SINTEZA

ADN

Sinteza ADN-ului

eveniment interfazic (etapa S a ciclului celular) ce consta in dublarea cantitatii de ADN prin autoreplicare semiconservativa

Ca urmare a sintezei ADN-ului, prin diviziunea celulara informatia genetica (parentala) se conserva si apoi se

transmite (in mare parte nemodificata)

in celulele fiice

Ciclul celular

MODELUL SINTEZEI ADN-ului

(IMAGINAT DE WATSON SI CRICK)

- valorifica structura tertiara a ADN

-replicarea este semiconservativa

prin modelul fermoarului

Momentele sintezei
dublul helix se desface sub actiune enzimatica: HELICAZE progresia ruperii legaturilor de hidrogen= asemanatoare unui fermoar PRIMAZELE initiaza sinteza preferential in anumite puncte bazele azotate expuse in urma desfacerii se cupleaza complementar cu bazele azotate din mediu cu ajutorul ADN - POLIMEARZEI III se refac cele 2 catene si apar 2 molecule noi sub actiune enzimatica catenele se rotesc formind helixul initial LIMITE - sinteza nu poate fi sincrona pe ambele catene deoarece acestea sunt antiparalele, iar ADN polimeraza III lucreaza numai in directia 5 -3

REPLISOMUL = un dispozitiv molecular complex care realizeaza replicarea

REPLISOMUL
este un complex alcatuit din structuri cu functii specifice in cadrul replicarii: POLIMERAZE (III si I) HELICAZE GIRAZE (topoizomeraze)- nu permit superspiralizari PRIMAZE - ARN-polimeraze LIGAZE SSB (single strand binding)- PROTEINE ce nu permit monocatenelor sa se apropie PROTEINE ce remodeleaza dublul helix

 Complementaritatea guverneaza modul de alipire a nucleotidelor pe catenele nou formate: A =T, G C Replicarea necesita prezenta unei catene matrita, de pe care sa se copieze informatia genetica. Fiecare catena este o matrita in replicarea semiconservativa

1 http://www.youtube.com/watch?v=teV62zrm2P0 3 http://www.youtube.com/watch?v=4jtmOZaIvS0

4 http://www.youtube.com/watch?v=hfZ8o9D1tus http://www.youtube.com/watch?v=AGUuX4PGlCc http://www.youtube.com/watch?v=cDlKrLJjRlY 2. http://www.youtube.com/watch?v=-mtLXpgjHL0 http://www.mcb.harvard.edu/Losick/images/TromboneFINALd.swf

Replicare mitoc /procariot http://www.wwnorton.com/college/biology/mbio/animations/main.asp?chn o=ch03a01 http://helicase.pbworks.com/Molecular+Biology+Movies+and+Animati ons

La eucariote pot exista mai multe origini de replicare (ori) cu aspect electronomicroscopic de BULE DE REPLICARE (repliconi). Replicarea are loc in ambele sensuri in fiecare replicon, pana cand repliconii vecini fuzioneaza si intreg ADN-ul este duplicat. Durata de replicare este de 4-5 ore desi viteza este de 5pb/secunda.

Complexul de initiere a replicarii

1) ADN polimeraza (tipurile ,,,,) sintetizeaza ADN in prezenta dezoxinucleotid-trifosfatului si a ionului de Mg2+ 4dNTP + ADN parental ADN progen - completeaza catena ADN in sens 5-3 2) trifosfati nucleotidici (dATP, dGTP, dTTP, dCTP ) 3) ioni de magneziu 4) primer este un oligonucleotid ARN, sintetizat de primaza sub actiunea ARN polimerazei este elongat in directia 5-3 localizarea si secventa primerului depind de proteinele de recunoastere ce aleg situsul de aliniere 5) ADN parental ca matrita 6) Helicaza, topoizomeraza

ADN polimeraza (Pol) tip alungeste primer-ul cu pana la 20 de nucleotide, fiind apoi preluata functia de Pol (care are si proprietatea de a cauta greselile) pe catena conducatoare si respectiv Pol (aceeasi functie, de proof-reading) pe catena decalata. Pol este implicata in repararea ADN-ului, excizand baze si sintetizand unele complementare matritei Pol de asemenea cu capacitate de cautare a greselilor in directia 3 -5, replica si repara ADNul mitocondrial

Complexul enzimatic care participa la sinteza se numeste PRIMOZOM ( Ssb proteine + helicaza + primaza dupa unii autori; complex de 7 proteine si enzime dupa alti autori) descris numai la procariote

Sinteza ADN se face diferit pe cele 2 catene : pe catena CONDUCATOARE se face direct, in sensul de actiune a ADN polimerazei-5-3 pe catena DECALATA se face pe segmente scurte fragmente OKAZAKI in prezenta primerului.

Pol III Catalytic Core: (core polymerase: , , ) (dimerization core polymerase) (dimeric clamp) (clamp loader): mediaza transferul subunitatii pe substratul in forma de duplex ADN - primer

ETAPELE REPLICARII ADN :

1. Desfacerea ( derularea ) helixului in prezenta ADN helicazei
2. SSB- proteinele nu permit monocatenelor sa se apropie 3. Replicarea incepe simultan pe ambele catene in directia 53: pe catena conducatoare este continua in prezenta ADN polimerazei epsilon si dNTP. pe catena decalata sinteza se face discontinuu in prezenta ADNpolimerazei delta + dNTP+ primaza +primer fragmentele Okazaki (unite prin ligaze, dupa indepartarea si inlocuirea primer-ului cu ADN) 4. Cele 2 molecule nou formate se rasucesc

Replicarea catenei decalate

DnaB catenele Helicaza desface

DnaG ARN Primaza sintetizeaza si alipeste un primer ARN, apoi ADN polimeraza III (la procariote) sau delta (la eucariote) fixeaza dNTP in directia 5 3 formandu-se fragmentele Okazaki

Replicarea

catenei decalate
ADN polimeraza va repeta mereu alungirea catenei decalate cu fragmente Okazaki. ADN polimeraza I (la procariote) si nucleaza RNaza H (la eucariote) inlocuieste primerii ARN cu ADN. In final toate golurile ramase in catena vor fi eliminate prin interventia ligazei, ce uneste fragmentele Okazaki.

Can you say Mechanical

Form follows function. The clamp part of DNA Polymerase keeps the replication machine on the DNA. Now thats just cool!

TIPURI ARN - ROL BIOLOGIC

1. ARNm (mesager), copie a ADN-ului nuclear, transporta informatia la ribozomi, unde este citita, in vederea

sintezei proteice.

1. Structura genei

 Pentru ca ARNpm sa devina ARNm:

matisare + CAP poliadenilarea capatului 3 acoperirea cu un strat proteic protector

SINTEZA ARNm

ARN MESAGER-ARNm
-reprezinta 2-4% din ARN celular -preia informatia de la ADN fiind complementar cu acesta (T U) -odata transcris se exporta in citoplasma unde se leaga de ribozomi se degradeaza in componente nucleotidice in prezenta ARN polimerazei. -este heterogen- cu masa moleculara mica, -are 150-12000 nucleotide, - este monocatenar, spiralat

 2. ARNr (ribozomal) intervine in construirea ribozomilor, dar este activ catalitic si in realizarea legaturilor peptidice are zone dublu catenare alternind cu zone monocatenare Functiile sale sunt inca putin intelese

ARN RIBOZOMAL-ARNr

80-85% din ARN celular

este constituentul major al ribozomilor are la eucariote 3 forme moleculare in functie de constanta de sedimentare: 5 S ARNr 18 S ARNr 28 S ARN (in functie de specie variaza de la 25 S la 30 S)

se sintetizeaza si matureaza in nucleol

in afara de 5 S ARNr se transcrie din ADN ribozomal existent pe cz. in regiunea organizatorului nucleolar
masa moleculara mare: 106 - 104 daltoni, 28 S ARNr si 5 S ARNr sunt in subunitatea ribozomala 60S, pe cand 18 S ARNr in cea 80S (eucariote) este implicat in sinteza de proteine.

A. DNA B. 5S rRNA C. Nucleolus D. (rDNA) E. Ribosome F. Cytoplasm G. Proteins H. 5S rRNA I. 18S-OS(mRNA) J. 4-(tRNA) K.Nuclear envelope L.Nucleopore M.Amino acid N.tRNA O.Ribosome

3. ARNt de transfer preia a.a. din citoplasma si ii transporta la ribosomi

ARN DE TRANSFER-ARNt
-8-10% din totalul ARN

- este scurt: 73 - 93 nucleotide, -transfera aminoacidul specific pe lantul polipeptidic la situsul ribozomal al sintezei proteice in timpul translatiei, -se sintetizeaza in nucleu, -are structura spatiala de frunza de trifoi -are dubla polaritate functionala: 1. o extremitate se temina cu secventa CCAunde se va fixa aminoacidul specific; 2. a doua polaritate este bucla centrala cu o secventa de 3 nucleotide (ANTICODON), complementara codonului de pe ARNm .

In toate ARNt se imperecheaza bazele complementare dand aspectul caracteristic (structura secundara) In bucle insa bazele nu sunt complementare si deci nu pot realiza punti de hidrogen. Structura tridimensionala tertiara face ca domeniile functionale sa fie cat de departe posibil una de alta: bucla cu anticodonul (corespunzator unui triplet de baze azotate) si trunchiul acceptor de a.a.

ARN DE TRANSFER-ARNt
trifoiul are in stanga bucla dihidrouracil, cu rol in recunoasterea ARNt ului de catre aminoacil ARNt sintetaza, care il incarca cu aminoacidul specific corespunzator anticodonului uneori diferite ARNt uri transporta acelasi aa.

trifoiul are in dreapta bucla T (PSI) C, unde PSI = pseudouridin; aici se fixeaza ARNt ul de 5S- ARNr al subunitatii mari a ribosomului

Alte tipuri de ARN NECODANT- (pe langa cel ribozomal si de transfer) sunt ARN-urile reglatoare
ARN-ul regator: poate controla expresivitatea genica nu se transcrie in proteine (=necodant) poate cataliza anumite reactii chimice Exemple:
microARN (miRNA): 21- 22 nucleotide small interfering RNAs (siRNA): 20 - 25 nucleotide ambele tipuri pot determina o metilare tintita ce va amplifica sau diminua transcriptia ARN lung necodant: imbraca la femei cz. X ce are gena XIST (X inactivated specific transcript) activa, adica cz. supus lyonizarii.

FUNCTIILE ACIZILOR NUCLEICI

ADN o autocatalitica (autoreplicare, reparare)-conserva informatia genetica; o heterocatalitica-datorita structurii primare aperiodice transcrie informatia genetica in ARN- proteinecaracter. o Variabilitate ARN ARNm-in transcriptie ARNr-cupleaza ribozomii in procesul de translatie. ARNt-transporta aminoacizii spre poliribozomi.