EPR laboratorija

Fakultet za fiziku hemiju

Univerzitet u Beogradu

Studentski trg 12-16

11000 Beograd, Srbija
Tel: +381-11-2630796

PREDLOG PLANA ZA IZRADU EPR EKSPERIMENATA

1. Nauni cilj ispitivanja, odnosno ta je problem koji treba da se rei pomou EPR tehnike.
U poslednje tri decenije teku intenzivna istraivanja naina i mehanizma dejstva brasinosteroidnih fitohormona (Clouse and
Sasse, 1998; Li and Gou, 2007; Kutschera and Wang, 2012). Posle istraivanja fiziolokih odgovora biljaka na brasinosteroide
1980-tih, zatim genetske osnove njihovog dejstva i metabolizma 1990-tih i objedinjenog istraivanja primarnog mesta dejstva
brasinosteroida i daljih signalnih puteva 2000-tih, poslednjih godina intenzivirana su istraivanja dejstva brasinosteroida na
primarni i sekundarni metabolizam biljaka (Jiang et al., 2012; Serna et al., 2013). Osnovna funkcija brasinosteroida je
koordinacija razliitih signalnih puteva (fitohormonskih, environmentalnih i inih) u cilju optimalnog rasta, kako u uobiajenim,
tako i u uslovima stresa. Otuda presudan znacaj ove klase fitohormona na rastenje biljaka. Proces rastenja, znaajan za
bioproduktivitet nativnih i prinos gajenih biljnih vrsta, pokazuje posebnu osetljivost prema dejstvu razlicitih faktora (kako
fitohormonskih, tako i sredinskih) u pojedinim fazama razvia biljaka, od kojih je najznaajnije klijanje semena. U tom smislu
znaajno je ispitati vezu primarnog i sekundarnog metabolizma pri klijanju semena razliitih genotipova kukuruza (Z. mays L.),
pri njihovom izlaganju tokom 7 dana koncentracionoj seriji (od 5.2 X 10-7 mol do 5,2 X 10-15 mol) fitohormona
24-epibrasinolida (24-EBL). U dosadanjem radu sa dva genotipa kukuruza (ZP704 i ZP434) sprovedena je kvantifikacija
razliitih saharida (mono i disaharidi pre svega), radi ustanovljavanja pri kojim koncentracijama dolazi do uveane produkcije
saharida potrebnih za rastenje i sintetske procese u klijancima kukuruza (npr. glukoza, fruktoza, saharoza, arabinoza), kao i
produkcije saharida koji prate reakcije biljaka na stres (trehaloza). Takode je sprovedena i kvantifikacija polifenola (ukupnih i po
frakcijama) u semenima kukuruza naklijavanih pri razliitim koncentracijama 24-EBL. Cilj kvantifikacije polifenola je zbog
njihove dvojne uloge, kako sastavnih delova elijskog zida (slinu ulogu imaju i pojedini polisaharidi, npr. celuloza), tako i
gasioca-kvenera reaktivnih kiseonicnih vrsta (ROS: reaktive oxygen species). Imajuci u vidu i nove nalaze o uticaju
brasinosteroida na vezu produkcije H2O2 i regulacije fotosinteze (kao primarnog producenta saharida u biljci) (Jiang et al.,
2012), jasna je potreba za koritenjem metode EPR radi nedestruktivnog odreivanja ROS vrsta u klijancima kukuruza
izloenih brasinosteroidima.

2. Pregled literature koja pokazuje potrebu za korienjem EPR tehnike.

1. Clouse SD, and JM Sasse (1998) BRASSINOSTEROIDS: Essential Regulators of Plant Growth and Development. Annual
Revue of
2. Plant
Jia Li,Physiology
Xiaoping Gou
Brassinosteroids
10.1002/9780470015902.a0020092; Published Online: 16 APR 2007),
and(2007):
Plant Molecular
Biology,(DOI:
49: 42751
in:
3. Clouse
Ulrich Kutschera
andSasse
Zhi-Yong
Wang
(2012) Brassinosteroid
action in
flowering of
plants:
Darwinian
Journal
Encyclopedia
of JM
Life
Sciences:
http://www.els.net/WileyCDA/ElsArticle/refId-a0020092.html
SD, and
(1998)
BRASSINOSTEROIDS:
Essential
Regulators
PlantAGrowth
and perspective.
Development.
Annualof
Experimental
Botany, Vol. 63, No. 10: 35113522 (doi:10.1093/jxb/ers065)
Revue
of
4. Plant
Yu-ping
JIANG, Fei
Yan-hong
ZHOU,49:
Xiao-jian
Physiology
andCHENG,
Plant Molecular
Biology,
42751XIA, Wei-hua MAO, Kai SHI, Zhi-xiang CHEN, Jing-quan YU
(2012)
5. Serna
M, Hernndez
F, Coll F,
Y, and A Amors
(2013)
Effects of brassinosteroid
on totaland
phenols,
Hydrogen
peroxide functions
asColl
a secondary
messenger
for brassinosteroidsinduced analogues
CO2 assimilation
carbohydrate
antioxidant
sugars,
organic
acidsofand
yield of
field grown endive (Cichorium
endiviaBiotechnology):
L.). Journal of Science
of
metabolismactivity,
in Cucumis
sativus.
Journal
Zhejiang
University-SCIENCE
B (Biomedicine&
13(10): 811-823
Food
and
Agriculture
(doi:
10.1002/jsfa.5968),
93(7):
1765-1771
(ISSN
1673-1581:
Print;
ISSN
1862-1783:
Online;
doi:10.1631/jzus.B1200130)
3. Plan
u vezi
sa
duinom
trajanja
eksperimenata
(planirani
broj efektivnih sati rada na EPR ureaju).
Poto su EPR merenja tehniki i finansijski zahtevna, cilj nam je da sprovedemo in situ merenje EPR odziva kod klijanaca
kukuruza 4 genotipa (2 dosad ispitivana i 2 nova), starih 4 dana (staju u ependorficu), izloenih saetom opsegu koncentracija
24-EBL: 0 mol; 5.2 X 10-15 mol; 5.2 X 10-11 mol; 5.2 X 10-7 mol. Tako bi in situ EPR odzivi klijanaca kukuruza mogli da se
sa raditi
sadrajima
eera
polifenola
(kao i vrednostima
4.koreliu
Plan ta
dalje ako
se idobiju
oekivani
rezultati. odgovarajuih proraunatih termodinamskih parametara: W.Q.
Sun, in: Desiccation and Survival in Plants: Drying Without Dying, Black M. & Pritchard H. W. (Ed.), CABI Publishing, New
Ukoliko
dobijemo
korelacije EPR
odziva,
koji ukazuje
na nisku
produkciju
ROS vrsta,
sa sadrajem eera
povezanih
York, USA,
2002,pozitivne
47-91.), odreenih
takoe
kod klijanaca
kukuruza
tretiranih
ekvivalentnim
koncentracijama
24-EBL.
Sve u
sa
rastenjem
i sintetskim
procesima
u klinacima
kukuruza
(glukoza,
fruktoza, saharoza,
arabinoza),
kao i uvezanih
polifenola
svemu
to bi bilo
4 genotipa
X 4 koncentracije
24-EBL
tretmana
X 4 ependorf
epruvete sa
po 1 klijancem
njima od
svakog (za
elijski
zid),
tj. ukolikotj.dobijemo
pozitivne
korelacije
EPR
visoku produkciju
ROS vrsta, sa sadrajem
tretmana
i genotipa,
ukupno 64
ependorf
epruvete,
tosignala,
je osnovkoji
za ukazuju
proraunnaiskorienosti
EPR aparata.
ecera povezanih sa stresom (trehaloza), kao i odgovarajuih slobodnih polifenolnih vrsta (kao mogucih kvenera ROS vrsta),
smatraemo da su ostvareni rezultati ogleda. Takode je znaajno ustanoviti pri kojim koncentracijama 24-EBL dolazi do
5. Potrebna potrona oprema za eksperimente da bi se eventualno pripremili gasovi, hemikalije i odredila cena DMT.
prevladavanja sintetskih procesa, tj. stresnih odgovora biljke. (termodinamski prorauni bi mogli biti jedan od nezavisnih nacina
potvrde ovih ispitivanja.) U tom slucaju i ukoliko postoji interes ljudi iz EPR laboratorije, obavili bismo i ispitivanje dejstva
Ependorf plasticne epruvete: po 4 za svako EPR merenje; 16 EPR merenja (4 genotipa kukuruza izloenih
propikonazola, inhibitora biosinteze brasinosteroida (Hartwig T, Corvalan C, Best NB, Budka JS, Zhu J-Y, Choe S and B Schulz
pri klijanju sa 4 koncentracije 24-EBL); ukupno 48 ependorf epruveta. Ukoliko bi bili odobreni dodatni ogledi merenja EPR
(2012) Propikonazole Is a Specific and Accessible Brassinosteroid (BR) Biosynthesis Inhibitor for Arabidopsis and Maize. PloS
odziva na biljkama tretiranim propikonazolom, inhibitorom sinteze brasinosteroida, bilo bi potrebno duplo manje ependorf
ONE 7(5): e36625.; doi:10.1371/journal.pone.0036625; ed. Marcus Grebe, Umea Plant Science Center, Sweden;
epruveta: 4 genotipa i 2 koncentracije propikonazola (PZR: 0 mol, 10-6 mol PZR) i po 4 ependorf upruvete po merenju:
http://www.plosone.org/article/info%3Adoi%2F10.1371%2Fjournal.pone.0036625), ime bismo potvrdili da li su zapaeni
24 ependorf epruvete ukupno.
Ostali trokovi
(gasovi,
hemikalije i sl.) zavise od procene ljudi iz EPR laboratorije.
Bogdan
i Hadi
Ime
i prezime
predlagaa:
fenomeni
(promene
sadraja
eceraNikolic
i polifenola
uWaisi
klijancima, intenziteta EPR odziva i termodinamskih parametara) povezani sa
brasinosteroidima.
Datum: 28.01. 2015.
Broj projekta: TR 31018 i TR

Poalji formular