Espectroscopia de

Absorcin Molecular
I ntroduccin
METODOS ESPECTROSCOPICOS
Son Mtodos analticos que utilizan tcnicas instrumentales en la cuales
se genera una seal de tipo ptico cuyo fundamento esta basado en
la interaccin de la energa (REM) con el analito.

Fenmenos que pueden ocurrir al interaccionar energa con la materia:

ABSORCIN DISPERSIN
DIFRACCIN EMISIN
de la radiacin electromagntica
Los mtodos espectroscpicos son consideradas uno de los mtodos
mejores y mas utilizados para la determinacin tanto cualitativa como
cuantitativa.
LA REM ES UN TIPO DE ENERGA, QUE SE PUEDE TRANSMITIR
POR EL VACIO.

1) TEORA ONDULATORIA
REM compuesta de campos magnticos y elctricos oscilantes
2) TEORA CORPUSCULAR: REM compuesta de flujo de partculas discretas o
paquetes ondulatorios energa, llamados fotones.
Permite explicar fenmenos de absorcin y emisin (interaccin REM) con la
materia; la energa del fotn depende la frecuencia de radiacin E = h
h cte de Plank (6,63x10-34 Joule segundo)
Los mtodos espectroscpicos se pueden clasificar segn la regin del
espectro que este involucrada:
rayos X,
ultravioleta,
visible,
infrarroja,
microondas
Radiofrecuencia.
Ejemplo de divisin de la
REM segn energa del foton
Mtodos Espectroscpicos
METODOS DE ABSORCION
*Los mtodos de absorcin estn basados en la
disminucin de la potencia de la radiacin
electromagntica como consecuencia de la absorcin
que se produce en su interaccin con el soluto.

*Estos Mtodos poseen la ventaja de producir muy
poca o ninguna alteracin en el sistema estudiado
(conservacin de la muestra).
Absorcin -
Es el proceso en el cual la radiacin
electromagntica es transferida a los tomos, iones,
o molculas de la muestra causando la transicin
o salto de estas partculas desde un estado basal a
un estado excitado.
n M h M
*

METODOS DE ABSORCION
ESPECTRO DE
BANDAS
Los espectros de absorcin molecular son
mas complejos que los de absorcin
atmica debido al mayor numero de
posibles estados de energa.
La banda de absorcin observada, se debe
a componentes energticos electrnicos,
vibracionales y rotacionales.

E = E
electronic
+ E
vibrational
+ E
rotational

Leyes Fundamentales de la Absorcin
Se denomina absorcin al proceso por el cual una especie, en un medio
transparente, capta selectivamente ciertas frecuencias de la radiacin
electromagntica (Ley de Lambert-Beer).
Ley de Lambert: cuando un haz de luz atraviesa un medio
absorbente de concentracin constante, la cantidad de energa
luminosa absorbida por el medio vara en forma directamente
proporcional a la distancia recorrida.
Energa absorbida b


Ley de Beer: cuando un haz de luz atraviesa un medio absorbente de
espesor constante, la cantidad de energa luminosa absorbida por
el medio varia en forma directamente proporcional a la
concentracin del absorbente en el medio
Energa absorbida [C]
TRAMITANCIA
Se define como la fraccin de radiacin incidente que es transmitida por
la solucin. Se expresa en %.

T = Transmitancia

T = P
Po

% T = P x 100
Po
ABSORBANCIA
Se define como la fraccin de radiacin incidente que es absorbida
por un material o una superficie en funcin de la longitud de onda.
A= Log (Po / P) A= Log 1/T
ABSORBANCIA
La absorbancia es directamente proporcional a la trayectoria de la radiacin
a travs de la solucin y a la concentracin de la especie que produce la
absorbancia.
Esta definida por la ecuacin:
A= abC
Ley de Lambert-Beer
a: constante de proporcionalidad llamada absortividad.

Cuando se expresa la concentracin en (moles / litro) y la trayectoria a
travs de la celda en cm., la absortividad se denomina
ABSORVATIVIDAD MOLAR y se representa con el smbolo .

En consecuencia cuando b se expresa en cm. y C en moles/ litro.


A= bC (mol/lt) = A/ bC C= A/ b
Depende de:
caractersticas del disolvente
Especie absorbente
Longitud de onda de trabajo
Absortividad o coeficiente de extincin ()
INDICA LA PROBABILIDAD DE QUE EL ANALITO
ABSORBA UN FOTN DE ENERGA DETERMINADA
Un compuesto con un elevado valor de , es
muy eficiente en la absorcin de la REM de una
longitud de onda () adecuada, y por tanto
puede detectarse a concentraciones muy bajas.
LI MI TACI ONES A LA LEY DE LAMBERT-BEER
Ley de Lambert-Beer se cumple en soluciones diluidas
(10
-4
a 10
-5
M)

Concentraciones elevadas se pierde la linealidad
debido a la interaccin entre molculas de analito
Seleccin de longitud de Onda de trabajo
Se debe tratar de medir en lo posible lo mas prximo a la max de
absorcin en el espectro. (se logra mayor sensibilidad en la medida)
Midiendo lejos de ese punto de mxima absorcin:
pequeas variaciones en la medida se traducen en grandes
errores.
I nstrumentacin
*COMPONENTES BSICOS DE UN INSTRUMENTO
DE ABSORCIN MOLECULAR
*COMPONENTES BSICOS DE UN INSTRUMENTO
DE ABSORCIN MOLECULAR
FUENTE: Consiste en una lmpara que
emita un espectro de determinada; para
absorcin molecular se ocupa la lmpara
de tungsteno que emite en el visible.

SELECTOR : Consiste en un filtro
que se interponga en el paso de la luz
absorbiendo gran parte y dejando pasar
la deseada; o un monocromador que
permite un barrido espectral.
*COMPONENTES BSICOS DE UN INSTRUMENTO
DE ABSORCIN MOLECULAR
RECI RPI ENTE: Consiste en una cubeta que permite
el paso de REM sin absorberla o desviarla.
*COMPONENTES BSICOS DE UN INSTRUMENTO
DE ABSORCIN MOLECULAR
DETECTORES: Miden la intensidad radiacin del haz emergente
*Son fotoelctricos
*Los fotones tiene suficiente energa para arrancar electrones de las
superficie del ctodo produciendo su ionizacion.
La corriente generada es proporcional a la intensidad de radiacin.
Cuantificacin en anlisis por absorcin
En el espectro de absorcin,
cual es la longitud de onda
que debo elegir?
Al mximo de absorcin a
determinada longitud de
onda, se le denomina
longitud de onda analtica
*ESPECTRO DE ABSORCON
b mX Y
Cuantificacin en anlisis por absorcin
*CURVA DE CALIBRADO
Se le determina la absorbancia
a la longitud de onda analtica
a una serie de solucin de
concentracin exactamente
conocida.
(*)Regresin lineal.
b mX Y b C A ) l (
Cuantificacin en anlisis por absorcin
*INTERPOLACON DE LA MUERTA PROBLEMA
x
x
x
x
C1 C2 C3 C4
A1
A2
A3
A4
C
A
Abs
mp
Concentracin mp
Abs mp - b = Conc mp
-----------------
m

Se interpola en la recta
previamente realizada con los
estndares.
Cuantificacin en anlisis por absorcin
*ADICION ESTANDAR
Mtodo de cuantificacin que se realiza cuando la muestra puede
presentar interferentes que absorban a la misma longitud de onda que
nuestro analito.
Se utiliza para disminuir efecto de matriz.
x
x
x
x
C0 C1 C2
A0
A1
A2
C
A
A la muestra problema se le adiciona
cantidades crecientes de patrn a
determinar y se determina su absorbancia
a la longitud de onda analtica
b mX Y
m
b
X y

; 0
Espectroscopa de absorcin molecular

Determinacin de permanganato (MnO
4
-
)

Curva de calibracin
Adicin patrn
Preparacin curva de calibracin
Solucin 1 2 3 4 5
KMnO
4
0.01M (mL) 0.25 0.35 0.50 0.75 1.00
Determinacin de longitud de onda analtica
Realizar barrido entre 500-600nm
500 600
[MnO
4
-
] mM Absorbancia
0.00 0.001
0.10 0.132
0.14 0.194
0.20 0.294
0.30 0.415
0.40 0.652
y = 1.6727x - 0.044
R = 0.9843
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
A
b
s

[MnO
4
-
] mM
Curva de calibracin
Soluciones de 25mL
y = 1.6727x - 0.044
R = 0.9843
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
A
b
s

[MnO
4
-
] mM
Curva de calibracin
Determinacin [MnO
4
-
] en muestra problema
Realizar las diluciones correspondientes
Absorbancia MP: 0,319 U.A.

0.319=1.6727* [MnO
4
-
] - 0.044

[MnO
4
-
] = 0.217mM * fd
Cuantificacin por adicin patrn
Solucin 1 2 3 4 5
MP (mL) 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50
KMnO
4
0.01M (mL) 0 0.25 0.40 0.55 0.70
[MnO
4
-
] mM Absorbancia
0.00 0.326
0.10 0.464
0.18 0.589
0.22 0.667
0.28 0.746
y = 1.5254x + 0.3204
R = 0.9976
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3
A
b
s

[MnO
4
-
] mM
Adicin patrn
Determinacin [MnO
4
-
] en muestra problema
0 = 1.5254* [MnO
4
-
] - 0.3204

[MnO
4
-
] = 0.3204/1.5254 mM

[MnO
4
-
] = 0.210 mM * fd


Y = m*x + b
X = |b/m|
y = 1.5254x + 0.3204
R = 0.9976
-0.2
-0.1
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
-0.3 -0.2 -0.1 0 0.1 0.2 0.3 0.4
A
b
s

[MnO
4
-
] mM
Adicin patrn
Cuantificacin por adicin patrn

Determine la concentracin de MnO
4
-


por el mtodo de
curva de calibrado simple y por adicin patrn.
Expresando los resultados como promedio LC y
aplicando los test estadsticos necesarios.

Si se nos informa que la concentracin de la muestra
problema es de 8.375 ppm MnO
4
-
determine cual de los
mtodos de cuantificacin entrega un resultado
estadsticamente similar.

Determine el LOD y LOQ para cada mtodo de
cuantificacin.


EJERCICIO
Se realiza una cuantificacin de permanganato por absorcin molecular, la curva
de calibrado se realiz segn lo detalla la tabla a continuacin.
Cada solucin se afor a 50 mL. Utilizando una solucin patrn de MnO
4
-

50 mg/L
Para el anlisis de la MP, se tomaron 2 ml de la muestra original y se aforaron a
50 mL.





Ejercicio Tipo
Anlisis M P
Absorbancia UA
0.154
0.149
0.181
0.153
Solucin 1 2 3 4 5
MnO
4
-
50 mg/L (mL) 0.25 0.35 0.50 0.75 1.00
[MnO
4
-
] mg/L Absorbancia
0.00 0.005
0.25 0.071
0.35 0.134
0.50 0.184
0.75 0.256
1.00 0.341
Luego se realiz una calibracin de adicin patrn para la cuantificacin
de permanganato, tal como se detalla a continuacin
Cada solucin se afor a 50 mL.
Solucin de MnO
4
-
50 mg/L
Solucin 1 2 3 4 5
MP (mL) 2 2 2 2 2
MnO
4
-
50 mg/L (mL) 0 0.10 0.30 0.50 0.70
[MnO
4
-
] mg/L Abs 1 Abs 2 Abs 3
0.00 0.147 0.148 0.141
0.10 0.173 0.174 0.172
0.30 0.231 0.236 0.235
0.50 0.336 0.332 0.333
0.70 0.418 0.420 0.419
Adems de lo anterior se realizaron una serie
de mediciones de absorbancia de soluciones
blanco detalladas a continuacin:

0.003 0.008
0.009 0.005
0.001 0.004
0.005 0.006
0.007 0.002

y = 0.3114x + 0.0302
R = 0.9805
0
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.35
0.4
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1
[MnO
4
-
] mg/L Absorbancia
0.00 0.005
0.10 0.071
0.25 0.134
0.50 0.184
0.75 0.256
1.00 0.341
m 0.311
b 0.030
r^2 0.980
Curva de calibrado
Anlisis M P
Absorbancia UA
0.154
0.149
0.181
0.153
Anlisis MP
Absorbancia [MnO
4
-
]

ppm
Diferencia 12.10 9.950 = 2.15
0.154 9.950 Rango 12.10- 9.525 = 2.575
0.149 9.525
0.153 9.859 Q calculada = 0.835
0.181 12.10 Q tabulada = 0.829
[MnO
4
-
]

ppm dil
10.36
Q calculada > Q tabulada
Valor rechazado
Absorbancia [MnO
4
-
]

ppm
0.154 9.950
0.149 9.525
0.153 9.859
0.181 --
promedio 9.778
S 0.2238
[MnO
4
-
]

ppm dil
9.778 0.556
fd = 25
1 2 3
m 0.395 0.393 0.401
b 0.135 0.136 0.132
r^2 0.986 0.989 0.992
Conc. MP 0.341 0.346 0.329
fd =25 8.514 8.654 8.213
promedio 8.460
LC 0.560
[MnO
4
-
] mg/L Abs 1 Abs 2 Abs 3
0.00 0.147 0.148 0.141
0.10 0.173 0.174 0.172
0.30 0.231 0.236 0.235
0.50 0.336 0.332 0.333
0.70 0.418 0.420 0.419
Adicin patrn
Valor real
MP
8.375
ppm [MnO
4
-
]

CC t calculado t tabulado
9.778
ppm [MnO
4
-
]

10.858 > 4.303
Valor estadisticamente
diferente
0.2238 S
Ad patrn t calculado t tabulado
8.460
ppm [MnO
4
-
]

0.653 < 4.303 Valor estadsticamente similar
0.2255 S
Test t comparacin de resultados con el real
s
N X
t
calculado

LOD y LOC
Blancos
0.003
0.008
0.009
0.005
0.001
0.004
0.005
0.006
0.007
0.002
Promedio 0.005
Desv.
estndar 0.0025
Curva de calibrado Adicion patron
m 0.3114 m 0.3963
b 0.0302 b 0.1343

LOD 0.0241 LOD 0.0189
LOQ 0.0803 LOQ 0.0631
LOD= 3*S
m
LOQ= 10*S
m
Test Q


t

0,100
(80%)

0,050
(90%)

0,025
(95%)

0,010
(98%)

0,005
(99%)


1
2
3
4
5

6
7
8
9
10

11
12
13
14
15

16
17
18
19
20



3,078
1,886
1,638
1,533
1,476

1,440
1,415
1,397
1,383
1,372

1,363
1,356
1,350
1,345
1,341

1,337
1,333
1,330
1,328
1,325



6,314
2,920
2,353
2,131
2,015

1,943
1,895
1,860
1,833
1,812

1,796
1,782
1,771
1,761
1,753

1,746
1,740
1,734
1,729
1,725



12,706
4,303
3,182
2,776
2,571

2,447
2,365
2,306
2,262
2,228

2,201
2,179
2,160
2,145
2,131

2,120
2,110
2,101
2,093
2,086



31,821
6,965
4,541
3,747
3,365

3,143
2,998
2,896
2,821
2,764

2,718
2,681
2,650
2,624
2,602

2,583
2,567
2,552
2,539
2,528



63,657
9,925
5,841
4,604
4,032

3,707
3,499
3,355
3,250
3,169

3,106
3,055
3,012
2,977
2,947

2,921
2,898
2,878
2,861
2,845



PRACTICA LABORATORIO
DETERMINACION DE Fe CON 1,10-FENANTROLINA
Una metodologa sensible y selectiva para determinar hierro es en
funcin de un complejante, la o-fenantrolina, que forma un complejo
estable de color naranja con el hierro (II)

La o-fenantrolina es
un quelante orgnico
que forma complejos
con cationes

DETERMINACION DE Fe CON 1,10-FENANTROLINA
*CONSIDERACONES
Para lograr la formacin cuantitativa del complejo se debe realizar la
cuantificacin en valores de pH entre 2 9.
Debido a la posible oxidacin del hierro, este debe mantenerse en
estado +2 por lo que se adiciona hidroxilamina, este reductor debe
adicionarse antes de producir el color caracterstico


Se debe esperar a que se desarrolle la mxima intensidad de
coloracin antes de medir, por lo que es recomendable esperar 10
minutos antes de medir.


DETERMINACION DE Fe CON 1,10-FENANTROLINA
*NOTAS
La intensidad del color del complejo de hierro es independiente
del pH, dentro del rango de 2 a 9.
La o-fenantrolina en solucin se descompone fcilmente, se
recomienda su preparacin el mismo da para asegurar la
formacin del complejo.
El hierro debe estar en estado de oxidacin +2, el agente
reductor se debe adicionar antes de desarrollar el color.
Se deben esperar al menos 10 minutos para que se desarrolle la
mxima intensidad de color antes de realizar la medicin de la
absorbancia. (esperar el mismo tiempo con todas las muestras).
Debido a la interferencia del Cu no se puede determinar hierro
en bronce o latn

DETERMINACION DE Fe CON 1,10-FENANTROLINA
- Solucin de 1,10-fenantrolina: preparada disolviendo
0,2 g de slido en 100 ml de H
2
O caliente.
- Solucin de clorhidrato de hidroxilamina: preparada
disolviendo 5 g en 100 ml de H
2
O.
- Acetato de sodio 1M (PM = 82 g/mol).
- Solucin patrn de 100 ppm de Fe(II)
*Soluciones y Reactivos

DETERMINACION DE Fe CON 1,10-FENANTROLINA

DETERMINACION DE Fe CON 1,10-FENANTROLINA