Guía de Manejo de Animales de Laboratorio Caballo y Rana

GUA DE MANEJO DE ANIMALES DE LABORATORIO
GUA DE MANEJO Y ENSAYOS DE ANIMALES DE LABORATORIO

CABALLO Y RANA

En el proceso de investigacin cientfica, en el rea de las ciencias de salud, desde la antigedad se
emplean animales de laboratorio. Quienes casi siempre con el sacrificio de sus vidas han dado su
aporte a la generacin de nuevo conocimiento para ser aplicado al mejoramiento de la salud de los
seres humanos y otros animales.

Es importante tener presente una serie de conceptos bsicos para el uso y manejo de animales de
laboratorio, ya que el desconocimiento de estos factores pueden incidir negativamente en el
resultado de los datos obtenidos en el laboratorio, lo cual causara imprecisiones en el conocimiento
y adems elevacin de costos.

El uso de los animales para investigacin esta constituido en un tema tico controversial, hay
quienes consideran que los animales son y siguen siendo necesarios e irremplazables, y otros que
consideran que no deben ser utilizados como modelos de investigacin, debindose utilizar otras
alternativas.

Animal de laboratorio

Es cualquier especie animal utilizada en experimentacin con fines cientficos, es decir, mantenido
bajo determinadas condiciones y utilizado como instrumento de medida.

Este al ser sometido a una experimentacin, proporciona datos, los cuales son utilizados como
informacin para los resultados. Como ejemplo de esos animales tenemos al ratn, la rata, el
hmster, el conejo, el perro o el mono.

Otra definicin que se toma es modelo animal:

Un modelo animal es aquel que emplea animales de especies distintas a la humana, seleccionados
por sus caractersticas especficas, para ser utilizados en investigacin o docencia. En el diseo de
los mismos las claves son la eleccin de la especie animal y la viabilidad de extrapolacin de los
datos obtenidos a la especie en que se vayan a aplicar los resultados obtenidos.

Factores a considerar en la seleccin de un modelo de experimentacin animal
Se plantean factores que deben tener en cuenta, al disear un modelo experimentalanimal:

Costo y cuidado del animal.
Disponibilidad.
Tolerancia a la cautividad.
Facilidad de Enjaular.
Pocos cuidados de mantenimiento.
Resistencia a Infecciones y a Enfermedades.
Homogeneidad.
Caractersticas biolgicas anlogas al hombre.

Tamao adecuado para realizar el experimento.
Tolerancia a procedimientos quirrgicos.

INFORMACIN Y CONOCIMIENTO DE LAS CARACTERSTICAS DEL ANIMAL

CABALLO

El caballo es un mamfero cuadrpedo, perisodctilo, perteneciente a la familia de los quidos. Sus
principales caractersticas fsicas son: un gran porte, aproximadamente mide 1,5 m de altura, sus
patas terminan en un solo dedo que tiene una ua llamada casco, la cabeza es alargada, las orejas
relativamente pequeas, su cola es larga y presenta crin en el cuello.

El tamao de los caballos vara considerablemente entre las diferentes razas y tambin en ello
mucho tendr que ver la nutricin.

Existen tres tipos: pesados o de tiro (entre 163 y 183 cm), ligeros o de silla (entre 142 y 163 cm)
y ponis y razas miniatura (no superan los 147 cm).

La reproduccin, ambos sexos alcanzan la madurez sexual a los dos aos; sin embargo, no se
emplean con fines reproductivos hasta los 3 aos. El periodo de gestacin dura unos once meses
(337 a 344 das) y la hembra pare una nica cra; el nacimiento de gemelos es algo excepcional, as
como los partos de tres o ms potros.
La vida adulta puede extenderse hasta los 30 aos.

RANA

Las ranas son animales de piel lisa y suave, ojos saltones que pueden ver casi en cualquier direccin
y tmpanos auditivos externos. Los adultos carecen de cola. La mayora de ellas tienen patas traseras
largas, que les permiten dar grandes saltos, y pies palmeados que las convierten en excelentes
nadadoras.

Los sistemas internos de la rana son tpicos de la mayora de los anfibios; de hecho, stos eran
llamados en su origen, batracios, del griego antiguo batrachus, que significa rana.

La mayora de las ranas, en especial los machos, emiten sonidos. Al expulsar el aire de los pulmones,
ste hace vibrar las cuerdas vocales de la laringe, produciendo sonidos caractersticos de las
diferentes especies. Los machos de las especies que poseen un saco resonador que se hincha
enormemente cuando la rana emite sonidos para atraer a su pareja producen un sonido mucho ms
intenso. La lengua de la rana est fijada en la parte anterior de la boca en vez de en la parte
posterior, y est cubierta de una sustancia pegajosa que la convierte en una trampa eficaz para cazar
insectos.

Durante su vida la rana experimenta una metamorfosis completa, que atraviesa las fases de huevo,
una fase larvaria similar aun pez y al final la fase de adulto. Ponen sus huevos en el agua, donde dan
lugar a renacuajos (larvas de cuerpo corto), a principios de la primavera o el verano, fase en la que

presentan branquias y cola. Al irse desarrollando, el renacuajo pierde la cola, desarrolla las patas y,
finalmente, sale del agua en forma de rana adulta.

TAXONOMA

En esta parte se explicara la taxonoma de los dos animales de los cuales hablaremos:

Taxonoma del caballo:

Reino: Metazoa
Subreino: Eumetazoa
Rama: Bilateria
Grado: Coelomata
Serie: Deuterostomia
Phylum: Chordata
Subphylum: Gnathostomata
Superclase: Tetrapoda
Clase: Mammalia
Subclase: Eutheria
Superorden: Laurasiatheria
Orden: Perissodactyla
Familia: Equidae
Gnero: Equus
Especie: caballus

Taxonoma de la rana:
Reino: Metazoa
Subreino: Eumetazoa
Rama: Bilateria
Grado: Coelomata
Serie: Deuterostomia
Phylum: Chordata
Subphylum: Gnathostomata
Superclase: Tetrapoda
Clase: Amphibia
Orden: Anura
Suborden: Neobatrachia
Superfamilia: Ranoidea
Familia: Ranidae
Gnero: Pelophylax
Especie: perezi

CONSIDERACIONES FUNDAMENTALES EN EL USO DE ANIMALES DE LABORATORIO

Es sumamente importante que todos los investigadores que vayan a utilizar animales de
laboratorio para sus investigaciones o lasprcticasdocentesdediquenespecialatencina:

Revisar previamente sus procedimientos experimentales y evaluar la idoneidad del
protocolo a ser utilizado, con respecto a los objetivos del estudio.
Estudiar y considerar las posibles estrategias experimentales alternativas a la
utilizacin de animales de laboratorio y garantizar que los objetivos no pueden ser
alcanzados por dichos procedimientos. (Reemplazar)
Utilizar el menor nmero de animales posibles para la consecucin de los
objetivos, consultando a este respecto a expertos en estadstica. (Reducir)
Velar para que los animales no sufran innecesariamente y proporcionarles,
cuando sea necesario, analgsicos, anestsicos y otras sustancias apropiadas.
(Refinar)
Controlar que los mtodos eutansicos empleados sean adecuados a la especie
(consideracin tica importante)
Controlar que el personal que participa en los procedimientos est debida-
mente acreditado y entrenado para desempear las tareas que les corresponda.
Existe prohibicin del uso de animales en los experimentos que se utilicen
especies considerados en peligro de extincin, a menos, que los objetivos del
experimento sean: la investigacin tendente a la proteccin de las estas especies o
cuando se compruebe que estas son excepcionalmente las nicas indicadas a tal
fin.
En ningn caso podr utilizarse un animal ms de una vez en experimentos que
conlleven dolor, estrs o sufrimiento intensos.

PERSONAL

El personal que trabaja en un bioterio de produccin o de experimentacin debe ser lo
suficientemente capacitado, de acuerdo con las caractersticas de las instalaciones, nmero de
animales mantenidos y la naturaleza de la investigacin que se va a realizar. Es responsable de
la atencin y mantenimiento correcto de los animales asignados.

Normas de seguridad y Proteccin del Personal

El personal debe adoptar normas y formas de proteccin, para brindar buenas condiciones de
mantenimiento y salud a los ratones. Para ello deber contar con procedimientos e
instrucciones normalizados como:

Procedimiento de higiene de personal.

Uso de la vestimenta completa.
Procedimiento de ingreso al bioterio de produccin o bioterio de experimentacin.
Procedimientos de limpieza de ambientes, con programas de limpieza y rotacin de
desinfectantes, efectivo.
Procedimientos de limpieza y desinfeccin de materiales.
Procedimiento de eliminacin de desechos.
Programa de control de plagas.
Programa de capacitacin al personal.
Flujo de personal y materiales por las zonas indicadas, para evitar diseminacin de
material contaminado en zonas limpias.

Entre las normas de higiene y de seguridad ms importantes tenemos:

Uso de una vestimenta completa y de uso exclusivo en el bioterio.
Todo animal encontrado en la sala, libre, debe ser eliminado y no devuelto a la
colonia.
Se debe trabajar con el menor ruido posible y en forma de reducir el estrs
ocasionado a los animales.
Uso de gafas de seguridad cuando el procedimiento de investigacin lo requiera.
Tener conocimiento de la localizacin del botiqun de primeros auxilios y rutas de
evacuacin ante una emergencia
Utilizar guantes quirrgicos para el manejo de los animales.
No llevar nada a la boca mientras se est en el bioterio.
Mantener el rea limpia.
Uso de equipos en buenas condiciones.
Eliminacin de desechos en la forma correcta. Uso de bolsas rojas para material
biolgico contaminado y bolsas de color negro para material sucio o desechos no
contaminados.
Rotular correctamente las jaulas, especialmente en las salas de reproductores
monogmicos.
Restringir el acceso a personal extrao, permitir slo el acceso apersonas autorizadas.
Informar inmediatamente al jefe o coordinador, cualquier accidente.
Si tiene problemas respiratorios (asma), neurolgicos o alergias infrmelo por escrito
a su jefe inmediato.
No debe permitirse al personal comer, beber, fumar o aplicarse cosmticos en las
salas de animales.
El uso de los elementos de proteccin del personal (mascarilla, guantes,gorros, etc.),
los procedimientos normalizados de limpieza y desinfeccin de materiales e
instalaciones conjuntamente con los flujos adecuados de personal y material,
constituyen una verdadera barrera sanitaria, que se recomienda mantenerla vigente a
pesar de las limitaciones en equipamiento e infraestructura.


ENTRENAMIENTO Y CAPACITACION DEL PERSONAL
El grado y los requisitos del personal requerido para conducir y apoyar el programa de cuidado
y uso de animales, depende de varios factores que incluyen: el tamao y tipo de institucin, la
estructura administrativa para suministrar un cuidado animal adecuado, las caractersticas de
las instalaciones, el nmero de animales mantenidos y la naturaleza de la investigacin
cientfica, las pruebas de laboratorio y las actividades educativas.
El personal que cuida a los animales debe estar entrenado apropiadamente y la institucin
debe ofrecer capacitacin formal o entrenamiento durante el desempeo del trabajo, para
facilitar la implementacin eficaz del programa y el cuidado y uso humanitarios de los
animales. La necesidad de personal experto en otras disciplinas, tales como: crianza animal,
administracin, medicina y patologa de los animales de laboratorio, salud y seguridad
ocupacional, manejo de conducta, manejo gentico y otros aspectos varios de apoyo a la
investigacin cientfica, ser acorde con los alcances del programa.
El personal que use o cuide a los animales debe participar regularmente en actividades de
educacin continua relevantes para sus responsabilidades. Se espera una participacin activa
del personal en reuniones locales y nacionales de organizaciones afines. El entrenamiento
durante el desempeo de sus labores debe ser parte del trabajo de todos los tcnicos y debe
ser complementado con discusiones auspiciadas por la institucin, programas de
entrenamiento y con materiales bibliogrficos aplicables a su trabajo y a las especies con las
cuales laboran.

RIESGOS DE EXPERIMENTACIN CON ANIMALES

Al seleccionar los dispositivos de seguridad especficos para la experimentacin con agentes
peligrosos en animales se debe prestar especial atencin a los procedimientos de cuidado y
alojamiento de animales, almacenamiento, distribucin de los agentes, preparacin y
administracin de dosis, manejo de fluidos y tejidos corporales, disposicin de los desperdicios
y cadveres y proteccin del personal.

El equipo especial de seguridad se debe usar en combinacin con las prcticas de seguridad y
manejo apropiados. Como regla general, la seguridad depende del personal entrenado que
observa rigurosamente las prcticas de seguridad.

Son necesarias instalaciones y equipo especiales de seguridad para proteger al personal
encargado del cuidado animal y de la investigacin, a otros ocupantes del edificio, al pblico,
los animales y el medio ambiente, de la exposicin a agentes peligrosos fsicos, qumicos y
biolgicos usados en experimentacin animal. Las instalaciones empleadas en
experimentacin animal con agentes peligrosos deben estar separadas de otras reas de
alojamiento animal, reas de apoyo, de los laboratorios de investigacin y clnicos, as como
de las reas para la atencin de los pacientes y deben estar identificadas apropiadamente; el
acceso a ellas estar limitado al personal autorizado. Tales instalaciones debern estar
diseadas y construidas para facilitar la limpieza y el mantenimiento de sistemas mecnicos.
Un diseo de doble corredor correctamente administrado y usado o un sistema de barrera con
entrada controlada son medios efectivos para reducir la contaminacin cruzada. Los drenajes
del piso siempre deben contener lquidos o sellarse eficazmente por otros medios. Se pueden
colocar trampas de llenado automtico para asegurar que siempre permanezcan llenas de
lquido.

Los agentes peligrosos deben ser confinados al medio ambiente en donde se realice el estudio.
El control de flujo de aire (tal como el uso de gabinete de seguridad biolgica) que reduce al
mnimo el escape de contaminantes es una barrera primaria utilizada para la manipulacin y
administracin de agentes peligrosos y para llevar a cabo necropsias de animales
contaminados.

Las barreras secundarias tales como los vestbulos ventilados, la presin de aire negativa, los
filtros de aire y el equipo mecnico de respaldo con encendido automtico, estn dirigidos a
evitar la liberacin accidental de los peligros fuera del medio ambiente de trabajo y de la
instalacin.

Se debe limitar la exposicin a los gases sobrantes de la anestesia, esto generalmente se logra
utilizando varias tcnicas de purificacin-expulsin. Si se usa ter se debe asegurarse al
personal mediante el uso apropiado de letreros, equipos y procedimientos que reduzcan al
mnimo los riesgos asociados con su explosividad.
PROTOCOLO PARA EL CUIDADO Y USO DE LOS ANIMALES
Se deben considerar los siguientes puntos para la elaboracin y revisin de los protocolos para
el cuidado y uso de los animales.
Razn y objetivos propuestos para el uso de los animales.
Justificacin de la especie y nmero de animales requeridos. Siempre que sea posible,
el nmero de animales que se requieren deber justificarse estadsticamente.
La calidad del entrenamiento y experiencia del personal involucrado en los
procedimientos usados
Requisitos de crianza, alojamiento y manejo no usuales.
Anestesia, analgesia y sedacin apropiadas, (las escalas de dolor y dao pueden
ayudar en el diseo y revisin de los protocolos).
La duplicacin innecesaria de experimentos.
La realizacin de varias intervenciones quirrgicas mayores, en el mismo animal
Criterios y mecanismos para la intervencin oportuna, retiro de los animales del
experimento o eutanasia, en caso de preveer la ocurrencia de dolor o estrs grave.
Cuidados despus del procedimiento
Mtodos de eutanasia y eliminacin de los cadveres.
Ambiente laboral seguro para el personal.
Restriccin Fsica
La restriccin fsica es el uso de medios manuales o mecnicos para limitar algunos o todos los
movimientos normales del animal con el propsito de examinarlo, tomar muestras,
administrar medicamentos y otras manipulaciones teraputicas o experimentales. En la
mayora de las ocasiones en que se aplica, los animales son inmovilizados por lapsos breves,
generalmente minutos.
Los movimientos del animal pueden ser restringidos brevemente ya sea en forma manual o
mediante aparatos de restriccin, estos ltimos deben ser del tamao, diseo y operacin
apropiados para reducir al mnimo la incomodidad o evitar lesiones al animal.

Se debe evitar la restriccin prolongada, a menos que sea esencial para lograr los objetivos de
la investigacin.Los sistemas menos restrictivos que no limitan la capacidad del animal para
adoptar sus posturas normales, los puntales en forma de yugo para los animales de granja,
deben usarse cuando sean compatibles con los objetivos del protocolo. Cuando se usen
aparatos de restriccin, stos debern estar diseados especficamente, para lograr las metas
de la investigacin que sera imprctico o imposible lograr por otro medio, y para evitar
lesiones a los animales y al personal.
A continuacin se enlistan importantes lineamientos para la restriccin de movimiento:
Los aparatos de restriccin no deben considerarse como mtodos de alojamiento
normales.
Los aparatos de restriccin no deben usarse por simple conveniencia al manipular o
manejar animales.
El lapso de restriccin deber ser el mnimo requerido para alcanzar los objetivos de la
investigacin.
Debern tomarse las previsiones para observar al animal a intervalos apropiados.
Si se observan lesiones o enfermedades asociadas con la restriccin de movimiento se
debe brindar atencin mdico veterinaria. La presencia de lesiones, enfermedades o
cambios de conducta severos a menudo necesitan la remocin, temporal o
permanente, del animal de la restriccin.
Mltiples Intervenciones Quirrgicas Mayores
La ciruga mayor penetra o expone una cavidad corporal o produce un menoscabo substancial
de la funcin fsica o fisiolgica. La realizacin de varias intervenciones quirrgicas mayores,
con recuperacin entre ellas, en el mismo animal no est aprobada, pero puede permitirse si
el investigador la justifica cientficamente.
Restriccin de Lquido o Alimento
Cuando las situaciones experimentales requieran restringir la ingestin de lquido o alimento,
debern brindarse, por lo menos, las cantidades mnimas para permitir el desarrollo de los
animales jvenes y para mantener el bienestar a largo plazo de todos los animales. La
restriccin debida a propsitos de investigacin debe estar justificada cientficamente y
acompaada de un programa que verifique los parmetros fisiolgicos y de conducta e incluya
criterios (tales como la prdida de peso y el estado de hidratacin) para el retiro, temporal o
permanente, del animal del protocolo experimental. La restriccin es usualmente medida
como un porcentaje de la ingestin ad libitum o del consumo diario, o como cambio
porcentual conforme al peso corporal del animal.
En el caso de limitacin de lquido se deben tomar precauciones para evitar la deshidratacin
aguda o crnica, incluyendo el registro diario de la ingestin de lquido y el registro, por lo
menos semanal, del peso corporal.


Atencin veterinaria
Debe brindarse atencin veterinaria adecuada, incluyendo a todos los animales para la
evaluacin de su salud y bienestar. La misin institucional, las metas programticas y la
envergadura del programa animal determinarn la necesidad de tiempo completo, tiempo
parcial o servicios de asesora veterinaria. Las visitas del asesor o del veterinario de tiempo
parcial debern hacerse a intervalos apropiados segn las necesidades del programa.
Consideraciones ticas, humanitarias y cientficas en ocasiones requieren el uso de
tranquilizantes, analgsicos o anestsicos en los animales. El veterinario responsable debe
asesorar al personal de investigacin para asegurar que se cumplan las necesidades
humanitarias y que a la vez sean compatibles con los requerimientos cientficos.
NORMAS DE BIOSEGURIDAD EN EL ANIMALARIO
Segn los parmetros establecidos por la OMS para lo que es ambiente de los animales en
laboratorios, se puede agregar lo siguiente:

El empleo de animales de laboratorio con fines experimentales y de diagnstico impone al
usuario la obligacin moral de adoptar todas las medidas necesarias para evitar que aqullos
padezcan dolores o sufrimientos innecesarios. Hay que proporcionar a los animales un
alojamiento cmodo, higinico y de dimensiones suficientes, as como agua y comida de
buena calidad y en cantidad suficiente. Al final del experimento habr que sacrificarlos con el
procedimiento menos cruel posible.

Por motivos de seguridad, los animales deben estar alojados en un local independiente,
separado del laboratorio. Si se trata de un local contiguo, deber estar construido de tal modo
que sea posible aislarlo de las partes pblicas del laboratorio en caso de necesidad, as como
para las operaciones de descontaminacin y desinfestacin.

Al igual que todos los laboratorios normales, los animalarios tienen sus niveles de
bioseguridad.


En cuanto a los animales que van a usarse en el laboratorio, los factores que hay que tener en
cuenta son los siguientes:

1. El carcter de los animales, es decir, su grado de agresividad y tendencia a morder o araar.
2. Sus endoparsitos y ectoparsitos naturales.
3. Las zoonosis a las que son susceptibles.
4. La posible diseminacin de alrgenos.

Como en el caso de los laboratorios, los requisitos relativos a las caractersticas de diseo, el
equipo y las precauciones son cada vez ms estrictos a medida que aumenta el nivel de
seguridad. Las directrices son acumulativas; es decir, cada nivel incorpora los requisitos de los
niveles inferiores.

Animalarios nivel de bioseguridad 1

Este nivel es el apropiado para mantener a la mayora de los animales despus de la
cuarentena (salvo los primates no humanos, respecto de los cuales debe consultarse a las
autoridades nacionales) y para los animales que son inoculados deliberadamente con agentes
de riesgo. Se necesitan tcnicas microbiolgicas apropiadas.
El director del animalario debe determinar las polticas, procedimientos y protocolos para
todas las operaciones, as como para el acceso al animalario. Se instituir un programa
apropiado de vigilancia mdica para el personal y se preparar y adoptar un manual de
seguridad de las operaciones.


Este nivel es apropiado para el trabajo con animales a los que se inoculan deliberadamente
microorganismos del grupo de riesgo 2. Se aplicarn las siguientes precauciones de seguridad:

1. Se cumplirn todos los requisitos de los animalarios del nivel 1.
2. Se colocarn seales de advertencia del peligro biolgico en las puertas y otros lugares
apropiados.
3. El local estar diseado de modo que sea fcil de limpiar y mantener.
4. Las puertas deben abrirse hacia dentro y cerrarse solas.
5. La calefaccin, la ventilacin y la iluminacin deben ser apropiadas.
6. Si se instala ventilacin mecnica, el flujo de aire debe dirigirse hacia dentro. El aire
utilizado se evacuar al exterior y no se reciclar a ninguna otra parte del edificio.
7. El acceso se limitar a las personas autorizadas.
8. No se admitir ningn animal distinto de los utilizados con fines experimentales.
9. Existir un programa de lucha contra artrpodos y roedores.
10. Si hay ventanas, estas sern seguras, irrompibles y, si se pueden abrir, llevarnrejillas a
prueba de artrpodos.
11. Las superficies de trabajo habrn de ser descontaminadas con desinfectantes eficaces
despus del trabajo.

12. Se dispondr de CSB (clases I o II) o jaulas aislantes con suministro especial de aire y
evacuacin de aire a travs de filtros HEPA para aquellas tareas que puedan entraar
la generacin de aerosoles.
13. Se dispondr de una autoclave in situ o cerca del animalario.
14. El material de los lechos de los animales se eliminar de modo que se reduzca al
mnimo la produccin de aerosoles y polvo.
15. Todos los materiales de desecho y de los lechos deben descontaminarse antes de ser
eliminados.
16. Se restringir en lo posible el uso de instrumentos punzantes o cortantes. stos se
recogern siempre en recipientes resistentes y a prueba de perforacin, provistos de
tapa, y sern tratados como material infeccioso.
17. El material destinado al tratamiento con autoclave o a la incineracin debe
transportarse sin riesgo en recipientes cerrados.
18. Las jaulas de los animales se descontaminarn despus de su uso.
19. Los cadveres de los animales sern incinerados.
20. En el local se utilizar ropa y equipo de proteccin, que se retirar a la salida.
21. Se instalarn lavabos y el personal se lavar las manos antes de salir del animalario.
22. Todas las lesiones, por leves que sean, debern ser tratadas de forma apropiada,
notificadas y registradas.
23. Estar prohibido comer, beber, fumar y aplicar cosmticos dentro del animalario.
24. Todo el personal deber recibir capacitacin apropiada.


Este nivel es apropiado para trabajar con animales que son inoculados deliberadamente con
agentes incluidos en el grupo de riesgo 3, o cuando as lo indique la evaluacin del riesgo.
Todos los sistemas, prcticas y procedimientos habrn de ser revisados y certificados
nuevamente una vez al ao. Se aplicarn las siguientes precauciones de seguridad:

1. Deben cumplirse todos los requisitos correspondientes a los animalarios de los niveles
de bioseguridad 1 y 2.
2. El acceso debe estar estrictamente controlado.
3. El animalario estar separado de otros locales del laboratorio y destinados a animales
por dos puertas que formen un vestbulo o antesala.
4. En el vestbulo se instalarn lavabos.
5. En el vestbulo se instalarn duchas.
6. Habr que disponer de ventilacin mecnica que asegure un flujo continuo de aire en
todos los locales. El aire de salida pasar por filtros HEPA antes de ser evacuado a la
atmsfera sin ningn tipo de recirculacin. El sistema estar diseado de tal modo que
impida el flujo de retorno accidental y que haya una presin positiva en todas partes
del animalario.
7. Se dispondr de una autoclave situada en un lugar cmodo respecto del alojamiento
de los animales y donde el riesgo biolgico est contenido. Los residuos infecciosos se
tratarn en la autoclave antes de trasladarlos a otros lugares de la instalacin.
8. Se dispondr de un incinerador de fcil acceso en la instalacin o se tomarn otras
disposiciones al mismo efecto con las autoridades competentes.

9. Los animales infectados con microorganismos del grupo de riesgo 3 estarn alojados
en jaulas aisladas o en locales con salidas de ventilacin situadas detrs de las jaulas.
10. Los lechos de los animales tendrn el mnimo polvo que sea posible.
11. Toda la ropa protectora deber ser descontaminada antes de enviarla a la lavandera.
12. Las ventanas estarn hermticamente cerradas y sern resistentes a la rotura.
13. Se ofrecer al personal la posibilidad de inmunizarse, si procede.

El trabajo que se realice en estas instalaciones normalmente guardar relacin con el del
laboratorio de contencin mxima nivel de bioseguridad 4, y habr que armonizar las
normas y los reglamentos nacionales y locales para aplicarlos a ambos tipos de instalaciones.
Para el trabajo en laboratorios que requieren trajes especiales se utilizarn prcticas y
procedimientos especiales, adems de los que se describen a continuacin.

1. Se cumplirn todos los requisitos de los animalarios de los niveles de bioseguridad
1, 2 y 3.
2. El acceso estar estrictamente controlado; slo tendr autorizacin para entrar el
personal designado por el director del establecimiento.
3. Ninguna persona deber trabajar sola: se aplicar la regla de las dos personas.
4. El personal habr recibido el mximo nivel posible de formacin en microbiologa
y estar familiarizado con los riesgos que entraa su trabajo y las precauciones
necesarias.
5. Las zonas en las que se alojen los animales infectados con agentes del grupo de
riesgo 4 mantendrn los criterios de contencin descritos y aplicados en los
laboratorios de contencin mxima nivel de bioseguridad 4.
6. Se entrar en la instalacin por un vestbulo de cierre hermtico cuya parte limpia
estar separada de la parte restringida por las instalaciones de cambio de ropa y
duchas.
7. El personal deber quitarse la ropa de calle al entrar y ponerse ropa protectora
especial. Despus del trabajo se quitar la ropa, la separar para ser tratada en
autoclave, y se duchar antes de salir.
8. La instalacin estar ventilada por un sistema de evacuacin de aire con filtros
HEPA que asegure una presin negativa (flujo de aire hacia el interior).
9. El sistema de ventilacin estar diseado de modo que impida el flujo de retorno y
la presurizacin positiva.
10. Para el intercambio de materiales se dispondr de una autoclave de doble puerta
con el extremo limpio situado en una sala exterior a las salas de contencin.
11. Para el intercambio de materiales que no puedan ser tratados en la autoclave se
dispondr de una caja de paso con cierre hermtico cuyo extremo limpio estar
situado fuera de salas de contencin.
12. Todas las manipulaciones de animales infectados con agentes del grupo de riesgo4
se realizarn en condiciones de contencin mxima nivel de bioseguridad 4.
13. Todos los animales estarn alojados en aisladores.
14. Todos los desechos y el material de los lechos de los animales se tratarn en la
autoclave antes de sacarlos del animalario
15. Se someter al personal a vigilancia mdica.

ENSAYOS REALIZADOS EN ANFIBIOS
Uno de los Phylum ms utilizados como modelos experimentales es el grupo Amphibia, ya que
stos presentan unas enormes ventajas entre las que se incluyen un buen conocimiento de su
fisiologa, gran diversidad taxonmica, tolerancia a grandes variaciones en el ambiente, fcil
mantenimiento en cautividad y mayor similitud con los humanos en comparacin con otras
especies animales utilizadas en experimentacin. Todas estas ventajas han hecho que los
anfibios constituyan un tercio de los modelos animales, siendo utilizados por varios
investigadores galardonados con el Premio Nobel.

Tabla1: Utilizacin de modelos animales con anfibios en las investigaciones de
Premios Nobel.

Fecha

Galardonados

Campos de estudio

Especies utilizadas

1920

A. Krogh
Regulacin capilar
Rana esculenta
Rana temporaria

1922
A.V. Hill
O.F. Meyerhof
Metabolismo muscular

Rana temporaria

1935

H. Spermann
Centros orgnicos
Tritoncristalus
Tritonlaeniatus

1936
H. Dale
O. Loewi
Bases qumicas en la transmisin
nerviosa

Rana esculenta

1947

B.A. Houssay
Regulacin del metabolismo de
carbohidratos
Butoarenarum
Rana pipiens

1963
J.C. Eccles
A.L. Hodgkin
A.F. Huxley
Base de los iones en los
potenciales de accin

Rana esculenta
Rana temporaria

1991
E.
Neher
B.
Sakmann
Funcin de los canales inicos

Rana esculenta

Caractersticas especiales de los anfibios de inters como modelos animales

Los anfibios son uno de los modelos de eleccin por las siguientes razones:

Fisiologa bsica

Existen una gran cantidad de estudios que describen y explican las caractersticas anatmicas,
fisiolgicas y ecolgicas de los anfibios. En muchos de ellos el objetivo es el conocimiento de

los anfibios perse, ya que estos animales despiertan un gran inters por su posicin clave en la
escala evolutiva. Sin embargo, los resultados aportados pueden ser utilizados en la creacin de
modelos animales, extrapolables incluso a animales mamferos.

Facilidad de mantenimiento en cautividad

Los anfibios utilizados en experimentacin presentan una talla media comprendida entre 1 y
20 cm, por lo que requieren espacios relativamente pequeos para su confinamiento en jaulas;
se estima que las necesidades medias son de 80 L por animal. S es importante realizar un
perfecto mantenimiento de las condiciones de humedad (que ha de ser elevada) y
ventilacin, para asegurar el buen estado fsico de los individuos y evitar la proliferacin de
microorganismos.

Prolificidad elevada

Algunas especies exticas son poco prolficas porque tienen que llevar los huevos o
renacuajos en la espalda, en bolsas de la piel, o incluso en el estmago durante una gran
parte de su juventud. Sin embargo, la mayora de las especies del gnero Rana cra a principio
de la primavera alcanzando los 20.000 huevos por puesta. Hay tambin dos especies de sapos,
y algunas salamandras y cecilias que paren cras vivas que tienen una conformacin corporal
similar a la de sus progenitores.

Elevado nmero de especies

Existen 3.140 especies de anfibios conocidas que se han dividido en tres ordenes: Anura o
Salientia (2660 especies de ranas terrestres y arborcolas y de sapos), Urodela, o Caudata (320
especies de salamandras) y Apoda, o Gymnophiona (160 especies de cecilias). Esta gran
diversidad de especies permite realizar estudios comparativos con facilidad.

Gran diversidad de hbitats

La diversidad de especies, a su vez se traduce en una amplia distribucin geogrfica y gran
capacidad de adaptacin a distintos medios naturales. As, podemos encontrar anfibios en muy
diversos hbitats, adquiriendo morfologas distintas y mostrando diversas adaptaciones
fisiolgicas al ambiente. Algunos, como Xenopus laevis, son completamente acuticos aunque
tengan la capacidad de respirar aire directamente, lo que hace que predomine un tipo de
respiracin cutnea no habiendo perdido la forma de respiracin pulmonar. Otra clase de
anfibios han sido encontrados a ms de 4000 metros de altitud (Rana sauteri en Taiwan)
con una gran capacidad de resistencia a las bajas temperaturas y a la concentracin
reducida de oxgeno en el aire. Tambin es conocida la capacidad de sapos encontrados en
altas latitudes de resistir la congelacin completa de su cuerpo. Otras especies (Rana
cancrivora, o rana comedora de cangrejos), incluso han desarrollado la capacidad de hacer
inmersiones en agua salada de mar consiguiendo resolver los problemas osmoreguladores que
se presentan en este medio.


Modelos animales con anfibios

Para su exposicin hemos clasificado algunos ejemplos de modelos animales que utilizan
distintas especies de anfibios en funcin del campo experimental en el que se resultan de
aplicacin, explicando brevemente su aplicabilidad al mtodo experimental.

Tabla 2: Resumen de los modelos experimentales realizados con anfibios.

rea cientfica Experimentos Especie anfibia

Fisiologa
cardiovascular
Desarrollo cardiaco Ajolote (Ambystoma mexicanum)
Reparacin del dao tras infarto Tritn (Notophthalmus viridescens)
Permeabilidad vascular Rana africana de uas (Xenopus laevis)
Relacin con el comportamiento Anuros en general

Fisiologa del
msculo
esqueltico
Metabolismo celular Rana africana de uas (Xenopus laevis)
Sapo de las Montaas Rocosas (Bufo woodhousei)
Rana leopardo (Rana pipiens)
Corrientes de activacin de calcio
Canales de membrana

Cintica de alta velocidad
Ajolotes (Ambystoma mexicanum, Ambystoma
tigrinum)
Funcin renal Desarrollo del rin Sapo marino (Bufo marinus)

Fisiologa
sensorial
Canales inicos y conexiones
neuronales

Salamandra tigre (Ambystoma tigrinum)
Evaluacin del sentido del gusto Sapo moteado (Bufo punctatus)

Neurofisiologa del odo interno
Coqu comn (Eleutherodactylus coqui)
Salamandra olm (Proteus anguinus)
Fisiologa
respiratoria

Desarrollo del sistema respiratorio

Salamandras (fam. Plethodontidae)
Fisiologa
reproductiva
Desarrollo embrionario Coqu comn (Eleutherodactylus coqui)
Evolucin del aparato reproductor Cecilias (Gymnophiona)
Fisiologa
evolutiva

Adaptacin a la terrestrialidad

Tritn vientre de fuego chino (Cynops orientalis)

Fisiologa
ambiental
Indicadores de la calidad
ambiental

Rana de bosque (Rana sylvatica)
Rana leopardo (Rana pipiens)
Ambientes extremos
Criogenizacin Rana africana de uas (X. laevis)

Fisiologa del msculo esqueltico

Muchos de los estudios iniciales sobre inervacin y actividad muscular fueron realizados en
anfibios, con protocolos de trabajo que hoy todava se emplean, con ciertas modificaciones, en
laboratorios para docencia.
La forma y la funcin del msculo esqueltico de los anfibios continan siendo un campo
muy frtil, aplicando nuevos protocolos y tcnicas cientficas, para el estudio de procesos
bsicos de metabolismo celular, corrientes de activacin de calcio, cintica de canales de

membrana, y otros procesos ms especficos como los estudios de la cintica de alta velocidad
responsable de los movimientos de la lengua. Una de las ltimas revisiones sobre la activacin
muscular por calcio enfatiza el papel clave de los anfibios en la comprensin de la fisiologa
muscular.

Estudios del sistema cardiovascular

En la actualidad el ajolote (Ambystoma mexicanum) se emplea frecuentemente en
investigaciones sobre el desarrollo cardiaco, ya que existen individuos que sufren una
mutacin que les produce una carencia de corazn; realmente, ste se desarrolla a lo largo
de la vida del animal, si bien nunca llega a latir ya que sus miofibrillas estn mal organizadas. En
otros vertebrados se produce tambin esta mutacin que resulta letal en estadios iniciales del
desarrollo; sin embargo, el ajolote es capaz de sobrevivir y continuar su desarrollo durante
varios das.

Otra caracterstica interesante de algunos anfibios es su capacidad para regenerar miocitos,
a diferencia de los mamferos; esta caracterstica se est utilizando en modelos para el estudio
de la recuperacin miocardial tras un infarto. Realmente los miocitos de los anfibios no se
regeneran sino que tienen capacidad potencial para dividirse y repoblar la zona cardiaca
daada.

Dentro de la investigacin microvascular se utilizan anfibios en el desarrollo de nuevas tcnicas
para estudiar la permeabilidad vascular, basndose en el gran desarrollo de su sistema
linftico, que incluye incluso un corazn linftico pulstil.

Por ltimo el estudio de la relacin entre el comportamiento y la funcin cardiovascular en
anuros es de gran inters ya que son el nico grupo de animales terrestres cuya hidratacin no
depende de la ingesta de agua o de su produccin a partir del metabolismo; estos animales
absorben agua a travs de una zona en la piel y, mediante cambios posturales, pueden
conducirla al sistema circulatorio y regular as su volumen sanguneo.

Funcin renal

Para una adecuada filtracin renal en mamferos es necesario el desarrollo del rin desde
pronefros hasta el metanefros, pero el pronefros no es funcional en estadios iniciales del
desarrollo y es difcil estudiar su funcionalidad in tero. En los anfibios el pronefros es
funcional en estadios iniciales y sirve de rgano filtrador de sangre, lo que nos permite estudiar
ms fcilmente el desarrollo de este rgano.

Fisiologa sensorial

Los anfibios han sido el modelo animal de eleccin en estudios sobre visin durante aos, y se
siguen empleando en la actualidad. Las clulas retinianas de los anfibios tienen un gran
tamao, lo que hace que sean el modelo ideal para estudiar la actividad de los canales y
la conexin neuronal. La investigacin de otros sistemas sensoriales tambin se ha beneficiado

de algunas de las caractersticas fisiolgicas de los anfibios, ya que los anfibios (como las aves)
tienen la capacidad de regenerar las clulas ciliadas del odo interno, a diferencia de los
mamferos, una de las principales causas de sordera en humanos. Adems, Bufo punctatus ha
sido empleado para evaluar el sentido del gusto en humana, ya que este sapo que habita en
zonas desrticas tiene una zona especial de la piel capaz de absorber agua y posee unos
sensores que detectan la salinidad de dicho agua (para poder regular su osmolaridad).

Fisiologa respiratoria

La fisiologa respiratoria de estos animales concede un amplio campo de estudio. Los
individuos adultos intercambian gases a travs de los pulmones y la piel, aunque existe un
grupo de salamandras que carecen de pulmones y cuya respiracin es completamente
cutnea. Las branquias estn presentes normalmente durante el desarrollo larvario y se
mantienen en ciertos casos durante las fases adultas. El paso de una respiracin branquial a
pulmonar se lleva a cabo durante el proceso de metamorfosis, que es sumamente interesante
para el estudio del control respiratorio desde el punto de vista de la fisiologa de la evolucin,
fisiologa del desarrollo y fisiologa ambiental.

ENSAYOS REALIZADOS EN CABALLOS
Antes de mencionar los ensayos realizados en los caballos, explicaremos a grandes rasgos los
cuidados o pautas necesarias para mantener a este animal en instalaciones adecuadas.
Esto quiere justificar que a simples rasgos los caballos son animales de gran tamao con
respecto a otros animales que se utilizan comnmente en los laboratorios por lo cual el
alojamiento o crianza de este animal tiene que seguir algunas recomendaciones para que as
los resultados obtenidos nos sean mas factible y verdicos.

Estas son las pautas ms resaltantes en el manejo de caballos:

Confinamiento o encierro primario

Una caballeriza bien iluminada y con acceso a un corral de ejercicio es deseable para que los
caballos se mantengan en condiciones ptimas de salud y tono muscular. El alojamiento debe
permitir un espacio adecuado en los pasillos para permitir el movimiento seguro de los
caballos y sus cuidadores. En las caballerizas no debe existir ningn objeto saliente que pueda
lastimar a los animales. Las paredes debern ser lo suficientemente altas para prevenir las
interacciones con los caballos alojados a los lados. Es importante que las puertas tengan un
ancho (1.25 m) y alto (2.25 m) adecuados para facilitar el movimiento de los animales, sin
riesgo ni lesiones. Los techos tambin debern tener una altura adecuada, de 3 m para
permitir al caballo asumir una postura normal y evitar lesiones en la cabeza. Los pisos debern
tener una superficie durable, no resbalosa. Bajo condiciones de laboratorio o en instituciones
educativas, se deber proporcionar un cuarto o rea separada de la zona de las caballerizas
para realizar procedimientos de preferencia con una manga de manejo.


Temperatura

Los caballos pueden tolerar bajas temperaturas siempre y cuando exista suficiente proteccin
de los vientos y lluvias extremas. De igual manera pueden tolerar temperaturas altas siempre
y cuando se les proporcione sombra en praderas y una ventilacin y humedad apropiadas en
las caballerizas. Debe existir suficiente agua potable y fresca disponible en todo momento.,
especialmente en climas calurosos. La temperatura ptima se encuentra entre 10 y 15C,
aunque pueden tolerar de -7 a 29C si se alojan en caballerizas secas y libres de corrientes de
aire.
Ventilacin

La capacidad de ventilacin debe ser de por lo menos 2.8 m
3
/min. por 450 Kg de caballo a
temperaturas de -1 a 10C y deber incrementarse a medida que aumente la temperatura.
Densidad de poblacin

Idealmente los caballos debern alojarse en caballerizas individuales de por lo menos 3.5 x 3.5
m, y tener acceso a un corral de ejercicio de 10 x 27.5 m mayor.
Despus del destete es conveniente que cada animal tenga una caballeriza separada. En el
corral de ejercicio se debe mantener una separacin por edad y compatibilidad.
Cama

Se debe proporcionar suficiente cama en la forma de aserrn, paja o algn otro material
adecuado. Deber existir un drenaje adecuado para evitar problemas en los cascos y que el
animal se ensucie innecesariamente. El estircol y la cama mojada debern retirarse
diariamente para mantener a los caballos limpios y secos, y el medio ambiente libre de olores.
Los animales no debern tener acceso al estercolero para evitar infestaciones de parsitos.
Se recomienda el cepillado diario, especialmente si los caballos estn alojados en caballerizas
que limitan sus movimientos.

Salud Animal

Los caballos sanos estn activos, alertas y responden cuando se acerca alguien. La cabeza la
traen en alto y las orejas erguidas. El pelaje est brillante y corto en el verano y grueso y suave
en el invierno, especialmente si se encuentran al aire libre. Los caballos sanos comen con
gusto cuando se les acerca alimento y generalmente toman agua despus de comer. Defecan
heces consistentes varias veces al da y orinan cada 2 a 4 horas.


Alimento y Agua

Los caballos en confinamiento deben ser alimentados por lo menos dos veces al da. Cuando
no tienen acceso al pastoreo se les debe proporcionar forraje en la forma de paja u otros
materiales fibrosos para disminuir la incidencia de clicos y problemas de comportamiento
tales como morder la puerta o el borde del pesebre, masticar madera o comerse su cama. Los
caballos deben ser alimentados para que no estn ni bajos ni altos de peso.
El agua debe estar siempre limpia y disponible a libre acceso o proporcionrselas por lo menos
dos veces al da. Los requerimientos de agua dependen de varios factores, tales como la
temperatura ambiental, la funcin del animal y la composicin de la dieta. Sin embargo un
caballo en general requiere de 2 a 4 L de agua por cada Kg. de materia seca. Un caballo con
dieta de mantenimiento en un ambiente termoneutral puede requerir de 15 a 35 L, pero uno
que est trabajando y sudando o lactando puede requerir de 50 a 80 L.

Manejo y Transporte

Los caballos deben manejarse utilizando almartigones y cuerdas. Se puede obtener un mayor
control pasando la cadena de la cuerda delalmartign o ronzal sobre la nariz del caballo, esto
en caballos enteros. Se puede flexionar un miembro anterior (mano) para tener un mayor
control. En caballos ms difciles de manejar se puede utilizar el arcial, pero siempre con
cuidado y nunca por ms de cinco minutos a la vez. Las barreras fsicas pueden ser de gran
ayuda. La inmovilizacin qumica es efectiva siempre que se administre por parte de una
persona calificada. Drogas como acepromazina y xilazina son las ms utilizadas. Se deben
utilizar analgsicos o anestsicos en el caso de procedimientos que provoquen dolor.
ENSAYO REALIZADO
Produccin de suero antiofdico
El proceso de produccin del suero antiofdico antibothrops bivalente, para uso teraputico.
El suero, proveniente de equinos inmunizados con dosis crecientes de venenos bothropicos
activos, fue purificado mediante precipitaciones salinas, accin enzimtica y calor. De esta
forma se obtiene una inmunoglobulina hipotxica e hiperinmune, capaz de neutralizar
especficamente la accin de los venenos de Bothrops neuwiedi y alternates.

Animales
El primer lote de diez equinos fue proporcionado por el MSP. Los animales eran sanos. Jvenes
entre 2 y 5 anos y de mas de 500 quilos de peso.
Para las pruebas de potencia y seguridad, se utilizaron ratones blancos de 18 a 20 g de peso
(Mus musculus) de ambos sexos, y libres de patgenos especficos. Para las pruebas de
inocuidad y seguridad se utilizaron cobayos machos de 300 a 350 g de peso y libres de
patgenos especficos.

Disponibilidad de antgenos
Como se careca de produccin local de veneno, en el comienzo se utilizaron venenos de
Bothrops neuwiedi, y B. alternatus.

Caracterizacin de los venenos

Se sigui la metodologa aconsejada por la OPS/OMS para la elaboracin de sueros
heterlogos, segn se aplica en el Instituto Malbran.
Antes de comenzar la inmunizacin se determino la potencia de cada uno de los venenos,
utilizando ratones de 18 a 20 g, para calcular la dosis letal 50 (DL50) aplicando mtodos
estadsticos. La misma estuvo en menos de 4 ug/ml para el veneno de B. alternatus y menos
de 10 J.g/ml para B. neuwiedi.
Animales seroproductores
Los equinos fueron controlados por un mdico veterinario, realizndosele, a cada uno, su
ficha sanitaria en la cual se anotaron las caractersticas de su pelaje, identificacin, sexo,
numero, estado de las mucosas, dentadura y peso. Fueron numerados del 21 al 30. Se los
vacuno contra ttanos y se desparasitaron.

Antgenos

Se preparo una solucin madre de venenos de B. alternatus y B. neuwiedi a una concentracin
de 10 mg/ml, utilizando venenos completos y secos, reconstituidos. Se corrigi su pH a 7,2. Se
los filtro clariesterilizante por membranas Millipor de diametro 47 mm y poros 0,8 y 0,22 (i. Se
controlo la esterilidad, seleccionando medios que desarrollaran grmenes aerobios y
anaerobios segn lo pautado por la OMS.
Se realizaron las diluciones del veneno siguiendo el protocolo y usando como adyuvante el de
Freund complete (AFC), (AFI), y solucin salina tamponada (SSB). Los mismos fueron
completamente homogeneizados y conservados a 5C. Para tal fin, se idearon frascos
estriles que contengan una barra magntica en su interior y cerrados hermticamente. Los
componentes estriles, fueron mezclados aspticamente dentro de estos recipientes, los
cuales una vez cerrados, se colocaron sobre un agitador magntico obtenindose as una
correcta homogenizacin de los antgenos con los adyuvantes y evitando la contaminacin. Se
mantuvieron a 5C hasta su inoculacin.

En todas estas etapas el personal tcnico uso de bata, gorro, guantes y tapabocas estriles.

Obtencin del suero Sangra

La sangra exploratoria se realizo el da 161 de la reinmunizacin, por puncin de la vena
yugular del equino. El suero obtenido se titul para cada veneno por separado, mediante la
tcnica de seroneutralizacin in vivo, utilizando como animal de experimentacin el ratn que
fue inoculado por va intravenosa en vena de la cola. Cada ratn recibi 0,5 ml i/v de veneno a
una concentracin 1/1000, mezclado con cantidades variables del suero de prueba. Se los

observo durante 72 horas, al cabo de las cuales se procedi a la lectura y a realizar los clculos
estadsticos correspondientes.

De los 10 equinos inmunizados, 9 tenan ttulos
neutralizantes aceptables (ms de 900 g/ml). Un
caballo, el numero 21, mostro una neutralizacin
incompleta para el componente neuwiedi. A los diez
das de la ltima inoculacin se realizaron dos sangras
definitivas, separadas por 48 horas, a los 9 equinos
que tenan buena respuesta inmune.

No se repuso el paquete globular por falta de
estandarizacin de la tcnica. Sin embargo, el
procedimiento fue muy bien tolerado por los
animales. Se extrajeron 8 litros de plasma de cada
uno.

Dicho plasma se recogi en damajuanas estriles de
diez litros conteniendo citrato de sodio a 33%. El
mismo da de la sangra se separo el paquete globular
por decantacin y se obtuvo un total de 79 litros de
plasma sobrenadante.

Control de sueros

El control de los sueros se lleva a cabo mediante
diversas pruebas: de neutralizacin en ratones
blancos, de pirogenicidad en conejos, de seguridad en
cobayos y ratones, de esterilidad segn
recomendaciones del National Institute of Health de
E.U.A. (NJH); tambin incluye determinacin de fenol
y protenas, as como una inspeccin visual por
materiales en suspensin.

Una vez que los animales inmunizados han alcanzado un ttulo de neutralizacin adecuado el
cual, de acuerdo con los estndares adoptados por los autores, es de 1 a 2 mg de veneno
neutralizado por ml de suero para crotalinae y de 0.250 mg para Micrurus (3) se sangran en un
cepo con un equipo diseado para tal efecto.

Normalmente se obtienen ocho litros diarios de sangre de cada caballo durante cuatro das,
con reinoculacin de los eritrocitos al da siguiente. Este sistema proporciona alrededor de 16
litros de plasma citratado por caballo, el cual se so mete al mismo proceso 3 6 4 veces al ano.
Con objeto de mantener niveles elevados de anticuerpos, los animales reciben tres dosis de
refuerzo de veneno entre cada sangra.


Con respecto al suero crudo preparado en carneros, su actividad neutralizante frente a los
venenos utilizados en el proceso de inmunizacin. Resta aun comprobar su eficacia contra
otros venenos de serpientes del gnero Bothrops y en pruebas de campo.

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