LAPORAN KULTUR JARINGAN HEWAN

ISOLASI MAKROFAG DARI PERITONEAL MENCIT

A. Tujuan
Mengatahui cara pengisolasi mekrofag mencit dari peritonial tikus (Rattus norvegicus)
Alat dan Bahan :
Mikroskop cahaya
Spluit 10 cc dan needle 26 G
sentrifuge tube dan Sentrifuge
Mikropipet 1,5 ml
Hemositometer
Dissecting set steril
Kapas
Bak paraffin
Incubator CO
2

Neutral red
PBS (phospat Buffer Saline)
RPMI dingin
Alkohol 70%
Lar.tripan blue
Mikrowell dan cover slip
Latex bead LB30 sigma
CARA KERJA
1. Isolasi dan Kultur Sel Makrofag Peritoneum Mencit.
Mencit dibunuh dengan narkose menggunakan kloroform. Mencit diletakkan dalam
posisi terlentang, kulit bagian perut dibuka dan dibersihkan selubung peritoneumnya
dengan alkohol 70%.
Suntikkan 10 ml medium RPMI dingin ke dalam rongga peritoneum, tunggu 3 menit
sambil ditekan-tekan secara perlahan.
Cairan peritoneal diaspirasi dari rongga peritoneum dengan cara menekan organ dalam
dengan 2 jari, cairan diaspirasi dengan spuit injeksi, dipilih pada bagian yang tidak
berlemak dan jauh dari usus. Aspirat yang didapat ditampung dalam tabung sentrifus dan
disentrifus pada 1.200 rpm, 4C selama 10 menit.
Supernatan dibuang, kemudian ditambahkan 3 ml medium RPMI komplit (mengandung
FBS 10%) pada pellet yang didapat.
Jumlah sel yang didapat dihitung dengan menggunakan hemositometer, kemudian
diresuspensikan lagi dengan medium RPMI komplet sehingga didapat suspensi sel
dengan kepadatan 2,5 x 10
6
/ml.
Suspensi sel yang telah dihitung dikultur pada sumuran microplate 24 yang telah diberi
cover slips bulat, setiap sumuran 200l (5 x 10
5
sel).
Inkubasikan dalam inkubator CO
2
5%, 37C selama 30 menit. Kemudian ditambahkan
medium RPMI komplit 1 ml/ sumuran dan diinkubasikan lagi selama 2 jam. Sel dicuci
dengan RPMI 2x kemudian ditambahkan medium komplit 1 ml/ sumuran dan inkubasi
dilanjutkan sampai 24 jam.

2. PENGAMATAN AKTI FI TAS FAGOSI TOSIS MAKROFAG
1. Amati preparat yang sudah disediakan pada perbesaran 100x.
2. Gambar dan identifikasi keberadaan makrofag yang teraktifasi.