Tambin llamada anatoma

microscpica
Finn Geneser, 2005
Los tejidos se
forman por la
agrupacin de
clulas para
desarrollar
colectivamente una
funcin especial
Ms adelante menciona
la matriz extracelular
como importante para el
tejido conectivo.
Gartner y Hiatt,
1997
Las clulas
similares o
relacionadas que
funcionan de una
manera particular
o tienen una
finalidad en
comn, se
agrupan para
formar tejidos
Definicin Actual
Por definicin un tejido es
una agrupacin de clulas
diferenciadas en forma y
funcin, que interaccionan
entre s para cumplir una
funcin o ms. Todas las
clulas de un tejido en
particular se definen
tambin por la composicin
qumica de la matriz
extracelular.
Ross, 1994
Cuando hablamos de un
conjunto organizado de
clulas que funcionan en
forma colectiva, estamos
aludiendo, por definicin a un
tejido .
Ms adelante menciona las uniones
intercelulares especializadas (nexo),
que facilitan la colaboracin entre
clulas.
Hablar de tejidos es til a los
fines descriptivos, facilita el
estudio de la estructura
corporal.
Pero debemos estar atentos a
sus limitaciones
No todos los tejidos forman
rganos.
Un tejido no es un simple
conjunto de clulas.
La clasificacin de tejido es
conflictiva ya que no se
encuentran en forma pura ni
aislada: se yuxtaponen, se
entremezclan y se combinan
para formar rganos. Son
interdependientes.
METODOLOGA DE ESTUDIO EN LA
HISTOLOGA
TECNICAS HISTOLOGICAS:
Es el conjunto de operaciones que se somete un
material organizado para hacer posible su estudio por
medio del microscopio, posibilitando la observacin de
las estructuras no visibles al ojo humano.
1-Examen inmediato o in vivo:
a) En fresco: animales unicelulares y clulas
libres.
b) Coloracin vital: usando soluciones de
colorantes no txicos (colorantes vitales),
coloracin intravital o in vivo, y la coloracin
supravital, donde pueden colorearse clulas
libres o porciones de rganos.
2- Examen mediato o post-mortem:
Requiere de la muerte celular y supone seguir una serie
de pasos, la Tcnica histolgica.
TECNICAS HISTOLOGICAS:
1-Examen inmediato o in vivo:
Estado Fresco: Estado Fresco:
Plasma Sangu Plasma Sangu neo neo
Alb Alb mina mina
Humor Acuoso o L Humor Acuoso o L quido Amni quido Amni tico tico
Soluciones Fisiol Soluciones Fisiol gicos o gicos o Ringer Ringer
Coloraciones Vitales:
Colorantes muy diludos que no daan el tejido
Carmn, Azul de Metileno o Rojo Neutro
Intravital
Supravital
Toma de muestra:
Debe ser rpida.
Hay que tener en cuenta las caractersticas del
rgano (muy hidratado, contrctil, colapsa, etc)
Biopsia.
Autopsia (p/ humanos, post mortem)
2- Examen mediato o post-mortem:
Obtencin del material de estudio:
Puede provenir de:
biopsias quirrgicas,
material obtenido de necropsias,
utilizando animales de laboratorio,
estudios experimentales en animales,
material de cultivos de tejidos,
frotis o extendidos.
1 Fijacin 2 Lavado y deshidratacin
3 Aclarado
4 Inclusin
Impregnacin
Orientacin
Solidificacin
5 Tallado 6 Corte
7 Montaje 8 Desparafinizacin
10 Coloracin 9 Hidratacin
11 Deshidratacin 12 Montaje final
13 Observacin
2- Examen mediato o post-mortem:
8 Desparafinizacin
9 Hidratacin 10 Coloracin
1 Fijacin:
Es el proceso Fsico (Histoqumico) que logra una
situacin estable de los constituyentes tisulares,
interrumpiendo las reacciones enzimticas de
autlisis.
Cualidades de un buen fijador:
1) Actuar con rapidez y detener los procesos autolticos.
2) Buen poder de penetracin.
3) Conservar lo mas fielmente la estructura del tejido.
4) No interferir y facilitar los procesos posteriores.
5) Endurecer el tejido y darle mayor consistencia.
6) Insolubilizar los componentes de los tejidos.
7) No producir estructuras artificiales.
Clasificacin de los fijadores:
1- Fijadores qumicos: Desnaturalizan y estabilizan protenas Son los
ms empleados y pueden ser:
a) Simples: constituido por una sola sustancia.
Formol al 10%: Es muy usado.
Aldehdo glutrico o glutaraldehdo al 2.5 % (M electrnica)
Acetona en fro.
b) Compuestos o mezclas fijadoras: constituidas por varias
sustancias.
Liquido de Flemming: (mezcla cido pcrico-osmo-cido actico cromo-osmio-
actica) para estudios citolgicos.
Liquido de Bouin: (mezcla cido pcrico-formol-cido actico). El mejor fijador
para los trabajos corrientes. Muy penetrante.
2- Fijadores fsicos:
Desecacin (microorganismos)
Calor (Coagulan protenas)
Fro
Congelacin y desecacin
2 Lavado y deshidratacin: serie creciente de OH.
3 Aclaramiento: Es el paso donde se pasa el tejido a una
solucin miscible (se la llama lquido intermediario) : : xilol xilol, ,
toluol toluol, alcohol but , alcohol but lico o benceno. lico o benceno.
4 Inclusin
Es impregnar la pieza con una sustancia que le confiere dureza y permite
obtener cortes uniformes y delgados.
En la tcnica corriente, se utiliza la parafina; que es insoluble en agua
(deshidratacin previa, paso 2).
Puede ser un medio acuoso (gelatina o agar-agar) o anhidro (parafina,
celoidina, paraplast o resinas sintticas). Este medio disuelve el lquido
intermediario y penetra en el tejido (por ejemplo la parafina a 60C). El
objetivo de esto es brindar posteriormente un soporte slido que permita
el corte del tejido en delgadas capas.
5 Tallado
Para eliminar exceso de parafina . Se elimina la parafina con un cuchillo, en forma
de pirmide truncada, con el objeto de que no ofrezca resistencia al ser cortado en
el micrtomo.
6 Corte
Para obtener cortes finos (lminas de 3-8 micrones)se utilizan aparatos
denominados micrtomos. Existen diferentes tipos de micrtomos
(deslizamiento y rotacin), segn el medio de inclusin y microscopia.
7 Montaje
Se coloca el corte en un bao de agua caliente, para que se estire.
Se extienden sobre el portaobjetos una pelcula de albmina o gelatina.
Se levantan los cortes con un pincel y se colocan sobre el portaobjetos.
El portaobjetos se lleva a la estufa para terminar de estirar.
c: Secado c: Secado
Ba Ba o histol o histol gico para extendido del corte. gico para extendido del corte.
8, 9 Desparafinizacin e hidratacin
Dado que la parafina ha cumplido su funcin de soporte en el
corte, es necesario sacarla, ya que dada su naturaleza
anhidra, no permitira la accin de los colorantes
(generalmente acuosos o polares) en los tejidos.
Para ello debe desparafinarse previo a la coloracion por
medio de un tratamiento con xilol.
Luego se rehidrata el corte mediante pasajes por
concentraciones decrecientes de alcohol.
Los colorantes se pueden clasificar como:
a) cidos: Tienen cargas negativas. Se unen a grupos catinicos como los grupos
aminos de las protnas. Actan a pH bajo. Eosina, azul de anilina, fucsina cida
orange G. Son colorantes citoplasmticos.
b) Bsicos: Presentan cargas positivas. Se unen a los grupos fosfato de los cidos
nuclecos , grupos sulfato de los glucosaminoglicanos (Gags) y grupos carboxilo de
protenas. Acta a pH alto ya que los grupos se ionizan y se unen al colorante.
Hematoxilina, azul de metileno, azul de toluidina. Son colorantes nucleares.
c) Neutros: Colorean citoplasma y ncleo de diferente color. Eosinato de azul de
metileno.
10 Coloracin
Sustancias basfilas se colorean con colorantes bsicos
Sustancias acidfilas se colorean con colorantes cidos
Sustancias neutrfilas se colorean con colorantes neutros
Hematoxilina-Eosina: Fundamento de la coloracin
La Eosina es un colorante cido (predomina densidad de carga negativa),
se asocia y colorea a estructuras catinicas del citoplasma y matriz
extracelular, tales como: filamentos citoplasmticos (como los de clulas
musculares); membranas intracelulares; y fibras extracelulares (por sus
aminocidos bsicos ionizados).
La Hematoxilina se asocia con mordientes para actuar como un colorante bsico,
por lo cual se asocia y colorea estructuras aninicas (que posean fosfatos, sulfatos
y/o carboxilos ionizados):
Heterocromatina y nuclolos
RNA ribosomal
Matriz extracelular
(por los sulfato de los GAG)
Hematoxilina Hematoxilina- -eosina eosina
N N cleo: violeta. cleo: violeta.
Citoplasma: rojizo. Citoplasma: rojizo.
Diferentes
coloraciones
El montaje consiste en
Homogenizacin o aclaracin: se emplea el benzol o xilol a los que se le
puede agregar cido carbnico o fnico para aumentar su eficacia, estos
son muy vidos de agua.
Colocacin del cubreobjeto: con la finalidad de proteger el preparado, se
lo recubre con un cubreobjeto. Para adherir el cubreobjeto al portaobjeto
se emplean resinas, por ejemplo: el Blsamo de Canad.
11 Deshidratacin: mediante la accin de alcoholes de gradacin
creciente: 70, 80, 90 y 100, sucesivamente hasta eliminar el agua.
12 Montaje final:
PROBLEMAS DE INTERPRETACION
PROBLEMAS DE INTERPRETACION
al visualizar los cortes con el Microscopio
al visualizar los cortes con el Microscopio
Artefactos de tcnica: Cambios estructurales inducidos
por la tcnica histolgica aplicada. Algunos de los ms comunes
son:
Melladuras: defectos en la cuchilla de corte del tejido al
tomar la muestra o al cortar en el micrtomo.
Encogimientos, Retraccin
Pliegues (mal extendido)
Precipitados (mala coloracin)
Manejo poco cuidadoso
Degeneracin post mortem (mal fijado)
Conceptuales
Debidos a una interpretacin inadecuada, a que las clulas pueden
presentar tamaos diferentes, a que se ven imgenes en 2D en
lugar de 3D, etc.