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UNIDAD III.- NUTRICIN, METABOLISMO, CRECIMIENTO Y

CONTROL DE LOS MICROORGANISMOS
Tema 8.- Control de microorganismos: Definiciones. Cintica de
muerte microbiana. Tcnicas fsicas (calor, bajas temperaturas,
filtracin y radiacin) qumicas (fenoles, alcoholes, halgenos,
metales pesados, amonio cuaternario, aldehdos, gases
esterilizantes,) y evaluacin de su eficacia . Antibiticos,
evaluacin de su eficacia y mecanismos de accin. Antifngicos y
antivirales.
Esterilizacin
Destruccin o eliminacin de todas las clulas vivas y/o esporas viables y/o virus
y/o viroides y/o priones de un objeto o hbitat
Desinfeccin
Destruccin inhibicin o eliminacin de organismos patgenos
desinfectante
Agente, habitualmente qumico, usado para desinfectar
Generalmente sobre objetos inanimados
Saneamiento
Reduccin de la poblacin microbiana hasta niveles que se consideran seguros
para la salud pblica
Antisepsia
Prevencin de una infeccin o sepsis de tejidos vivos
antispticos
Agentes qumicos aplicados sobre tejidos vivos para la prevencin e
inhibicin del crecimiento de agentes patgenos
Agentes antimicrobianos
Agentes que eliminan a los microorganismos o que inhiben su crecimiento
El sufijo cida se emplea para agentes que matan: i.e. germicida (alimina patgenos
y algunos no patgenos pero no necesariamente endosporas). Incluye bactericidas,
fungicidas, algicidas y viricidas.
El sufijo estatco se emplea para agentes que inhiben el crecimiento i.e.
Bacteriosttico, fungisttico
Definicin de trminos frecuentes
Definiciones
Cintica de muerte microbiana
La poblacin microbiana no se destruye instantneamente
En general su destruccin ocurre exponencialmente
Se considera que los microorganismos estn muertos cuando son incapaces de
reproducirse en condiciones que normalmente permiten su crecimiento
Condiciones que afectan la efectividad de los agentes antimicrobianos
Tamao de la poblacin (a mayor Tamao mayor tiempo necesario)
Composicin de la poblacin microbiana
Concentracin e intensidad de los agentes empleados (a [], rapidez, no es lineal)
Duracin de la exposicin
Temperatura
Ambiente local (pH, viscosidad, compuestos orgnicos)
Cintica de muerte microbiana
Control y evaluacin de la eficacia de tcnicas fsicas y
qumicas antimicrobianas
Tcnicas Fsicas:
Calor
Temperaturas bajas
Filtracin
Radiacin.
Agentes Qumicos:
Fenoles
Alcoholes
Compuestos Halogenados
Compuestos clorados
Metales pesados
Sales de amonio cuaternario
Aldehidos
Gases
Antibiticos
Control microbiano por tcnicas qumicas y fsicas
Empleo de tcnicas Fsicas: Calor
Calor hmedo: Efectivo contra todo tipo de microorganismos. Degrada cidos
nucleicos, desnaturaliza protenas y disgrega membranas
Esterilizacin con calor seco: Es menos efectivo, requiere mayores temperaturas y
mayores tiempos de exposicin. Oxida componentes celulares y desnaturaliza
protenas
Evaluacin de la eficacia: Calor
Tiempo de muerte trmica (TMT
TDT en ingls): Tiempo mnimo
necesario para destruir todos los
microorganismos a una temperatura
especfica y condiciones definidas
Tiempo de reduccin decimal (D o
valor D): tiempo necesario para
destruir el 90 % de los
microorganismos o esporas en una
muestra a una temperatura
especfica
Tcnicas fsicas (Calor)
Evaluacin de la eficacia: Calor
Valor Z: Aumento de temperatura
necesario para reducir D a 1/10
Valor F: tiempo, en minutos,
necesario para destruir una
poblacin de clulas o esporas a
un a temperatura determinada (en
general 121,1 C)
Tcnicas fsicas (Calor)
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Calor hmedo
autoclaves
se emplean para destruir microorganismos,
incluidas las esporas, eficientemente
en su interior, una atmosfera de vapor a
presin permite alcanzar temperaturas
superiores a 100 C
Tcnicas fsicas (Calor)
Levaduras
Mohos
Bacterias
Virus
Calor hmedo
pasteurizacin
Calentamiento controlado a temperaturas muy por debajo del punto de ebullicin
Reduce la poblacin microbiana total y como consecuencia aumenta el tiempo
de conservacin del material tratado (reduce la putrefaccin)
Pasteurizacin de la leche
Pasteurizacin rpida (High Temperature Short-Term HTST)
72C durante 15 segundos despus se enfra rpidamente
Esterilizacin a temperatura ultraelevada (UltraHigh-Temperature, UHT)
de 140 a 150 C durante 1 a 3 segundos
Bajas temperaturas
Congelacin
detiene la reproduccin microbiana debido a la ausencia de agua lquida
algunos microorganismos mueren como consecuencia de la rotura de la
membrana provocada por los cristales de hielo
Refrigeracin
reduce el crecimiento microbiano y la reproduccin
Tcnicas fsicas (Calor y bajas temperaturas)
Filtracin
Filtrado de lquidos
Filtros de profundidad
filtros granulares o de fibras gruesas que elimina
microorganismos por adsorcin, o por tamizado o
ambos
Filtros de membrana
membranas porosas con un tamao de poro
definido que elimina los microorganismos
principalmente por tamizado
Membranas de nylon con bacterias
retenidas (poro de 0.2 m)
polycarbonate membrane
with 0.4 m pores
Tcnicas fsicas (Filtracin)
Disminuye la poblacin microbiana o esteriliza
disoluciones que contienen compuestos termosensibles a
travs de la eliminacin de todos los microorganismos
Membranas de policarbonato con
bacterias retenidas (poro de 0.4 m)
Sistema de filtracin con bomba
peristltica
Filtrado de aire
mascarillas
tapones de algodn
Filtros HEPA (high-efficiency particulate air)
empleadas en las cabinas de seguridad (cmaras) de flujo laminar de flujo
laminar
Tcnicas fsicas (Filtracin)
Radiacin
radiacin ultravioleta (UV)
uso limitado para esterilizacin de superficies ya que la radiacin UV no
penetra el vidrio, superficies sucias agua o otras sustancias
radiacin ionizante
penetra profundamente en los objetos
destruye endosporas bacterianas (o es siempre efectiva contra virus)
empleado para la esterilizacin y pasterurizacin de antibiticos, hormonas,
suturas, plsticos desechables y alimentos
Objetos que se esterilizan frecuentemente con radiacin
Tcnicas fsicas (Radiacin)
Agentes qumicos de control microbiano
Tcnicas qumicas
Desinfectante: Agente, habitualmente qumico, usado para desinfectar (destruccin inhibicin o eliminacin de
organismos patgenos, generalmente sobre objetos inanimados. Antispticos: Agentes qumicos aplicados
sobre tejidos vivos para la prevencin e inhibicin del crecimiento de agentes patgenos
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Fenoles
comnmente empleados en la desinfeccin de laboratorios y hospitales
desnaturaliza portenas y disgrega membranas
tubercolicida, efectivo en presencia de materia orgnica y duraderos sobre las
superficies que se aplican
olor desagradable y pueden irritar la piel
Alcoholes
bactericida, fungicida pero no esporicida
inactiva algunos virus
desnaturaliza protenas, precipita el ADN y,
posiblemente, disgrega membranas
Tcnicas qumicas
Halgenos (Fluor, cloro, bromo y iodo)
Iodo
se emplea sobre la piel como antisptico
oxida componentes celulares y ioda protenas
a altas concentraciones mata esporas
puede daar la piel, la colorea y puede
ocasionar problema alrgicos
iodoforo
iodo formando complejos con
transportadores orgnicos
Cloro
- oxida componentes celulares
- importante en la desinfeccin de suministros de agua y
piscinas, se emplea en industrias lcteas y alimentarias
y como desinfectante en los productos de limpieza
- destruye clulas vegetativas de bacterias y hongos, pero
no esporas
- puede reaccionar con compuestos orgnicos para dar
lugar compuestos cancergenos
Tcnicas qumicas
Metales pesados
ej. iones de mercurio, plata, arsnico, zinc y cobre
efectivos pero, en general, txicos
se combina con las protenas y las inactiva; tambin pueden precipitar protenas
Compuestos de amonio cuaternario
detergentes
molculas orgnicas anfipticas (tienen un extremo hidrfilo y otro hidrfobo)
actan como humectantes y emulsionantes
los detergentes catinicos son efectivos desinfectantes
matan la mayora de las bacterias pero no Mycobacterium tuberculosis o las
endosporas
seguro y fcil de usar, pero se inactivan con agua dura o jabn
Tcnicas qumicas
Aldehdos
molculas muy reactivas
esporicida, y puede
emplearse como esterilizante
qumico
se combina con cidos
nucleicos y protenas y las
inactiva
empleado para esterilizar materiales
termosensibles
microbicida y esporicidad
se combina con las protenas y las
inactiva
Gases esterilizantes
Tcnicas qumicas
Evaluacin de la efectividad de los agentes antimicrobianos
Proceso complejo regulado por agencias gubernamentales
En USA es la EPA (Environmental Protection Agency) y la FDA (Food and Drug
Administration)
En la UE es la Agencia Europea para la Evaluacin de Medicamentos (EMEA)
Prueba del coeficiente
de fenol
la potencia de un
desinfectante es
comparada con la de el
fenol
Un valor superior a 1
indica que el
desinfectante es mejor
que el fenol
ej.: un valor de 2.7 para
el mercuriocromo indica
que cuando se diluye
2.7 veces ms que el
fenol es igual de
efectivo que este
Evaluacin de la efectividad Evaluacin de la efectividad
Niveles de actividad de germicidas seleccionados
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AGENTES QUMIOTERAPETICOS
Agentes qumicos empleados en el tratamiento de enfermedades
Destruyen los microorganismos patgenos o inhibe su crecimiento en el
husped
La mayora son antibiticos
Productos microbianos o sus derivados, elimina a microorganismos
susceptibles o elimina su crecimiento
Antibiticos
EL DESARROLLO DE LA QUIMIOTERAPIA
Paul Ehrlich (1904)
desarrolla el concepto de toxicidad selectiva
identifica colorante que tratan de forma efectiva la
enfermedad del sueo
Sahachiro Hato (1910)
trabajando con Ehrlich, identifica compuestos de arsnico
para el tratamiento efectivo de la sfilis
Gerhard Domagk, and Jacques and Therese Trefouel (1935)
descubri las sulfamidas y derivados
Penicilina
fue descubierta por Ernest Duchesne
(1896) pero su trabajo fue olvidado
fue accidentalmente redescubierta por
Alexander Fleming (1928)
observ la actividad de la penicilina en
placas Petri contaminadas
abandon las investigaciones
su efectividad fue demostrada por Florey,
Chain, y Heatley (1939). Purificaron y
caracterizaron clnicamente la penicilina
Descubrimientos posteriores
La streptomicina fue descubierta por Selman Waksman (1944)
en 1953 ya se dispona adems de cloranfenicol, terramicina, neomicina y
tetraciclina
Antibiticos
Una colonia del moho
Penicillium prxima bacterias
Staphylococcus
Caractersticas generales de los frmacos antimicrobianos
toxicidad selectiva
capacidad de un frmaco de matar o inhibir patgenos al tiempo que daa
mnimamente al husped
dosis teraputica
nivel del frmaco requerida para un tratamiento clnico
dosis txica
nivel del frmaco al cual resulta demasiado txico para el paciente (ej., produce
efectos secundarios)
ndice teraputico
relacin entre la dosis txica y la teraputica
Antibiticos
Frmacos de amplio espectro atacan diferentes tipos de patgenos
Frmacos de corto espectro atacan unos pocos tipos de patgenos
Propiedades de algunos frmacos antibacterianos comunes
El sufijo cida (cidal) se emplea para agentes que matan: i.e. germicida (alimina patgenos y algunos
no patgenos pero no necesariamente endosporas). Incluye bactericidas, fungicidas, algicidas y
viricidas.
El sufijo estatco (static)se emplea para agentes que inhiben el crecimiento i.e. Bacteriosttico,
fungisttico
Antibiticos
Antibiticos
Fuentes microbianas de algunos
antibiticos
Algunos antibiticos son de origen sinttico (qumico)
sulfamidas, cloranfencol
otros son de origen natural y provienen en general de hongos y bacterias
Streptomicina, penicilina
la efectividad se expresa de dos formas
la concentracin mnima inhibitoria (minimal inhibitory concentration, MIC)
concentracin ms baja de un frmaco que inhibe el crecimiento de un
patgeno
Concentracin letal mnima (minimal lethal concentration, MLC):
concentracin ms baja de un frmaco que mata a un patgeno
dos tcnicas son empleadas rutinariamente para determinar la MIC y la MLC
Pruebas de sensibilidad por dilucin
Pruebas de sensibilidad por difusin en agar
Determinacin del nivel de actividad antimicrobiana
Antibiticos (evaluacin de efectividad)
Pruebas de sensibilidad por dilucin
se inoculan medios de cultivo con diferentes concentraciones de frmaco
la menor concentracin de frmaco en el caldo o el agar que no muestre
crecimiento es la MIC
si se emplean caldos de cultivo, los tubos en los que no se observa
crecimiento pueden ser subcultivados (transferidos) a un medio sin
frmaco
la menor concentracin de frmaco en el caldo de cultivo a la que no
se observa recuperacin de los microorganismos es la MLC
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Pruebas de sensibilidad por difusin en agar
discos impregnados de concentraciones
conocidas de frmaco se sitan sobre medios de
cultivo con agar inoculados con el
microorganismos con el que se va aprobar
el frmaco difunde del disco hacia el agar
formando un gradiente de concentracin
tras la incubacin, las zonas claras al rededor
del disco indican que no ha habido crecimiento
Antibiticos (evaluacin de efectividad)
Mtodo de Kirby-Bauer method
mtodo estandarizado para llevar a cabo la
prueba de difusin
la sensibilidad y la resistencia se determinan
empleando tablas que relacionan el dimetro
del halo con la resistencia microbiana
los valores de la tabla se emplean para
determinar si la concentracin de frmaco que
se alcanza en el cuerpo es efectiva
Empricamente se ha observado que hay una relacin entre la MIC de un
antibitico y el dimetro del halo de inhibicin (ver figura). Los organismos
sensibles a un frmaco tienen una MIC baja y muestran halos grandes.
Antibiticos (evaluacin de efectividad)
Si la concentracin de un
frmaco en el cuerpo oscila
entre 7 y 28 g/ml, desde la
grfica podemos estimar
que son sensibles los
microorganismos que
muestren un halo superior
a 17 mm con una
concentracin de frmaco
de 7 g/ml y, son
resistentes, los que
muestren halos menores de
12 mm.
La sensibilidad o resistencia de una bacteria a un frmaco se determina a partir
de tablas
Ej.: si un disco con 30 g de tetraciclina crea un halo de ms de 19 mm, la
bacteria es sensible
Antibiticos (evaluacin de efectividad) Dispositivo estndar para la prueba de Kirby-Bauer
Determinacin de la concentracin de un frmaco en sangre
para que sea efectiva, la concentracin del frmaco en el lugar de la
infeccin debe ser superior a la MIC
para determinar la concentracin del frmaco en sangre se pueden emplear
tcnicas
microbiolgicas
qumicas
inmunolgicas
enzimticas
cromatogrficas
Antibiticos (evaluacin de efectividad)
Mecanismo de accin de los agentes antimicrobianos
afectan al patgeno alterando alguna funcin necesaria para su
reproduccin y supervivencia
la funcin alterada es muy especfica del patgeno alto ndice teraputico
(relacin entre la dosis txica y la teraputica)
Antibiticos (mecanismo de accin)
Factores que afectan la efectividad de los frmacos antimicrobianos
capacidad del frmaco de alcanzar la infeccin
depende del modo de administracin
oral (algunos frmacos son destruidos por el cido en el estmago)
tpica
ruta parenteral (rutas de administracin no oral)
los frmacos pueden tener problemas para alcanzar tejidos necrticos o cogulos
sensibilidad del patgeno al frmaco
resistencia al frmaco
el frmaco puede ser alterado o bombeado al exterior
el organismo puede modificar la diana a la que va dirigido
se previene: i) administrando altas concentraciones de frmacos, ii) dando varios
simultaneamente, iii) emplendolos solo cuando es necesario, iv) desarrolando
nuevos frmacos o terapias (fagos, por ejemplo)
una vez que se origina en una poblacin puede ser transmitida a otras bacterias
a travs de plsmidos
Superinfecin: desarrollo y dispersin de un patgeno resistente a un frmaco trs la
administracin de un frmaco. Ej.: Enterocolitis pseudomembranosa causada por
Clostridium difficile trs eliminar la flora bacteriana con antibiticos
capacidad del frmaco de alcanzar una concentracin superior a la MIC del
patgeno
cantidad administrada
ruta de administracin
velocidad de toma
velocidad de eliminacion del cuerpo
Antibiticos (mecanismo de accin)
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Antifngicos
menor nmero de frmacos efectivos debido a la similitud entre las clulas
humanas y las de los hongos
son ms fciles de tratar las infecciones (micosis) superficiales que las
sistmicas
Antifngicos
alteran la
permeabilidad de la
membrana e inhibe
la sntesis de
esteroles
altera el uso
mittico;
puede inhibir la
sntesis de
protenas y ADN
antibitico polieno obtenido de Streptomyces
Tratamiento superficial
Tratamiento de micosis sistmicas
se une a los esteroles de la membrana
altera la funcin del RNA
Antifngicos
Frmacos antivirales
relativamente pocos debido a la dificultad de alterar especficamente la
replicacin del virus
se emplea para prevenir
la infeccin de la
gripe
bloquea la penetracin y
la liberacin de la
cpsula del virus de
la gripe
inhibe las enzimas del
virus del herpes
implicadas en las
sntesis y funcin del
ADN y el ARN
inhibe la DNA
polimerasa del
herpes
inhibe la DNA
polimerasa del herpes
y el citomegalovirus
Antivirales
Frmacos anti-ADN vrico de amplio espectro
inhibe la ADN
polimerasa
viral
papovavirus,
adenovirus,
herpesvirus
iridovirus,
y poxvirus
Antivirales
Frmacos Anti-HIV
dos dianas principales
Transcriptasa inversa del HIV
Proteasa del HIV