Microscopia de transmisie - Microscopia de reflexie

I. Noiuni teoretice
Microscopul reprezint un instrument optic alctuit dintr-un ansamblu de dioptrii
(sferici) i centrai ce are rolul de a forma imagini mult mrite ale unor obiecte de
dimensiuni mici.
Microscopul este alctuit din :
- sistemul mecanic
- sistemul electric
- sistemul optic


Figura 2.1. Schema microscopului de transmisie i de reflexie (sistemul optic).

Microscopia de transmisie: se folosete pentru preparate ce nu au grosimi mai
mari de un micron i prezint un contrast bun.
Microscopia de reflexie: se folosete pentru preparate ce nu permit o
transmisie eficient a luminii. Obiectivul poate juca rol de condensor sau poate exista
un condensor special dispus coaxial cu obiectivul.
Sistemul mecanic (principalele elemente componente):
-msua microscopului prevzut cu doi cavaleri (sau clrei) ce asigur fixarea
preparatului pe msu.
-uruburi de punere la punct a imaginii (macroviza pentru acordul brut i
microviza pentru acordul fin).
-uruburi de centrare a componentelor optice pe acelai ax.
-revolverul cu obiective i diafragmele (fante circulare cu diametrul variabil ce au
rolul de a modifica fluxul de lumin pe preparat).
Sistemul optic (principalele elemente componente):
-condensorul focalizeaz razele de lumin ce vin de la surs, pe preparat.
-obiectivul format dintr-un ansamblu de lentile convergente ce formeaz o
imagine real, mrit i rsturnat.
-ocularul format dintr-un ansamblu de lentile convergente ce formeaz o
imagine virtual, mrit i dreapt.
Sistemul electric (principalele elemente componente):
-sursa de tensiune.
-aparate de msur.
Mrimi caracteristice microscopului:
mrirea transversal:
1
2
y
y

unde: y
2
= dimensiunea imaginii (perpendicular pe axa optic)
y
1
= dimensiunea obiectului (perpendicular pe axul optic)
grosismentul:
oc ob
1
2
G G
tg
tg
G
unde:
2
= unghiul sub care se vede obiectul privit prin microscop,

1
= unghiul sub care se vede obiectul atunci cnd este privit cu ochiul liber i
situat la distana optim de citire (0.25m pentru un ochi normal),
G
ob
= grosismentul obiectivului, G
oc
= grosismentul ocularului.
puterea separatore:
22 , 1
sin n 2 1
P
unde: = distana dintre dou puncte ale obiectului care pot fi separate,
n = indicele de refracie dintre preparat i obiectiv,
= lungimea de und a radiaiei utilizate,
= unghiul dintre axa optic i razele cele mai deprtate de ax care mai
ptrund n obiectiv.


Figura 2.2. Reprezentare schematic a elementelor prezentate mai sus.

II. Parte experimental
A. Determinarea diametrului eritrocitelor
Materiale necesare:
preparat
microscop
micrometru ocular
Mod de lucru: se aeaz preparatul pe msua microscopului i se pune la punct
imaginea. Se nlocuiete ocularul cu micrometul ocular. Se localizeaz apoi o celul
(eritrocit) i se determin diametrul n diviziuni (figura 2.3).
.
Figura 2.3. Eritrocitele vzute la microscop prin micrometrul ocular.

Diametrul n microni se calculeaz cu ajutorul formulei:
100
G
1
ob
div m
, unde ( 40 G
ob
)
Datele experimentale se trec n tabelul de mai jos.
No.
div

m

med

n-1

1
....

S se determine intervalul de confiden i s se compare rezultatul obinut cu
intervalul fiziologic admis n literatura de specialitate pentru hematii.
B. Determinarea grosismentului obiectivului
Materiale necesare:
microscop
micrometru obiectiv
micrometru ocular
Mod de lucru: se aeaz micrometrul obiectiv pe msua microscopului i se
pune la punct imaginea. Se nlocuiete ocularul cu micrometul ocular. Se aliniaz cele
doua scale la stnga i se caut diviziuni ce coincid att pe scala micrometrului obiectiv
ct i pe cea a ocularului (figura 2.4).

Figura 2.4. Determinarea grosismentului obiectivului (n = numrul de diviziuni
pe micrometrul ocular, m = numrul de diviziuni pe micrometrul obiectiv).

Grosismentului obiectivului se calculeaz cu ajutorul formulei:
10
m
n
g
ob

Datele experimentale se trec n tabelul de mai jos.
No. n m g
ob
g
med

n-1

1
......

S se determine intervalul de confiden.