UNIVERSIDAD DE NARIO PRACTICA DE BIOQUIMICA No. 2 RECONOCIMIENTO DE AMINOACIDOS Y PROTENAS Docente: Claudia Sofa Guevara A.

Reaccin de la ninhidrina La ninhidrina (hidrato de tricetohidrindeno) reacciona con el grupo amino de aminocidos libres y con los grupos amino de la molcula protenica para dar un compuesto azul violeta. Los aminocidos prolina e hidroxiprolina tambin reaccionan con la ninhidrina pero en este caso se obtiene un color amarillo en lugar de violeta. La reaccin es muy sensible por lo cual se utiliza en cromatografa y en la deteccin de aminocidos y protenas en muestras biolgicas. Tcnica: 1. Rotular 5 tubos de ensayo como glicina, metionina, prolina, albumina (clara de huevo) y muestra biolgica (algn producto vegetal que contenga protenas) 2. Aadir a cada tubo 1 ml de la sustancia correspondiente de acuerdo a su rotulo 3. Agregar a cada tubo 1 ml de ninhidrina 4. Calentar los tubos en un bao mara a ebullicin durante 5 minutos, 5. Observar las coloraciones presentadas y registrar los resultados

Reaccin Xantoproteica Es debida a la formacin de un compuesto aromtico nitrado de color amarillo, cuando las protenas son tratadas con cido ntrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas protenas con aminocidos portadores de grupos bencnicos o los llamados aromticos como la tirosina, triptfano y fenilalanina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un lcali vira a un color anaranjado oscuro.

Tcnica 1. Poner en el tubo de ensayo 2 ml de solucin albumina (clara de huevo), muestra biolgica, glicina, triptfano, fenilalanina y tirosina. 2. Aadir 1 cc. de HNO3 concentrado. 3. Calentar al bao mara a 100: C.. 4. Enfriar en agua fra 5. Aadir gota a gota una disolucin de sosa al 40%.

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Reaccin de Biuret La producen los pptidos y las protenas, pero no los aminocidos, ya que se debe a la presencia del enlace peptdico (- CO- NH -) que se destruye al liberarse los aminocidos. Cuando una protena se pone en contacto con un lcali concentrado, se forma una sustancia compleja denominada Biuret, de frmula: Que en contacto con una solucin de sulfato cprico diluida, da una coloracin violeta caracterstica. Tcnica 1. Poner en diferentes tubos de ensayo de 2 cc. de albmina de huevo (clara de huevo), de glicina, de alanina y muestra biologica 2. Aadir 2cc. de solucin de hidrxido sdico al 20%. 3. A continuacin 4 5 gotas de solucin de sulfato cprico diluida al 1%. 4. Debe aparecer una coloracin violeta-roscea caracterstica.

Reaccin de los aminocidos azufrados Se pone de manifiesto por la formacin de un precipitado negruzco de sulfuro de plomo. Se basa esta reaccin en la separacin mediante un lcali, del azufre de los aminocidos, el cual al reaccionar con una solucin de acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo. Tcnica 1. Poner en diferentes tubos de ensayo de 2 cc. de albmina de huevo (clara de huevo), de glicina, de cistena, metionina y muestra biolgica. 2. Aadir 2 cc. de solucin de hidrxido sdico al 20%. 3. Aadir 10 gotas de solucin de acetato de plomo al 5%. 4. Calentar el tubo hasta ebullicin. 5. Si se forma un precipitado de color negruzco nos indica que se ha formado sulfuro de plomo, utilizndose el azufre de los aminocidos, lo que nos sirve para identificar protenas que tienen en su composicin aminocidos con azufre.

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Reaccin de Milln Esta reaccin se debe a la presencia, de un grupo fenlico, presente en el radical de tirosina. Este grupo por calentamiento con el reactivo de Millos (una mezcla de nitrato y nitrito mercrico disueltos en cido ntrico concentrado), produce una coloracin roja que se debe a la formacin de la nitrotirosina que, por una reaccin de adicin con el mercurio en el curso del calentamiento, se transforma en una sal mercrica de color rojo. Tcnica: 1. Poner en diferentes tubos de ensayo de 2 cc. de albmina de huevo (clara de huevo), de glicina, tirosina y muestra biologica. 2. Aadir 1 cc. de reactivo de Millon y agitar. 3. Calentar los tubos en un bao mara durante 5 minutos y agregar 0,5 ml de nitrito de sodio 5%. 4. La aparicin de una tonalidad roja indica la presencia de tirosina.

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Reaccin de Hopkins Cole El anillo indlico presente en la cadena lateral de los alfa-aminocidos libres o haciendo parte de pptidos y protenas se puede reconocer mediante reaccin con el cido glioxlico a pH cido, puesto que forma complejos de coloracin violeta o amarillo violeta, permitiendo as identificar al triptfano. Tcnica: 1. Poner en diferentes tubos de ensayo de 2 mL de albmina de huevo (clara de huevo), triptfano, albmina de huevo, glicina y muestra problema. 2. Adicione a cada uno 2 mL. del reactivo de Hopkins Cole. 3. Mezcle bien el contenido y adicione a cada tubo por las paredes lenta y cuidadosamente, sin mezclar 1 mL. de cido sulfrico concentrado, la formacin de un anillo violeta en la interfase es prueba positiva para el triptfano.

Desnaturalizacin de Protenas

Las protenas, debido al gran tamao de sus molculas, forman con el agua soluciones coloidales. Estas soluciones pueden precipitar con formacin de cogulos al ser calentadas a temperaturas superiores a los 70:C o al ser tratadas con soluciones salinas, cidos, alcohol, etc. La coagulacin de las protenas es un proceso irreversible y se debe a su desnaturalizacin por los agentes indicados, que al actuar sobre la protena la desordenan por la destruccin de su estructura terciaria y cuaternaria Tcnica Para ver la coagulacin de las protenas se puede utilizar clara de huevo, para conseguir ms volumen puede prepararse para toda la clase una dilucin de clara de huevo en agua, de forma que quede una mezcla an espesa. 1. Colocar en un tubo de ensayo una pequea cantidad de clara de huevo. 2. Aadir 5 gotas de cido actico y calentar el tubo a la llama del mechero.

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