UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA CENTRO DE CIENCIAS BIOLGICAS DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA CELULAR, EMBRIOLOGIA E GENTICA O MICROSCPIO DE LUZ Cuidados

com o microscpio. 1. Nunca desloque o microscpio do seu lugar de origem e movimente-o mnimo possvel. Voc poder danific-lo ou no mnimo descentralizar e/ou desalinhar suas lentes e o feixe de luz. 2. Quando preparar seu material biolgico entre lmina e lamnula, assegure-se SEMPRE, que sua lmina e lamnula estejam perfeitamente limpas. 3. Comece a focalizar sua lmina SEMPRE pela objetiva de menor aumento, usando o macromtrico para movimentos grosseiros e o micromtrico para o ajuste final (movimento fino). Aps focalizar o material biolgico com a objetiva de menor aumento, passe para a de aumento imediatamente superior, SEM tocar no macro e micromtrico. Aps inserir a objetiva de maior aumento, faa o ajuste final do foco (pois este estar bem prximo) com o macro/micromtrico. No se preocupe em quebrar a lmina, pois a passagem DIRETA para as objetivas de maior aumento no far com que estas toquem na lmina, mesmo sendo de maior tamanho. O microscpio foi desenhado para que isto no acontea, desde que voc focalize corretamente, nas lentes de menor aumento. 4. Troque as lentes objetivas SEMPRE girando o revlver, sem manipular ou empurrar as prprias objetivas. 5. Quando tiver que mudar de lmina, volte SEMPRE para a objetiva de menor aumento, antes de tirar aquela que voc estava observando, Desta forma voc estar protegendo a lmina e a objetiva contra choques. Quando inserir a lmina nova, inicie como j explicado, pela lente objetiva de menor aumento. 6. NUNCA use a objetiva de imerso (aumento 100x) SEM leo, pois voc estar danificando seriamente esta lente, que a pea mais delicada e cara do microscpio, alm de no ter como alcanar o foco e ainda correr o risco de quebrar a lmina. Aps usar a lente de imerso (100x), limpe-a SEMPRE com uma soluo lcool-ter em algodo, ou apenas com papel super-macio ou guarda-p. 7. NUNCA volte para a objetiva de 40x APS utilizar a objetiva de imerso(100x), pois esta vai tocar no leo da lmina, danificando-a. As outras objetivas no tocaro o leo pois seu ponto focal mais alto que o leo da lmina. 8. Quando o material biolgico estiver corado use o condensador alto e o diafragma aberto. Quando o material no estiver corado (por exemplo, espcimes frescos ou vivos) use o condensador baixo OU o diafragma fechado. Assim voc estar acentuando os contrastes naturais. 7. Quando terminar sua observao ao microscpio, volte SEMPRE para a objetiva de menor aumento e deixe-a inserida para o prximo colega que usar o aparelho. 8. Desligue sempre o microscpio da tomada SEM enrolar o fio eltrico e cubra-o com sua capa.

LIMITE DE RESOLUO (LR) E PODER DE R ESOLUO (PR) DE UM SISTEMA PTICO.

1. O olho humano no consegue distinguir objetos menores que 0,1 mm. O microscpio de luz age como um complemento do olho, permitindo distinguir objetos menores que 0,1 mm. Voce vai encontrar nmeros gravados nas lentes objetivas: o aumento da lente, a sua Abertura Numrica (AN) e s vezes, no caso das lentes de grande aumento, a espessura da lamnula a ser usada (0,17 mm). A AN corresponde qualidade da lente e com este valor voc poder calcular o limite de resoluo de cada objetiva. O limite de resoluo (LR) de uma lente a sua capacidade de distinguir detalhes, ou melhor dizendo, LR a menor distncia entre dois pontos de tal forma que eles ainda possam ser individualizados. Quanto menor o LR , melhor ser o microscpio. O LR das melhores lentes objetivas do microscpio de luz atingem 0,2 m. O LR de uma lente pode ser calculado a partir da frmula: LR = K AN onde K uma constante - 0,61 o comprimento de onda da luz branca - 0,55 m AN a abertura numrica da lente ou: n.sen. 2. Poder de Resoluo ou PR o inverso do LR: ou seja, quanto menor o LR, maior o seu poder de resoluo e portanto, maior a qualidade das lentes e melhor o microscpio. 3. O Aumento Final da imagem fornecida pelo microscpio, pode ser calculado, multiplicando-se o aumento de cada lente objetiva pelo aumento da lente ocular. A objetiva a lente que confere qualidade imagem do microscpio, enquanto a ocular uma simples lente de aumento. 4. No deve haver confuso entre AUMENTO e QUALIDADE de imagem Imagem grande nem sempre imagem de qualidade e rica de detalhes (LR baixo). O microscpio deve primeiramente garantir uma imagem de qualidade, qualidade esta que poder estar associada a um maior aumento do objeto biolgico. 5. A imagem final do microscpio caracteriza-se por ser uma imagem virtual, ampliada e invertida, devido ao seu sistema composto de lentes. 6. Existem vrios tipos de microscpios de luz, alm do tradicional, sendo os mais importantes: o microscpio de contraste de fase, de interferncia, de campo escuro, de polarizao e de fluorescncia.

MEDIDAS E UNIDADES EM BIOLOGIA CELULAR 1. Transforme nas outras unidades (mm, nm, m e A) os valores abaixo, indcando os resultados em nmeros inteiros ou potencias de 10. a) 7 mm f) 10 m b) 300 A g) 5.105 A c) 0,1 A h) 103 nm d) 0,8 nm e) 1.300 m i) 7.10-2 nm j) 0,2.10-4 mm

2. Porque o microscpio de fluorescncia que trabalha com luz ultra-violeta tem um LR menor que o microscpio de luz comum. Justifique. 3. Suponha dois sistemas pticos com objetiva 100x. Quais os respectivos LR, sabendo-se que a objetiva do primeiro microscpio tem uma AN de 0,65, enquanto a do segundo de 0,95. 4. Observando duas mitocondrias distando 0,4 m uma da outra, com os dois sistemas pticos acima, explique se possvel individualizar cada uma delas emambos sistemas. Justifique.