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Experimento no Ensino de Qumica

Anlise Qualitativa de Protenas em Alimentos Por Meio


de Reao de Complexao do on Cprico

Vanessa Vivian de Almeida, Edmilson Antnio Canesin, Rbia Michele Suzuki e


Graciana Freitas Palioto
O estudo das biomolculas comum s disciplinas de Qumica e de Biologia no ensino mdio. Essas
cincias, por sua vez, tm a experimentao como ferramenta importante do ensino-aprendizagem e da
formao de conceitos. Nesse contexto, os alimentos tornam-se instrumentos contextualizadores do conhecimento qumico que podem ser utilizados pelos professores em aulas prticas, possibilitando trabalhar
contedos relacionados s biomolculas. Este trabalho prope um experimento simples, baseado na reao
clssica de complexao entre cobre(II) e biureto, adaptada para deteco de protenas em alimentos, pois
utiliza materiais de fcil obteno.
compostos de coordenao, protenas, biureto

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Recebido em 12/09/2011, aceito em 14/08/2012

Protenas

percentual mdio de 15% da composio do organismo


humano (Feltre, 2004).
As protenas se caracterizam por ser o grupo mais
As unidades constituintes fundamentais das protenas
abundante de macromolculas, encontradas dentro e fora
so os aminocidos. Estes, por sua vez, so molculas ordas clulas, e de importncia vital aos seres vivos. Suas
gnicas que possuem ligadas ao mesmo tomo de carbono
funes vo desde catlise de reaes qumicas (enzimas),
(denominado de carbono ) um tomo de hidrognio, um
transporte de outras molculas, transmisso de impulsos
grupo amino, um grupo carboxlico e uma cadeia lateral R
nervosos, proteo imunitria e at mesmo funo hormo(caracterstica para cada aminocido). Essa cadeia o que
nal, entre outras.
difere os aminocidos em estrutura, tamanho e propriedade
A alimentao humana deve incluir protenas que so
fsico-qumica (Francisco Jr. e Francisco, 2006).
encontradas em carne, peixe, ovo,
Os aminocidos podem forleite e derivados, entre outros. A
mar
macromolculas pela ligaNo organismo, as protenas ingeridas dos
Tabela 1 mostra que os alimentos
o
do
grupo carboxila de um
alimentos so transformadas em cerca de
mais ricos em protenas so aqueaminocido com o grupo amino
100.000 protenas dos mais diversos tipos,
les de origem animal. A grande
de outro. Essa ligao carbonototalizando um percentual mdio de 15%
maioria dos alimentos vegetais,
-nitrognio, chamada ligao
da composio do organismo humano
como cereais, verduras, frutas,
peptdica, obtida formalmente
(Feltre, 2004).
tubrculos, pobre em protena,
por excluso intermolecular de
com exceo das leguminosas
uma molcula de gua (Figura1),
(soja, amendoim, feijo etc.). No organismo, as protenas
o que leva formao de uma cadeia polipeptdica, denomiingeridas dos alimentos so transformadas em cerca de
nada de estrutura primria da protena. A estrutura primria
100.000 protenas dos mais diversos tipos, totalizando um
a sequncia linear especfica de aminocidos da cadeia
polipeptdica, sendo essa sequncia muito importante, pois
determinar as propriedades biolgicas das protenas.
A seo Experimentao no ensino de Qumica descreve experimentos cuja
A funo da protena est intimamente relacionada com
implementao e interpretao contribuem para a construo de conceitos cientficos
sua forma tridimensional. Essa conformao obtida pelo
por parte dos alunos. Os materiais e reagentes usados so facilmente encontrveis,
permitindo a realizao dos experimentos em qualquer escola.
dobramento da estrutura primria em secundria que, por sua
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Tabela 1: Contedo proteico dos alimentos.



Teor de protena
(g/100 g de alimento)
Carne bovina
27
Queijo prato
26
Fgado bovino
26
Carne de frango
24
Carne de porco
24
Peixe
23
Soja
17
Ovo
13
Feijo
6,0
Ervilha
6,0
Aveia
3,7
Leite de vaca2
3,5
Milho
2,4
Arroz
2,0
Batata
1,9
Banana
1,3
Gelatina3
1,2
Cenoura
1,0
Laranja
0,84
Mandioca
0,65
Maa
0,21
1
Alimentos cozidos, exceto frutas e cenoura.
2
Leite contm casena, uma protena de excelente valor nutricional, mas com alto teor de gua.
3
Alguns produtos comercializados com gelatina contm predominantemente carboidratos.
Fonte: Marzzoco e Torres, 2007.
Alimento1

Figura 1: Formao da ligao peptdica entre dois aminocidos.


Fonte: Explicatorium, 2012.

vez, sofre mais dobramentos at chegar estrutura terciria


(Figura 2). Esta mantida por interaes fracas no covalentes e tambm por ligaes dissulfeto (ligao covalente)
entre as cadeias laterais dos aminocidos (Figura 3).
Molculas de protenas so relativamente grandes por
serem formadas pela unio sequencial de dezenas, centenas
ou milhares de aminocidos e podem ser formadas por uma
ou mais de uma cadeia polipeptdica (estrutura quaternria)
(Marzzoco e Torres, 2007). Embora possam ser encontradas protenas de alto peso molecular devido ao nmero
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Figura 2: Conformao estrutural das protenas. A sequncia de


aminocidos (estrutura primria) sofre dobramentos, originando
a estrutura secundria que, por sua vez, sofre dobramentos
para a conformao funcional da protena, a estrutura terciria.
Quando a protena formada por duas ou mais cadeias, a forma
completa denominada de estrutura quaternria (adaptado de
Nelson e Cox, 2011).

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Figura 3: Interaes na estrutura terciria. A estrutura terciria da


protena mantida por interaes fracas no covalentes e ponte
dissulfeto (ligao covalente) (adaptado de Nelson e Cox, 2011).

de aminocidos constituintes como a protena muscular


conectina, com quase 27.000 aminocidos e peso molecular
de aproximadamente 3.000.000 , a maioria das protenas
celulares possui menos de 2.000 aminocidos.
A insulina produzida pelo pncreas, por exemplo, controla os nveis de acar no sangue aps as refeies e uma
pequena protena constituda por duas cadeias polipeptdicas,
contendo 30 e 21 aminocidos, respectivamente. Essas duas
cadeias so ligadas entre si por duas pontes dissulfetos entre
os grupos sulfidrilas das cadeias laterais dos aminocidos
cistena (Figura 4).
J a enzima ribonuclease, tambm produzida no pncreas, catalisa a hidrlise no intestino delgado dos cidos
A protena queratina pode ser encontrada em
materiais flexveis, como cabelo e l, e em materiais
rgidos, como chifres, garras e cascos de animais.
O que difere esses materiais o nmero de pontes
dissulfetos entre as hlices da protena. A l, por
exemplo, possui menos pontes e, quando estendida,
pode ser alongada para quase o dobro de seu
comprimento, pois so rompidas somente as
interaes fracas entre as hlices.

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Figura 4: Estrutura da insulina. Estrutura linear (A) e tridimensional (B) da insulina. A molcula constituda por duas cadeias ligadas
por pontes dissulfeto (Berg et al., 2008).

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Figura 5: Estrutura da ribonuclease. Os aminocidos em destaque
mostram (C - cistena) as pontes dissulfetos que estabilizam a
estrutura terciria da protena.

nucleicos ingeridos nos alimentos. Esta uma cadeia nica


de 124 aminocidos, contendo quatro pontes dissulfetos
para estabilizar as hlices da estrutura secundria (Figura 5).
A protena queratina pode ser encontrada em materiais
flexveis, como cabelo e l, e em materiais rgidos, como chifres, garras e cascos de animais. O que difere esses materiais
o nmero de pontes dissulfetos entre as hlices da protena.
A l, por exemplo, possui menos pontes e, quando estendida,
pode ser alongada para quase o dobro de seu comprimento,
pois so rompidas somente as interaes fracas entre as
hlices. Contudo, as pontes dissulfetos covalentes resistem
ao rompimento e fazem a fibra voltar a seu estado original,
uma vez liberada a fora distensora (Berg et al., 2008).

eletromagntica na regio do visvel, resultando em compostos coloridos. Os compostos de Cu2+ apresentam comumente
coloraes azuis ou verdes e, em geral, a cor de um composto
de coordenao depender do metal, do seu estado de oxidao e dos ligantes que o coordenam (Lee, 1999).
A Figura 6 apresenta o sal sulfato de cobre(II) em diferentes formas cristalinas. O slido azul corresponde ao sulfato de
cobre pentahidratado, CuSO4.5H2O. A colorao observada
nesse slido se deve presena de gua em sua estrutura
cristalina. No estado slido, o on cprico apresenta-se tetracoordenado por molculas de gua que atuam como ligantes
monodentados, isto , doadores de nico par de eltrons
usado para estabelecer ligao com o metal do composto de
coordenao. A quinta molcula de gua pertencente ao slido
cristalino CuSO4.5H2O e encontra-se ligada ao on sulfato por
intermdio de ligao de hidrognio (Brown et al., 1999). O
sulfato de cobre pentahidratado, quando mantido em estufa a
110 C por 1 hora, por exemplo, apresenta colorao esbranquiada devido desidratao, isto , perda parcial ou total
das molculas de gua que compem a estrutura cristalina.

Compostos de coordenao e o on cprico


Os compostos de coordenao, ou complexos metlicos,
so estruturas qumicas compostas de um tomo central (sendo este um metal) envolto por um determinado nmero de
molculas, ons, ou ainda outros tomos chamados ligantes.
Os compostos de coordenao so indicados pelo uso de
colchetes, por exemplo, o on tetramincobre(II) [Cu(NH3)4]2+,
espcie em que o on Cu2+ se encontra coordenado por quatro
molculas de amnia.
Uma caracterstica muito comum a alguns compostos
de coordenao que eles so capazes de absorver radiao
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Figura 6: Sulfato de cobre pentahidratado (A) e submetido ao


aquecimento (B).

Ao adicionar o sulfato de cobre em gua, conforme a


Figura 7, a colorao azul obtida o resultado da complexao do on Cu2+ por seis molculas de gua. Em soluo aquosa, o on cprico encontra-se hexacoordenado

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[Cu(H2O)6]2+. A colorao azul passa a azul intenso quando


os ligantes amnia substituem os ligantes gua, formando
o ons como [Cu(H2O)2(NH3)4]2+, [Cu(H2O)3(NH3)3]2+ e
[Cu(H2O)4(NH3)2]2+. Como cita Lee (1999), em soluo
aquosa, difcil adicionar o quinto e o sexto grupo amnia ao
on cprico, mas possvel obter o on [Cu(NH3)6]2+ usando
amnia lquida como solvente.

Quadro 1: Possibilidades de absoro eletromagntica na


regio do visvel para um composto.
Se um composto...

O resultado aparecer sobre


a viso com colorao:

Absorve toda a radiao


incidente sobre ele

Negra

No absorver luz no visvel

Branca ou incolor

Se absorver todas as radiaes, exceto as azuis

Azul

Se absorver a radiao de
cor complementar ao azul
(alaranjada)

Azul

Figura 7: Preparao da soluo de sulfato de cobre (A e B);


adio de amnia (C); complexo [Cu(H2O)2(NH3)4]2+ formado (D).

Para um composto apresentar cor, necessrio que haja


absoro de luz na regio do visvel do espectro eletromagntico (Figura 8), ou seja, regio compreendida na faixa
espectral com comprimento de onda entre 400 e 700 nm
aproximadamente. Um composto absorver radiao visvel
quando essa radiao tiver energia necessria para promover
um eltron de um estado de menor energia (estado fundamental) para um de maior energia (estado excitado). Quando um
composto absorve luz visvel, a cor percebida o resultado
das cores remanescentes, que so refletidas ou transmitidas
e atingem a retina ocular. Um determinado composto poder
ter certa cor em virtude de duas circunstncias: a) por refletir
ou transmitir a luz correspondente cor observada ou, ento,
b) por absorver a luz correspondente cor complementar
daquela que observada (Brown et al., 1999). O Quadro 1
exemplifica as cores observadas para um composto como
resultado da absoro da luz por este. A Figura 9 apresenta
o disco de cores em que os setores opostos identificam os
pares complementares. Por exemplo, o azul e o alaranjado
so cores complementares.

Figura 8: Espectro no visvel, com as cores e comprimentos de


onda (Campos, 2008).

Reao de caracterizao de protena


Determinar protenas tem relevncia em vrias reas
como, por exemplo, em anlises clnicas, favorecendo o
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Figura 9: Disco de cores, com as cores complementares e intervalos de comprimento de onda.

diagnstico de certas doenas correlacionadas com a alterao da quantidade de protenas nos fluidos biolgicos; em
nutrio animal, destacando o aproveitamento racional de
nutrientes; em problemas relacionados nutrio humana,
devendo certas dietas apresentar teor balanceado de protenas; em tecnologia e cincias de alimentos, objetivando
o aproveitamento da matria prima e o melhoramento dos
produtos; entre outros.
ampla a variedade de compostos capazes de reagir
com protenas e formar compostos coloridos. Existem
reaes de colorao que so especficas para certos grupos
funcionais de aminocidos como, tambm, existem reaes
gerais que caracterizam grupamentos comuns a todas as
protenas.
Uma reao geral que caracteriza ligaes peptdicas
chamada reao de biureto, nome dado estrutura originada
a partir da decomposio da ureia, quando esta submetida a
uma temperatura de aproximadamente 180 oC (Figura 10) e
que fornece resultado positivo nesse teste (Petkowicz, 2007).
O biureto, ao reagir com ons Cu2+ em meio alcalino, resulta
em uma soluo de colorao violeta, sendo este o princpio
do mtodo utilizado para determinar biureto em fertilizantes

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Figura 10: Reao de formao do biureto.

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e suplementos alimentares animais e recomendado pela


Association of Official Analytical Chemists (AOAC) como
mtodo oficial (Ferreira et al., 2007).
A Figura 11 representa a estrutura do composto de coordenao formado entre biureto e o on Cu2+. A Figura 12
apresenta como ocorre a interao entre a ligao peptdica
da protena e o on cprico, sendo possvel observar que
as ligaes existentes na molcula de biureto so muito
parecidas com as ligaes peptdicas estabelecidas entre
os aminocidos formadores das cadeias polipeptdicas que
originam as protenas. O mtodo de biureto tem sido aplicado para determinar a concentrao de protenas totais em
diversos meios como soro, urina, alimentos. Apesar de ser
rpido, utilizar reagentes de baixo custo e no apresentar
grande variao da absortividade especfica para diferentes
protenas, esse mtodo apresenta a desvantagem de baixa
sensibilidade, pois os mtodos que envolvem a reao de
biureto requerem alta concentrao de protena na amostra
como destaca o trabalho de Zaia et al. (1998), o que os

tornam desvantajosos em comparao a outros mtodos


existentes.
O presente trabalho apresenta um experimento simples,
que utiliza materiais de fcil aquisio e ilustra uma reao
qualitativa para deteco de protenas em alimentos, tendo
como resultado o surgimento de uma colorao violeta (indicativo de protenas) devido formao do composto de
coordenao formado a partir da interao entre protenas
e o on Cu2+.

Material e reagentes
Hidrxido de sdio (soluo 20 %); sulfato de cobre (soluo 0,25 mol/L) o reagente pode ser facilmente adquirido
em casas de produtos agrcolas ; gua; sal; acar; amido
de milho; clara de ovo; extrato (caldo) de carne fresca; leite;
suco ou leite de soja; conta-gotas; esptula; tubos de ensaio;
e estante para tubos.
Procedimento

Figura 11: Representao da interao entre o on cprico e o


biureto.

Figura 12: Representao da interao entre o on cprico e as


cadeias proteicas.
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1. Soluo de referncia (padro de cor do reagente): em


um tubo de ensaio, adicionar 20 gotas de gua, 20 gotas
de soluo de NaOH e 5 gotas de soluo de CuSO4.
Misturar bem os reagentes e observar a colorao.
2. Alimentos em p: tomar uma pitada da amostra (amido
de milho, acar, sal) e dissolv-la em 15-20 gotas de
gua. Em seguida, adicionar 20 gotas de soluo de
NaOH e 5 gotas de soluo de CuSO4. Agitar bem a
mistura e observar a colorao.
3. Alimentos lquidos: no caso de leite, suco ou leite de
soja e extrato (caldo) de carne fresca (deixar um pequeno pedao de carne vermelha em gua, 50 mL, por
alguns minutos e separar o caldo), adicionar 10 gotas
da amostra em um tubo de ensaio e, a este, 10 gotas de
gua. Misturar 20 gotas de soluo de NaOH e 5 gotas
de soluo de CuSO4. Agitar e aguardar.
4. Coloraes em diferentes concentraes de extrato
de carne: separar 4 tubos de ensaio. Ao primeiro,
adicionar 3 gotas de extrato de carne; ao segundo,
8 gotas; ao terceiro, 13 gotas; e ao quarto, 23 gotas.
Sobre cada amostra, adicionar 20 gotas de soluo de
NaOH e 5 gotas de soluo de CuSO4. Completar o
volume com gua (aproximadamente 10 mL). Agitar
e aguardar. Transferir alquotas de cada soluo para
tubos limpos, evitando a transferncia de slidos
formados.

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Agradecimento
Agradecemos Profa. Dra. Elvira Barbosa da Silva,
professora de lnguas na UTFPR cmpus Apucarana, pela
colaborao.

Nota

Figura 14: Mistura de referncia (A); sequncia de cores obtidas


conforme a concentrao de caldo de carne na mistura, variando
da menor para a maior concentrao empregada (B).

De acordo com Petkowics (2007), um volume de 1000


mL do reativo de biureto preparado pela dissoluo de 1,5
g de sulfato de cobre pentahidratado, 6,0 g de tartarato duplo
de sdio e potssio e 300 mL de soluo de hidrxido de
sdio 10% (m/v) em quantidade suficiente de gua destilada
para completar o volume. No entanto, resultados qualitativos sobre a presena de protenas em alimentos podem
ser obtidos utilizando apenas soluo de sulfato de cobre
e hidrxido de sdio, o que torna conveniente a aplicao
dessa prtica em aulas do ensino mdio, principalmente
pela facilidade de aquisio desses reagentes. Segundo a
descrio do mtodo colorimtrico para a determinao de
protenas totais utilizando o biureto, o limite de deteco
de 6,0 g/L (Katal, 2011). A fim de comparao, um mtodo
mais sensvel, proposto em 1976 e que utiliza o corante azul
brilhante de Comassie G250 para determinao de protenas,
apresentou o limite de deteco de 25 mg/L como descrito
por Miwa (2002).

Resultados e discusso

Questes propostas

Figura 13: Acima: amostra de gua (referncia) (A); sal (B); acar
(C); amido (D); extrato (caldo) de carne (E); clara de ovo (F); leite
(G); e suco de soja (H), respectivamente. Abaixo: resultado aps
a reao com sulfato de cobre. O aspecto leitoso das amostras
de deve precipitao de Cu(OH)2 ou CuO em meio alcalino.

A Figura 13 apresenta os resultados obtidos no experimento. Nos tubos A, B, C e D, a colorao da mistura


permaneceu azul, sendo a soluo de referncia e os tubos
contendo alimentos isentos de protena: sal, acar e amido. No entanto, observou-se a formao de uma colorao
violeta nos tubos E, F, G e H. A colorao violeta foi mais
intensa nas amostras de extrato de carne, clara de ovo e leite.
A amostra de suco de soja apresentou a colorao violeta
menos intensa, possivelmente por apresentar menor concentrao de protenas comparada s amostras dos alimentos de
origem animal. A formao de precipitado ou opalescncia
observada em todos os tubos deve-se formao do hidrxido de cobre(II).
A colorao violeta observada aps as reaes descritas
com alguns alimentos se deve ocorrncia de um composto
de coordenao que se forma a partir de interaes entre o on
cprico e os tomos de nitrognio presentes nas protenas.
O on Cu2+, por exemplo, capaz de estabelecer ligaes
com ligantes capazes de contribuir com quatro pares de
eltrons. Nesse caso, as protenas atuam como ligantes do
on cprico, e o par de eltrons disponvel em cada tomo de
nitrognio exerce interao com o metal de modo a mant-lo
envolto, protegido, permitindo a estruturao do composto
de coordenao.
A Figura 14 mostra que a intensidade da colorao violeta
observada no experimento varia em termos da concentrao
de protenas na mistura.
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1. Na preparao de uma amostra para anlise de protenas, pode-se encontrar tambm aminocidos livres.
possvel detectar esses aminocidos pela reao de
biureto? Justifique sua resposta.
2. A conformao tridimensional da protena extremamente importante para sua atividade funcional. A
desnaturao proteica por exemplo, por altas temperaturas um processo que desfaz as interaes
moleculares que mantm a conformao tridimensional
da protena, afetando assim sua funo. O ato de fritar
ou cozinhar um ovo, por exemplo, afeta a conformao da protena albumina encontrada na sua clara, que
fica esbranquiada aps esse processo e, mesmo com
a diminuio da temperatura, ela no volta ao estado
normal. Se voc utilizar o mtodo do biureto para
detectar as protenas da clara de um ovo cru e de um
cozido, encontrar resultados semelhantes? Explique.
Vanessa Vivian de Almeida (vanessavivian@utfpr.edu.br), bacharel, licenciada e

mestre em Qumica pela Universidade Estadual de Maring (UEM). Apucarana,


Paran BR. Edmilson Antnio Canesin (edmilsoncanesin@utfpr.edu.br), bacharel
em Qumica Tecnolgica pela Universidade Estadual de Londrina (UEL), especialista em Ensino de Qumica (UEL), mestre em Qumica (UEL), doutorando em
Qumica (UEM). Apucarana, Paran BR. Rbia Michele Suzuki (rubiasuzuki@
utfpr.edu.br), bacharel, mestre e doutora em Qumica (UEM). Apucarana, Paran BR. Graciana Freitas Palioto (graciana@utfpr.edu.br), bacharel e licenciada
em Cincias Biolgicas (UEM), mestre e doutoranda em Biologia Comparada
(UEM). Apucarana, Paran BR.

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Para saber mais


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bioquimica/praticas_proteinas/reacoes_coradasdois3.htm. Acessado em: ago. 2011.

Abstract: Qualitative analysis of proteins in food through the complexation reaction of Cu+2. The study of biomolecules is common in the subjects of Chemistry
and Biology in high school. These Sciences have the experimentation as an important tool of teaching-learning and the formation of concepts. In this context
the foods become contextualizing instruments of chemical knowledge that can be used by teachers in practical classes, what enable the teachers to develop
contents related to biomolecules. This paper proposes a simple experiment based on classic reaction of complexation between copper (II) and biuret, adapted
for the detection of proteins in foods, because it uses materials easily found.
Keywords: coordination compounds, proteins, biuret.

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