Medios de cultivo para el crecimiento de bacterias

2000 Kenneth Todar, University os Wisconins-Madison

Medios de cultivo para el crecimiento de bacterias
Para cada bacteria a ser cultivada para cualquier propsito es necesario proveer el
ambiente bioqumico y bio!sico apropiado" #l ambiente bioqumico $nutricional% se
hace disponible como medio de cultivo, y dependiendo de las necesidades
especiales de cada bacteria particular se ha desarrollado una &ran variedad y tipos de
medios de cultivo con di!erentes propsitos y utili'aciones" (os medios de cultivo son
empleados para el aislamiento y mantenimiento de cultivos puros de bacterias y
tambi)n son utili'ados para la identi!icacin de bacterias de acuerdo a sus
propiedades bioqumicas y !isiol&icas"
#l modo en que las bacterias son cultivadas, y el propsito de los medios de cultivo,
varan ampliamente" (os medios lquidos son utili'ados para el crecimiento de lotes
de cultivos puros mientras que los medios slidos son ampliamente utili'ados para el
aislamiento de cultivos puros, para la estimacin de poblaciones de bacterias viables,
y una variedad de otros propsitos" #l agar, a&ente &)lido m*s utili'ado para medios
slidos o semislidos, es un hidrocoloide derivado de las al&as ro+as" #l a&ar es
utili'ado por sus propiedades !sicas ,nicas $se !unde a -00 &rados y permanece
lquido hasta en!riarse a .0 &rados, la temperatura a la que se vuelve &el% y porque no
puede ser metaboli'ado por la mayora de las bacterias" Por lo tanto, como un
componente del medio es relativamente inerte, simplemente mantiene $&eli'a% los
nutrientes que se encuentran en la solucin acuosa"
(os medios de cultivo pueden ser clasi!icados en varias cate&oras dependiendo de su
composicin o uso" Un medio qumicamente definido (sinttico) $Tabla ./ y .b% es
un medio en el que se conoce la e0acta composicin qumica" Un medio complejo
(indefinido) $Tabla 1/ y 1b% es un medio en el que no se conoce la composicin
qumica e0acta" (os medios de!inidos est*n habitualmente compuestos por
bioqumicos puros sacados del stoc23 los medios comple+os habitualmente contienen
materiales comple+os de ori&en biol&ico tales como la san&re, la leche, el e0tracto de
levadura o el e0tracto de carne, cuya composicin qumica e0acta es obviamente
indeterminada" Un medio de!inido es un medio mnimo $Tabla ./% si provee slo los
nutrientes e0actos $incluyendo al&unos !actores de crecimiento% necesarios para el
crecimiento del or&anismo" (a utili'acin de medios mnimos de!inidos requiere que el
investi&ador cono'ca los requerimientos nutricionales e0actos de los or&anismos en
cuestin" (os medios de!inidos qumicamente son de valor para el estudio de los
requerimientos nutricionales mnimos de los microor&anismos, para cultivos
enriquecidos, y para una amplia variedad de estudios !isiol&icos" (os medios
comple+os habitualmente proveen la &ama completa de !actores de crecimiento que
pueden ser requeridos por un or&anismo por lo que pueden ser utili'ados m*s
pr*cticamente para cultivar bacterias desconocidas o bacterias cuyos requerimientos
nutricionales son comple+os $por e+emplo, or&anismos que requieren muchos !actores
de crecimiento%"
4tros conceptos empleados en la construccin de medios de cultivo son los principios
de seleccin y enriquecimiento" Un medio selectivo es aquel que tiene a&re&ados
componentes que inhibir*n o prevendr*n el crecimiento de ciertos tipos o especies de
bacterias y5o promover*n el crecimiento de las especies deseadas" Uno puede
tambi)n a+ustar las condiciones !sicas del medio de cultivo, como el p6 y temperatura,
para hacerlo selectivo para or&anismos capaces de crecer ba+o esas condiciones"
Un medio de cultivo puede tambi)n ser un medio diferencial si permite al investi&ador
distin&uir entre di!erentes tipos de bacterias basado en al&,n ras&o observable de su
pauta de crecimiento en el medio" 7s, un medio selectivo, diferencial para el
aislamiento de Staphylococcus aureus, el pat&eno bacteriano m*s com,n en los
humanos, contiene una concentracin muy alta de sal $que el esta!ilococo tolerar*%
que inhibe a la mayora de las otras bacterias, mannitol como !uente de a',car
!ermentativo, y un tinte de indicador de p6" 8e los especimenes clnicos, slo el
esta!ilococo crecer*" S. aureus es di!erenciado de S. epidermidis $un componente no
pat&eno de la !lora normal% por su capacidad de !ermentar el mannitol" (as colonias
!ermentadoras de mannitol $S. aureus% producen *cidos que reaccionan con el tinte
indicador !ormando un halo coloreado alrededor de las colonias3 las no !ermentadoras
del mannitol $S. epidermidis% utili'an otros sustratos no !ermentadores en el medio
para el crecimiento y no !orman un halo alrededor de sus colonias"
Un medio enriquecido emplea un &iro al&o di!erente" Un medio enriquecido $Tabla 1a
y 1b% contiene al&unos componentes que permiten el crecimiento de tipos o especies
espec!icas de bacterias, habitualmente porque ellas solas pueden utili'ar el
componente de su ambiente" 9in embar&o, un medio enriquecido puede tener
caractersticas selectivas" Un medio enriquecido para bacterias no simbiticas
!i+adoras de nitr&eno omite la !uente de nitr&eno a&re&ado al medio" #l medio es
inoculado con una !uente potencial de esta bacteria $por e+emplo, una muestra de
suelo% e incubado en la atms!era en donde la ,nica !uente de nitr&eno disponible es
es :
2
" Un medio selectivo enriquecido $Tabla 1b% para el crecimiento de la halo!lica
e0trema $Halococcus% contiene cerca de un 21; de sal <:a=l>, que es requerido por la
halo!lica e0trema y que inhibe el crecimiento de otros procariotes"
Tabla 4a. Medio mnimo para el crecimiento de Bacillus megaterium. n ejemplo
de medio qumicamente definido para el crecimiento de bacterias !eterotrficas.
"omponente "antidad #uncin del componente
sucrose -0"0 & = y !uente de ener&a
K
2
6P4
.
2"1 & bu!!er p63 !uente de P y K
K6
2
P4
.
2"1 & bu!!er p63 !uente de P y K
$:6
.
%
2
6P4
.
-"0 & bu!!er p63 !uente de : y P
M&94
.
?6
2
4 0"20 & !uente de 9 y M&
@@

Ae94
.
?6
2
4 0"0- & !uente de Ae
@@

Mn94
.
6
2
4 0"00? & !uente de Mn
@@

a&ua BC1 ml
p6 ?"0
Tabla 4b. Medio definido (tambin medio enriquecido) para el crecimiento de
Thiobacillus thiooxidans, una bacteria litoautotrfica.
"omponente "antidad #uncin del componente
:6
.
=l 0"12 & !uente de :
K6
2
P4
.
0"2C & !uente de P y K
M&94
.
?6
2
4 0"21 & !uente de 9 y M&
@@

=a=l
2
26
2
4 0"0? & !uente de =a
@@

7'u!re elemental -"1D & !uente de ener&a
=0
2
1;E !uente de =
a&ua -000 ml
p6 F"0
E 7erear el medio en !orma intermitente con aire conteniendo 1; de =4
2
"
Tabla $a. Medio complejo para el crecimiento de bacterias fastidiosas.
"omponente "antidad #uncin del componente
#0tracto de carne -"1 &
Auente de vitaminas y otros !actores
de crecimiento
#0tracto de levadura F"0 &
Auente de vitaminas y otros !actores
de crecimiento
Peptona D"0 & Auente de amino*cidos, :, 9, y P
Glucosa -"0 & = y !uente de ener&a
7&ar -1"0 & 7&ente inerte solidi!icante
a&ua -000 ml
p6 D"D
Tabla $b. Medio selectivo enriquecido para el crecimiento de !aloflicas
e%tremas.
"omponente "antidad #uncin del componente
7cidos =asamino ?"1 & Auente de amino*cidos, :, 9 y P
#0tracto de
levadura
-0"0 & Auente de !actores de crecimiento
=itrato trisdico F"0 & = y !uente de ener&a
K=l 2"0 & !uente de K
@

M&94
.
? 6
2
4 20"0 & !uente 9 y M&
@@

Ae=l
2
0"02F & !uente Ae
@@

:a=l 210 &
!uente de :a
@
para halo!licas e
inhibidor para no halo!licas
a&ua -000 ml
p6 ?".