Tcnicas de

colecta y
tincin de
parsitos
24 de septiembre
2008
Las tinciones se utilizan para diferenciar fcilmente la morfologa y estructura
de los organismos en observacin. Los colorantes modifican el ndice de
refraccin de las sustancias que colorean.
Prctica III
[TCNICAS DE COLECTA Y TINCIN DE
PARSITOS]
24 de septiembre de
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Tcnicas de colecta y tincin de parsitos
Prctica 3
Universidad Nacional Autnoma de Mxico. Facultad de Estudios
Superiores Zaragoza, UNAM. Av. Guelatao 66, Col. Ejrcito de Oriente, 09230
Mxico D.F.
Laboratorio de Microbiologa L-121
Prez Prez Jos Manuel, Equipo 1, Grupo 1701


Introduccin:

MTODOS DE COLORACIN:
Se utilizan para diferenciar fcilmente la morfologa y
estructura de los organismos en observacin.
Los colorantes modifican el ndice de refraccin de las
sustancias que colorean.

COLORACIN DE GIEMSA: se emplea en Hematologa
para observar los elementos sanguneos normales y en
Microbiologa para identificar parsitos (protozoarios de
la sangre y los tejidos), espiroquetas, levaduras y hongos
(Chlamydia).
Observacin: Los ncleos de clulas y protozoarios se
observan en color, el citoplasma en color azul claro. Los
eritrocitos en color gris claro.
Utilidad: se emplea principalmente en frotis sanguneos
para observar a los agentes patgenos junto a las clulas
sanguneas y mostrar las diferencias entre ambos. Se
ponen en evidencia la morfologa y estructura de los
microbios. Estas diferencias pueden ayudar al
diagnstico certero de varias enfermedades infecciosas
de la sangre.
Nota: El colorante de Giemsa es un colorante compuesto
ya que es una mezcla de varios colorantes. Por esto se
dice que la coloracin de Giemsa es una coloracin
compuesta o diferencial (ya que emplea ms de un
colorante).
Fundamento: se basa en la distinta afinidad que
demuestran las clulas y sus componentes a los distintos
colorantes incluidos en el colorante de Giemsa.
Tcnica: se realiza el extendido de la gota de sangre (gota
gruesa del pulpejo del dedo gordo). Se deja secar, se
cubre con la solucin de Giemsa, se lava con agua y se
observa. El fijador (metanol o etanol) se usa cuando se
cuentan con muestras de tejidos, no debe usarse con
extendidos de sangre.
Resultados errneos: se deben principalmente a errores
durante el extendido sanguneo o durante la aplicacin
del fijador.
La tincin de Giemsa emplea como colorante
fundamental, una mezcla de ticinicos catdicos, como el
azur A,B y azul de metileno, que colorean el ncleo,
mientras que la eosina para coloracin citoplasmtica,
estas sustancias estn disueltas en alcohol metlico. Su
fundamento est en la disociacin controlada de las sales
de eosinato, que ocurre por la mezcla de Giemsa con
agua destilada. La cromatina nuclear adopta la tincin
azul violcea algo distinta a la habitual para los
colorantes tiacnicos y que recibe la denominacin de
efecto Giemsa

Resultaos e interpretacin:
Los eritrocitos se tien de rosa
Las plaquetas de violeta
Los ncleos de los leucocitos de violeta
El citoplasma de los leucocitos es rosa.

La tincin de Giemsa al igual que la tincin de Wright
sirven para la identificacin de parsitos tales como el
Paludismo en los cuales es conveniente un tiempo de 30
minutos hasta una hora para Giemsa y de tres a cinco
minutos para Wright aunque se podran obtener mejores
resultados si se le deja a ste ultimo hasta por 15
minutos. El mtodo de Wright brinda buenos resultados
y requiere de muy poco tiempo, pero se obtiene detalles
ms precisos con la tincin de Giemsa.

El mtodo de Wright solo se puede aplicar a frotis
delgados mientras que en Giemsa se pueden usar frotis
delgados y frotis de gota gruesa omitiendo el paso de
fijacin con alcohol metlico.

Las preparaciones en fresco son utilizadas
principalmente para la identificacin de Tripanosomas y
microfilarias; los frotis teidos (delgados) sirven para
identificar diferencias morfolgicas de protozoarios en
clulas sanguneas, mientras que la gota gruesa es
utilizada cuando escasean los parsitos o cuando en
frotis delgados los resultados son negativos, pero es muy
difcil la identificacin estructural de estos; estos tambin
se utilizan para la identificacin de Tripanosomas,
microfilarias, plasmodios y leishmanias.

Uno de los inconvenientes del uso de canastillas durante
las tinciones es la cantidad de colorante que se requiere
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para llenar hasta el borde superior de los portaobjetos y
la contaminacin de los reactivos (figura 1y 2), as como
tambin la posibilidad de formacin de espacios libres de
colorante por la presencia de aire entre los portaobjetos
impidiendo la tincin.

*Tincin de Wright
Fundamento:
La tincin de Wright es una tincin de tipo Romanowsky.
Es extremadamente importante en el laboratorio de
hematologa este tipo de tincin, ya que puede
obtenerse una cantidad abundante de informacin a
partir del examen de un frotis de sangre perifrica bien
teido.
Una tincin de Romanowsky consiste en azul de metileno
y sus productos de oxidacin, as como eosina Y o eosina
B.
La accin combinada de estos colorantes produce el
efecto Romanowsky y da una coloracin prpura a los
ncleos de los leucocitos y a los grnulos neutroflicos y
de color rosado a los eritrocitos. Los componentes de
este efecto son el azul B y la eosina Y
Las propiedades de tincin de Romanowsky dependen
del enlace de los colorantes a las estructuras qumicas y
de las interacciones del azul B y la eosina Y. Los
agrupamientos de cidos nucleicos, las protenas de los
ncleos celulares y el citoplasma inmaduro reactivo, fijan
el azul B, colorante bsico
La eosina Y, colorante cido, se fija a los agrupamientos
bsicos de las molculas de hemoglobina y a las
protenas bsicas.
La naturaleza cida o bsica de las estructuras celulares
determina su avidez por los componentes del colorante
policromtico de Wright; es as como los cidos nucleicos
se tien con azul B que es el bsico y la hemoglobina con
la eosina Y que es cida. Otras estructuras se tien por
una combinacin de ambos y se denominan neutrfilas.

Observaciones
Una tincin satisfactoria debe dar los siguientes
resultados:
Glbulos Rojos: rojo amarillento.
Neutrfilos: cromatina prpura oscuro, citoplasma rosa
plido y grnulos lila.
Eosinfilos: cromatina prpura oscuro, citoplasma azul
plido y grnulos rojo brillante.
Basfilos: cromatina prpura oscuro, grnulos azul
oscuro. Linfocitos: cromatina prpura oscuro, citoplasma
azul cielo.
Monocitos: cromatina prpura medio, citoplasma azul
grisceo y grnulos lila Plaquetas: centrmero violeta o
prpura, hialmero azul claro.
Causas de error en la tincin del frotis sanguneo.
Una extensin excesivamente azul (basfila).
Extensin gruesa.
Lavado insuficiente.
Tiempo tincin excesivamente prolongado.
Empleo de colorante excesivamente alcalino
Una coloracin excesivamente rosada (acidfila).
Extensin delgada.
Exceso de buffer.
Empleo de colorante excesivamente cido.
Solucin colorante de Giemsa
La solucin colorante de Giemsa se usa tanto para
manchas de sangre como para manchas de bacterias.
Una parte de la solucin base concentrada se deber
diluir en diez partes de agua destilada.
Utilice una mancha de sangre secada al aire y fije la
pelcula al portaobjeto colocndola en alcohol metlico
de 70% de tres a cinco minutos. Seque el portaobjeto al
aire. Luego coloque el portaobjeto en un plato o frasco
(en el frasco de Coplin, si se cuenta con uno) que
contenga solucin colorante de Giemsa de 15 a 30
minutos. Finalmente lave el portaobjeto en agua
destilada y squelo.
Muchas soluciones colorantes (generalmente aquellas
que son tintes bsicos de anilina, como la fucsina bsica,
el violeta cristal, el azul de metileno y la safranina) puede
ser usadas para colorear la bacteria. Se deber diluir la
solucin colorante; vierta una parte de la solucin base
concentrada en diez partes de agua. Se deber aplicar la
solucin colorante de uno a dos minutos, lavando luego
y, por ltimo, secando con papel secante. Los
cubreobjetos no son necesarios a menos que quiera
volver sus portaobjetos en permanentes. En tal caso,
aada una gota de blsamo cuando el portaobjeto est
seco y luego aada un cubreobjeto.

FILARIAS
Son un tipo de gusanos de aspecto filamentoso, largos y
delgados, que suelen aparecer en el tejido linftico
enrollados unos a otros.
La hembra puede tener distintas localizaciones en el
organismo y es la que produce las microfilarias que
alcanzan el torrente circulatorio. Cuando el individuo es
picado por un mosquito, le transfiere las microfilarias y
en su interior desarrolla el ciclo infeccioso de las larvas.
Cuando este mosquito vuelve a pica a otra persona, le
transmite las larvas.
La deteccin se lleva a cabo en sangre perifrica y ser
necesario realizar varias tomas ya que la presencia en
sangre es variable.
Las dos especies ms importantes desde el punto de
vista clnico son: (infecta los vasos linfticos y regin
inguinal) y
Tcnicas para la coloracin de protozoos
Mtodo de Klein modificado (impregnacin de plata para
tri codnidos)
Preparar frotis delgados tanto de piel como de las
branquias en un portaobjeto bien limpio.
Se deja secar al ambiente.
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Cubrir el portaobjeto con una solucin acuosa al 2% de
nitrato de plata durante 7 minutos. Para tricodnidos
marinos o estuarinos se recomienda utilizar la solucin a
una temperatura de 4C.
Lavar con agua destilada o con agua de lluvia.
Exponer el portaobjeto al sol entre 1030 minutos segn
el espesor del frotis. Puede verse al microscopio a los 5
minutos. Se deja secar.
Chequear las muestras al microscopio.
Colocar la lmina en alcohol absoluto y despus llevarlo a
xilol.
Montar con blsamo de Canad.
Tcnicas para la fijacin y coloracin de helmintos
Como regla general los metazoos parasitarios pueden ser
preservados para su posterior identificacin en una
solucin fijadora que contenga 10 ml de formol, 20 ml de
alcohol al 95% y 15 ml de agua; inmediatamente antes de
usarse, se agregan 5 ml de cido actico glacial a la
solucin fijadora. No obstante, se recomienda el empleo
de las siguientes tcnicas para la fijacin y coloracin de
metazoos pertenecientes a diferentes clases:

Objetivos:
Que el alumno aprenda a colectar material
parasitario de animales de experimentacin y
domsticos.
Que el alumno utilice y practica las diferentes
tcnicas de tincin, utilizados en parasitologa.
Que el alumno aprenda a conocer las
preparaciones, de diversos parsitos colectados.

Mtodo:
1.- Sangre
a) Tcnica de gota gruesa
Se pincho un dedo e inmediatamente se tomo una
muestra de sangre y se procedi a realizar el siguiente
procedimiento. Esquema A:

Sobre un portaobjetos limpio se coloca una
gota de sangre y se extiende, con una de las
aristas de un portaobjetos formando un
cuadro de aprox 1.5 cm se deja secar.
El siguiente paso es el lacado o lisado de
los eritrocitos en agua destilada durante 8-
10 minutos se seca y se tie se observa.
Se observ al microscopio en seco dbil y
seco fuerte e inmersin





b) Tcnica frotis fino en sangre.
Para las preparaciones fijas se realizo el siguiente
procedimiento. Esquema B


Se deposita una gota de sangre en uno de
los extremos del portaobjetos, y con el
borde de otro porta se realiza la extensin
de la sangre.
Se mueve rpido este segundo
porta el cual debe de formar un
ngulo de aprox. 30 grados.
Se deja secar, se tie y se observa
al microscopio en 10X, 40X,
100X aumentos.



2.- Bsqueda y estudio de
ectoparsitos.
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Localizar y obtener parsitos del sapo
Sacrificar ectoparasitos
Observaciones del artrpodo
Realizar preparaciones, utilizar
colorantes de contraste

3.- Obtencin de protozoarios y
helmintos
Se realizo el siguiente procedimiento.


Obtencin y fijacin
Conservacin tincin
Montaje y observacin
Identificacin

Al animal sacrificado se realizo el siguiente
tratamiento.
Sacrificar al animal y hacer una incisin
en la lnea media ventral
Busqueda de en la superficie
de los organos internos y
menbranas serosas la
presencia de quistes
Extrae cada organo y se pone en
solucin salina
Se cotara y/o desmenuzara cada
organo en busca de helmintos y
protozoarios
Limpiar al helminto y conservarlos en
AFA

Resultados:
Tabla 1: Organismos encontrados en la practica

organismo Clase Genero Especie
Acaro Ciliophora* Balantidium sp
Ascaris Secernentia Ascaris lumbricoides
Faciola Trematoda Fasciola hepatica

Sapo:










Figura 1. Se muestra el pulmn de sapo en solucin
salina. En la parte inferior izquierda se puede observar
una Filaria. Cabe sealar que el pulmn se encontr
infestado con estar larvas.











Figura 2. Filaria observada bajo el estereoscopio
obtenido de pulmn de sapo, cabe sealar la estructura,
la terminacin en punta y el intestino caractersticos.












Figura 3. Filaria observada bajo el estereoscopio
obtenido de intestino de sapo, cabe sealar la estructura,
la terminacin en punta y el intestino caractersticos.










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Figura 4. Ectoparsito, Garrapata, ste se encontr en un
brazo del sapo aun alimentndose.

Hgado de Res









Figura 5. Preparacin fija de Faciola heptica, se puede
observar claramente que es un trematodo plano, stos
se encontraron en el hgado y en los conductos
hepticos.










Figura 6. Faciola heptica, trematodo plano, se observo en
estereoscopio, en un acercamiento se puede notar el poro
oral














Figura 7. En esta muestra se observa alguna clase de
cestodo encontrado en un sapo, observado bajo
estereoscopio. Esta muestra pertenece a otro equipo.


Figura 9. Preparacin a seco fuerte 40x de una frotis de
sangre de sapo observada teida bajo Wright. No se
encontr parsitos, aunque si una gran cantidad de la
serie blanca.


Figura 10. Impronta de sapo, observada bajo Giemsa en
inmersin. No se encontraron microfilarias en ninguno
de los dems tejidos.



Anlisis de resultados:

Los parsitos pueden ser microorganismos unicelulares,
eucariontes o multicelulares y se clasifican de acuerdo a
sus caractersticas morfolgicas, es posible
caracterizarlos de acuerdo en el lugar donde parasiten
dentro o fuera de husped. En esta prctica observamos
primeramente un ectoparsito garrapata Figura 4, que se
encontr alimentndose del brazo del sapo previo al
sacrificio. La mayora de stos artrpodos son portadores
de enfermedades o en alguna fase de la vida de un
parasito.
Posteriormente en el sacrificio del sapo, se tomo sangre
fresca para realizar los frotis fino y en gota gruesa que
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posteriormente se tieron con colorante de Giemsa o
Wright.

Se procedi a realizar un diseccin del sapo observando
que no estuviera parasitado en piel, al no encontrar
ningn parasito se procedi a obtener cada rgano y
colocarlo en solucin salina. En el acto se procedi a
agitar cada rgano para que por el movimiento se
expulsaran a los parsitos si presentaban, con lo cual se
encontr en pulmn Figura 1, microfilarias,
caractersticas de cuerpo alargado, con un intestino y
terminacin en punta Figura 2, en intestino se encontr
por lo que se observo la misma clase de microfilarias
Figura 3, aunque no se puede decir con certeza si era de
la misma especie. En hgado no se encontr parsitos,
aunque por el color y poros encontrados se puede decir
que es un hgado enfermo. En una preparacin externa
se encontr un cestodo por su caracterstico cuerpo
segmentado y el esclex, Figura 7, posiblemente de
alguna clase de tenia.

Tambin se realizo observacin en una muestra obtenida
de hgado de res, en la cual se observo meticulosamente,
en la parte externa e interna encontrando Faciola
heptica Figura 5, caracterstico, cabe sealar que el
hgado se encontraba infestado de estos organismos,
algunos inclusive taponando los conductos hepticos lo
cual provoco necrosis del tejido circundante.
En el estereoscopio se observo el poro oral y ventral de
dicho microorganismo Figura 6.

Conclusiones:

Con base en la prctica se colecto parsitos de animales
de vida libre y en cautiverio, tambin se realizo las
diferentes tcnicas de tincin que se utilizan en
parasitologa observando que cada una de ellas ofrece
una utilidad, por ejemplo la tincin de Wright es rpida
en comparacin a Giemsa, aunque en sta ltima se
pueden observar mejor los detalles y puede ser usada en
frotis fino y de gota gruesa, as mismo realizo la forma
correcta de realizar preparaciones de los parsitos
colectados y su conservacin en AFA

Referencias:

PARASITOLOGA MEDICA. Jorge Tay
Zavala, Ramon Lara Aguilera et.al. 5a
edicin. Editorial Mendez editores. Mxico
1995.
Biagi Francisco. Enfermedades
parasitarias. Editorial el Manual Moderno.
3ra ed. Mxico, 2004.
Romero Cabello Ral. Microbiologa y
Parasitologa Humana. Bases etiolgicas de
las enfermedades infecciosas y parasitarias.
Editorial Panamericana. 3ra ed. Mxico,
2007.

Anexo: Cuestionario III

CUESTIONARIO

1.- Desarrolle el ciclo biolgico de o los parsitos que
encontr en la prctica. De no haber encontrado ningn
parsito, el asesor le asignar el o los parsitos que
desarrolle.
Filarias:
Las filarias adultas tienen varias ubicaciones en los
tejidos tanto de los mamferos como del hombre que
constituyen sus hospedadores definitivos. En general, la
hembra adulta fecundada produce embriones vivos
denominados microfilarias, que migran hacia los vasos
linfticos la sangre o la piel. Para la transmisin de la
infestacin a otro mamfero se hace precisa la existencia
de un hospedador intermediario, que es un Artrpodo
hematfago que junto con la sangre ingiera microfilarias.
En el Artrpodo las microfilarias sufren dos mudas,
convirtindose en larvas filariformes infectantes. Estas
larvas se liberan en las glndulas salivares o probscide
del Artrpodo que, cuando de nuevo se alimenta,
transmite a otro mamfero. Al entrar en el torrente
circulatorio de del mamfero, las larvas filariformes
infectantes, migran hacia el tejido adecuado,
transformndose en adultos. La maduracin puede
tardar hasta un ao.
La presencia de microfilarias de determinadas especies
en la sangre perifrica puede ser ms prevalente en
algunas horas del da, es decir, existe una periodicidad.
Estos patrones suelen coincidir con los de la actividad
alimentara de los Artrpodos hematfagos que
constituyen sus hospedadores intermediarios.

Fasciola:
El ciclo biolgico se puede dividir en 3 fases:
1.) PUESTA Y ELIMINACIN DE HUEVOS:
Una fasciola adulta puede poner una media de 3.500
huevos al da, pero esta cifra puede variar en funcin de:
a) Antigedad de la infestacin: a mayor edad de la
fasciola, menor nmero de huevos pone.
b) poca estacional: en los meses de marzo, abril y mayo
la puesta es mxima, siendo mnima en los meses de
enero y febrero. c) Grado de parasitacin: a mayor
nmero de fasciolas albergadas en el hgado menor
nmero de huevos ponen.
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d) Edad del hospedador: la eliminacin de huevos
decrece a medida que la vaca envejece, (fenmenos
inmunolgicos).
2.) FASE EXTERNA DEL CICLO:
Una vez eliminados los HUEVOS por la vaca a travs de
las heces, requiere unas condiciones para desarrollarse,
como son; una temperatura entre 10-30 grados
centgrados, una elevada tensin de oxgeno y una
elevada humedad.
Durante la incubacin que puede durar entre 15 das (si
las condiciones son favorables), a 90 o ms das, se
produce en el interior del huevo numerosas divisiones
celulares hasta la formacin de un embrin mvil
llamado MIRACIDIO, ste es un gran nadador y en las 24
horas posteriores a su salida del huevo debe encontrar el
hospedador intermediario (caracol), pues sino morir.
El hospedador intermediario es un molusco, un caracol,
que en Espaa la especie ms frecuente se llama
Limnaea truncatula. El miracidio por fototropismo y
quimiotropismo busca al caracol penetrando en el va
percutanea.
En el caracol la larva pasa por varios estadios como son
ESPOROCISTO, REDIA y CERCARIA, para lo cual necesita
un plazo de 6-8 semanas. De un huevo pueden aparecer
unas 400 cercarias. Las cercarias salen del caracol y en un
plazo de 1-2 horas deben fijarse a alguna superficie lisa,
fijndose a ella por su ventosa ventral. Tras sufrir una
serie de transformaciones, a los 2-3 das adquiere la
capacidad infestante, pasando a llamarse
METACERCARIAS. Las metacercarias que tienen
posibilidad de continuar el ciclo evolutivo son aquellas
que las vacas ingieren al encontrarse fijadas sobre la
hierba de la que se nutre.
Se necesita un periodo de aproximadamente 3 meses
desde que sale el huevo por heces, hasta la formacin de
metacercarias.
3.) FASE INTERNA DEL CICLO:
Las metacercarias al ser ingeridas con la hierba alcanzan
el intestino delgado (duodeno) del rumiante, y bajo la
accin de los jugos digestivos sufren un proceso de
desenquistamiento. 1 hora despus, estas formas
inmaduras perforan la pared intestinal y a travs de la
cavidad peritoneal se dirigen al hgado. Los parsitos
inmaduros estn durante 6-8 semanas rodeando los
canales biliares, destruyendo una buena parte del
parnquima. El desarrollo acaba cuando pasan a canales
biliares en donde comienzan a poner huevos
aproximadamente al mes de implantarse. Esta puesta de
huevos acaba cuando se muere la vaca o cuando se
acaba con el parsito mediante tratamientos
antiparasitarios adecuados.
Para el ciclo interno del parsito, es decir desde que se
ingiere la metacercaria hasta que el parsito adulto libera
huevos, transcurren unos 3 meses.
Las infestaciones de los animales pueden producirse a lo
largo de todo el ao, aunque el mximo riesgo tiene
lugar en otoo e invierno.


2.- Nombre y explique el fundamento de dos tcnicas de
fijacin, para protozoarios y helmintos, aparte de las
incluidas en el anexo.

FIJADORES

Formaldehdo

Para preservar esporas de microsporidia, quistes y
ooquistes de protozoarios se utiliza el formaldehdo al
5.0% y para huevos y larvas de helmintos al 10%. Si la
muestra de heces contiene quistes y huevos se
recomienda usar el fijador al 10%.

Folmaldehido 0.5% 5.0mL
Solucin salina (NaCl 0.85%) 95.0mL

El formaldehdo se diluye con solucin salina. Para
mantener la morfologa de los parsitos en condiciones
ptimas se recomienda el fijador amortiguado. A 100mL
del fijador se le adiciona 0.08g de una mezcla de sales y
se homogeniza (sales: se mezclan 6.10g de fosfato de
sodio monobsico y se almacena en un frasco
hermticamente cerrado). Cuando se utiliza el fijador a
temperatura ambiente, los huevos de helmintos de
pared gruesa pueden seguir su desarrollo; para asegurar
que los huevos no sigan su desarrollo se recomienda usar
el fijador a 60 C.

Schaudinn

Este fijador facilita la preservacin de quistes,
trofozoitos, huevos y larvas.

Solucin concentrada
Cloruro de mercurio 11.40g
Agua destilada 200.0mL
Etanol 95% 100.0mL
Solucin de trabajo
Solucin concentrada 47.0mL
cido actico glacial 3.0mL

Se mezcla el cloruro de mercurio y el agua destilada con
agitacin constante; despus se aade el etanol, se
homogeniza y se almacena en frascos mbar a
temperatura ambiente. Esta solucin concentrada puede
durar varios meses.

La solucin de trabajo se prepara en el momento en que
se va a preservar la muestra con las estructuras
parasitarias. La muestra con el especimenes parasitarios
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se homogeniza con la solucin de trabajo pero se
mantiene una relacin 1:3 (muestra: fijador).

TINCIONES

Hematoxilina frrica modificada

La hematoxilina es un colorante natural, cuyo producto
de oxidacin (la hematena) cumple la funcin de
colorante. La hematena por s sola tiene poca afinidad
por los tejidos por lo tanto debe utilizarse con un
mordiente. De acuerdo al mordiente tendremos las
distintas hematoxilinas, entre ellas la frrica y la
fosfotngstica.
Hematoxilina Frrica > Es una coloracin muy estable,
que resulta til para estudiar detalles celulares finos pues
brinda una tincin ntida y bien diferenciada (ej.
Extraccin muscular).
En este caso se usan como mordientes sales de hierro,
las que actan a la vez como agentes oxidantes. La laca
frrica que forman estas hemotoxilinas presenta color
negro o azul negro.
Hematoxilina Fostotngstica > Esta tcnica se utiliza para
el estudio del sistema nervioso central y tejido
conjuntivo, en particular estras musculares y fibras. En
este caso el mordiente utilizado es el cido
fosfotngstico. Resultados: cromatina, eritrocitos y cilias
se colorean azul oscuro, las estriaciones musculares azul
casi negro y los citoplasmas se colorean rosa plido.

Para obtener buenas tinciones se recomienda usar el
fijador Schaudinn.

Solucin concentrada A
Hematoxilina 10.0g
Etanol absoluto 1000.0mL
Solucin concentrada B
Sulfato ferroso de amonio 10.0g
Sulfato frrico de amonio 10.0g
cido clorhidrico 10.0mL
Agua destilada 1000.0mL

Las soluciones se almacenan a temperatura ambiente y
su vida media es de 6 meses.

Solucin de trabajo
Solucin concentrada A 15.0mL
Solucin concentrada B 15.0mL

PROCEDIMIENTO

Hacer un frotis en un portaobjetos y emulsionarlo con
solucin salina isotnica; es necesario que la capa quede
delgada. Antes de que las heces se sequen, se fija con
Schaudinn durante sesenta minutos. (se puede dejar
toda la noche en el fijador).
Para eliminar los cristales del cloruro de mercurio se
colocan las preparaciones en una solucin de etanol al
70%-yodo durante cinco minutos . (la solucin alcohol
yodo se prepara aadiendo unas gotas de yodo a 3% al
etanol a 70%). Posteriormente, en etanol al 95% y en
etanol al 70% (en ambos pasos durante cinco minutos).
Se lavan al chorro de agua, dejando que el agua fluya
durante 10 minutos.
Los portaobjetos se colocan en la solucin de trabajo
durante cinco minutos.
Se lavan al chorro de agua durante 10 minutos.
Se deshidratan en etanol al 70%, 95% y etanol absoluto
(cada paso ser de 5 minutos).
Se transfieren las laminillas a xileno durante 10 minutos.
Se cubren las laminillas con blsamo de Canada se coloca
un cubreobjetos del nmero 1 y se dejan secar.
Negro de Clorazol
Esta tincin se usa para teir el esqueleto cuticular de
los insectos, entero o en partes aisladas. El negro de
clorazol en un colorante que se fija extraordinariamente
a la cutcula dando diferentes tonos de coloracin que
hacen aparecer los ms finos detalles. Se recomienda
utilizarla con muestras de materia fecal sin fijador.
Solucin A
Etanol 90% 170.0mL
Metanol 100% 160.0mL
cido actico glacial 20.0mL
Fenol lquido 20.0mL
cido fosfotngstico 1% 12.0mL
Agua destilada 618.0mL
Solucin B
Negro de clorazol 5.0g
Solucin A 1000.0mL

Se tritura el colorante (negro de clorazol) con algunos
mililitros de la solucin A, y se sigue triturando hasta
obtener una pasta sin grumos; se aade ms solucin A,
se muele, se deja sedimentar y se vaca el sobrenadante
en otro recipiente. Se sigue moliendo y se vaca hasta
que todo el colorante est en solucin. El colorante se
almacena de 4-6 semanas antes de usarse.

PROCEDIMIENTO
Se hace un frotis con las heces, y se evita que se seque.
Se sumerge en el colorante durante 1-2 horas.
Se coloca en etanol al 95%, durante 5 minutos. Despus
en etanol al 100% por cinco minutos (se repite este paso
una vez ms).
Se pasa al tolueno o xileno durante cinco minutos
(repetir una vez).
Se cubren las preparaciones con resina o blsamo de
Cnada, se coloca un cubreobjetos del nmero 1 y se
deja secar.
Resultados: la cutcula toma el color de azul a negro
segn el grosor de la cutcula y el tiempo de exposicin al
colorante (Fig. 2A, 2B). Si no se quiere hacer el montaje
[TCNICAS DE COLECTA Y TINCIN DE
PARSITOS]
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definitivo en blsamo de Canad, las piezas se pueden
guardar indefinidamente en lactofenol o en alcohol
benzlico para observar directamente en el microscopio,
slo hay que evitar que el lactofenol o el alcohol
benzlico se evaporen.


3.- Nombre y desarrolle el ciclo biolgico de dos
nemtodos hematfagos y parsitos del humano.

NEMATODOS HEMATOFAGOS. W. bancrofti




Wuchereria bancrofti es un parsito nemtodo, causante
de la parasitosis humana llamada filariasis linftica y
transmitida por varias especies de mosquitos. Su nombre
fue dado por razn de los cientficos Otto Wucherer y
Joseph Bancroft, afecta a ms de 120 millones de
personas, principalmente en frica, Suramrica y otros
pases tropicales y subtropicales. De no tratarse la
infeccin, puede resultar en una enfermedad
denominada elefantiasis.
Ciclo de vida
W. bancrofti completan su ciclo de vida en dos
hospedadores: los seres humanos sirven como el
hospedador definitivo y los mosquitos son los
hospedadores intermediarios. Los parsitos adultos
residen en el sistema linftico y son vivparos, es decir,
sus cras se desarrollan en el vientre de la hembra.
Microfilaria
El primer estadio del parsito se denomina microfilaria y
estn presentes el sistema circulatorio. Las microfilarias
continuamente migran de la circulacin profunda hasta
la circulacin perifrica. Durante el da estn presentes
en las venas profundas y durante la noche migran a la
circulacin perifrica, desde donde el gusano es
transferido al vector. Los vectores artrpodos ms
comunes son los mosquitos de las especies Culex,
Anopheles, Aedes, y Mansonia. Dentro de su segundo
hospedador, la microfilaria madura a la larva motil. Un
mosquito, del gnero Armigeres ingiriendo sangre de un
dedo humano.
Larva
Cuando el mosquito infestado se alimenta, deposita en la
sangre del hospedador humano, la forma larval del
gusano. La larva migra hacia los ganglios linfticos,
predominantemente a nivel de las piernas (la ingle) y el
rea genital, lugar donde se desarrolla en la forma adulta
del parsito en el curso de aproximadamente un ao.
Para entonces, las hembras adultas pueden producir
nuevas microfilarias. o vacunas preventivas.
Onchocerca volvulus
La oncocercosis es un padecimiento producido en el
hombre por un nematodo: Onchocerca volvulus
Ciclo de onchocerca



















Trichuris trichiura


Ciclo de vida

A: Eliminacin por materia fecal de huevos inmaduros .
B: En presencia de condiciones optimas (25 - 30 C y
elevada humedad) el huevo se torna maduro (larva
desarrollada) e infectante en el lapso de 2-4 semanas. C:
Este huevo infectante es vehiculizado hasta el hombre
(nico hospedero) a travs de tierra y alimentos
contaminados con la misma. D: El hombre ingiere los
huevos maduros producindose la liberacin de la larva
en el intestino delgado y su migracin hasta el ciego
donde se diferenciar a gusano adulto y luego de que la
hembra se encuentre fecundada comenzar la liberacin
[TCNICAS DE COLECTA Y TINCIN DE
PARSITOS]
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de huevos al tubo digestivo para que estos sean
eliminados con la materia fecal.