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1
CARACTERIZACIÓN FISICOQUÍMICA DE LOS EXTRACTOS DE LA SEMILLA
DEL ÁRBOL DE NEEM (Azadirachta Indica) EN EL DEPARTAMENTO DEL
CESAR
2
A Dios por su inmensa misericordia y amor,
A mi Papá y Mamá por su paciencia y por haberme
brindarme su apoyo incondicional,
A mis hermanos por su ayuda y fortaleza,
A todos mis Familiares, Amigos y demás personas que
siempre estuvieron dispuestas a colaborarme
en esta labor y en especial a
la directora del proyecto.
3
TABLA DE CONTENIDO
Pág.
LISTA DE CUADROS 7
LISTA DE FIGURAS 9
LISTA DE ANEXOS 10
RESUMEN 11
ABSTRACT 12
INTRODUCCIÓN 13
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA 15
1.1. Descripción Del Problema 15
1.2. Formulación Del Problema 16
2. JUSTIFICACIÓN 17
3. OBJETIVOS 19
3.1. Objetivo General 19
4.2. Objetivos Específicos 19
4. MARCO TEÓRICO 20
4.1. Antecedentes Históricos 20
4.2. Marco Legal 23
4.3. Marco Conceptual 25
4.3.1. Árbol Del Neem 25
4.3.1.1. Principales Características Del Árbol Del Neem 26
4.3.1.1.1. Descripción Botánica 26
4.3.1.1.2. Descripción Taxonómica 26
4.3.1.1.3. Organografía 27
4.3.1.1.4. Ecología 27
4.3.1.1.5. Condiciones Para La Propagación Y Desarrollo 28
4.3.1.2. Componentes Químicos 29
4.3.1.2.1. Terpenoides 31
4
4.3.1.2.1.1. Clasificación 32
4.3.1.2.1.2. Terpenoides Con Poder Biocida Presentes En El Árbol Del Neem 35
4.3.1.2.1.2.1. Azadiractina 36
4.3.1.2.1.2.2. Meliantrol 39
4.3.1.2.1.2.3. Salannina 40
4.3.1.2.1.2.4. Nimbina Y Nimbidina 41
4.3.1.3. Procedimientos Para La Elaboración Del Insecticida Natural 41
4.3.1.3.1. Tecnología De Producción Artesanal 41
4.3.1.3.1.1. Empleo De La Semilla Entera 42
4.3.1.3.1.2. Empleo De La Hoja 43
4.3.1.3.2. Tecnología De Producción Industrial 43
4.3.1.3.2.1. Empleo Del Aceite 44
4.3.1.3.2.1.1. Métodos De Extracción Del Aceite 44
4.3.1.3.2.1.1.1. Extracción Mecánica 44
4.3.1.3.2.1.1.2. Extracción Con Solvente 46
4.3.1.3.2.2. Empleo De La Torta 48
4.3.1.4. Mecanismo De Acción Del Insecticida 49
4.3.1.5. Insectos Que Controla 51
5. METODOLOGÍA 53
5.1. Introducción Metodología 53
5.1.1. Enfoque De Investigación 53
5.1.2. Población 53
5.1.3. Selección De Variables 53
5.1.4. Diseño Experimental 56
5.1.5. Técnicas Utilizadas 58
5.2. Procedimiento Experimental 60
5.2.1. Selección De La Muestra 60
5.2.2. Acondicionamiento Del Fruto 61
5.2.3. Determinación de Características Fisicoquímicas de la Semilla Molida 61
5.2.4. Extracción De Aceite 62
5
5.2.5. Determinación de Características Fisicoquímicas del Aceite 64
5.2.6. Determinación de Características Fisicoquímicas de la Torta 64
5.2.7. Extracción del Extracto Presente en la Torta 65
5.2.8. Análisis Fisicoquímico de El Extracto de la Torta 66
6. Resultados Y Análisis 67
6.1. Caracterización Proximal De La Semilla Molida Del Árbol Del Neem 67
6.2. Extracción Y Características Fisicoquímicas Del Aceite de la Semilla Molida
Del Árbol Del Neem 69
6.3. Características Fisicoquímicas De La Semilla Desengrasada O Torta Del
Árbol Del Neem 71
6.4. Extracción Del Extracto Presente En La Torta 72
6.4.1. Análisis De Varianza Para El Diseño Unifactorial 74
6.4.2. Método De Análisis De Media 78
6.5. Análisis Fisicoquímico Del Extracto Presente En La Torta 81
6.6. Características Fisicoquímicas Del Sólido Agotado 84
7. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES 86
BIBLIOGRAFÍA 90
ANEXOS 94
6
LISTA DE CUADROS
Pág.
7
Cuadro Nº 16. Análisis Fisicoquímicas Del Extracto Presente En La
Torta 84
Cuadro Nº 17. Características Fisicoquímicas Del Sólido Agotado 85
8
LISTA DE FIGURAS
Pág.
9
LISTA DE ANEXOS
Pág.
10
RESUMEN
11
ABSTRACT
The tree of the Neem is known by Azadirachta Indica's botanical name, is a native
tree of the indies and is spread in several municipalities of the department of the
Cesar. Given the need that exists to use the nature as an equilibrador of the
environmental pollution and in addition chemists diminish the utilization of
insecticides, becomes imperative, across the investigation (research) to generate
bioinsecticidas that help to the agricultural sector in the integrated managing of
plagues, as a healthy option. The aim of this work was to characterize Physicist-
Chemically the present extracts in the seed of the tree of the Neem; which contain
a series of components bases of biodegradable insecticides. Several
physicochemical parameters decided of each one of the extracts obtained in this
seed. I take the seed as a base of analysis ground without treating, the oil obtained
by solvent and the cake desengrasada to obtain a base extract ethanol that
presents suitable conditions as natural insecticide. Both to the oil and to the extract
ethanol, him(her) there were realized physicochemical volumetric tests(proofs),
gravimétricas and cromatrográficas, where there was verified that they have the
same active components of other parts of the world. The active components
(terpenoides) that this seed contains are the base of production of natural
insecticides used on different parts (reports) of Latin America. These
physicochemical analyses were compared with analysis of other countries to look
at the relation that has use these extracts so that there could be realized
insecticides that do not affect the environment and are very effective to attack
insects.
12
INTRODUCCIÓN
1
NATIONAL RESEARCH COUNCIL. Neem: A Tree For Solving Global Problems. National
Academy Press. Washington DC. USA. 1992.
2
BRIMNER, T. AND G. BOLAND. A review of the non-target effects of fungi used to biologically
control plant diseases. Agriculture, ecosystems and Environment. 2003.
13
Gran parte de la literatura relacionada con la extracción de los extractos de Neem
consiste de patentes que se enfocan mayormente en la descripción de diversos
procedimientos de extracción y en la comparación de la efectividad de diferentes
solventes3. Sin embargo, en el departamento del Cesar no hay una información
concreta de las semillas del árbol Neem ni de los extractos que estas contenían.
Ante estas circunstancias se ha respondido con procesos de investigación
orientados a la búsqueda de nuevas fuentes potenciales de desarrollo para la
producción de nuevos métodos con el fin de obtener y producir insecticidas
naturales más competitivos.
Por estas razones, se buscaron alternativas viables y seguras con respecto a los
insecticidas convencionales, para así contribuir a aumentar el interés por la
producción y empleo de extractos naturales, en especial los obtenidos del árbol
del Neem.
3
NAGASAMPAGI et al., 1999; LARSON, 1985; SANKARAM et al., 1999; MOORTY y KUMAR,
1998; ROLAND y BLOUIN, 1996.
14
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
Este árbol se usa desde tiempos prehistóricos y era utilizado sobre todo en la
parte medicinal. Se dice que es un “árbol noble” porque puede servir de: abono,
medicina, insecticida, crece con facilidad, necesita poca atención, purifica el aire,
proporciona madera y también da sombra, una de las características notables es,
que está virtualmente libre de insectos y nematodos5.
En el departamento del Cesar el árbol del Neem ha sido introducido por medio de
personas particulares que lo han sembrado de forma ornamental sin saber la
cantidad de propiedades que éste posee y los grandes usos que se le pueden dar
potencialmente en la industrialización de productos.
15
al incremento del empleo, al retorno al campo y al desarrollo en general de la
región.
Estas razones son mas que suficientes para especular sobre la importancia del
tema, especialmente la posibilidad de contar con el árbol del Neem en el
departamento el Cesar y mirando que las características ambientales y de suelos
son parecidas a las de otros países, se toma la decisión de analizar si los
extractos de la semilla del árbol del Neem sembrado en el departamento del Cesar
contienen los compuestos de acción insecticida.
16
1. JUSTIFICACIÓN
Una planta que se presenta como promisoria para la producción del insecticidas
es el árbol del Neem (Azadirachta indica), el cual según el Consejo de
Investigación Nacional de los Estados Unidos (NRC) en un informe titulado “El
Neem aporta soluciones a problemas globales”, considera este árbol como “la más
6
AHMED, S., C. MITCHELL, AND R. SAXENA. Renewable resource utilization for agriculture and
rural development and environmental protection: Use of indigenous plant material for pest control
by limited resource farmers. Planning Wkshp, Botanical pest control proyect. Int. Rice Res. Inst. Los
Baños, Philippines. 1984.
17
prometedora de todas las especies vegetales por el hecho de que puede
beneficiar eventualmente a todos los habitantes de éste planeta”7.
Trabajos relacionados con el árbol del Neem son conocidos en todo el mundo.
Luego de ciertas observaciones en África en 1959 sobre el Neem, y de otras
investigaciones publicadas en la India, a partir de la década de los 90´s, varios
cientos de investigadores comenzaron a estudiar este árbol8.
En Colombia, los estudios realizados con el árbol de Neem son muy recientes; En
el departamento del Cesar la siembra del árbol de Neem se ha venido
adelantando por su uso ornamental en perímetros urbanos, y como control
biológico de moscas y garrapatas en las zonas rurales.
7
CABAL, Esteban. Revista Natural: Neem, el árbol del siglo XXI. Madrid - España 2000.
8
PEREZ, R. Asesora grupo estatal alimentos, MINAZ, 01/2002. Carta agropecuaria azucarera.
Tema: El árbol del Neem. http: //www.virtualcentre.org/es/enl/keynote5/htm, en GRUPO DE
INVESTIGACIÓN YAGUA. Validación Integral del Sistema Agroforestal con árbol del Neem en la
Vereda Guabinal Cerro, Girardot- Cundinamarca. Universidad Piloto de Colombia y Universidad
Distrital Francisco José de Caldas. Bogotá, D. C., 2005.
18
3. OBJETIVOS
Estudiar los potenciales usos que puedan tener los extractos de la semilla
del árbol del Neem.
19
4. MARCO TEÓRICO
Las plantas han evolucionado por más de 400 millones de años y para
contrarrestar el ataque de los insectos han desarrollado mecanismos de
protección, como la repelencia y la acción insecticida. El método de control de
plagas más antiguo fueron los sacrificios humanos, pero dada su baja efectividad,
o tal vez la falta de voluntarios, se comenzaron a utilizar polvos y extractos
vegetales, de lo cual hay antecedentes incluso en la Biblia9.
9
ADDOR, R.W. Insecticides. In: Godfrey C.R.A. (Ed) Agrochemicals from natural products. Marcel
Dekker. 1995.
20
excelentes resultados como controladoras de insectos también han resultado ser
fuente de compuestos para combatir enfermedades como el cáncer10.
El uso masivo de estos insecticidas ha tenido un camino muy difícil pues en una
primera época las recopilaciones que hacían los investigadores, entre los
agricultores e indígenas, tenían mucho de superstición y cuando se les sometió a
pruebas con rigor científico no mostraron efecto alguno. Después de la segunda
guerra mundial las pocas plantas que mostraron resultados auspiciosos, y
alcanzaron a usarse masivamente, fueron reemplazadas por los insecticidas
sintéticos. Con la aparición en la década de los cuarenta de estos insecticidas
sintéticos se pensó que los insecticidas vegetales desaparecerían para siempre
pero problemas como la contaminación del ambiente, los residuos en los
alimentos y la resistencia por parte de los insectos han hecho que hoy en día
vuelvan a ser tomados en cuenta11.
10
ARNASON, J.T., B.J. PHILOGENE AND P. MORAND (EDS). Insecticides of plant origin.
American Chemical Society, Washington, DC. USA. 1989.
11
HEAL, R., E. ROGERS., R.T. Wallace AND O. Starnes. A survey of plants for insecticidal activity.
Lloydia. 1950.
12
SAXENA, R.C., Z.R. KHAN, Y N.B. BAJET. Reduction of tungro virus transmission by Nephotettix
virescens (homóptera: Cicadellidae) in Neem cake-treated rice seedlings. J. Econ. Entomol. 1987.
21
extractos son fáciles de procesar y formular; y proporciona seguridad a los
humanos y animales al usarlo y consumirlo en las diferentes formas y propósitos13.
13
AHMED, S., C. MITCHELL, AND R. SAXENA. Renewable resource utilization for agriculture and
rural development and environmental protection: Use of indigenous plant material for pest control
by limited resource farmers. Planning Wkshp, Botanical pest control proyect. Int. Rice Res. Inst. Los
Baños, Philippines. 1984.
14
LEOS, M.J. Y R.P. SALAZAR S. El árbol insecticida neem (Azadirachta indica A. Juss) en
México. Universidad Autónoma de Nuevo León. Facultad de Agronomía. Folleto Técnico No. 3.
Marín, Nuevo León, México. 1992.
15
FIGUEROA, P. Adalberto. Ciencia al día: Universidad Nacional de Colombia. El Árbol Milagroso,
Sirve Para Todo. Palmira, Colombia. 2007.
22
Doradal específicamente y algunos otros cultivos aislados en la zona norte del
departamento del Valle del Cauca16.
En Colombia no se han desarrollado muchos trabajos con el árbol del Neem, pero
podemos nombrar cuatro en especial: el primero por parte de estudiantes de
Zootecnia de la universidad de Fusagasuga (2004), en el manejo de Neem para el
control de garrapata Labophilus sp., en el ganado de la zona; el segundo realizado
por estudiantes de Ingeniería Química de la Universidad Nacional de Colombia
(2004), para la determinación y aislamiento de más de 20 moléculas efectivas en
el control de insectos; el tercero por estudiantes de administración y gestión
ambiental de la Universidad Piloto de Colombia (2007), modelo empresarial
ecoeficiente para la transformación y comercialización de los productos derivados
del sistema agroforestal con árbol del Neem, en la vereda guabinal-cerro, Girardot-
Cundinamarca y un cuarto por el Grupo de Entomología Médica de la Universidad
de Antioquia (2002), en la evaluación de la actividad insecticida del Neem sobre la
cucaracha Periplaneta Americana.
16
GRUPO DE INVESTIGACIÓN YAGUA. Validación Integral del Sistema Agroforestal con árbol del
Neem en la Vereda Guabinal Cerro, Girardot- Cundinamarca. Yagua. Universidad Piloto de
Colombia y Universidad Distrital Francisco José de Caldas. Bogotá, D. C., 2005.
23
El artículo 80 de la Carta Política, preceptúa que le corresponde al Estado
planificar el manejo y aprovechamiento de los recursos naturales, para garantizar
su desarrollo sostenible, su conservación, restauración o sustitución, y además,
debe prevenir y controlar los factores de deterioro ambiental, imponer las
sanciones legales, y exigir la reparación de los daños causados.
La parte IV del Decreto – Ley 2811 de 1974 se refiere a: “De las normas de
preservación ambiental relativas a elementos ajenos a los recursos naturales” y en
el Título I: “Productos Químicos, Sustancias Tóxicas y Radioactivas”, establece:
“Artículo 32”. Para prevenir deterioro ambiental o daño en la salud del hombre y
de los demás seres vivientes se establecerán los requisitos y condiciones para la
importación, la fabricación, el transporte, el almacenamiento, la comercialización,
el manejo, el empleo o la disposición de sustancias y productos tóxicos o
peligrosos.
24
4.3. Marco Conceptual
El árbol del Neem (Azadirachta indica), es una especie vegetal de una importancia
potencial relevante, en virtud de sus características muy distintas, las cuales se
reconocen en el mundo científico de occidente, y reconocido su uso milenario en
las culturas del viejo mundo. Esta especie arbórea, ha despertado la atención del
mundo científico biológico, por sus múltiples propiedades y usos; también se le
conoce con los nombres comunes de “cinamomo”, “acederaque”, y “margoza”, o
“la planta milagrosa”, o “la botica del pueblo” como lo llaman en la India, donde
desde hace siglos los indios recurren a este árbol para aliviar el dolor, la fiebre y
las infecciones. Por ese motivo, en los últimos años ha ido en aumento el interés
de la ciencia por esta especie, ya que dos decenios de investigación revelan
resultados prometedores en tantos campos, que esta especie pudiera aportar
enormes beneficios a la humanidad17.
17
OSUNA, L.E. Producción de plantas y establecimiento y manejo de plantaciones de neem
(Azadirachta indica A. Juss). Instituto Nacional de Investigaciones Forestales Agrícolas y
Pecuarias-INIFAP. Centro de Investigación Regional del Noroeste-CIRNO. Campo Experimental
Todos Santos-CETS. Folleto Técnico Núm. 5. México. 2000.
25
4.3.1.1. Principales Características Del Árbol Del Neem
Reino: Plantae
Filo: MAGNOLIOPHYTA
Clase: Magnoliopsida
Orden: Melia
Familia: Meliaceae
18
STONEY, C. 1998. Una guía útil para los árboles de uso múltiple. Uso del Neem como agente de
Control Biológico de Plagas. Program Officer y Erin Hughes, Program Associate Winrock
International. Hoja informativa, FACT 98–04S, Junio 1998.
http://www.winrock.org/forestry/factpub/spusonim.htm. En GRUPO DE INVESTIGACIÓN YAGUA.
Validación Integral del Sistema Agroforestal con Árbol del Neem. Bogotá, D.C. 2005.
26
Género: Azadirachta
Nombre científico: Azadirachta indica A. Juss.
Sinónimos: Melia indica, Melia azadirachta
Nombres comunes: Árbol del Neem, margosa, limba, cinamomo, mimba, nimba,
kohomba y lila india.
4.3.1.1.3. Organografía
4.3.1.1.4. Ecología
19
Ibid. p. 94.
27
metros de la superficie; sin embargo, se desarrolla mejor en zonas que reciben de
450 a 1200 mm al año20.
El árbol Neem se propaga naturalmente por semillas; los frutos cuando están
maduros caen al suelo pudiendo germinar si las condiciones son adecuadas,
siendo su capacidad de germinación muy alta durante las primeras 4 semanas,
descendiendo luego rápidamente. Los frutos empiezan a aparecer cuando el árbol
alcanza una edad de 3 a 5 años, hasta los 10 años la producción de frutos no es
rentable.
20
STONEY, C. 1998. Una guía útil para los árboles de uso múltiple. Uso del Neem como agente de
Control Biológico de Plagas. Program Officer y Erin Hughes, Program Associate Winrock
International. Hoja informativa, FACT 98–04S, Junio 1998.
http://www.winrock.org/forestry/factpub/spusonim.htm. En GRUPO DE INVESTIGACIÓN YAGUA.
Validación Integral del Sistema Agroforestal con Árbol del Neem. Bogotá, D.C. 2005.
21
Ibid. p. 95.
22
SÁNCHEZ, R. Raúl. Zoe tecno-campo: Aceite de Neem un insecticida ecológico para la
agricultura. http://www.zoetecnocampo.com/Documentos/Neem/neem01.htm. 2007.
28
El desarrollo más o menos óptimo de este árbol se ve condicionado por los
siguientes factores:
- Humedad relativa.
- Tipo de suelo (acidez o basicidad).
- Edad del árbol (para descubrir a que edad el contenido de azadiractina es
mayor).
29
terpenoides. El más activo es la azadiractina, de la que existen varios tipos que
varían desde la azadiractina A a la azadiractina K23.
Existen muchos más compuestos activos en el árbol del Neem. De las hojas se
pueden aislar varias moléculas como un flavonoide polifenólico llamado
quercetina, un β-sitosterol, el nimbosterol, nimbina y otros liminoides, como la
nimocinolida e isonimocinolida. También se han aislado un grupo de alcanos de
entre 14 y 31 carbonos, aminoácidos y ácidos grasos. De las flores se extrae un
aceite que contiene sesquiterpenos, nimbosterol y numerosos flavonoides entre
los que destacan la melicitrina y el kaempferol. Las flores producen una cera
compuesta por una mezcla compleja de ácidos grasos (araquídico, esteárico,
palmítico, oleico y linoléico). La corteza y madera del árbol del Neem son también
fuente de numerosos principios activos: nimbina, nimbidina, nimbinina,
nimbosterol, margosina, nimbineno y algunos diterpenos como la nimbinona,
nimbocilina, nimbidiol y nimbiona25.
Pero sin duda el elemento más interesante en la bioquímica del Neem son las
semillas, por su riqueza en lípidos y la presencia de moléculas con una intensa
actividad biológica. El hueso de la drupa contiene una o dos semillas y de ellas se
obtiene un aceite compuesto de ácido oleico (50-60%), palmítico (13-15%),
23
SAXENA, S.K. Y SAXENA, PURNIMA: El Neem en el control de nematodos: Estudio en el que
se demuestra la eficacia del aceite de Neem en el control de nemátodos.1995.
24
Ibid. p. 85.
25
El portal de los productos del árbol del Neem en España. http://www.neem.es/bioq.html. 2008.
30
esteárico (14-19%), linoleico (8-16%) y araquídico (1-3%), composiciones que
varían según el método de extracción.
4.3.1.2.1. Terpenoides26
Los terpenoides, algunas veces referidos como isoprenoides, son una vasta y
diversa clase de compuestos orgánicos similares a los terpenos. El nombre
proviene que los primeros miembros de esta clase fueron derivados del aguarrás
“turpentine” en inglés, “terpentin” en alemán. Los terpenoides pueden verse como
formados por unidades de 5-carbono isopreno (pero el precursor es el isopentenil
difosfato), ensambladas y modificadas de muchas maneras diferentes, siempre
basadas en el esqueleto del isopentano. La mayoría de los terpenoides tiene
estructuras multicíclicas, las cuales difieren entre sí no sólo en grupo funcional
sino también en su esqueleto básico de carbono. Los monómeros generalmente
son referidos como “unidades de isopreno” porque la descomposición por calor de
muchos terpenoides da por resultado ese producto; y porque en condiciones
químicas adecuadas, se puede inducir al isopreno a polimerizarse en múltiplos de
26
R. CROTEAU, T. M. KUTCHAN, N. G. LEWIS. "Natural Products (Secondary Metabolites)". En:
Buchanan, Gruissem, Jones (editores). Biochemistry and Molecular Biology of Plants. American
Society of Plant Physiologists. Rockville, Maryland, Estados Unidos. 2000. Capítulo 24.
31
5 carbonos, generando numerosos esqueletos de terpenoides. Por eso se
relaciona a los terpenoides con el isopreno, si bien se sabe ya desde hace más de
100 años que el isopreno no es el precursor biológico de esta familia de
metabolitos.
Los terpenoides de las plantas son extensamente usados por sus cualidades
aromáticas. Juegan un rol importante en la medicina tradicional y en los remedios
herbolarios, y se están investigando sus posibles efectos antibacterianos y otros
usos farmacéuticos. Están presentes, por ejemplo, en las esencias del eucalipto,
los sabores del clavo y el jengibre. También en el citral, mentol, alcanfor, y los
cannabinoides. La biosíntesis de los terpenoides en las plantas es a través de la
vía del ácido mevalónico.
4.3.1.2.1.1. Clasificación28
Los terpenos son hidrocarburos que pueden verse como una combinación de
numerosas unidades isopreno, por lo general unidas de forma cabeza-cola, pero
también pueden darse combinaciones cabeza-cabeza y algunos compuestos
27
GOODWIN TW. Aspects of terpenoid chemistry and biochemistry. Academic Press, Londres.
1971.
28
JUDD, W. S. CAMPBELL, C. S. KELLOGG, E. A. STEVENS, P.F. DONOGHUE, M. J. Plant
systematics: a phylogenetic approach, Second Edition.Sinauer Axxoc, USA. Capítulo 4. 2002.
32
están formados por uniones cabeza-medio. Los terpenoides pueden ser
considerados como terpenos modificados donde grupos metilo han sido
reacomodados o removidos, o a los que se les han añadido átomos de oxígeno.
Algunos autores usan el término terpeno para referirse a los terpenoides.
33
xantosina, no es sintetizada directamente de 3 unidades isopreno sino
producida por un “cleavage” asimétrico de un carotenoide de 40 unidades.
34
el dolicol), y también a enormemente largos polímeros como el “rubber”,
usualmente encontrado en el látex.
Hasta ahora, al menos nueve triterpenos del neem han demostrado una habilidad
para impedir el crecimiento en los insectos, afectando a un número de especies
que incluyen algunas de las plagas más mortíferas para la agricultura y la salud
humana. Son los componentes azadiractina, salannina, melantriol, nimbina y
nimbidina los más conocidos y por ahora al menos, parecen ser los más
significativos.
35
4.3.1.2.1.2.1. Azadiractina29
29
SÁNCHEZ, R. Raúl. Zoe tecno-campo: Aceite de Neem un insecticida ecológico para la
agricultura. http://www.zoetecnocampo.com/Documentos/Neem/neem01.htm. 2007.
36
Esta materia activa no mata insectos, al menos no inmediatamente, sino que en
lugar de ello, repele y destruye su crecimiento y reproducción. Los últimos 20 años
de investigación han mostrado que es uno de los más poderosos reguladores de
crecimiento y frenador de la alimentación que se ha probado. Repele y reduce la
alimentación de muchas especies de plagas de insectos así como de algunos
nemátodos. Algunos autores demostraron una reducción en la síntesis de
ecdisona al aplicar el principio activo. Otros autores (Rembold et al., 1984),
sugieren que la azadiractina interviene en el sistema neuroendocrino para
controlar la síntesis de la hormona ecdisona y juvenil.
La azadiractina aparece por tanto como una materia activa de origen natural que
resulta bastante eficaz; de hecho, es tan potente que una simple señal de su
presencia previene a algunos insectos de incluso tocar las plantas. No obstante se
han mostrado algunas limitaciones sobre todo debido al efecto de los rayos
ultravioletas sobre esta sustancia que aceleran su degradación. El efecto residual
dura unos cinco días, aunque los efectos juvenoides, es decir sobre el crecimiento,
pierden su actividad normalmente después de uno o dos días bajo condiciones de
campo30.
37
ninfas tratadas con el extracto, murieron durante sucesivos estados de crecimiento
y las pocas que sobrevivieron hasta forma adulta, tenían alas y tórax malformados.
Se demostró que la azadiractina era eficaz contra el escarabajo de judía mejicano
(Epilachna viriavestis) y contra el escarabajo de la patata (Leptinotarsa
decemlineata). Se observó que casi todas las hembras pararon de poner huevos.
Algunas hembras habían sido completamente esterilizadas y el efecto era
irreversible.
Hay que tener en cuenta el efecto que la radiación solar produce sobre su eficacia,
ya que causa una disminución sobre su efecto anticomida, no obstante se puede
evitar si se mezcla el aceite de Neem, con aceite de angélica, ricino y cáñamo.
Por otra parte el efecto secundario anticomida también ha sido explicado como un
posible efecto de la azadiractina sobre los ecdiesteroides. No obstante también ha
quedado probado que algunos efectos reguladores del crecimiento del
azadiractina se entienden por la acción directa de esta sobre la movilidad intestinal
31
STEETS, R. AND H. SCHMUTTERER. The effect of azadirachtin on the longevity and
reproduction of Epilachna varivestis Muls. (Coleoptera: Cocinellidae). 1975. p.176.
38
en el caso de Locustidae migratoria. Esto quizás lleva a interferir en el proceso de
la metamorfosis influyendo en las diferentes etapas de esta.
4.3.1.2.1.2.2. Meliantriol32
Fue aislado por primera vez por Lavie en 1967. Su estructura es también muy
complicada al igual que la de la azadiractina. Este compuesto actúa también como
inhibidor de la alimentación. Hace posible que en concentrados extremadamente
bajos, los insectos cesen de comer. Además también actúa sobre el crecimiento
de los insectos y afecta también a nemátodos.
32
TOVAR, H.H. El neem. Insecticida Botánico. Los insecticidas naturales inician un cambio radical
en el control de plagas. Tecnoagro. Año 1. Núm. 2. Naucalpan, Estado de México. México. 2000.
39
La demostración de su habilidad para prevenir el mascado de las langostas en los
cultivos, fue la primera prueba científica del uso tradicional del Neem para el
control de insectos en los cultivos de La India.
4.3.1.2.1.2.3. Salannina33
Fue la tercera materia activa aislada del Neem. Estudios indican que este
compuesto inhibe también, poderosamente la alimentación, pero no influye en los
distintos cambios hasta que los insectos no llegan a ser adultos34.
33
SÁNCHEZ, R. Raúl. Zoe tecno-campo: Aceite de Neem un insecticida ecológico para la
agricultura. http://www.zoetecnocampo.com/Documentos/Neem/neem01.htm. 2007.
34
COHEN, E., QUISTAD, G.B. Y CASIDA, J.H. 1996. Cytotoxicity of nimbolide, epoxyazadiradione
and other liminoids from neem insecticide. Life Sciences. 1996. p.1075.
40
4.3.1.2.1.2.4. Nimbina y Nimbidina
35
SODEPAZ, 2002. Proyecto introducción del árbol del Neem en
Cuba.http://www.sodepaz.org/nim/ en GRUPO DE INVESTIGACIÓN YAGUA. Validación Integral
del Sistema Agroforestal con árbol del Neem en la Vereda Guabinal Cerro, Girardot-
Cundinamarca. Universidad Piloto de Colombia y Universidad Distrital Francisco José de Caldas.
Bogotá, D. C., 2005.
41
Figura Nº 7. Elaboración Artesanal De Insecticida Natural Neem
42
Las semillas después de secadas hasta alcanzar entre 8 y un 10 % de humedad,
son sometidas a un proceso de molido, utilizando molinos manuales o eléctricos
en dependencia de la disponibilidad local; esta operación se regulará para lograr
un tamaño de la partícula entre 1 y 2 mm a fin de obtener un buen proceso de
extracción del principio activo cuando se elabore el extracto acuoso, que se
empleará en el control de plagas de insectos y ácaros, y en forma de polvo para el
control de los nemátodos e insectos que atacan el cogollo del maíz y el sorgo. El
producto obtenido se envasa en bolsas plásticas con capacidades de 1 y 5 Kg;
posteriormente se almacenan durante un mes o más en condiciones de ambiente
fresco.
La hoja para ser utilizada como insecticida o antiparasitario durante algún tiempo,
se debe deshidratar manteniendo su color verde claro, luego se procede al molido,
envase y conservación igual que la semilla.
La hoja verde para uso emergente y limitado, puede ser aplicada en forma de
extracto acuoso en el control de plagas agrícolas y de ectoparásitos.
43
4.3.1.3.2.1. Empleo Del Aceite
Por esta vía, la producción de los insecticidas utiliza como materia prima la
almendra de la semilla descascarillada, la cual se somete a un proceso de
prensado donde se extrae el aceite que se filtra y luego se formula empleando
diferentes sustancias orgánicas y emulsificantes, así como otros coadyuvantes.
También con el aceite y el residuo, se puede elaborar ungüento, pasta y pomada
para emplear en el control de ectoparásitos en animales.
44
naturales que no hayan estado en contacto con disolventes o productos químicos,
requiriendo el uso de la extracción mecánica. En tercer lugar, la extracción
mecánica puede crear una torta de alto contenido proteico como alimento para
animales rumiantes, que se vende a un precio más alto que la torta proveniente de
la extracción con solventes. Por último, la extracción mecánica es considerada a
menudo más confiable que el disolvente en el tratamiento de la extracción de
materiales difíciles (Copra y Palm Kernel), en caliente y climas tropicales.
45
Después de la separación gravimetríca, el aceite es entonces bombeado a través
de un screener vibrador o mediante una hoja de filtro a presión para la separación
final de partículas del grano molido. Partículas de grano molido separadas de las
del flujo de aceite limpio están saturadas con el aceite y el reciclado en el proceso
por delante de la amplia difusión por la prensa.
46
A causa de las consideraciones de seguridad, el proceso de extracción por
solvente se construye en una instalación de proceso de preparación de la semilla.
El proceso de extracción por solvente consta de cinco unidades de procesos
estrechamente relacionados entre sí: extracción por solvente, desolventización de
grano molido, secado del grano molido y la refrigeración, destilación de miscelas y
recuperación de solventes.
El extractor hace parte del equipo en los procesos de extracción por solventes,
donde la fracción del aceite vegetal del material oleaginoso es separada de la
fracción del grano molido por la disolución de la fracción de aceite en el disolvente.
Separado el material de la oleaginosa se transporta desde el proceso de
preparación de las semillas a la extracción por solvente y entra en el proceso de
extracción por solventes. El solvente de extracción transmite el material preparado
de su entrada a su salida, con tal que el material preparado resida
aproximadamente 30 a 120 minutos de tiempo. Mientras que el material está
siendo transmitido adelante, la miscela (disolvente y solución de aceite) es lavada
a través del lecho para extraer el aceite vegetal del material.
47
presión interna se establece dentro de la célula y concentrada la miscela, se
difunde hacia fuera de la célula. Esta miscela concentrada se difunde a través de
las paredes de las células adyacentes y, finalmente, llega a la superficie de la
partícula.
48
Cuadro Nº 2. Cantidad De Azadiractina Obtenido Usando Distintos Solventes
SOLVENTE USADO AZADIRACTIN ENCONTRADO (µg/10µl)
Metanol 2,19
Acetona 0,74
Etil-éter 1,28
Las propiedades del Neem vienen basadas en el parecido que presentan sus
componentes con las hormonas reales, de tal forma que los cuerpos de los
insectos absorben los componentes del Neem como si fueran hormonas reales y
estas bloquean su sistema endocrino. El comportamiento profundamente
arraigado resultante y las aberraciones psicológicas, dejan a los insectos tan
confundidos en su cuerpo y cerebro, que no pueden reproducirse y sus
poblaciones se reducen mucho36.
Los efectos precisos de varios extractos del Neem son a veces difíciles de
concretar. La complejidad de ingredientes del Neem y sus formas de mezclarlos y
de acción tan variadas, complican en gran medida su aclaración. Pero, a pesar de
las dudas en varios detalles, se sabe bastante bien y es de sobra conocido que
varios extractos del Neem actúan en diversos insectos de diferentes maneras:
36
SAXENA, S.K. Y SAXENA, PURNIMA: El Neem en el control de nematodos: Estudio en el que
se demuestra la eficacia del aceite de Neem en el control de nemátodos.1995.
49
Destruyendo e inhibiendo el desarrollo de huevos, larvas o crisálidas.
Bloqueando la metamorfosis de las larvas o ninfas.
Destruyendo su apareamiento y comunicación sexual.
Repeliendo a las larvas y adultos.
Impidiendo a larvas poner huevos.
Esterilizando adultos.
Envenenando a larvas y adultos.
Impidiendo su alimentación.
Bloqueando la habilidad para tragar (reduciendo la movilidad intestinal).
Enviando mayores errores a su metamorfosis en varios periodos de
desarrollo del insecto.
Inhibiendo la formación de quitina (material del que se compone el
esqueleto del insecto).
Impide que se realicen las mudas, necesarias para entrar en la siguiente
etapa del desarrollo, de tal forma que actúa como regulador de crecimiento
del insecto.
37
SÁNCHEZ, R. Raúl. Zoe tecno-campo: Aceite de Neem un insecticida ecológico para la
agricultura. http://www.zoetecnocampo.com/Documentos/Neem/neem01.htm. 2007.
50
4.3.1.5. Insectos Que Controla
Homóptera. Afidos (de los cítricos, del algodón, caña de azúcar), psilidos,
mosquita blanca y otros homópteros son sensibles a los productos de
Neem. La ninfa de defoliadores presenta considerable efecto antialimentario
y efectos reguladores del desarrollo.
51
plantas tratadas con Neem. Recientemente un nuevo efecto descubierto es
el que modifica su comportamiento gregario a formas solitarias.
52
5. METODOLOGÍA
5.1.2. Población
53
Fue en esta última etapa donde se centró la investigación, puesto que era en este
punto donde se mediría la cantidad de extracto obtenido por medio de un solvente
etanolico. Como resultado de la revisión bibliográfica sobre los factores que
influyen en esta etapa se determinaron las variables de entrada a modificar para
medir el efecto sobre las variables de salida; además se determinó cuáles de las
variables de entrada se mantendrían constantes y cuáles no se medirían.
NR T
CE Extracción Del
Extracto Insecticida
%E
SMD
PA
54
Variables de Entrada:
CE = Cantidad de Etanol.
Variables de Salida:
%E = Porcentaje de Extracto.
Factores Controlables:
T = Temperatura.
NR = Número de Reflujos.
Factores Incontrolables:
55
Cuadro Nº 3. Factores Que Se Mantienen Constantes Durante El Proceso
FACTOR NIVELES
Número De Reflujos 5
56
Es claro también que las variables de interferencia como cantidad de solvente,
cantidad de muestra, etc., fueron controladas, manteniendo un procedimiento
estándar previamente determinado y cuidando que se cumplieran con las mínimas
variaciones posibles. Las muestras fueron tomadas con un muestreo estadístico
adecuado, como lo es el muestreo aleatorio el cual es una técnica utilizada
comúnmente en donde las muestras son seleccionadas de tal manera que todas
las combinaciones de unidades tienen la misma probabilidad de ser elegidas como
muestra, y mantenidas en iguales condiciones, para evitar posibles efectos
negativos en los resultados de la investigación.
330 1 2 3
320 4 5 6
310 7 8 9
300 10 11 12
290 13 14 15
280 16 17 18
270 19 20 21
57
5.1.5. Técnicas Utilizadas
MEDICIÓN
PARÁMETRO MATERIALES Y
DESCRIPCIÓN MÉTODO
EQUIPO (S)
Estufa,
Contenido de agua desecador, Evaporación a
Humedad
en la muestra. balanza peso constante
%
analítica.
Contenido de Unidad de
Aparato de
extracción
Soxhlet,
Contenido de balones,
% Soxhlet
Extracto etéreo grasa presente en estufa, hexano,
desecador,
la muestra.
balanza
analítica.
58
Matraz de
fondo plano de
Contenido de Crisoles de
minerales totales o porcelana,
Céniza % material inorgánico Calcinación
mufla,
presente en la
desecador,
muestra. balanza
analítica.
muestra
Picnómetro,
Relación entre
balanza Picnometria
Masa de un cuerpo
Densidad g/ml
y el volumen que analítica.
ocupa
59
5.2. Procedimiento Experimental
Las muestras se tomaron de forma manual y de modo aleatorio del fruto del árbol
del Neem de tres zonas diferentes del departamento el Cesar:
Figura Nº 9. Mapa Del Departamento Del Cesar Con Los Sitios De Recolección
De La Muestra
60
Estas muestras se tomaron de forma aleatoria, recogiendo los racimos enteros y
cortándolos desde la parte de conexión con la planta. La recolección dependió
mucho de las condiciones en las cuáles se encontraba el fruto. Se seleccionaron
aquellos frutos que no tenían daños físicos, ni signos de enfermedades, ni golpes,
ni magulladuras, con coloración externa homogénea y que se encontraran listos
para ser cosechados (los frutos que estuvieran maduros).
En esta etapa se realizó un lavado de los frutos con agua potable para liberarlos
de residuos que afectaran o dañaran su estado físico y además se humedeció el
cuerpo carnoso o pulpa del fruto para facilitar el proceso de despulpado que se
realizó de forma manual.
61
de determinaciones que se realizan para describir la composición nutritiva de una
sustancia alimenticia que pueda reducirse al estado de harina 38. Además se
determino el pH, acidez, y la conductividad. Teniendo en cuenta las
recomendaciones reportadas por la A.O.A.C. (Association of Official Analytical
Chemists).
Este proceso se manejo por medio de la Norma Técnica Colombia (NTC) 235 de
1998. El hexano es un reactivo de grado analítico y fue adquirido de Distrumedica
38
BERNAL, I. Análisis de alimentos. Bogotá: Guadalupe Ltda., 1994.
39
GEANKOPLIS, C. J. Procesos de Transporte y Operaciones Unitarias. 3ª Edición Compañía
Editorial Continental, S.A. de C.V. México, D.F. 1998. p. 461.
62
S.A. de marca MERCK. Este aceite fue extraído solo con fines de determinar las
características fisicoquímicas que presenta.
63
5.2.5. Determinación De Características Fisicoquímicas Del Aceite
Para esta fase del proyecto se determinaron las características fisicoquímicas del
aceite extraído anteriormente, realizándole análisis de densidad, color, acidez, pH
y punto de saponificación; Para estos análisis se tuvieron en cuenta las normas
NTC.336 de 1999, NTC.335 de 1998 y NTC.218 de 1999, y además las técnicas
recomendadas por la AOAC (Association of Official Analytical Chemists).
Figura Nº 11. Aceite Extraído De La Semilla Molida Del Árbol Del Neem
40
Ibid. p. 104-107.
64
5.2.7. Extracción Del Extracto Presente En La Torta
65
Una vez se obtiene el extracto de la torta, esta queda convertida en un sólido o
bagazo al cual se llamó Sólido Agotado. A este sólido agotado, se le midieron
pH, porcentaje de fibra y de proteína.
66
6. RESULTADOS Y ANÁLISIS
Semillas
67
fueron: humedad, ceniza, proteína bruta, extracto etéreo, fibra cruda y calcio.
Además de esto se le realizaron otros análisis de pH, acidez y conductividad.
PARÁMETRO PROMEDIO
% Humedad 8.50
% Proteína 19.95
% Ceniza 3.03
% Acidez (Acido
0.20
Oleico)
pH 5.66
Fuente: Investigadores
68
parámetros evaluados se encontraron diferencias y similitudes con los rangos
reportados en la literatura. Es así como, los porcentajes de ceniza y de extracto
etéreo, fueron más bajos, respecto a los reportados por Romero C. y Vargas M.
en 2005, lo que se atribuye a las condiciones de trópico-seco que presenta
nuestra región y a la textura del suelo. En cuanto al porcentaje de humedad, este
se disminuyo para tener mejores condiciones de trabajo durante el proceso y en el
almacenamiento.
69
comparándolos con los obtenidos por Romero C. y Vargas M. en la Universidad de
Carabobo-Venezuela en 2005.
PROMEDIO
PROMEDIO
PARÁMETRO (Romero C. y
(Investigadores,
Vargas M. en
2008)
2005)
pH 5.14 -
Se puede analizar que los resultados obtenidos tienen muchas similitudes con los
obtenidos en Venezuela por Romero C. y Vargas M. en 2005. El valor de acidez
establece la cantidad de ácidos grasos originados por la lipólisis de los triglicéridos
que forman al aceite; en este sentido, se afirma que el aceite de Neem evaluado
no ha experimentado hidrólisis acentuada, por lo que la presencia de ácidos
grasos libres es alta, lo cual está relacionado con el bajo contenido de humedad
de la semilla y del buen proceso realizado. El valor de acidez libre (0,44 g de ácido
70
oleico/100 g de aceite) estuvo dentro de los límites establecidos por la Normativa
Técnica Colombiana (NTC) para aceites vegetales. En cuanto a los valores de
punto de saponificación, densidad y color son bastante parecidos a los reportados
por la literatura sobre todo por Romero C. y Vargas M. en 2005.
PARÁMETRO PROMEDIO
% Proteína 21.70
71
Alcalinidad (ppm Ca) 11.71
% Cenizas 3.28
pH 5.23
Color Marrón
Cantidad De Etanol
Secuencia Número De Corrida
(ml)
1 4 300
2 17 310
3 9 320
72
4 13 280
5 1 330
6 18 300
7 7 270
8 5 290
9 10 310
10 20 280
11 19 290
12 15 330
13 2 320
14 11 300
15 21 270
16 3 310
17 16 320
18 12 290
19 6 280
20 8 330
21 14 270
73
En el siguiente cuadro se observa cada uno de los resultados de los tratamientos
que se realizaron para la obtención del extracto presente en la semilla
desengrasada del árbol del Neem. También se observa que el mayor porcentaje
de extracto se obtiene con 300 ml de etanol.
528,26 25.2033
74
Cuadro Nº 12. Análisis De Varianza Del Porcentaje De Extracto Presente En La
Torta
Total 81,6159 20
75
Cuadro Nº 13. Método De La Mínima Diferencia Significativa (LSD)
270 3 22,4233 X
280 3 23,7767 X
330 3 23,9333 X
320 3 25,0367 X
290 3 25,72 X
310 3 26,6767 X
300 3 28.8567 X
76
320 – 270 *2,61333 0,103603
77
Figura Nº 13. Graficas De Las Medias Al 95% Con LDS
78
Cuadro Nº 14. Medias Con El 95% De Confianza Entre Intervalos LSD
Error Estándar
Total 21 25,2195
79
Figura Nº 14. Análisis De Las Medias
Por lo tanto, teniendo en cuenta los resultados arrojados por el diseño y ensayos
realizados, se escogió trabajar con 300ml de etanol en la cámara de reflujo,
manteniendo constante la cantidad de muestra y temperatura. Al extracto obtenido
se le realizaron diferentes determinaciones fisicoquímicas y un perfil de
componentes. También se le realizo una determinación de la cantidad de
Azadiractina (Compuesto activo del Neem) por medio de cromatografía liquida de
alta resolución (HPLC).
80
6.5. Características Fisicoquímicas Del Extracto Presente En La Torta
81
El análisis realizado por Cromatografía Líquida de alta resolución HPCL identificó
el contenido de azadiractina expresado en porcentaje. Para esta identificación el
Laboratorio de Análisis Instrumental de la Universidad Nacional De Colombia Sede
Medellín utilizó dos metodologías. El método 1 fue tomado de la tesis de maestría
“Efecto antialimentario de los extractos de suspensiones celulares de
Azadirachta indica sobre Spodoptera frugiperda J.E. Smith en condiciones
de laboratorio” Jacqueline Capataz Tafur et al y el método 2 fue tomado del
artículo “Determinación de azadirachtina por cromatografía líquida de alta
eficiencia (HPLC) en semillas del árbol del Neem (A. indica) cultivadas en
Colombia”. Vitae. Revista de la Facultad de Química Farmacéutica. Universidad
de Antioquia. Vol 9 Número 1. Año 2002. Págs. 59-63.
82
Figura Nº 15. Cromatograma Para Extracto De Semilla Del Árbol Del Neem
Empleando El Método 2.
41
Schmutterer H. Natural Pesticidas From The Neem Tree (Azadirachta Indica A. Juss) and Other
Tropical Plants. Third International Neem Conference. Nairobi, Kenya. 1986, Pag. 157 – 160.
83
Cuadro Nº 16. Características Fisicoquímicas Del Extracto Presente En La Torta
PARÁMETRO PROMEDIO
pH 4.51
Color Vinotinto
Fuente: Investigadores
El sólido agotado es aquel bagazo que queda después de haber extraído el aceite
y el extracto de las semillas molidas del árbol del Neem. A este bagazo se le
realizaron una serie de análisis para determinar que se podría hacer
agroindustrialmente con él; arrojándonos que este contiene altos porcentajes de
fibra y proteína lo que nos indica que podría ser utilizado para realizar un
subproducto nutricional para la industria animal.
84
Cuadro Nº 17. Características Fisicoquímicas Del Sólido Agotado
PARÁMETRO PROMEDIO
% Proteína 20.3
pH 5.90
Fuente: Investigadores
85
7. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
86
Por otro lado la extracción del aceite por medio de solvente (hexano) se
realizó a través de un sistema que presenta un montaje en el equipo soxhlet
en el que se pueden controlar sin ningún problema algunas variables que
afectan este tipo de extracción (Cantidad de Muestra, Número de reflujos y
Temperatura); sin embargo, se recomienda otros sistemas en los que la
cantidad de muestra no este en contacto con el solvente (Anhídrido
Carbónico (C02) con presión) para no obtener en el aceite y la semilla
desengrasada o torta residuos de solvente.
87
Para la extracción del extracto presente en la semilla desengrasada o torta
del árbol del Neem por medio de solvente etanólico, se presenta un sistema
sencillo en el que se pueden controlar sin ningún problema la mayoría de
variables que afectan este tipo de extracción (Cantidad de muestra,
cantidad de solvente, numero de reflujos y temperatura); sin embargo, se
recomienda otros sistemas en los que se puedan controlar de igual manera
otras variables (agitación, presión) que puedan aumentar la velocidad de
extracción y el rendimiento del extracto etanólico.
88
Por otra parte el estado de madurez en que se recolecte el fruto es ideal
para una buena producción de Azadiractina, por eso se deben recolectar
los frutos más o menos a los 120 a 130 días después de la floración cuando
estos completen su estado de madurez fisiológica, ya que es aquí donde se
produce mayor cantidad de este compuesto activo.
89
8. BIBLIOGRAFÍA
ANGULO, M., GARDEA, A., VELEZ, R., GARCIA, R., CARRILLO, A. Y PARTIDA,
J. Contenido De Azadiractina A En Semillas De Nim (Azadirachta Indica)
Colectadas En Silanoa – México. Revista fitotecnia Mexicana, Chapingo, México.
2004.
90
BRIMNER, T. Y G. BOLAND. A Review Of The Non-Target Effects Of Fungi Used
To Biologically Control Plant Diseases. Agriculture, Ecosystems And Environment.
2003.
91
Forestales Agrícolas y Pecuarias-INIFAP. Centro de Investigación RegionaL del
Noroeste-CIRNO. Campo Experimental Todos Santos-CETS. Folleto Técnico
Núm. 5. México.
RAMOS, C., GONZÁLES, V., SOTO, C., RODRÍGUEZ, D., MARK, E. Variación En
Contenido De Azadiractina En Frutos De Margosa Durante Su Desarrollo.
Sociedad Mexicana de fitogenetica. 2004. p. 81- 85.
92
Schmutterer, H. y R.P. Singh. List Of Insect Pest Susceptible To Neem Products.
En The Neem Three Azadirachta Indica A. Juss. And Other Meliaceous Plants, p.
326-365. 1995.
STONEY, C. Una Guía Útil Para Los Árboles De Uso Múltiple. Uso Del Neem
Como Agente De Control Biológico De Plagas. Program Officer y Erin Hughes,
Program Associate Winrock Internacional.
http://www.winrock.org/forestry/factpub/spusonim.htm. Hoja Informativa,
FACT1998-045, Junio 1998.
93
ANEXOS
94
ANEXO A. Fotografías De Todo El Proceso De Caracterización De Los
Extractos De La Semilla Del Árbol Del Neem En El Departamento Del Cesar
95
96
97
98
99
Anexo B. Determinación De La Composición Química De Un Extracto
Etanólico, Por Cromatografía De Gases Con Detector Selectivo De Masas
(GC-MC)
100
101
102
103
104
105
ANEXO C. Determinación Azadiractina Del Extracto Etanólico, Por
Cromatografía Líquida De Alta Resolución HPCL
106
107
108
109
Anexo D. Nombre Químico (IUPAC), Estructura, Uso Y Toxicidad Para El
Organismo Y El Medio Ambiente
110