6 2 6 J . P .

J OHNSTON 1 9 5 5
2 . An e m p i r i c a l c o r r e c t i o n f o r t h e e f f e c t o f
a l b u m i n o n t h e s e d i m e nt a t i o n o f h y a l u r o ni c a c i d i s
o b t a i ne d , a nd a p p l i e d t o t h e r e s u l t s o b t a i ne d f o r
h u m a n s y no v i a l f l u i d s .
3 . Th e e f f e c t o f a l b u m i n o n t h e s e d i m e nt a t i o n o f
h y a l u r o ni c a c i d , wh e n t h e l a t t e r i s t h e s l o we r
c o m p o ne nt , i s s h o wn t o b e c o ns i s t e nt wi t h t h e
' M c F a r l a ne ' ( 1 9 3 5 a , b ) b o u nd a r y a no m a l y .
4 . Th e e f f e c t o f a l b u m i n o n t h e s e d i m e nt a t i o n o f
h y a l u r o ni c a c i d a nd t h e r e v e r s e e f f e c t , i n r e g i o ns o f
t h e c e l l wh e r e b o t h a r e p r e s e nt , h a v e b e e n i nv e s t i -
g a t e d . Th e f o r m e r i s s h o wn t o b e c o ns i s t e nt i n
g e ne r a l wi t h c u r r e nt t h e o r y . Th e l a t t e r e f f e c t
r e q u i r e s s p e c i a l e x p l a na t i o n, a nd t h e h y p o t h e s i s i s
p u t f o r wa r d t h a t a l a r g e f r a c t i o n o f t h e h y a l u r o ni c
a c i d p a r t i c l e i s no t p e ne t r a b l e b y a l b u m i n.
Th e a u t h o r i s m o s t g r a t e f u l t o Dr A. G . Og s t o n f o r e n-
c o u r a g e m e nt a nd f o r v e r y h e l p f u l d i s c u s s i o ns ; t o M r R . G .
Ta y l o r o f t h e W i ng f i e l d - M o r r i s Or t h o p a e d i c Ho s p i t a l ,
Ox f o r d a nd t o Dr R o b b - Sm i t h o f t h e R a d c l i f f e I nf i r m a r y ,
Ox f o r d , f o r s u p p l i e s o f h u m a n s y no v i a l f l u i d , a nd t o t h e
Ox f o r d C o - o p e r a t i v e So c i e t y L t d . , f o r f a c i l i t i e s a t t h e i r
B o t l e y R o a d s l a u g h t e r h o u s e .
R EF ER ENC ES
C e c i l , R . & Og s t o n, A. G . ( 1 9 4 8 ) . B i o c h e m . J . 4 3 , 5 9 2 .
F e s s l e r , J . H. & Og s t o n, A. G . ( 1 9 5 1 ) . Tr a ns . F a r a d a y So c . 4 7 ,
6 6 7 .
J o h ns t o n, J . P . ( 1 9 5 5 a ) . B i o c h e m . J . 5 9 , 6 2 6 .
J o h ns t o n, J . P . ( 1 9 5 5 b ) . B i o c h e m . J . 5 9 , 6 3 3 .
J o h ns t o n, J . P . & Og s t o n, A. G . ( 1 9 4 6 ) . Tr a ns . F a r a d a y So c .
4 2 , 7 8 9 .
M c F a r l a ne , A. S. ( 1 9 3 5 a , b ) . B i o c h e m . J . 2 9 , 4 0 7 , 6 6 0 .
Og s t o n, A. G . & St a ni e r , J . E. ( 1 9 5 0 ) . B i o c h e m . J . 4 6 , 3 6 4 .
Og s t o n, A. G . & St a ni e r , J . E. ( 1 9 5 1 ) . B i o c h e m . J . 4 9 , 5 8 5 .
Og s t o n, A. G . & St a ni e r , J . E. ( 1 9 5 2 ) . B i o c h e m . J . 5 2 , 1 4 9 .
P h i l p o t , J . St L . ( 1 9 3 8 ) . Na t u r e , L o nd . , 1 4 1 , 2 8 3 .
A C o m p a r i s o n o f t h e P r o p e r t i e s o f Hy a l u r o ni c Ac i d f r o m
No r m a l a nd P a t h o l o g i c a l Hu m a n Sy no v i a l F l u i d s
B Y J . P . J OHNSTON*
De p a r t m e nt o f B i o c h e m i s t r y , U ni v e r s i t y o f Ox f o r d , a nd De p a r t m e nt o f P h y s i o l o g y ,
C h a r i ng C r o s s Ho s p i t a l M e d i c a l Sc h o o l
( R e c e i v e d 2 0 Oc t o b e r 1 9 5 4 )
A nu m b e r o f s t u d i e s h a v e p r e v i o u s l y b e e n c a r r i e d
o u t o n s y no v i a l f l u i d f r o m b o t h h u m a n a nd a ni m a l
s o u r c e s . Th e p r e s e nt wo r k wa s u nd e r t a ke n p r i -
m a r i l y t o c o m p a r e t h e h y a l u r o ni c a c i d i n f l u i d s
f r o m no r m a l a nd p a t h o l o g i c a l h u m a n kne e j o i nt s .
B e c a u s e o f t h e s m a l l v o l u m e o f f l u i d a v a i l a b l e f r o m
a no r m a l j o i nt , i nv e s t i g a t i o n b y e l e c t r o p h o r e s i s o r
b y p r e p a r a t i o n o f u l t r a f i l t e r - r e s i d u e ( Og s t o n &
St a ni e r , 1 9 5 0 ) wa s p r e c l u d e d a nd t h e s e m e t h o d s
we r e a c c o r d i ng l y no t u s e d o n p a t h o l o g i c a l e f f u s i o ns .
Th e m e t h o d s u s e d i nc l u d e d u l t r a c e nt r i f u g a l a nd
v i s c o s i t y m e a s u r e m e nt s , t h e f o r m a t i o n o f m u c i n,
a nd t h e s t u d y o f i t s c o m p o s i t i o n. I t wa s h o p e d
t h a t a ny d i f f e r e nc e b e t we e n t h e s e p r o p e r t i e s i n
no r m a l a nd p a t h o l o g i c a l f l u i d s m i g h t t h r o w l i g h t
o n a ny c h a ng e s i n t h e h y a l u r o ni c a c i d i n t r a u m a a nd
d i s e a s e . F u r t h e r m o r e , a n a s s e s s m e nt o f t h e r e s u l t s
f r o m t h e s e t e c h ni q u e s m i g h t r e v e a l a r e l i a b l e a nd
s e ns i t i v e t e s t f o r a b no r m a l i t y i n j o i nt f l u i d s .
EXP ER I M ENTAL
Sy no v i a l
f l u i d 8 ,
s o u r c e s a nd c o l l e c t i o n
K ne e - j o i nt f l u i d f r o m f r e s h l y s l a u g h t e r e d c a t t l e wa s c o l -
l e c t e d a nd s t o r e d a s d e s c r i b e d b y Og s t o n & St a ni e r ( 1 9 5 0 ) .
Hu m a n s y no v i a l f l u i d f r o m kne e j o i nt s wa s o b t a i ne d wi t h
f u l l s t e r i l e p r e c a u t i o ns . Th e h u m a n s a m p l e s , m a y b e d i v i d e d
i nt o t h r e e g r o u p s : ( i ) f l u i d s f r o m no r m a l j o i nt s , ( i i ) f l u i d s
f r o m j o i nt s a s ne a r no r m a l a s p o s s i b l e , a nd ( i i i ) f r a nkl y
p a t h o l o g i c a l f l u i d s . Th o s e i n t h e i nt e r m e d i a t e g r o u p we r e
o b t a i ne d o nl y f r o m j o i nt s wh i c h a p p e a r e d a t o p e r a t i o n t o
b e ne a r l y no r m a l ; a l l i nj u r i e s we r e p a s t t h e a c u t e p h a s e a nd
t h e j o i nt s h a d b e e n p r e v i o u s l y r e s t e d . B r i e f d a t a o n t h e
s a m p l e s a r e g i v e n b e l o w.
No r m a l g r o u p . A a nd B : no r m a l j o i nt f l u i d o b t a i ne d a t
o p e r a t i o n, 1 m l . J : p o s t - m o r t e m s a m p l e o b t a i ne d 1 2 h r .
a f t e r d e a t h , 1 m l .
I nt e r m e d i a t e g r o u p . C : i nt e r na l d e r a ng e m e nt o f t h e kne e ,
a p p r o x . 1 5 m l . D: p o o l e d s a m p l e f r o m f o u r c a s e s o f c a r t i l a g e
o p e r a t i o n, a p p r o x . 1 2 m l . E: c a r t i l a g e o p e r a t i o n. Sl i g h t l y
b l o o d - s t a i ne d , 8 m l . F : c a r t i l a g e o p e r a t i o n, 3 m l . G :
c a r t i l a g e o p e r a t i o n, 8 m l .
P a t h o l o g i c a l g r o u p . H: a c u t e t r a u m a wi t h l a r g e e f f u s i o n,
a p p r o x . 4 0 m l . K a nd L : u nt r e a t e d c a s e o f r h e u m a t o i d
a r t h r i t i s . F l u i d s f r o m r i g h t a nd l e f t j o i nt s r e s p e c -
t i v e l y .
M a nd N: f r o m t h e s a m e j o i nt s a s K a nd L a f t e r t r e a t m e nt
wi t h c o r t i s o ne . Sa m p l e s K - N we r e o b t a i ne d b y p a r t i a l
a s p i r a t i o n o f l a r g e e f f u s i o ns .
St o r a g e . Al l f l u i d s we r e c o o l e d t o 4 a s s o o n a s p o s s i b l e .
Hu m a n f l u i d s r e t a i ne d t h e i r v i s c o s i t y a t t h i s t e m p e r a t u r e f o r
f r o m 3 we e ks t o s e v e r a l m o nt h s , d e s p i t e b r i e f r e m o v a l t o
r o o m t e m p e r a t u r e a nd c o nt a m i na t i o n o n wi t h d r a wa l o f
p a r t o f t h e s a m p l e . Af t e r 1 2 h r . a t r o o m t e m p e r a t u r e a
f l u i d f e l l i n v i s c o s i t y a nd t h e r e f o r e d u r i ng d i a l y s i s o r p r o -
l o ng e d e x p e r i m e nt s a l l f l u i d s we r e ke p t a t 4 0 , b u t no s t e r i l e
p r e c a u t i o ns we r e t a ke n f o r b r i e f e x p e r i m e nt s . F l u i d s we r e
*
P r e s e nt a d d r e s s : M e d i c a l Di v i s i o n, C h e m i c a l De f e nc e
Ex p e r i m e nt a l Es t a b l i s h m e nt , P o r t o n, W i l t s .
P R OP ER TI ES OF HU M AN HYAL U R ONI C AC I D
d i a l y s e d a g a i ns t a s t a nd a r d b u f f e r b e f o r e u s e ( 0 2 m - Na C l ,
0 0 0 7 7 M - Na , HP O4 , 0 - 0 0 2 3 M - K H2 P O4 ,
p H 7 . 3 ) .
C e r t a i n f l u i d s d u r i ng t h e f i r s t f e w d a y s o f s t o r a g e i n t h e
c o l d , t h r e w d o wn a v o l u m i no u s c l o t . One o f t h e s e c l o t s wa s
r e m o v e d , wa s h e d a nd r e d i s s o l v e d i n M - Na 2 C O8 . Th i s
s o l u t i o n g a v e p o s i t i v e t e s t s f o r p r o t e i n a nd c a r b o h y d r a t e .
I n t h e u l t r a c e nt r i f u g e i t p r o v e d h e t e r o g e ne o u s , b u t s h o we d
a d i f f u s e c o m p o ne nt o f S2 0 1 *5 . Si nc e t h e v i s c o s i t y o f a f l u i d
wa s u na f f e c t e d b y t h e a p p e a r a nc e o f a c l o t , f l u i d s we r e
c e nt r i f u g e d b e f o r e u s e a nd a ny c l o t r e j e c t e d .
M e t h o d 8
U l t r a c e nt r i f u g e . A Sv e d b e r g o i l - t u r b i ne u l t r a c e nt r i f u g e
wi t h a d i a g o na l s c h l i e r e n o p t i c a l s y s t e m ( P h i l p o t , 1 9 3 8 ) wa s
u s e d . Al l r u nni ng p r o c e d u r e a nd s e d i m e nt a t i o n c o ns t a nt
c a l c u l a t i o ns we r e c a r r i e d o u t a s d e s c r i b e d b y C e c i l & Og s t o n
( 1 9 4 8 ) .
V i s c o 8 i t y . R o u t i ne v i s c o s i t y m e a s u r e m e nt s we r e m a d e i n
a n Os t wa l d v i s c o s i m e t e r ( c a p a c i t y 0 - 9 5 m l . a nd wa t e r - f l o w
t i m e o f a b o u t 2 4 s e c . ) . St u d i e s o n v i s c o s i t y a t d i f f e r e nt
v e l o c i t y g r a d i e nt s we r e c a r r i e d o u t i n a c o - a x i a l c y l i nd e r
C o u e t t e - t y p e v i s c o s i m e t e r ( Og s t o n & St a ni e r , 1 9 5 3 a ) . Th i s
h a d a c a p a c i t y o f 1 0 m l . o f f l u i d a nd a r a ng e o f v e l o c i t y
g r a d i e nt u p t o 7 5 s e c . - ' . Al l v i s c o s i t y m e a s u r e m e nt s we r e
m a d e a t 2 5 .
To t a l ni t r o g e n. To t a l ni t r o g e n wa s e s t i m a t e d b y a s h i ng
a nd ne s s l e r i z a t i o n. Th e c o l o u r d e v e l o p e d wa s m e a s u r e d i n
a Hi l g e r ' B i o c h e m ' p h o t o e l e c t r i c c o l o r i m e t e r .
G l u c o s a m i ne . G l u c o s a m i ne i n m u c i n wa s e s t i m a t e d b y
t h e m e t h o d o f J o h ns t o n, Og s t o n & St a ni e r ( 1 9 5 1 ) .
R e f r a c t i v e i nc r e m e nt . Two r e f r a c t o m e t e r s we r e u s e d t o
m e a s u r e r e f r a c t i v e i nc r e m e nt . Th e f i r s t wa s a d o u b l e - p r i s m
r e f r a c t o m e t e r ( d e s i g ne d b y Dr J . St L . P h i l p o t ) ; t h e s e c o nd
wa s a m o d i f i c a t i o n o f t h i s ( C e c i l & Og s t o n, 1 9 5 1 ) . L i g h t o f
5 4 6 a nd 5 7 8 m , . , r e s p e c t i v e l y , wa s u s e d i n t h e t wo r e f r a c t o -
m e t e r s . De t e r m i na t i o ns we r e a c c u r a t e t o 2 x 1 0 - 6 o f
r e f r a c t i v e i nd e x ( S. D. ) .
M u c i n
p r e p a r a t i o n.
M u c i n c l o t s we r e p r e p a r e d b y t h e
s m a l l s c a l e m e t h o d o f Og s t o n & St a ni e r ( 1 9 5 0 ) .
Dr y we i g h t . Th e d r y we i g h t o f m u c i n wa s m e a s u r e d b y
h e a t i ng t o c o ns t a nt we i g h t a t 1 0 5 .
Es t i m a t i o n o f h y a l u r o ni c a c i d c o nc e nt r a t i o n. An i m m e d i a t e
p r o b l e m a r o s e a s t o t h e m e t h o d c h o s e n t o e s t i m a t e h y a l u r o -
ni c a c i d c o nc e nt r a t i o n. P r o v i s i o na l l y c o nc e nt r a t i o n wa s
r e f e r r e d t o d r y we i g h t o f m u c i n. Al l f l u i d s e x a m i ne d g a v e
a s a t i s f a c t o r y c l o t i n a c l e a r s o l u t i o n, a l t h o u g h t h e f r i a b i l i t y
o f t h e c l o t v a r i e d . Two m e t h o d s we r e e m p l o y e d . I n t h e
f i r s t , m u c i n c l o t s we r e p r e p a r e d f r o m a kno wn v o l u m e o f
f l u i d a f t e r d i a l y s i s , a nd h e a t e d t o c o ns t a nt we i g h t . I n s o m e
c a s e s m u c i n c l o t f o r m a t i o n a f t e r d i a l y s i s wa s u ns a t i s -
f a c t o r y ; t h e o r i g i na l f l u i d s we r e t h e r e f o r e u s e d a nd e r r o r s
f r o m v o l u m e c h a ng e o n d i a l y s i s e l i m i na t e d b y q u a nt i t a t i v e
t r a ns f e r o f t h e s a c c o nt e nt s wi t h wa s h i ng a f t e r d i a l y s i s wa s
c o m p l e t e .
Th e s e c o nd m e t h o d d e p e nd e d o n r e f r a c t i v e i nc r e m e nt
e s t i m a t i o n. A c a l i b r a t i o n c u r v e wa s p r e p a r e d f o r t h e
a l t e r a t i o n i n t h e r e f r a c t i v e i nc r e m e nt o f b u f f e r o n d i l u t i o n
wi t h s m a l l q u a nt i t i e s o f d i s t i l l e d wa t e r . P a i r s o f m u c i n
c l o t s f r o m t h e s a m e f l u i d we r e p r e p a r e d , o ne o f e a c h p a i r
wa s h e a t e d t o c o ns t a nt we i g h t . Th e s e c o nd wa s a d d e d t o
a we i g h e d q u a nt i t y o f b u f f e r , a nd t h e r e s u l t i ng s o l u t i o n
we i g h e d a nd i t s r e f r a c t i v e i nc r e m e nt e s t i m a t e d a g a i ns t
t h a t o f b u f f e r . Th e we i g h t s o f t h e we t a nd d r y c l o t s g a v e t h e
we i g h t s o f wa t e r a nd m u c i n a d d e d t o t h e b u f f e r a nd f r o m
t h e s e t h e s p e c i f i c r e f r a c t i v e i nc r e m e nt o f m u c i n c o u l d b e
c a l c u l a t e d . Th e m e a n o f f i v e e s t i m a t i o ns g a v e a r e s u l t o f
0 - 0 0 1 6 4 0 0 0 0 0 4 ( S. D. ) .
R e f r a c t i v e i nc r e m e nt e s t i m a t i o ns c o u l d no w b e u s e d t o
m e a s u r e m u c i n c o nc e nt r a t i o n. A s i ng l e c l o t wa s p r e p a r e d ,
we i g h e d , r e d i s s o l v e d i n b u f f e r , a nd t h e r e f r a c t i v e i nc r e m e nt
o f t h e s o l u t i o n m e a s u r e d a s d e s c r i b e d a b o v e . As a f i r s t
a p p r o x i m a t i o n t h e b u f f e r wa s a s s u m e d t o h a v e b e e n d i l u t e d
b y wa t e r c o r r e s p o nd i ng t o t h e we t we i g h t o f t h e c l o t , t h e
r e f r a c t o m e t r i c m e a s u r e m e nt t h e n a l l o we d t h e t r u e d r y
we i g h t o f t h e c l o t t o b e o b t a i ne d b y s u c c e s s i v e a p p r o x i m a -
t i o n. Th i s m e t h o d wa s m o r e r a p i d , a nd wa s o f v a l u e wi t h
s m a l l f l u i d s a m p l e s s i nc e i t l e f t a m u c i n s o l u t i o n f o r f u r t h e r
e x p e r i m e nt s .
R ESU L TS
C o m p o s i t i o n o f m u c i n. Th e t o t a l ni t r o g e n a nd
g l u c o s a m i ne c o nt e nt s o f m u c i n p r e p a r e d f r o m f i v e
d i f f e r e nt f l u i d s we r e e x a m i ne d . To t a l ni t r o g e n
e s t i m a t i o ns g a v e a v a l u e o f 1 1 . 1 % 0 - 8 ( S. D. ) .
G l u c o s a m i ne e s t i m a t i o ns g a v e a v a l u e o f 1 1 - 9 %
0 6 ( S. D. ) . Al l t h e f l u i d s i n t h i s e x p e r i m e nt f o r m e d
s a t i s f a c t o r y c l o t s a l t h o u g h t h e c l i ni c a l no r m a l i t y o f
t h e j o i nt s v a r i e d c o ns i d e r a b l y . Th e r e wa s no
c o r r e l a t i o n b e t we e n t h e s e a na l y t i c a l f i g u r e s a nd t h e
no r m a l i t y o f t h e f l u i d a s i nd i c a t e d b y o t h e r t e s t s .
Th e s e m e a n v a l u e s a nd t h a t o f t h e s p e c i f i c r e f r a c t i v e
i nc r e m e nt g i v e n a b o v e a g r e e d s a t i s f a c t o r i l y wi t h
p r e v i o u s e s t i m a t i o ns o n h u m a n f l u i d s a nd wi t h
t h o s e o b t a i ne d f r o m s t u d i e s o n o x f l u i d ( R o p e s ,
R o b e r t s o n, R o s s m e i s l , P e a b o d y & B a u e r , 1 9 4 7 ;
Og s t o n & St a ni e r , 1 9 5 2 , 1 9 5 3 b ) . I n v i e w o f t h e s e
r e s u l t s a nd t h e u nc e r t a i n i m p o r t a nc e o f m u c i n no
f u r t h e r a na l y s e s we r e m a d e .
U l t r a c e nt r i f u g e r e s l t s
G e ne r a l . F o r t y - s i x u l t r a c e nt r i f u g e r u ns we r e
c a r r i e d o u t o n h y a l u r o ni c a c i d a nd i t s d e r i v a t i v e s .
F i g . 1 g i v e s t y p i c a l s e d i m e nt a t i o n s c h l i e r e n
F i g . 1 . U l t r a c e nt r i f u g e d i a g r a m s o f ( a ) f l u i d f r o m no r m a l
g r o u p , ( b ) f l u i d f r o m r h e u m a t o i d a r t h r i t i s g r o u p , ( c ) f l u i d
f r o m i nt e r m e d i a t e g r o u p s h o wi ng t h e p r e s e nc e o f a f a s t
c o m p o ne nt . Th e a r r o ws i nd i c a t e t h e d i r e c t i o n o f s e d i -
m e nt a t i o n.
4 0 - 2
V o I .
5 9 6 2 7
6 2 8
d i a g r
l o g i c s
g r o u j
m e nt
t h e
I
b o u ni
o f m i
m o l e (
1 9 5 5 1
wa s
s e d i n
h y a l h u
p r o t e
m e nt
o f t h
Os t w
a c i d i
i n i t E
t h e s e
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t i m e s
t o b e
c o m p
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c o nv E
t a t i o r
b o u n
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( V U
- 0
I
' o
t o
F i g . 2 .
v i s c
s a m l
I nt e :
g r o u
J . P . J OHNSTON
I 9 5 5
a m s f o r a no r m a l h u m a n f l u i d , f o r a p a t h o - t i m e a nd h a d t o s t a r t i m m e d i a t e l y o n ne a r i ng f u l l
EI f l u i d , a nd f o r a f l u i d o f t h e i nt e r m e d i a t e s p e e d wh e n r o t o r t e m p e r a t u r e a nd s p e e d we r e s t i l l
p s h o wi ng a f a s t c o m p o ne nt . Th e r a t e o f s e d i - c h a ng i ng . ) Th e s e d i m e nt a t i o n c o ns t a nt s v a r i e d
o a t i o n o f t h e h y a l u r o ni c a c i d wa s a f f e c t e d b y b e t we e n 9 - 1 a nd 1 5 - 2 . Th e y t e nd e d t o r i s e i n d i l u t e
p r e s e nc e o f p r o t e i n. Th i s e f f e c t i s d u e t o a s o l u t i o n a nd t h e v a l u e s a t i nf i ni t e d i l u t i o n
l a y
d a r y a no m a l y o p e r a t i ng i n t h e s e d i m e nt a t i o n b e t we e n 1 7 a nd 2 0 . No m a r ke d c o r r e l a t i o n e x i s t e d
i x t u r e s a nd no t t o a n e f f e c t o f p r o t e i n o n t h e b e t we e n
S2 0
a nd t h e v i s c o s i t y o f t h e s o l u t i o n, t h e
c u l a r p r o p e r t i e s o f h y a l u r o ni c a c i d ( J o h ns t o n, c o nc e nt r a t i o ns o f h y a l u r o ni c a c i d o r a l b u m i n, o r t h e
a ) . Th e p r o t e i n c o nc e nt r a t i o n o f e a c h s o l u t i o n t i m e o f p e r s i s t e nc e o f t h e b o u nd a r y . Th i s l a s t wa s
t h e r e f o r e e s t i m a t e d b y i nt e g r a t i o n o f t h e c h o s e n a s a p o s s i b l e m e a ns o f e s t i m a t i ng t h e c o n-
a e nt a t i o n d i a g r a m s a nd a l l v a l u e s f o r t h e S2 0 o f c e nt r a t i o n o f t h e f a s t
c o m p o ne nt .
i r o ni c a c i d we r e c o r r e c t e d f o r t h e p r e s e nc e o f I t i s l i ke l y t h a t t h e s e f a s t c o m p o ne nt s a r o s e f r o m
f i n, b e i ng r e f e r r e d t o h y a l u r o ni c a c i d s e d i - h y a l u r o ni c a c i d . Th e b o u nd a r i e s r e s e m b l e d t h o s e o f
i i ng a l o ne . F i g . 2 s h o ws a p l o t o f t h e r e c i p r o c a l h y a l u r o ni c a c i d a nd i n t wo c a s e s a p p e a r e d o nl y i n
e s e c o r r e c t e d S2 0 v a l u e s a g a i ns t t h e l o g o f t h e d i l u t i o ns o f t h e o r i g i na l f l u i d . I n a r u n o n a n a c c i -
a l d v i s c o s i t y o f t h e s o l u t i o ns . Th e h y a l u r o ni c d e nt a l l y i nf e c t e d f l u i d t h e h y a l u r o ni c a c i d
b o u nd a r y
f r o m d i f f e r e nt s o u r c e s s h o ws m a r ke d v a r i a t i o n a p p e a r e d r e d u c e d a nd t h e r e we r e t wo
f a s t - m o v i ng
3
p r o p e r t i e s . Th e r e a l i t y a nd s i g ni f i c a nc e o f b o u nd a r i e s i d e nt i c a l wi t h t h o s e o f f a s t
c o m p o ne nt .
d i f f e r e nc e s wi l l b e d i s c u s s e d l a t e r . Th e S2 0 v a l u e s o f t h e f a s t b o u nd a r i e s we r e ,
h o we v e r ,
8 t c o m p o ne nt s . I n s e v e n o f t h e f l u i d s t h e r e wa - s 1 6 - 3 a nd 2 7 - 0 .
I d i t i o na l f a s t - m o v i ng b o u nd a r y ( F i g . l c ) . Th e Th e f o r m a t i o n o f f a s t c o m p o ne nt o n d i l u t i o n o f
3 o f o r i g i n o f t h e s e we r e f o u nd b y e x t r a p o l a t i o n a s y no v i a l f l u i d wa s s u g g e s t e d b y t h e
f o l l o wi ng :
a p p r o x i m a t e l y t h e s a m e a s t h o s e o f t h e o t h e r ( 1 ) i n t wo c a s e s no f a s t c o m p o ne nt a p p e a r e d i n t h e
) o ne nt s . Th i s s h o we d t h a t t h e y r e p r e s e nt e d o r i g i na l s o l u t i o n; ( 2 ) wh e r e f a s t c o m p o ne nt s we r e
l u i ne s e d i m e nt i ng c o m p o ne nt a nd we r e no t a p r e s e nt i n m o r e t h a n o ne o f t h e d i l u t i o ns o f a
f l u i d ,
a c t i o n a r t i f a c t . I n f o u r t e e n c a s e s t h e s e d i m e n- t h e c o nc e nt r a t i o n o f t h e f a s t b o u nd a r y a p p e a r e d t o
n
c o ns t a nt s we r e m e a s u r e d . Si nc e t h e f a s t r e m a i n c o ns t a nt o r t o i nc r e a s e i n t h e m o r e d i l u t e
d a r i e s o nl y p e r s i s t e d f o r f r o m 5 t o 4 0 m i n. a f t e r s o l u t i o ns . ( Th i s o b s e r v a t i o n wa s b a s e d b o t h o n t h e
L i ng f u l l s p e e d , a c c u r a t e d e t e r m i na t i o ns we r e a p p e a r a nc e o f t h e b o u nd a r y a nd o n i t s t i m e o f
, l wa y s p o s s i b l e . ( M e a s u r e m e nt wa s l i m i t e d i n p e r s i s t e nc e . ) Ev e n wh e r e t h e c o nc e nt r a t i o n o f t h e
b o u nd a r y a p p e a r e d c o ns t a nt o n s e r i a l d i l u t i o n, t h i s
0 - 6
_
wo u l d i nd i c a t e a
g r e a t e r p r o p o r t i o n
o f t h e
h y a l -
*
u r o ni c a c i d a p p e a r i ng i n t h i s f o r m . Th e p o s s i b i l i t y
+
t h a t t h i s wa s d u e t o a c h a ng e p r o g r e s s i ng wi t h t i m e
0 - 5 +
Xv
r a t h e r t h a n wi t h d i l u t i o n wa s e l i m i na t e d i n t h e c a s e
0
o f s a m p l e C . R u ns we r e p e r f o r m e d o n t h r e e
*
d i l u t i o ns ( a l l s h o wi ng f a s t c o m p o ne nt s ) b e f o r e t h e
0 - 4
-
X
X
o r i g i na l f l u i d wa s u l t r a c e nt r i f u g e d . Th e o r i g i na l
X
*
o

f l u i d
s h o we d no
f a s t
c o m p o ne nt .
A
s
I f t h e s e b o u nd a r i e s a r i s e f r o m
h y a l u r o ni c a c i d ,
0 - 3
+ v
t h e n, wh a t e v e r t h e r e a s o n f o r t h e i r a p p e a r a nc e ,
t h e y
m u s t r e p r e s e nt a f o r m o f h y a l u r o ni c a c i d s u f f i c i e nt l y
* A
o
h o m o g e ne o u s t o g i v e a s i ng l e
u l t r a c e nt r i f u g e
0 - 2
- *
b o u nd a r y . Th i s m a y no t e nt a i l a h i g h d e g r e e o f
a o
Oh o m o g e ne i t y ,
s i nc e t h e v a r i a t i o n o f
S2 0 wi t h
0 c o nc e nt r a t i o n m u s t p r o d u c e a c o ns i d e r a b l e ' s h a r p -
0 . 1
-
e ni ng ' e f f e c t o n t h e b o u nd a r i e s o f h y a l u r o ni c a c i d .
( Th i s i s i l l u s t r a t e d b y s a m p l e D wh i c h , t h o u g h
a p o o l e d s a m p l e , f o r m e d a s i ng l e b o u nd a r y . ) Th e
O
I v a r i a t i o n o f
S2 0 wi t h c o nc e nt r a t i o n a p p e a r s l e s s i n
0 - 4 0 - 8 1 I 2 1 - 6
2 - 0 t h e c a s e o f t h e f a s t c o m p o ne nt b u t t h i s i s d i f f i c u l t t o
L o g , r L a s s e s s , s i nc e c o nc e nt r a t i o n e s t i m a t i o n i s u nc e r t a i n.
V a r i a t i o n i n I I S2 o f h y a l u r o ni c a c i d wi t h l g
A m a r ke d
s h a r p e ni ng
e f f e c t
m a y
s t i l l
o p e r a t e
wi t h
V a r l a t l o n
~ ~ ~ ~ ~ 0
t h f a Ss t c o p f e n a nl u d m c a u s e a t h e e r g ne u
Ds i t y o f t h e s o l u t i o n. No r m a l g r o u p o f f l u i d s : A t h e f a s t c o m p o ne nt a nd c a u s e a
h e t e r o g e ne o u s
p l e
A;
V , s a m p l e B ; 0 , s a m p l e J ; O, o x f l u i d . c o m p o ne nt t o f o r m a s i ng l e b o u nd a r y . I f t h e
r m e d i a t e g r o u p o f f l u i d s , s a m p l e a ; , s a m p l e D; i nc r e a s e i n S2 0 r e p r e s e nt s a n a l t e r a t i o n i n t h e s i z e o r
; a m p l e E; , s a m p l e F ;
s ,
s a m p l e G . P a t h o l o g i c a l f o r m o f t h e h y a l u r o ni c a c i d m o l e c u l e g i v i ng r i s e
t o
I p o f f l u i d s : + , s a m p l e H; x , s a m p l e s K - N. a r a ng e o f c o m p o u nd s , t h i s s h a r p e ni ng wi l l e x p l a i n
V o l . 5 9 P R OP ER TI ES OF HU M
t h e a p p e a r a nc e i n d i f f e r e nt s y no v i a l f l u i d s o f s i ng l e
b o u nd a r i e s wi t h d i f f e r i ng s e d i m e nt a t i o n p r o p e r t i e s .
Th e
S2 0
o b s e r v e d wi l l r e p r e s e nt a n a v e r a g e f o r t h e
r a ng e o f c o m p o u nd s d e p e nd e nt o n t h e p r o p o r t i o ns
p r e s e nt .
Al b u m i n/ g l o b u l i n ( A/ G ) r a t i o s . Th e A/ G r a t i o s
we r e e s t i m a t e d f r o m t h e s e d i m e nt a t i o n d i a g r a m s .
R e s o l u t i o n o f t h e p e a ks wa s c a r r i e d o u t b y t h e
m e t h o d s d e s c r i b e d i n J o h ns t o n & Og s t o n ( 1 9 4 6 ) .
Sa t i s f a c t o r y a g r e e m e nt wa s f o u nd b e t we e n d i f f e r e nt
d i a g r a m s i n t h e s a m e r u n e x c e p t wh e r e t h e r a t i o wa s
a b o v e 1 0 . Th e s e v a l u e s d o no t r e p r e s e nt t h e t r u e
A/ G r a t i o b e c a u s e o f t h e M c F a r l a ne e f f e c t a nd
b e c a u s e s o m e o f t h e g l o b u l i ns o f p l a s m a m a y s e d i -
m e nt i n t h e u l t r a c e nt r i f u g e wi t h t h e a l b u m i n. An
Ta b l e 1 . Th e a l b u m i n/ g l o b u l i n r a t i o s a nd i nt r i ns i c
v i s c o s i t i e f o r d i f f e r e nt h u s m a n s y no v i a l f l u i d
I nt r i ns i c v i s c o s i t y i s
( *.
-
1 ) / I ,
e x t r a p o l a t e d t o t = 0 ,
wh e r e q i s t h e h y d r a t e d v o l u m e f r a c t i o n.
Sa m p l e
A
C
D
b
F
G
H
J
K
L
M
N
1 6 0
c
2 1 2 0
- v
0
0 . i 4 0
. _
4 )
Al b u m i n/ g l o b u l i n
r a t i o
1 7 - 0
7 - 6
9 . 5
9 . 3
7 - 8
1 0 . 0
3 - 6
1 4 *0
0 - 8 3
1 *6
1 - 4
2 *4
L o g i nt r i ns i c
v i s c o s i t y
4 - 2 0
3 - 5 5
3 - 1 0
3 *2 5
3 - 2 5
3 - 2 5
3 - 7 0
3 - 8 0
0
2 0 0 4 0 0 6 0 0 8 0 0
M u c i n c o nc e nt r a t i o n
F i g . 3 . V a r i a t i o n i n t h e t i m e o f a p p e a r a nc e o f a d i f f u s e
b o u nd a r y d u r i ng s e d i m e nt a t i o n wi t h t h e c o nc e nt r a t i o n o f
t h e h y a l u r o ni c a c i d b o u nd a r y . ( Ti m e e x p r e s s e d a s
m i nu t e s a f t e r r e a c h i ng f u l l s p e e d , h y a l u r o ni c a c i d c o n-
c e nt r a t i o n a s m g . m u c i n/ 1 0 0 m l . i n t h e o r i g i na l f l u i d . )
Th e s y m b o l s r e f e r t o d i f f e r e nt s a m p l e s o f s y no v i a l f l u i d
a s i n F i g . 2 .
L AN HYAL U R ONI C AC I D 6 2 9
a p p r o x i m a t e c o r r e c t i o n f o r t h e f o r m e r wa s m a d e ;
t h e p r e s e nc e o f t h e h y a l u r o ni c a c i d wa s i g no r e d a nd
a c o r r e c t i o n b a s e d o n t h e e q u a t i o n f o r t h e c o nc e n-
t r a t i o n i n t h e t r a i l i ng b o u nd a r y o f a s e d i m e nt i ng
m i x t u r e wa s a p p l i e d ( J o h ns t o n & Og s t o n, 1 9 4 6 ) .
Th i s c o r r e c t i o n p r o v e d s m a l l a nd wa s o nl y u s e d
wh e r e t h e t o t a l p r o t e i n p r e s e nt e x c e e d e d 2
%.
Th e
A/ G r a t i o s s o o b t a i ne d a r e g i v e n i n Ta b l e 1 . Th e
v a l u e s f o r t h e ' no r m a l ' h u m a n f l u i d s a r e h i g h e r t h a n
t h o s e f o r o x f l u i d s . A r h e u m a t o i d a r t h r i t i s p a t i e nt
a f t e r t r e a t m e nt wi t h c o r t i s o ne s h o we d a s l i g h t
i nc r e a s e i n t h e A/ G r a t i o o f t h e f l u i d s o f b o t h kne e
j o i nt s ( s a m p l e s M , N c o m p a r e d wi t h K , L ) .
Di f f u s e ne s s o f t h e b o u nd a r y . I n u l t r a c e nt r i f u g e
e x p e r i m e nt s t h e h y a l u r o ni c a c i d b o u nd a r y a t f i r s t
a p p e a r e d v e r y s h a r p b u t i n s o m e c a s e s b e c a m e
d i f f u s e d u r i ng t h e c o u r s e o f s e d i m e nt a t i o n. Th i s
c h a ng e s h o we d a s a r a p i d b l u r r i ng o r d i s a p p e a r a nc e
o f t h e b o u nd a r y ' s p i ke ' wi t h a s i m u l t a ne o u s
b r o a d e ni ng o f i t s b a s e ( Og s t o n & St a ni e r , 1 9 5 0 ) .
F o r a ny g i v e n s a m p l e o f f l u i d t h e t i m e t a ke n f o r t h i s
t o h a p p e n wa s r o u g h t l y p r o p o r t i o na l t o t h e h y a l -
u r o ni c a c i d c o nc e nt r a t i o n ( F i g . 3 ) .
Th e b e h a v i o u r , h o we v e r , o f d i f f e r e nt s a m p l e s
v a r i e d c o ns i d e r a b l y . F o r t h e s a m e c o nc e nt r a t i o n o f
h y a l u r o ni c a c i d , t h e no r m a l f l u i d s t o o k l o ng e r t o
p r o d u c e a d i f f u s e b o u nd a r y t h a n d i d t h o s e o f t h e
o t h e r g r o u p s . ( I n v i e w o f t h e r o u g h na t u r e o f t h i s
t e s t t h e v a l u e o f t h e h y a l u r o ni c a c i d c o nc e nt r a t i o n
i n t h e o r i g i na l f l u i d wa s u s e d a nd no a t t e m p t m a d e
t o c o r r e c t f o r c o nc e nt r a t i o n e f f e c t s wh e n h y a l u r o ni c
a c i d f o r m e d t h e t r a i l i ng b o u nd a r y . Si nc e t h e m o r e
a b no r m a l f l u i d s t e nd e d t o h a v e a h i g h e r p r o t e i n
c o nt e nt , t h i s c o r r e c t i o n, i f i t we r e a p p l i e d , wo u l d
i nc r e a s e t h e d i f f e r e nc e s f o u nd b y t h i s t e s t . ) An
a p p a r e nt e x c e p t i o n t o t h e o b s e r v a t i o n t h a t no r m a l
f l u i d s t o o k l o ng e r t o f o r m a d i f f u s e b o u nd a r y , wa s
s a m p l e D wh i c h , t h o u g h i t b e l o ng e d t o t h e i nt e r -
m e d i a t e g r o u p , h a d t h e g r e a t e s t t e nd e nc y t o
p r o d u c e a d i f f u s e b o u nd a r y . Th i s s a m p l e wa s o b -
t a i ne d b y p o o l i ng f o u r s e p a r a t e f l u i d s a nd t h e
d i f f u s e ne s s wa s p r o b a b l y d u e t o h e t e r o g e ne i t y o f t h e
h y a l u r o ni c a c i d f r o m t h e s e d i f f e r e nt s o u r c e s .
V i s c o s i t y . V i s c o s i t y m e a s u r e m e nt s b y Os t wa l d
v i s c o s i m e t e r we r e m a d e o n a l l f l u i d s a nd t h e i r
d i l u t i o ns . Th e r e wa s c o ns i d e r a b l e v a r i a t i o n i n t h e
r e l a t i o ns h i p b e t we e n t h e m u c i n c o nt e nt a nd t h e
Os t wa l d v i s c o s i t y o f d i f f e r e nt s a m p l e s ( F i g . 4 ) .
I n t h r e e c a s e s s u f f i c i e nt f l u i d wa s a v a i l a b l e f o r
m e a s u r e m e nt i n t h e C o u e t t e v i s c o s i m e t e r , a nd t h e
v i s c o s i t y o f s e r i a l d i l u t i o ns wa s m e a s u r e d . V a l u e s f o r
7 , 9 r , j f o r z e r o v e l o c i t y g r a d i e nt we r e o b t a i ne d b y
e x t r a p o l a t i o n o f a p l o t o f 1 / Xi a g a i ns t v e l o c i t y
g r a d i e nt ( r ) ; v a l u e s f o r i nf i ni t e v e l o c i t y g r a d i e nt
we r e a l s o o b t a i ne d b y e x t r a p o l a t i o n
( - 9 r a
a g a i ns t
1 / r ) . F r o m m u c i n c l o t f o r m a t i o n, a nd a s s u m i ng a
v a l u e o f 4 5 % f o r t h e h y a l u r o ni c a c i d i n m u c i n
( Og s t o n & St a ni e r , 1 9 5 2 ) t h e h y d r a t e d v o l u m e
6 3 0
f r a c t i o n
( 4 )
o f
h y a l u r o ni c
a c i d c o u l d
f o r e a c h s o l u t i o n. Th e v i s c o s i t y
l o g
[ ( Q q . L -
1 ) / # ] wa s c a l c u l a t e d a nd E
o f t h i s a g a i ns t q i s g i v e n i n F i g . 5 .
v i s c o s i t y v a l u e s o b t a i ne d f r o m t h e
c o s i m e t e r a r e a l s o i nc l u d e d . I n s o m e
s h o w a v i s c o s i t y l e s s t h a n t h e s o - c E
v e l o c i t y g r a d i e nt ' v a l u e s f o r t h e C o
m e t e r , i nd i c a t i ng e i t h e r a n e r r o r d u
f l o w o f a f l u i d s h o wi ng a no m a l o u s v
a n u ns a t i s f a c t o r y e x t r a p o l a t i o n t o (
C o u e t t e . Os t wa l d v i s c o s i t y a l wa :
r e l a t i v e t o , ( C o u e t t e o n d i l u t i o x
Th e i nt r i ns i c v i s c o s i t y i s i nd e p e nd e nt (
g r a d i e nt , a nd t h e i nt r i ns i c v i s c o s i t y c
2 - 0 1
2 0 0 4 0 0 6 0 0
M u c i n ( m g . / 1 0 0 m l . )
F i g . 4 . V a r i a t i o n i n t h e Os t wa l d v i s c o s
f l u i d wi t h t h e h y a l u r o ni c a c i d c o nc e nt r a t
m g . m u c i n/ 1 0 0
m l . s o l u t i o n. Th e s y m b o l s
s a m p l e s o f f l u i d , a s i n F i g . 2 .
4 f l 8
4 4
- 0 .
0 4 0
- J
3 0 6
0
J . P . J OHNSTON
I 9 5 5
b e c a l c u l a t e d t h e Os t wa l d m e a s u r e m e nt s a g r e e s s a t i s f a c t o r i l y
e x p r e s s e d a s wi t h t h e C o u e t t e v a l u e . Th i s wa s f o u nd i n t h e t wo
a t y p i c a l p l o t o t h e r f l u i d s a nd Os t wa l d v i s c o s i t i e s we r e u s e d t o
Th e r e l a t i v e m e a s u r e t h e i nt r i ns i c v i s c o s i t y o f s a m p l e s t o o s m a l l
Os t wa l d v i s - f o r t h e C o u e t t e v i s c o s i m e t e r ( Ta b l e 1 ) .
d i l u t i o ns t h e y No n- Ne wt o ni a n v a r i a t i o n o f v i s c o s i t y wi t h
a l l e d ' i nf i ni t e v e l o c i t y g r a d i e nt wa s f o u nd i n t h e f l u i d s s t u d i e d i n
u e t t e v i s c o s i - t h e C o u e t t e v i s c o s i m e t e r , a l t h o u g h i n s o m e c a s e s
e t o c a p i l l a r y d i l u t i o n r e m o v e d a l l d e t e c t a b l e v a r i a t i o n. Th e
r i s c o s i t y o r t o i nt r i ns i c v i s c o s i t y a nd t h e d e g r e e o f t h e no n-
o b t a i n
7 7 , , , ,
Ne wt o ni a n v i s c o s i t y ( ' a no m a l y ' ) v a r i e d b e t we e n
y s d e c r e a s e d t h e d i f f e r e nt s a m p l e s . Th i s v a r i a t i o n i n t h e a no m a l y
a o f t h e f l u i d . m i g h t i nd i c a t e t h e no r m a l i t y o f t h e f l u i d . Ta b l e 2
o f t h e v e l o c i t y s h o ws t h e i nt r i ns i c v i s c o s i t i e s o f t h e f l u i d s a nd t h e
) b t a i ne d f r o m e x t e nt o f t h e i r a no m a l y . Th i s l a t t e r wa s m e a s u r e d
i n t wo wa y s : ( 1 ) t h e e x t e nt o f t h e a no m a l o u s
v i s c o s i t y ( e x p r e s s e d a s
l o g
[ ( U 7 6 i .
( o )
- 1 ) I ] - l o g
[ ( 9 . ( 0 o ) o 1 ) I # ] )
f o r a n a r b i t r a r i l y c h o s e n c o nc e nt r a t i o n v a l u e
( c
= 6 x
1 o - 4 ) ; ( 2 )
t h e e x t e nt o f t h e a no m a l o u s v i s -
c o s i t y ( e x p r e s s e d a s
- q e L
( 0 ) -
7 r e L ( 0 0 ) )
c o m p a r e d t o
l
( 0 0 ) -
( Th e t h r e e f l u i d s
h a p p e ne d
t o
p r o v i d e
d i l u t i o ns o f a p p r o x i m a t e l y t h e s a m e
- q . .
( O)
v a l u e . )
No r m a l f l u i d s m i g h t b e e x p e c t e d t o h a v e a h i g h
i nt r i ns i c v i s c o s i t y a nd a l a r g e a no m a l y r e l a t i v e t o
c o nc e nt r a t i o n a nd t o v i s c o s i t y a t i nf i ni t e v e l o c i t y
g r a d i e nt . Th e m e t h o d s o f c o m p a r i s o n u s e d i n
Ta b l e 2 d o no t g i v e c o ns i s t e nt r e s u l t s f o r t h e s e
t e s t s , a nd t h i s wi l l b e d i s c u s s e d b e l o w.
M o l e c u l a r d i m e ns i o n& As i n o x f l u i d , t h e i nt r i ns i c
v i s c o s i t y wa s i nd e p e nd e nt o f v e l o c i t y g r a d i e nt ,
8 0 0 1 0 0 0 i nd i c a t i ng a ne a r l y s p h e r i c a l m o l e c u l e . To a c c o u nt
f o r a no m a l o u s v i s c o s i t y a t f i ni t e c o nc e nt r a t i o ns
3 i t y o f s y no v i a l
a v e r y v o l u m i no u s p a r t i c l e m u s t b e a s s u m e d . F r o m
t i o n e s t i m a t e d a s t h e i nt r i ns i c v i s c o s i t y , S2 0 a t i nf i ni t e d i l u t i o n a nd t h e
3 d e no t e d i f f e r e nt r a t e o f c h a ng e o f
1 / S2 0
wi t h c o nc e nt r a t i o n [ d ( 1 / S) / d c ]
t h e m o l e c u l a r we i g h t , h y d r o d y na m i c s p e c i f i c
v o l u m e a nd a x i a l r a t i o we r e c a l c u l a t e d f o r s o m e o f
t h e s a m p l e s . Th e m e t h o d u s e d wa s t h a t o f F e s s l e r &
Og s t o n ( 1 9 5 1 ) a s m o d i f i e d b y Og s t o n ( 1 9 5 3 ) . Th e
p a r t i a l s p e c i f i c v o l u m e wa s t a ke n a s 0 - 6 9 a nd
c h y a l u r o ni c a c i d wa s a s s u m e d t o f o r m 4 5
%
o f m u c i n
A> ( Og s t o n & St a ni e r , 1 9 5 2 ) . Th e v a l u e s o b t a i ne d a r e
g i v e n i n Ta b l e 3 . Th e s e e s t i m a t e s c a n, a t b e s t , b e
c o ns i d e r e d s e m i - q u a nt i t a t i v e . Th e h y d r o d y na m i c
t h e o r y o f t h e v a r i a t i o n o f 1 / S2 0 i s i m p e r f e c t a nd t h e
Ta b l e 2 . C o m p a r i 8 o n o f t h e no n- Ne wt o ni a n v i 8 w0 s i t y
o f t h r e e s y no v i a l f l u i d s wi t h t h e i nt r i ns i c v i s 8 o s i t y
a nd t h e i nf i ni t e v e l o c i t y g r a d i e nt v i s c o s i t y
4 0 8 0 1 2 0 1 6 0 2 0 0 V a l u e s o f
q e x p r e s s e d a s r e l a t i v e v i s c o s i t i e s ; s u b s c r i p t s
, x 0 i o
r e f e r t o v e l o c i t y g r a d i e nt s .
T- T- r i -
_ i %i
F i g . 5 . V a r i a t i o n o f l o g
[ ( r d .
-
1 ) / q S] wi t h h y d r a t e d v o l u m e
f r a c t i o n ( q ) a t d i f f e r e nt v e l o c i t y g r a d i e nt s . C u r v e A, z e r o
v e l o c i t y g r a d i e nt , C o u e t t e v i s c o s i m e t e r ; c u r v e B ,
i nf i ni t e v e l o c i t y g r a d i e nt , C o u e t t e v i s c o s i m e t e r ; c u r v e C ,
Os t wa l d v i s c o s i m e t e r .
i nt r i ns i c
Sa m p l e ' 1 0 0 ' 1 o - ' 0 0 v i s c o s i t y
C 7 *4 4 . 3 3 - 6
D 9 - 0 5 - 0 3 - 1
H 9 . 5 3 *1 3 - 7
1 L g l O
L ( 7 7 o
-
l J L / Ol
-
l o g 1 0
[ ( U - o
-
W o l
k= 6 x 1 0 - 4
0 1 3
0 - 2 3
0 - 1 4
P R OP ER TI ES OF HU M AN HYAL U R ONI C AC I D
Ta b l e 3 . V a l u e s o f t h e a x i a l r a t i o ( J ) , e f f e c t i v e h y d r o -
d y na m i c v o l u m e ( V ' ) a nd m o l e c u l a r we i g h t ( M ) o f
h u m a n h y a l u r o ni c a c i d s
Sa m p l e
A
J
C
D
H
J V . *M
2 0 5 0 0 8 - 4 x 1 0 6
1 5 2 7 5 2 - 1 x 1 0 7
2 5 4 0 1 2 x 1 0 6
7 1 1 0 1 - 5 x 1 0 6 f
1 0 2 5 0 1 3 x 1 0 6
v a l u e o f c e r t a i n c o ns t a nt s u s e d u nc e r t a i n. Th e y
c o nf i r m , h o we v e r , t h e m o d e l o f a v e r y v o l u m i no u s
p a r t i c l e o f no g r e a t a s y m m e t r y wi t h a no r m a l
m o l e c u l a r we i g h t ( M ) o f t h e o r d e r o f 1 0 7 . Th e
m e t h o d i s m o r e a c c u r a t e i n t h e e s t i m a t i o n o f
m o l e c u l a r we i g h t s , a nd t h e d e c r e a s e i n M i n t h e
a b no r m a l f l u i d s p r o b a b l y i nd i c a t e s a d e p o l y m e r i z a -
t i o n o f t h e m o l e c u l e .
DI SC U SSI ON
M u c i n p r o p e r t i e s . Th e g l u c o s a m i ne c o nt e nt , t o t a l
ni t r o g e n a nd s p e c i f i c r e f r a c t i v e i nc r e m e nt o f m u c i n
o b t a i ne d f r o m d i f f e r e nt s y no v i a l f l u i d s a g r e e we l l
b e t we e n t h e m s e l v e s a nd wi t h t h o s e f o r o x f l u i d .
Th e s e e s t i m a t i o ns c a n o nl y b e m a d e o n no r m a l a nd
ne a r - no r m a l f l u i d s ( t h o s e c a p a b l e o f f o r m i ng c l o t s )
a nd s o a r e o f l i m i t e d a p p l i c a t i o n. Th e y s h o w l i t t l e
o r no c h a ng e wi t h t h e d e g r e e o f a b no r m a l i t y o f t h e
f l u i d a s j u d g e d b y o t h e r t e s t s .
U l t r a c e nt r i f u g a l r e s u l t s . Th e c o m p a r i s o n o f 1 / S2 0
f o r h y a l u r o ni c a c i d wi t h l o g v i s c o s i t y o f s o l u t i o n
s h o we d a l a r g e v a r i a t i o n b e t we e n d i f f e r e nt s a m p l e s
o f s y no v i a l f l u i d . Th i s , t h o u g h r e d u c e d , r e m a i ne d
a f t e r a c o r r e c t i o n wa s a p p l i e d f o r t h e p r o t e i n p r e s e nt
( F i g . 2 ) . Th i s r e s i d u a l v a r i a t i o n m i g h t b e d u e t o a n
i na d e q u a t e o r i na c c u r a t e c o r r e c t i o n f o r t h e p r e s e nc e
o f p r o t e i n, e s p e c i a l l y a s t h e v a l u e o f S2 0 a t i nf i ni t e
d i l u t i o n v a r i e d l i t t l e b e t we e n s a m p l e s . ( Ex t r a -
p o l a t i o n t o i nf i ni t e d i l u t i o n o f h y a l u r o ni c a c i d i s a l s o
e q u i v a l e nt t o e x t r a p o l a t i o n t o z e r o c o nc e nt r a t i o n o f
p r o t e i n a nd m i g h t b e e x p e c t e d t o g i v e a c o r r e c t
S2 0
a t i nf i ni t e d i l u t i o n e v e n
t h o u g h
t h e c o r r e c t i o n
f o r t h e p r e s e nc e o f p r o t e i n wa s i na c c u r a t e . ) I t i s
l i ke l y , h o we v e r , t h a t t h i s r e m a i ni ng v a r i a t i o n i s t o o
l a r g e t o b e a c c o u nt e d f o r b y e r r o r s i n t h e c o r r e c t i o n;
a nd f u r t h e r m o r e , i n t h e c a s e o f t h r e e f l u i d s , a n
i nc r e a s e i n t h e c o r r e c t i o n wo u l d l e a d t o a n e v e n
l a r g e r v a r i a t i o n b e t we e n d i f f e r e nt f l u i d s . Ag r e e -
m e nt b e t we e n t h e b e h a v i o u r o f d i f f e r e nt f l u i d s
c a nno t b e o b t a i ne d b y c h o o s i ng a ny a r b i t r a r y
c o r r e c t i o n t o t h e
S2 0
o f h y a l u r o ni c a c i d p r o p o r t i o na l
t o p r o t e i n c o nc e nt r a t i o n.
I f a b no r m a l i t y o f h y a l u r o ni c a c i d l e a d s t o a
d e c r e a s e i n v i s c o s i t y a nd a n i nc r e a s e o r l i t t l e c h a ng e
i n
S2 0 ,
t h e n t h i s r e s i d u a l v a r i a t i o n i nd i c a t e s t h a t i n
a b no r m a l f l u i d s t h e v i s c o s i t y a nd t h e
S2 0
o f h y a l -
u r o ni c a c i d a r e a f f e c t e d t o d i f f e r e nt e x t e nt s .
Ei t h e r t h e v i s c o s i t y i s r e d u c e d b e f o r e t h e S2 0 v a l u e
i s a f f e c t e d , o r e l s e , i f t h e y a r e a f f e c t e d s i m u l t a n-
e o u s l y , t h e n t h e f a l l i n v i s c o s i t y i s r e l a t i v e l y g r e a t e r
t h a n t h e r i s e i n
S2 0 .
F r o m t h e t i m e o f f i r s t a p p e a r a nc e o f d i f f u s e ne s s i n
h y a l u r o ni c a c i d b o u nd a r i e s a nd f r o m t h e b e h a v i o u r
o f t h e f a s t c o m p o ne nt , i t wa s s u g g e s t e d t h a t a s i ng l e
h y a l u r o ni c a c i d b o u nd a r y i n t h e u l t r a c e nt r i f u g e
m i g h t r e p r e s e nt a m i x t u r e o f h y a l u r o ni c a c i d
p a r t i c l e s o f d i f f e r e nt s i z e a nd p r o p e r t i e s . Th e
v a r i a t i o n i n t h e s e d i m e nt a t i o n b e h a v i o u r o f f l u i d s
i n t h e no r m a l g r o u p m i g h t b e e x p l a i ne d b y t h i s
h y p o t h e s i s , i . e . t h a t h y a l u r o ni c a c i d r e p r e s e nt s a
r a ng e o f p a r t i c l e s a nd no t a p a r t i c u l a r m o l e c u l a r
c o nf i g u r a t i o n o f f i x e d u l t r a c e nt r i f u g a l a nd v i s c o u s
p r o p e r t i e s . Ac c o r d i ng t o t h i s t h e h y a l u r o ni c a c i d o f
no r m a l s y no v i a l f l u i d s wi l l v a r y i n p h y s i c a l p r o -
p e r t i e s b u t wi l l t e nd t o c o nt a i n a h i g h e r p r o p o r t i o n
o f p a r t i c l e s h a v i ng l o w
S2 0
a nd h i g h v i s c o s i t y . I f
t h i s i s t r u e , t h e n t h e f a c t t h a t t h e m u c i n f o r m e d
f r o m d i f f e r e nt f l u i d s i s c o ns t a nt i n i t s g l u c o s a m i ne
a nd t o t a l N c o nt e nt s c o u l d b e d u e t o e i t h e r o f t wo
c a u s e s : ( 1 ) t h a t wi t h i n t h e no r m a l a nd ne a r - no r m a l
r a ng e o f m o l e c u l a r s i z e o f h y a l u r o ni c a c i d , t h e
we i g h t o f p r o t e i n a s s o c i a t e d wi t h h y a l u r o ni c a c i d
i n m u c i n i s d e p e nd e nt m o r e o n t h e q u a nt i t y o f
' h y a l u r o ni c a c i d c h a i n' t h a n o n t h e nu m b e r o f
m o l e c u l e s ; ( 2 ) t h a t a d e c r e a s e i n t h e s i z e o f t h e
h y a l u r o ni c a c i d m o l e c u l e ne e d o nl y b e v e r y s m a l l t o
a f f e c t i t s p h y s i c o c h e m i c a l p r o p e r t i e s , a nd t h a t i n
t h i s na r r o w r a ng e t h e c h a ng e m a y b e t o o s m a l l t o b e
d e t e c t e d b y a na l y t i c a l p r o c e d u r e s .
V i s c o s i t y m e a s u r e m e nt s . Hy a l u r o ni c a c i d m u s t
h a v e ne a r l y s p h e r i c a l m o l e c u l e s wi t h c o ns i d e r a b l e
h y d r a t i o n s i nc e i n t h e C o u e t t e v i s c o s i m e t e r e x p e r i -
m e nt s , t h e i nt r i ns i c v i s c o s i t y wa s i nd e p e nd e nt o f
v e l o c i t y g r a d i e nt . Th e f l u i d s e x a m i ne d i n t h e
C o u e t t e v i s c o s i m e t e r i nc l u d e d o ne f r o m t h e p a t h o -
l o g i c a l g r o u p ( s a m p l e H) a nd t h e r a ng e o f i nt r i ns i c
v i s c o s i t i e s o b t a i ne d b y e x t r a p o l a t i o n o f d a t a a t
d i f f e r e nt v e l o c i t y g r a d i e nt s l a y b e t we e n 1 2 6 0 a nd
5 1 0 0 , s u g g e s t i ng t h a t no g r e a t i nc r e a s e i n a x i a l r a t i o
o c c u r s i n t h e h y a l u r o ni c a c i d o f p a t h o l o g i c a l f l u i d s .
G e ne r a l . Se v e r a l o f t h e i nv e s t i g a t i o ns s h o we d
d i f f e r e nc e s i n t h e p r o p e r t i e s o f t h e v a r i o u s s a m p l e s
o f h y a l u r o ni c a c i d . Th e no r m a l i t y o f t h e h y a l u r o ni c
a c i d a s j u d g e d b y t e n c r i t e r i a i s r o u g h l y i nd i c a t e d i n
Ta b l e 4 .
Th e t e s t s c h o s e n we r e : ( 1 ) C l i ni c a l s t a t e o f t h e
j o i nt . ( 2 ) Th e q u a nt i t y o f f l u i d p r e s e nt i n t h e j o i nt ,
t h e l e s s f l u i d f o u nd t h e m o r e no r m a l i t wa s p r e s u m e d
t o b e . ( 3 ) Th e a b i l i t y t o f o r m m u c i n c l o t s : d e s i g -
na t e d ( a ) no r m a l c l o t , ( b ) a c l o t f o r m e d i n a c l e a r
s o l u t i o n b u t wi t h p o o r r e t r a c t i o n a nd i nc r e a s e d
f r i a b i l i t y , a nd ( c ) no c l e a r s o l u t i o n o b t a i ne d o r v e r y
f r i a b l e c l o t . ( 4 ) Di f f u s e ne s s o f t h e b o u nd a r y i n t h e
u l t r a c e nt r i f u g e . Th e l o ng e r t h e t i m e t a ke n f o r t h e
b o u nd a r y t o b e c o m e d i f f u s e d u r i ng t h e c o u r s e o f
V o I .
5 9
6 3 1
J . P . J OHNSTON
Ta b l e 4 . Th e d e g r e e o f no r m c a l i t y o f s a m p l e s o f h y a l u r o ni c a c i d a s j u d g e d b y v a r i o u s c r i t e r i a
Th e s y m b o l s r a ng e f r o m + + + a nd + + t o i nd i c a t e no r m a l i t y t o - i nd i c a t i ng g r o s s a b no r m a l i t y .
C l i ni c a l No r m a l i t y
s t a t e o f Q u a nt i t y o f m u c i n
Sa m p l e j o i nt o f f l u i d c l o t
Ox + + + + + +
J + + + + + +
A + + + + + +
C
D
b
F
a
H
K - N
Di f f u s e -
ne s s o f
b o u nd a r y
P r o t e i n
c o nc e n-
t r a t i o n/ 7 7 , e l .
+ + +
+ + + +
+ F + + + +
( 1 / S2 0 ) /
7 1 r e .
(
1
I S2 0 ) / ' 7 r e l . /
A/ G I nt r i ns i c m u c i n m u c i n
r a t i o v i s c o s i t y c o nt e nt c o nt e nt
+ + + + + +
+ + + + + + + + + + +
+ + + + + - F - + + + + + +
+ + + + + + + + + +
+ + + - + + + - + + +
+ + + + + + + + + _
+ - +
+ +
+ + + + + - +
+ + + - +
~ ~~+ _ _
_ + _
_ -
i ~~
- F - F +
+ + +
+ +
a r u n a t a g i v e n h y a l u r o ni c a c i d c o nc e nt r a t i o n, t h e
m o r e no r m a l t h e h y a l u r o ni c a c i d wa s c o ns i d e r e d .
( 5 ) Th e q u a nt i t y o f p r o t e i n p r e s e nt d i v i d e d b y t h e
v i s c o s i t y . Th e p r o t e i n c o nt e nt o f a no r m a l f l u i d i s
l o we r t h a n t h a t o f a p a t h o l o g i c a l e f f u s i o n. Th e
p r o t e i n c o nc e nt r a t i o n wa s c o m p a r e d wi t h t h e
v i s c o s i t y t o c o r r e c t f o r d i l u t i o n o f t h e s y no v i a l
f l u i d . ( 6 ) 1 / S2 0 c o m p a r e d wi t h Os t wa l d v i s c o s i t y .
Th i s wa s b a s e d o n t h e r e s i d u a l v a r i a t i o n o b s e r v e d
f r o m t h e u l t r a c e nt r i f u g a l r e s u l t s o f F i g . 2 . ( 7 ) Al b u -
m i n/ g l o b u l i n r a t i o . Hi g h v a l u e s o f t h e A/ G r a t i o
we r e t a ke n a s i nd i c a t i ng no r m a l i t y . ( 8 ) Th e
i nt r i ns i c v i s c o s i t y m e a s u r e d b y C o u e t t e o r Os t wa l d
v i s c o s i m e t e r . Hi g h v a l u e s we r e a g a i n t a ke n a s
i nd i c a t i ng no r m a l i t y o f t h e h y a l u r o ni c a c i d .
( 9 ) Th e v a l u e o f 1 / S2 0 c o m p a r e d wi t h m u c i n c o nt e nt .
Th e m o r e no r m a l f l u i d s we r e e x p e c t e d t o s h o w a
r e d u c e d S2 0 v a l u e f o r e q u i v a l e nt m u c i n c o nc e nt r a -
t i o ns . ( 1 0 ) Th e Os t wa l d v i s c o s i t y c o m p a r e d wi t h
t h e m u c i n c o nt e nt . A h i g h v i s c o s i t y f o r a l o w m u c i n
c o nt e nt s h o u l d i nd i c a t e no r m a l i t y . Owi ng t o t h e
v a r i a t i o n o f a no m a l y t h i s i s no t e q u i v a l e nt t o ( 8 ) .
Th e c r i t e r i a u s e d i n t h e f i r s t s e v e n c o l u m ns o f t h e
t a b l e s h o w v e r y c l o s e a g r e e m e nt i n a s s e s s i ng
no r m a l i t y . ( Th e m i x e d na t u r e o f s a m p l e D h a s
a l r e a d y b e e n m e nt i o ne d a s a p o s s i b l e r e a s o n f o r i t s
a p p e a r i ng v e r y a b no r m a l b y t h e u l t r a c e nt r i f u g e
b o u nd a r y t e s t . ) Ag r e e m e nt i s no t c l o s e , e s p e c i a l l y
i n t h e c a s e s o f s a m p l e s D a nd H, i n t h e l a s t t h r e e
c o l u m ns ; t h e s e c o l u m ns a l l i nv o l v e t h e u s e o f d r y
we i g h t o f m u c i n c l o t . I t i s l i ke l y t h a t t h i s p r o p e r t y
o f c l o t f o r m a t i o n i s d i f f e r e nt l y a f f e c t e d b y a b no r m -
a l i t y o f h y a l u r o ni c a c i d . C o m p a r i s o n o f a ny o t h e r
p r o p e r t y o f h y a l u r o ni c a c i d wi t h d r y we i g h t o f
m u c i n wi l l t h e n g i v e m i s l e a d i ng r e s u l t s . Th e
C o u e t t e v i s c o s i m e t e r r e s u l t s a r e i nt e r e s t i ng i n t h i s
c o nne x i o n. Ac c o r d i ng t o m o s t o f t h e c r i t e r i a o f
no r m a l i t y s a m p l e H s h o ws g r e a t e r a b no r m a l i t y
t h a n e i t h e r s a m p l e C o r D. Th e v a l u e s i n Ta b l e 2
i nd i c a t e t h i s o nl y wh e n a s s e s s e d b y t h e c o m p a r i s o n
o f t h e v i s c o s i t y a no m a l y wi t h v i s c o s i t y . Th i s
m e a s u r e m e nt a l o ne o f t h e t h r e e t e s t s p r o p o s e d i n
Ta b l e 2 d o e s no t i nv o l v e t h e we i g h t o f m u c i n c l o t .
F u r t h e r r e s u l t s s h o we d t h a t t h i s c o m p a r i s o n o f
v i s c o s i t y wi t h v i s c o s i t y a no m a l y a f f o r d s a c o n-
v e ni e nt m e t h o d o f e s t i m a t i ng t h e no r m a l i t y o f t h e
h y a l u r o ni c a c i d i n s y no v i a l f l u i d ( Og s t o n & St a ni e r ,
1 9 5 3 b ; J o h ns t o n, 1 9 5 5 b ) .
I n c o nc l u s i o n, h u m a n h y a l u r o ni c a c i d r e s e m b l e s
f a i r l y c l o s e l y t h a t o f o x f l u i d . Th e r e i s , h o we v e r , a
g r e a t e r i nd i v i d u a l v a r i a t i o n b e t we e n a p p a r e nt l y
no r m a l j o i nt s . I n t h e f l u i d f r o m a b no r m a l j o i nt s t h e
u l t r a c e nt r i f u g a l r e s u l t s , v i s c o s i t y a nd m u c i n f o r m a -
t i o n s h o w v a r i a t i o n. As t h e f l u i d b e c o m e s m o r e
a b no r m a l , t h e u l t r a c e nt r i f u g a l b e h a v i o u r , t h e
v i s c o s i t y a nd t h e a no m a l o u s v i s c o s i t y a r e a f f e c t e d
i n a s i m p l e m a nne r . Th e we i g h t o f m u c i n f o r m e d i n
p a t h o l o g i c a l f l u i d s s t i l l c a p a b l e o f c l o t f o r m a t i o n i s
a f f e c t e d i n a c o m p l i c a t e d wa y a nd t h e we i g h t o f
m u c i n f o r m e d i s d i f f i c u l t t o i nt e r p r e t .
SU M M AR Y
1 . Th e v i s c o s i t y , u l t r a c e nt r i f u g a l b e h a v i o u r ,
m u c i n f o r m a t i o n, m u c i n p r o p e r t i e s a nd h y a l u r o ni c
a c i d m o l e c u l a r d i m e ns i o ns h a v e b e e n s t u d i e d f o r
a nu m b e r o f h u m a n s y no v i a l f l u i d s f r o m no r m a l a nd
p a t h o l o g i c a l kne e j o i nt s .
2 . Th e u l t r a e e nt r i f u g a l a nd v i s c o s i t y b e h a v i o u r
i s a f f e c t e d i n a b no r m a l f l u i d s wh i c h h a v e no t l o s t
t h e p r o p e r t y o f c l o t f o r m a t i o n.
3 . I t i s s u g g e s t e d t h a t e v e n i n f l u i d s wh i c h wi l l
f o r m a c o m p a c t m u c i n c l o t , t h e we i g h t o f t h e c l o t
m a y b e a b no r m a l , a nd t h a t t h e u s e o f m u c i n
e s t i m a t i o ns e v e n i n t h e s e ne a r l y no r m a l f l u i d s i s
u ns a t i s f a c t o r y .
4 . Ot h e r c r i t e r i a o f no r m a l i t y f o r h u m a n h y a l -
u r o ni c a c i d a r e d i s c u s s e d .
Th e a u t h o r h a s p l e a s u r e i n t h a nki ng Dr A. G . Og s t o n f o r
e nc o u r a g e m e nt a nd h e l p f u l a d v i c e ; M r s E. P . J o h ns t o n f o r
a s s i s t a nc e wi t h u l t r a c e nt r i f u g e i nt e g r a t i o ns ; M r R . G . Ta y l o r
o f t h e W i ng f i e l d - M o r r i s Or t h o p a e d i c Ho s p i t a l , Ox f o r d , a nd
Dr L . E. G l y nn o f t h e R o y a l C a na d i a n M e m o r i a l Ho s p i t a l ,
Ta p l o w, f o r s u p p l i e s o f h u m a n s y no v i a l f l u i d ; t h e Ox f o r d
C o - o p e r a t i v e So c i e t y L t d . f o r f a c i l i t i e s a t t h e i r B o t l e y R o a d
s l a u g h t e r h o u s e .
I 9 5 5
6 3 2
V o l . 5 9 P R OP ER TI ES OF HU M AN HYAL U R ONI C AC I D 6 3 3
R EF ER ENC ES
C e c i l , R . & Og s t o n, A. G . ( 1 9 4 8 ) . B i o c h e m . J . 4 3 , 5 9 2 .
C e c i l , R . & Og s t o n, A. G . ( 1 9 5 1 ) . J . Sc i . I ns t r u m . 2 8 , 2 5 3 .
F e s s l e r , J . H. & Og s t o n, A. G . ( 1 9 5 1 ) . Tr a n8 . F a r a d a y So c .
4 7 , 6 6 7 .
J o h ns t o n, J . P . ( 1 9 5 5 a ) . B i o c h e m . J . 5 9 , 6 2 0 .
J o h ns t o n, J . P . ( 1 9 5 5 b ) . B i o c h e m . J . 5 9 , 6 3 3 ,
J o h ns t o n, J . P . & Og s t o n, A. G . ( 1 9 4 6 ) . Tr a ns . F a r a d a y So c .
4 2 , 7 8 9 .
J o h ns t o n, J . P . , Og s t o n, A. G . & St a ni e r , J . E. ( 1 9 5 1 ) .
Ana l y s t , 7 6 , 8 8 .
Og s t o n, A. G . ( 1 9 5 3 ) . Tr a nm . F a r a d a y So c . 4 9 , 1 4 8 1 .
Og s t o n, A. G . & St a ni e r , J . E. ( 1 9 5 0 ) . B i o c h e m . J . 4 6 ,
3 6 4 .
Og s t o n, A. G . & St a ni e r , J . E. ( 1 9 5 2 ) . B i o c h e m . J .
5 2 ,
1 4 9 .
Og s t o n, A. G . & St a ni e r , J . E. ( 1 9 5 3 a ) . B i o c h e m . J . 5 3 , 4 .
Og s t o n, A. G . & St a ni e r , J . E. ( 1 9 5 3 b ) . J . P h y s i o l . 1 1 9 ,
2 5 3 .
P h i l p o t , J . St L . ( 1 9 3 8 ) . Na t u r e , L o nd . , 1 4 1 , 2 8 3 .
R o p e s , M . W . , R o b e r t s o n, W . B . , R o s s m e i s l , E. C . , P e a b o d y ,
R . B . & B a u e r , W . ( 1 9 4 7 ) . Ac t a m e d . s c a nd . Su p p l .
1 9 6 ,
7 0 0 .
Th e V i s c o s i t y o f No r m a l a nd P a t h o l o g i c a l Hu m a n Sy no v i a l F l u i d s
B Y J . P . J OHNSTON*
De p a r t m e nt o f P h y 8 i o l o g y ,
C h a r i ng
C r 0 8 8 Ho s p i t a l M e d i c a l Sc h o o l , a nd De p a r t m e nt o f B i o c h e m i 8 t r y ,
U ni v e r 8 i t y o f Ox f o r d
( R e c e i v e d 2 0 Oc t o b e r 1 9 5 4 )
Th e u s e o f m u c i n c o nt e nt a s a c r i t e r i o n a g a i ns t
wh i c h t o c o m p a r e s u c h p h y s i c o c h e m i c a l p r o p e r t i e s
o f h u m a n s y no v i a l f l u i d s a s v i s c o s i t y a nd h y a l u r o ni c
a c i d s e d i m e nt a t i o n c o ns t a nt a p p e a r s u ns a t i s f a c t o r y .
Th e m o r e a b no r m a l f l u i d s wi l l no t f o r m c o m p a c t
c l o t s , a nd t h i s p o we r o f c l o t f o r m a t i o n i s a n i n-
s e ns i t i v e a nd q u a l i t a t i v e t e s t . Ev e n i n t h e m o r e
no r m a l s o l u t i o ns wh i c h d o f o r m c o m p a c t c l o t s t h e
u s e o f t h e c l o t we i g h t a p p e a r s m i s l e a d i ng , a nd
i nv e s t i g a t i o n o f t h e m u c i n f o r m e d wi t h r e s p e c t t o
s p e c i f i c r e f r a c t i v e i nc r e m e nt , t o t a l N, o r g l u c o s -
a m i ne c o nt e nt a p p e a r s t o s h o w no v a r i a t i o n i n t h i s
no r m a l t o ne a r - no r m a l r a ng e ( J o h ns t o n, 1 9 5 5 ) .
Th e c o m p a r i s o n o f s e d i m e nt a t i o n c o ns t a nt wi t h
v i s c o s i t y i s a v e r y l a b o r i o u s t e c h ni q u e . Th e i nv e s t i -
g a t i o n o f t h r e e h u m a n f l u i d s b y m e a ns o f a C o u e t t e
v i s c o s i m e t e r , h o we v e r , h a d s u g g e s t e d t h a t t h e
r e d u c t i o n i n t h e d e g r e e o f no n- Ne wt o ni a n v i s c o s i t y
( ' a no m a l y ' ) , c o m p a r e d t o t h e v i s c o s i t y a t a
s t a nd a r d v e l o c i t y g r a d i e nt , m i g h t a f f o r d a t e s t o f
no r m a l i t y o f h y a l u r o ni c a c i d . Th i s r e d u c t i o n i n
a no m a l y h a d b e e n f u r t h e r d e m o ns t r a t e d f o r o x
f l u i d s r e nd e r e d a r t i f i c i a l l y a b no r m a l ( Og s t o n &
St a ni e r , 1 9 5 3 a ) . I t wa s a c c o r d i ng l y d e c i d e d t o
d e s i g n a v i s c o s i m e t e r c a p a b l e o f p r o v i d i ng v a r i e d
v e l o c i t y g r a d i e nt a nd r e q u i r i ng v e r y s m a l l q u a nt i -
t i e s o f f l u i d , a nd wi t h t h i s t o i nv e s t i g a t e m o r e f u l l y
t h e v i s c o u s p r o p e r t i e s o f h u m a n f l u i d s . F u l l
v i s c o s i t y m e a s u r e m e nt s we r e c a r r i e d o u t o n a
nu m b e r o f f l u i d s f r o m d i f f e r e nt s o u r c e s , a nd i n s o m e
c a s e s t h e e f f e c t s o f t e m p e r a t u r e , d i l u t i o n a nd o f t h e
a c t i o n o f h y a l u r o ni d a s e we r e i nv e s t i g a t e d .
EXP ER I M ENTAL
M e t h o d s
V i s c o s i t y wa s m e a s u r e d b y t i m i ng t h e r a t e o f f l o w o f f l u i d i n
a h o r i z o nt a l c a p i l l a r y , v a r i a t i o n i n t h e f l o w r a t e b e i ng
o b t a i ne d b y a p p l y i ng d i f f e r e nt p r e s s u r e s .
Ap p a r a t u s . Th e a p p a r a t u s ( F i g . 1 ) c o ns i s t e d o f a h o r i -
z o nt a l l e ng t h o f c a p i l l a r y t u b i ng ( l e ng t h 1 6 c m . , i nt . d i a m .
0 - 3 m m . ) c o nne c t e d t o t wo 5 c m . v e r t i c a l p i e c e s . Th e s e
we r e o f 1 m m . i nt . d i a m . i nc r e a s i ng t o c u p s o f a b o u t
0 - 5 c m . i nt . d i a m . A c r o s s t u b e ( 1 m m . i nt . d i a m . ) , wi t h a
t a p , c o nne c t e d t h e t wo l i m b s o f t h e U - t u b e s o f o r m e d . One
l i m b o f t h e U - t u b e wa s c o nne c t e d b y a 3 - wa y t a p t o a i r a nd
t o a wa t e r o r m e r c u r y m a no m e t e r . Th e U - t u b e a nd m a no -
m e t e r we r e m o u nt e d o n a r i g i d f r a m e a r r a ng e d s o t h a t t h e
U - t u b e c o u l d b e i m m e r s e d i n a t h e r m o s t a t i c a l l y c o nt r o l l e d
wa t e r b a t h t o t h e l e v e l i nd i c a t e d . M a r ks 1 , 4 a nd 8 c m .
a p a r t we r e a r r a ng e d a l o ng t h e f i ne c a p i l l a r y .
P r o c e d u r e . Th e U - t u b e wa s f i r s t c l e a ne d t h o r o u g h l y b y
wa s h i ng i n s u c c e s s i o n wi t h c o nc . HNO3 , g l a s s - d i s t i l l e d
wa t e r , e t h a no l , 1 0 % ( w/ v ) K OH i n e t h a no l a nd f i na l l y wi t h
e t h a no l . I t wa s d r i e d , a nd t h e f l u i d t o b e e x a m i ne d wa s
i nt r o d u c e d s o t h a t i t f i l l e d t h e c a p i l l a r y a nd c r o s s - t u b e a nd
r o s e i nt o t h e e x p a ns i o n i n t h e s i d e p i e c e s ( 0 - 3 m l . o f f l u i d
r e q u i r e d ) . A s m a l l d r o p l e t o f o - c h l o r o t o l u e ne wa s t h e n
a d d e d t o t h e f l u i d . Th i s wa s d o ne b y d i p p i ng a p i e c e o f
0 2 4 6 8 1 0 1 2
c m .
F i g . 1 . Se c t i o n o f c a p i l l a r y v i s c o s i m e t e r .
*
P r e s e nt a d d r e s s : M e d i c a l Di v i s i o n, C h e m i c a l De f e nc e
Ex p e r i m e nt a l Es t a b l i s h m e nt , P o r t o n, W i l t s .