3. DETERMINACION DE MATERIA ORGANICA A. METODO DE COMBUSTION HUMEDA (WALKLEY AND BLACK) MODIFICADO 3.1. Concepto Determinacién del contenido de materia org&nica fa- cilmente oxidable del suelo, expresada como porcentaje. 3.2. Principio La determinacién se basa en una oxidacién incompleta del carbono org&nico por una mezcla oxidante de dicromato @e potasio (K2cr207) y 4cido sulfurico (H2S04) acentuada por el calor de dilucién acuosa del #2804, (110-130%c), @ependiendo de 1a temperatura inicial de los reactivos, contenido de materia orgaénica y tamafio del recipiente de reacci6n. La cantidad de agente oxidante consumido en esta, se determina por fotocolorimetria midiendo la intensidad del color verde de los iones Cr+6 amarillos del dicromato inicial y comparando con las lecturas de una curva de calibracién preparada en la misma forma con patrones conocidos de solucién de sacarosa o glucosa. Los iones Cr+3 producidos son proporcionales a la cantidad de carbono oxidado. Ejemplo de reaccién: 6 C6H1206 + 4K2Cr207 + 16H2S04 -----4K2S04 + 4Cr2(S04)3 + 6c02 + 22 H20. Por colorimetria o titulacién se lleva a cabo una medida del dicromato residual. 3.3. Equipos y Materiales a) Fotocolorimetro Klett-Summerson provisto de filtro ana- ranjado (590 nm) 6 Espectrofotémetro Bausch & Lomb-Spec- tronic 20 con fototubo azul a 650 nm.b) ©) a) e) £) 9) h) i) i) k) 3.4. Ri a) b) ce) Balanza de platillo superior, sensibilidad a 0.01 g. Balanza analftica, sensibilidad a 0.1 mg. Centrifuga. Bureta autom&tica dispensadora para la soluci6n de dicromato de potasio. Buretas autom&ticas dispensadoras de 50 ml para el Scido. Buretas autom&ticas dispensadoras de 25 ml. Macrobureta para la adici6n de agua. Matraces erlenmeyer de 125 ml. Tubos de centrifuga de fondo cénico de 15 ml. Tubos Klett o calibrados para Spectronic 20. tivos Dicromato de potasio 1N, disuelva 49,03 g de K2cr207 secado a 1042¢ en agua desionizada o destilada y diluir all. Acido sulfGrico (H2S04) no menor de 96% p/p grado comercial. Soluci6én de sacarosa standard: Pese 1.0318 de sacarosa y disuelva en un matraz aforado de 100 ml con agua. Esto corresponde a una concentracién de 4,343 mg de C/ml de solucién: a 4,343 X 1,724 7,4873 mg de M.0., facilmente oxidable y a 7/4873 X 1,333 = 9/9828 mg de M.0., total/ml de solucién.Para la titulacién: 4) Sulfato ferroso amoniacal 0.5 M [Fe(NH,))(S0,)) . 6H,0]: Disolver 196,1 gramos de 1a sal en 800 ml de agua destilada. Afiadir 20 ml de H,S0, concentrado y diluir a 1 litro. €) Acido Fosf6rico al 85% (H,P0,). £) Fluoruro de Sodio (NaF) en polvo. 9g) Difenilamina: disolver 0,5 gramos de difenilamina en una mezcla de 100 m1 #,S0, concentrado y 20 ml de agua. 3.5. Procedimiento 3.5.1. Calibracién de estandares Pipetear las siguientes alicuotas de la solucién de sacarosa en matraces erlenmeyer de 125 ml seguidas en forma sucesivas por los restantes reactivos: PASOS SUCESIVOS EN LA DETERMINACION ¥30m1 H20-8".0. 780,968 = M0. sol. Dicromato “2°74 A mgC/ml sacarosa € Potasio 2 ° ° 50,00m 0,0 1,086 0,25 mL 5 ml Lom) 49,75m™ 0,5 2,17 0,50 mi 5 ml 1om1 49,50m 1,0 4534 1,00 mL 5 ml om. 49}0oml 2,0 6.51 1.50. m1 5 ml 1oml 48,50 ml. 3.0 8,69 2,00 ml 5 ml 10m1 48,00 mL 4,0 10,86, 2,50 ml 5 ml 10m1 47, 50m 5,0 13203 3,00 ml 5 ml 10m1 47,00mL 6,0 15, 3,50 ml 5 ml 10m1 46,50m 7,0 Punto més elevado de la curva es igual a: 15,20 mg C X1/1000 X 1,333 x 1,724 x 100/0,5 g = 15,20 X 0,460 = 6,998 M.0. Reaccién: mgC/ml # G,5mLsoln. sacarosa) + Sml soln. K2Cr207+10ml H2S04 +H, 46.5 ml para completar.Trazar un grafico en papel milimetrado en lecturas de los patrones vs porcentajes de materia org&nica. Nor. Una forma alternativa es evaporar las alicuotas de sacarosa en estufa a 80°C, enfriar a temperatura am- biente y continuar agregando 5 ml de K2Cr207 (agitar), 10 ml de H2S04 (agitar), y 50 ml de HAO (Proceder como con las muestras m&s abajo). 3.5.2- Procedimiento en si Pese 0,50 g 6 1,0 g para determinar el carb6n org&nico de suelo seco al aire y tamizado por 2 mm en un matraz erlenmeyer de 125 ml. Si el suelo es arenoso o bajo en materia orgénica es preferible usar 1 g. Agregue con dispensador automético 5,0 ml de la solucién de dicromato de potasio 1N.Rote suavemente el frasco para mezclar antes de afiadir el Acido. Con bureta autom&tica agregue rapidamente 10 ml del H2S04, concentrado grado comercial y agite inmediatamente por 5-10 segundos. Hacer esta operacién bajo campana de extraccién de gases. Colocar matraces en mesén con tope de asbesto y dejar en reposo por 30 minutos. Después de este perfodo agregar 50 ml de agua en el mismo ordén que se agregé el Scido, mezclar y dejar en contacto por la noche. a) Cuantificaci6n del contenido de carbono org&nico por colorimetria. Al dfa siguiente pasar 13 ml de la solucién sobrenadante a tubo de centrifuga y centrifugar por 5 minutos a 3000 rpm.b) Pasar liquido limpido a tubos Klett y leer’ en fotocolorimetro Klett Sumerson con filtro anaranjado (590 nm) en posici6n, ajustando el cero del jnstrumento con un blanco preparado con los mismos volumenes de reactivos y agua usados con las muestras (excepto sacarosa), Equivalentea Baush and Lomb con fototubo azul (650nm). Si las lecturas se salen de la curva repetir con mitad del peso de la muestra y multiplicar por dos los resultados. Si dan lecturas menores de 30 (Klett) repetir con doble de muestra y dividir por dos. Cuantificaci6n volumétrica del contenido de carbono orgénico. 1. Pese 1 g de suelo pasado por un tamiz de 0,5 mm y coloque 1a muestra en un erlenmeyer de 500 ml. (La cantidad de muestra seré de 0.05 g para suelos turbosos, 0,5 g en suelos con alto contenido de materia org&nica y 2g . para suelos con contenido de materia org&nica, menor que 1%). Afiada exactamente 10 ml de solucién de dicromato de potasio 1N y mezcle con movimientos de rotaci6n. 3. Agregue 20 ml de H,S0, concentrado, agite cuidadosa~ mente y deje en reposo sobre la mesa, durante 20 a 30 minutos. 4. Afiada aproximadamente 170 ml de agua destilada y agite por rotacién. 5. Adicione 10 ml de cido fosférico al 85%, 0,2 9 de NaF y 30 gotas del indicador difenilamina.6, Titule con la solucién ferrosa 0.5 N hasta que haya un cambio de color azul a verde brillante. Anote los ml de solucién ferrosa gastados y utilicelos para calcular la normalidad del sulfato ferroso (T). 7. Haga la titulacién de un blanco usando el mismo procedimiento anterior, excepto que no se utiliza la muestra de suelo. Anote los ml de soluci6n ferrosa gastados en la titulacién del blanco (8). Si el consumo de 1a soluci6én ferrosa gastados en la titulacién de la muestra es menor de 4 ml, deber& repetirse 1a determinacién con una muestra més pequefia. 3.5.3.1. Rango y Sensibilidad El procedimiento colorimétrico se ajusta a la ley de Beer hasta las concentraciones escogidas (0-7%) con una sensibilidad de 1 mg de carbono. 3.5.3.2. Precisién y Exactitud El método consiste en una digesti6n incompleta y se debe aplicar un factor de correcci6n. La heterogeneidad de la muestra es un serio problema en la distribucién de la materia org&mica por lo cual las muestras se deben morterear y mezclar muy bien antes de tomar las submuestras para an&lisis. Los porcentajes aparentes de recuperacién y de contenidos de carbono de la materia org&nica del suelo son aproximaciones ya que pueden haber variaciones en distintos tipos de suelos y a distintas profundidades.3.5.3.3, Interferencias Suelos que contienen grandes cantidades de cloruros (cl-) . Mn++ y Fet+ resultan aparentemente con mayores cantidades de M.O. La interferencia de cloruros se puede eliminar agregando AgSO4 al H2S04 (1,25 g/100 ml). Es una inteferencia muy probable en suelos del litoral. No existe un procedimiento conocido para compensar las otras interferencias, aunque en muestras preparadas secas al aire estos elementos eben estar en forma oxidada no interferentes. 3.5.4. Observaciones al Procedimiento Se debe agregar el H2S04 bajo campana porque los vapores que se producen son t6xicos y corrosivos. Maneje el H2S04 con sumo cuidado porque es muy corrosivo. Evite contacto con sus manos o vestidos, etc. Use soluciones de NaHCO3 0 NH40H diluido para neutralizar cualquier salpicadura. Procure no moler las muestras en mortero de hierro para no introducir material reductor en la forma de hierro metélico. El hierro ferroso es presente en suelos bajo inundacién. La presencia de CaCO03 hasta 50% no causa interferencias por lo que el método es también apropiado para suelos calc&reos. Los nitratos interfieren solo si se encuentran presentes en exceso de 1/20 del carbono org&nico. Carb6n elemental, como carbén vegetal o carb6n de piedra o hulla es pr&cticamente inatacado por ese método.3.6. C&lculos El carbono org&nico total se calcula asumiendo que bajo las condiciones del método hay una oxidacién promedio del 75% del mismo: 100/75 = 1,333; y que la materia org&nica del suelo posee un 58% de carbono: 100/58 = 1,724. Por via de titulacién (N,.V,-N,-T) jl 2 co = . Peso suelo (gr) * f20tor % C.O. = porcentaje de carb6én organico N = normalidad del K,Cr20,- V, = ml de K,cr,0, usados. N = normalidad del Fe (NH,) 9-6H20- (SE DEBE CALCULAR). T = volumen de sulfato ferroso amoniacal gastado en la titulacién. Como se expresan los valores en % de MATERIA ORGANICA ¢ @m.o. = 8c Ox 1,724 Pasos y factores: Conociendo 1a cantidad dedicromato en exceso se puede obtener, por diferencia, el dicromato que oxid6 el. carbono orgénico. Esta cantidad de dicromato, en miliequivalentes, corresponde a los miliequivalentes de carbono oxidado, o sea; el carbono de la muestra de suelo. Estos me de carbono se deben pasar a gramos de carbono; para ello, recordemos que en la reacci6n que se sucede, el carbono (C) pasa a CO, ganando 4 electrones, en consecuencia, el peso equivalente del carbono seria: Pec. 12g a3.6. C&lculos El carbono org&nico total se calcula asumiendo que bajo las condiciones del método hay una oxidacién promedio del 75% del mismo: 100/75 = 1,333; y que la materia org&nica del suelo posee un 58% de carbono: 100/58 = 1,724. Por via de titulacién (N,.V)-N,-T) 112 co = cl Peso suelo (ar) * f3°tor % C.O. = porcentaje de carb6n organico N = normalidad del K,Cr20,- Vy = ml de K,Cr,0, usados. N = normalidad del Fe (NH) 9-6820- (SE DEBE CALCULAR). T = volumen de sulfato ferroso amoniacal gastado en la titulacién. Como se expresan los valores en % de MATERIA ORGANICA ¢ @M.o. = 8 C Ox 1,724 Pasos y factores: Conociendo la cantidad dedicromato en exceso se puede obtener, por diferencia, el dicromato que oxid6 el. carbono orgénico. Esta cantidad de dicromato, en miliequivalentes, corresponde a los miliequivalentes de carbono oxidado, o sea; el carbono de la muestra de suelo. Estos me de carbono se deben pasar a gramos de carbono; para ello, recordemos que en la reaccién que se sucede, el carbono (Cc) pasa a CO, ganando 4 electrones, en consecuencia, el peso equivalente del carbono serfa: Pec. 12g aEntonces, 1 me C 12 g- F000 x 1,000 ymec --- x (oxidado) Por otra parte, Walkley - Black encontré que por este procedimiento s6lo el 7% del carbono org&nico es oxidado, por lo que la cantidad anterior (x gr de carbono oxidado) debe multiplicarse por 100/77 para conseguir la cantidad de gramos de carbono en la muestra recuperados por este método. Como estos valores se expresan en porcentaje, entonces, se debe multiplicar por 100. De esta manera, aparece el primer factor utilizado: 12 100 . eX a « 100=0,39 Es decir, 12/4000 para transformar m.e de carbono a gramos, 100/77 porque s6lo el 77% de carbono es oxidado y 100 para pasar a porcentaje. Es por ello que la f6rmula para obtener % C.0. se expresa de la siguiente manera: x 0,39 N, = Normalidad del dicromato Vv, = Volumen de dicromato usado, en ml. N, = Normalidad del sulfato ferroso T = Volumen del sulfato ferroso usado para titular P.S. = Peso del suelo, en gramos. N,V, = Cantidad total de m e.de dicromato usados No? me de dicromato en exceso. NjV, - Nj-T = me de dicromato que oxidé el carbono org&ni- co.3.10. Para llevar a % de materia org&nica, se considera que la materia org&nica contiene, en promedio, un 58% de carbono, de manera que si se multiplica el % de carbono por el factor 1,724 se obtiene el % de materia org&nica en la muestra. Es decir, 100/58 = 1,724. 3.7. Forma de Expresi6én de los Resultados Los resultados se expresan en porcentajes de materia orgénica con dos cifras decimales. 3.8. Interpretaciones A los fines de normalizar os criterios de interpretacién de las caracteristicas que definen fertilidad de los suelos, se interpretan los niveles o contenidos de Materia Orgénica, en funcién de grupos o tipos texturales: % M.0. GRUPOS * Bago (B) MEDIO (M) ALTO (A) TEXTURALES Gruesas “1,5 1,5 - 3,0 3,0 Medias £2,0 2.0 - 4,0 4,0 Finas <3,0 3,0 - 5,0 5,0 TEXTURAS GRUESAS: a, aF y Fa TEXTURAS MEDIAS: FAa, F, FL, FA, Aa y L. TEXTURAS FINA : A, AL y FAL. * NOTA: Estos criterios de interpretacién retoman los niveles.de cate- gorizacién de materia organica en B, M y A, que venia usando el laboratorio.3.11. 3.10. Referencias 1. PAGE, A.L.; MILLER, R.H. y KEENEY, D. Ed. 1982. Me- thods of Soil analysis. Part II. Chemical and Mi- crobiological properties. 2end. Edition. Madison WIS. American Society of Agronomy Inc. VT (Agronomy 9). pp. 2. PEREZ DE ROBERTI, R. 1983. Metodologfa para an&lisis de suelos y aguas (Laboratorio de Servicios). Barq. Ven. Universidad Centro Occidental Lisando Alvara~ do - Escuela de Agromoia. Departamentos de Suelos. Serie Monografia No. 5. 47 p. (Archivos del Depar- tamento de Suelos de UCLA). CHIRINOS, A.V.; LOPEZ DE ROJAS, J.; GONZALEZ T., R. y PE- REZ SILVA, 1975. Aspectos basicos de un Programa de Analisis de Suelos con fines de fertilidad. Mara- cay. PONAIAP - CENIAP. pp. 48.