tertentu dalam analisis tanaman exracts. Reagen tembaga alkali Tembaga sulfat 20 ml Natrium kalium tartrat 20 mg Natrium carbnate 20 g Natrium hidroksida 40 g Metode 6.0 ml pereaksi tembaga basa, 0,5 ml sampel Campur dan memungkinkan untuk berdiri selama 10 menit dan tambahkan Reagen follin dan ciocalteus 0.5 ml Campur dan memungkinkan untuk berdiri selama 30menit Mengukur absorbansi di 600 nm
Pake goole translate metode spektroskopi Kehadiran aromatik asam amino residu menghasilkan protein yang menunjukkan serapan maksimum pada 280 nm dan perbandingan dari nilai absorbansi larutan uji dengan larutan standart memberikan metode yang sensitif kuantisasi . Hal ini tidak dapat dianggap sebagai metode yang mutlak kuantisasi karena variasi kandungan asam amino berarti bahwa nilai koefisien penyerapan bervariasi dari satu protein yang lain . Gambar 11.7 menunjukkan spektrum penyerapan beberapa asam amino bervariasi itu adalah efek kumulatif yang menghasilkan semua protein yang menunjukkan serapan maksimum pada 280 nm . Pada panjang gelombang triptofan ini memiliki koefisien absorpsi molar tertinggi dan memberikan kontribusi paling besar terhadap nilai absorbansi direkam. Penyerapan di wilayah 220 nm karena tulang peptida telah digunakan dalam kuantisasi protein tetapi banyak senyawa lain juga menyerap pada panjang gelombang ini dan sebagai hasilnya metode tersebut menderita gelar cukup interfeence.a reagen untuk deteksi fenolik groupd dikenal

sebagai Folin dan Ciocalteu reagen yang digunakan dalam kuantisasi protein oleh Lowry ( 1951 ) . Dalam bentuk yang paling sederhana reagen mendeteksi residu tirosin karena sifat fenolik mereka tetapi sensitivitas metode ini sangat ditingkatkan dengan penggabungan ion tembaga . Sebuah kompleks protein tembaga diproduksi menggunakan versi encer reagen biuret menyebabkan pengurangan asam phospotungstic dan phosphomolybdic , para constituens utama dari Follin dan Ciocalteu reagen , tungsten biru dan biru molibdenum . Komposisi yang tepat dari senyawa ini tidak diketahui tetapi mereka menunjukkan puncak serapan yang luas di bagian merah dari spektrum yang terlihat ( 600-800 nm) . Sekitar 75 % dari penurunan yang terjadi disebabkan oleh kompleks protein tembaga sementara tirosin ( dan pada tingkat lebih rendah , triptofan ) residu bertanggung jawab untuk sisanya . Follin dan reagen ciocalteus adalah komposisi yang kompleks dan disiapkan oleh pemanasan refluks natrium tungstat dan natrium molibdat dengan asam ortofosfat . Bahan-bahan lain telah digunakan untuk meningkatkan stabilitas reagen yang biasanya kuning pucat dan kehidupan rak terbatas . Karena kompleksitas persiapan disarankan untuk membeli reagen Metode ini lebih sensitif dibandingkan dengan metode biuret dan memiliki jangkauan analisis dari 1o sampai 1,0 mg protein . Dengan menggunakan metode yang dijelaskan di bawah ini setara dengan konsentrasi sampel antara 20 mg dan 2,0 g . Hubungan antara kurva absorbansi diperlukan . Metode ini juga terganggu oleh ion sederhana , seperti kalium dan magnesium , serta oleh berbagai senyawa organik , seperti tris penyangga dan EDTA ( asam ethylenediamonatetraacetic ) . Senyawa fenolik hadir dalam sampel juga akan bereaksi dan tgis mungkin penting khususnya dalam analisis exracts tanaman . Reagen tembaga Alkaline 20 tembaga sulfat ml Natrium-kalium tartrat 20 mg Sodium carbnate 20 g Natrium hidroksida 40 g metode 6,0 ml reagen tembaga alkali , 0,5 ml sampel Campur dan memungkinkan untuk berdiri selama 10 menit dan tambahkan 0,5 Follin ml dan reagen Ciocalteu ini Campur dan memungkinkan untuk berdiri selama 30 menit Maesure absorbansi pada 600 nm