Professional Documents
Culture Documents
Meso 3 2011 Utjecaj Toplinske Obrade Barenjem I Skladistenja Na Odrzivost Bakterije
Meso 3 2011 Utjecaj Toplinske Obrade Barenjem I Skladistenja Na Odrzivost Bakterije
Saetak
Listeria monocytogenes se s vie aspekata razlikuje od drugih patogena prenosivih hranom. S obzirom na njenu iroku rasprostranjenost i znaajnu rezistentnost na razliite nepovoljne uvjete rasta i razvoja, kao to su niske vrijednosti pH i visoke koncentracije
NaCl, njena mikroaerolna i psihrotropna svojstva, oneienje hrane ovim patogenom je postala jedan od vodeih problema javnog zdravstva i prehrambene industrije. Pored toga, opasnost od oneienja postrojenja za proizvodnju hrane temelji se i na njenoj
sposobnosti da preivi dugo vremena u vanjskoj sredini kako na veoma niskim temperaturama (od 0C do 7C), pa ak i na temperaturama dubokog smrzavanja (>-20C), tako i na visokim temperaturama (od 60C do 90C). Poznavajui osnovne karakteristike L.
monocytogenes, s namjerom doprinosa unapreenja higijenske ispravnosti namirnica i zatite zdravlja potroaa, ciljevi istraivanja su bili ispitivanje utjecaja razliitih temperaturnih reima toplinske obrade hrenovki na opstanak eksperimentalno inokulirane
L. monocytogenes te ispitivanje utjecaja razliitog inicijalnog broja eksperimentalno inokulirane L. monocytogenes i tehnolokog
procesa proizvodnje i skladitenja na dinamiku njenog opstanka i rasta u ispitivanim mesnim preraevinama. Dobiveni rezultati
naeg istraivanja su ukazali na mogunost opstanka L. monocytogenes u hrenovkama, uz utjecaj razliitih temperaturnih reima
toplinske obrade i skladitenja. Na osnovu naih rezultata preporuamo obaveznu mikrobioloku kontrolu namirnica na prisutnost
L. monocytogenes uz neophodnu edukaciju proizvoaa hrane, farmera i ire javnosti o osnovnim mjerama zatite od oneienja
hrane patogenom, kao i mjerama prevencije alimentarne listerioze.
Kljune rijei: mikrobioloka kontrola, Listeria monocytogenes, hrenovke
Uvod
Bakterija Listeria monocytogenes
se u vie pogleda razlikuje od drugih
patogena prenosivih hranom. Kako
je iroko rasprostranjena, rezistentna
je na razliite uvjete sredine, ukljuujui niske vrijednosti pH i visoke koncentracije NaCl-a. Ona je mikroaerolna i psihrolna bakterija. Postala je
jedan od najveih problema u prehrambenoj industriji zbog svoje sposobnosti da na razliite naine oneisti postrojenja za proizvodnju hrane,
preivi dugo vremena u vanjskoj
TSFEJOJ 'FOMPO
8BSSJOFSJTVS
LBPJTQPTPCOPTUJEBSBTUFQSJ
veoma niskim temperaturama (od
$EP$
UFEBQSFJWJVISBOJJMJOB
hrani due vrijeme u loim uvjetima
na temperaturama dubokog smrza-
148
mr. Kenan aklovica, vii asistent; dr. Muhamed Smajlovi, docent; dr. Faruk aklovica, redoviti profesor; mr. Davor Alagi, vii asistent; mr. Enida lanjak,
suradnik; Katedra za higijenu i tehnologiju namirnica Veterinarskog fakulteta Univerziteta u Sarajevu, Zmaja od Bosne 90, 71 000 Sarajevo, Bosna i Hercegovina
.&40
Utjecaj toplinske obrade barenjem i skladitenja na odrivost bakterije Listeria monocytogenes u hrenovkama
Materijal i metode
Istraivanje utjecaja tehnolokog
procesa proizvodnje i skladitenja na
odrivost bakterije L. monocytogenes
u mesnim preraevinama - hrenovLBNBPCBWMKFOPKFVSB[EPCMKV
HPEJOF
Eksperimentalno je proizvedeno
V[PSBLBISFOPWLJBH1SJQSFma nadjeva za hrenovke je obavljena u pogonu mesne kompanije Bearevi Sarajevo, a inokulacija patogena i zavretak tehnolokog procesa proizvodnje mesnih proizvoda u
laboratorijama Katedre za higijenu i
tehnologiju namirnica Veterinarskog
fakulteta Univerziteta u Sarajevu,
gdje su obavljene mikrobioloke i zikalno-kemijske analize uzoraka eksperimentalno proizvedenih mesnih
proizvoda.
Priprema inokulata
L. monocytogenes i
inokulacija
Za inokulaciju je koriten komercijalni referentni soj bakterije L. monocytogenes ATCC 13932. Iz konzerviranog stanja (poluitkog agara)
kolonije bakterije L. monocytogenes
su ezom prenesene u Brain-Heart
*OGVTJPO #SPUI #)*
3FG . )Jmedia, India) hranjivi bujon. Nakon
I JOLVCBDJKF OB $
JOPLVMVN
je precijepljen na Listeria agar (Fluka
3C
4JHNB"MESJDI
*OEJB
LPKJ
KF JOLVCJSBO I OB $ ,BSBLUFristine porasle kolonije s agara su
F[PN LPMPOJKF
JOPLVMJSBOF V
NM 'SBTFS TFDPOEBSZ FOSJDINFOU
www.meso.hr
Slika 1. Toplinska obrada hrenovki na temperaturama 65C i 72C. (Tehnoloki laboratorij Katedre za higijenu i tehnologiju namirnica)
Eksperimentalna
proizvodnja hrenovki
Za proizvodnju hrenovki koriteno
je govee/junee meso, prve i druge kategorije, te mjeavina zaina
i aditiva koji se dodaju u odgovarajuoj koliini prema proizvoakoj
specikaciji i vaeim normativnim
aktima, Pravilnik o kvalitetu mesnih
QSPJ[WPEB 4M-JTU#J)CS
J
. Ukupna koliina pripremljenog mesnog nadjeva za inokulaciju
KF J[OPTJMB LH 0E UPHB KF
LH
sirovine koriten za pripremu konUSPMOJI V[PSBLB ISFOPWLJ
B
LH
;/"/457&/04536/*%*0
NJLSPPSHBOJ[NJNBVCSPKVPE
$'6HJMJNM 8BMLFSJTVS
.Jkroorganizmi koji su dospjeli u meso
iz prostorija za klanje, preradu i skladitenje, mogu izazvati promjenu
senzorikih svojstva i kvarenje mesa
i mesnih preraevina, a neki i alimentarna trovanja s teim ili lakim
posljedicama po konzumenta. Skupini rizinijih proizvoda pripadaju i
mesni proizvodi koje smo koristili u
eksperimentu - hrenovke.
Uzorkovanje
Oznaavanje uzoraka je izvreno
na osnovu vrste proizvoda i vremena skladitenja te toplinske obrade.
Svi uzorci eksperimentalno proizve-
.&40
149
Utjecaj toplinske obrade barenjem i skladitenja na odrivost bakterije Listeria monocytogenes u hrenovkama
4MJLBKolonije L. monocytogenes na
selektivnoj podlozi Aloa agar (zbirka
Katedre za higijenu i tehnologiju
namirnica)
Procedura pripreme
uzorka za analizu
"TFQUJLJ KF V[FUP QSJCMJOP
g uzorka i homogenizirano u stoNBDIFSV -BC#MFOEFS
sekundi. Nakon homogenizacije, za
EBMKVBOBMJ[VKFV[FUPH[BQSJNBSno obogaivanje. Ostatak homogeniziranog uzorka je skladiten na temQFSBUVSJ
oC do zavretka analize.
150
.&40
E.coli
/ 0,01 g
Koagulaza
Sult
L.
pozitivni reducirajue Proteus spp.
monocytogenes
stalokoki klostridije
/ 0,01 g
/0,1 g
/ 0,1 g
/0,1 g
Negativno Negativno
Negativno
Procedure obogaivanja,
izolacije i oitavanja
Procedure izolacije i brojanja
mogu se provoditi simultano ili brojanje moe zapoeti tek nakon to
tipine ili sumnjive kolonije budu
izolirane na selektivnom mediju,
nakon primarnog ili sekundarnog
obogaivanja. Istovjetna inicijalna
razrjeenja uzorka mogu se iskoristiti za brojanje kao i procedure obogaivanja. Alternativno, ove procedure
se mogu izvesti i iz zasebnih razrjeenja, ali pri tome je vano da se
zapone od istog homogeniziranog
uzorka. Kod metode izolacije, koritena je procedura dvostupanjskog
obogaivanja.
Za primarno obogaivanje asepUJLJKFV[FUPHIPNPHFOJ[JSBOPH
V[PSLB J EPEBOP NM QSJNBSOPH
bujona za obogaivanje (Half Fraiser Broth), prethodno zagrijanog na
$ $
OBLPO FHB KF J[WSFOB
IPNPHFOJ[BDJKBVUSBKBOKVPETFkundi. Homogenizirani uzorak s primarnim bujonom za obogaivanje
KFJOLVCJSBOOBUFNQFSBUVSJPE
$ LSP[ I 1PTMJKF I
inkubacije, uslijedilo je sekundarno
PCPHBJWBOKF QSFCBDJWBOKFN
NM
QSJNBSOPPCPHBFOFLVMUVSFVNM
sekundarnog bujona za obogaivanje (Fraser Broth Fluka pune snage)
JJOLVCJSBOPOBUFNQFSBUVSJPE
$VUSBKBOKVPEI
Nakon sekundarnog obogaivanja
iz epruveta je mikropipetom prebaFOP QP
NM V[PSLB OB QPWSJOV
prethodno pripremljene podloge
za detekciju i brojanje L. monocytogenes - Listeria Agar Fluka. Sadraj je ravnomjerno rasporeen po
Negativno
Negativno
Fizikalno-kemijski
parametri mesnih
preraevina (voda, mast,
NaCl, aw i pH vrijednost)
Utjecaj toplinske obrade barenjem i skladitenja na odrivost bakterije Listeria monocytogenes u hrenovkama
Voda %
Mast %
NaCl %
aw
pH
Uzorak
Rezultati detekcije i
brojanje bakterije L.
monocytogenes
Rezultati mikrobiolokih analiza
utjecaja tehnolokog postupka proizvodnje i skladitenja hrenovki na
rast i razvoj bakterije L. monocytogenesTVQSJLB[BOJOBHSBmLPOJNB
J
Rezultati ispitivanja
zikalno-kemijskih
parametara
Odreivanje sadraja vode, masti,
NaCl, aw i pH vrijednosti je raeno
kod svih eksperimentalno proizvedenih hrenovki na poetku i na kraju procesa tehnolokog postupka
prerade, te skladitenja. Rezultati su
QSFETUBWMKFOJVUBCMJDBNBJ
30
minuta
20
10
;/"/457&/04536/*%*0
Rasprava
0
12
15
18
21
24
27
30
33
36
39
CFU/g x 1000
minuta
30
20
10
0
0
12
15
18
21
24
27
30
33
36
39
CFU/g x 1000
Rezultati
Rezultati analiza su predstavljeni
za svaki od eksperimentalno proizvedenih proizvoda (hrenovke), tabelarno i graki. Svaki rezultat predstavlja broj srednje vrijednosti od tri
mjerenja kod svih raenih analiza.
www.meso.hr
Polugotovi mesni proizvod - hrenovke, inokulirane s dva razliita inicijalna broja bakterije L. monocytogenes izloene su toplinskoj obradi
barenjem na temperaturama od
J $ V USBKBOKV PE NJOVUB
kako zahtijeva tehnoloki proces
QSPJ[WPEOKF )BEJCFHBOPWJ
JWLPWJ
3F[VMUBUJNJLSPCJPlokih analiza predstavljeni u Tablici
1. ukazuju da je sirovina za proizvod
bila negativna na prisutnost bakterije L. monocytogenes i druge bakterijske oneiivae i patogene. Pored
toga, vrijednosti zakalno-hemijskih
QBSBNFUBSB 5BCMJDB
TVPEHPWBSBle odredbama Pravilnika o metodama obavljanja mikrobiolokih analiza i superanaliza ivenih namirnica
4M M #J) CS
J
J UFInolokim zahtjevima proizvodnje
)BEJCFHBOPWJ
JWLPWJ
Dobiveni rezultati utjecaja razliitih reima toplinske obrade na
bakteriju L. monocytogenes u hrenovkama ukazuju na slinost s rezultatima drugih autora (aklovica,
.&40
151
Utjecaj toplinske obrade barenjem i skladitenja na odrivost bakterije Listeria monocytogenes u hrenovkama
45 dan
65 C
72 C
40 dan
35 dan
30 dan
25 dan
20 dan
15 dan
10 dan
5 dan
1 dan
0 dan
0
0,5
1,5
2,5
3,5
4 4,5 5 5,5
CFU/g x 100
6,5
7,5
8,5
9,5 10
)PVCFOJTVS
6(SBmkonu 1 prikazani su rezultati preivljavanja bakterije L. monocytogenes
u hrenovkama eksperimentalno
inokuliranim u inicijalnoj koncenUSBDJKJ PE $'6H
LPKB KF OB
kraju toplinske obrade barenjem u
USBKBOKV PE NJOVUB OB UFNQFSBUVSJ PE $ J[OPTJMB $'6H 1SJ
djelovanju iste temperature u istom
vremenskom intervalu i supstratu s
JOJDJKBMOJN CSPKFN PE $'6H
WFLPEoUFNJOVUFCSPKCBLUFSJKB
L. monocytogenes je reduciran u potpunosti.
5FNQFSBUVSBCBSFOKBPE$LPE
ISFOPWLJ T JOJDJKBMOJN CSPKFN PE
$'6HTNBOKVKFCSPKUJKFLPN
NJOVUBOB$'6H
EPLKFJOJDJKBMOJ
broj bakterije L. monocytogenesPE
$'6HQPOPWPCJPVQPUQVOPTUJ
TNBOKFO V QSWJI NJOVUB (SBmLPO
/B PTOPWV PWJI SF[VMUBUB
zakljuujemo da preivaljvanje bakterije L. monocytogenes u hrenovkama na navedenim temperaturama
i vremenskim intervalima direktno
zavisi od veliine incijalnog broja mikroorganizama. Do slinih rezultata
152
.&40
QVUBWFJ
BOBLSBKVEBOBJ[OPTJP
KF$'6H/BLPOUPQMJOTLFPCSBEFISFOPWLJOBUFNQFSBUVSJPE$
i njihovog skladitenja, broj bakterije L. monocytogenes UPH EBOB KF
J[OPTJP$'6H
[BUJNPHEBOB
broj je bio dva puta vei, i na kraju
skladitenja biljei najvei rast od
$'6H 3B[MJJUV EJOBNJLV SBTUB
bakterije L. monocytogenes kod spomenutih toplinskih obrada u hrenovkama tijekom skladitenja pojanjavaju i zikalno-kemijski parametri
predstavljeni u Tablici 3. Rezultati za
hrenovke nakon toplinske obrade na
UFNQFSBUVSJPE$[BWPEVJ[OPTF
[BUJN/B$M
JBLUJWOPTUJ
WPEFPE
EPLTVLPEUPQMJOTLF
PCSBEFPE$EPCJWFOFNBOKFWSJjednosti za iste parametre, osim pH
sredine koja je u obje toplinske obraEF J[OPTJMB
/BLPO EBOB TLMBditenja zikalno-kemijski parametri
hrenovki, kod temperaturnog reima
PE$
WPEB
/B$M
BLUJWOPTUWPEF
i pH vrijednost su i dalje neto vei
od vrijednosti spomenutih parameUBSBLPEUPQMJOTLFPCSBEFPE$
(Tablica 3.). Dobiveni rezultati nam
ukazuju da poveanjem temperature
barenja dolazi do gubitka vode to
se odraava na vrijednosti postotka
vode i aktivnosti vode koji su u padu,
te je broj bakterija L. monocytogens
neznatno vei na kraju skladitenja
kod hrenovki podvrgnutih barenju
OBUFNQFSBUVSJPE$QSJWSJKFEOPstima pH koje se nisu znaajno promijenile.
Dobivene vrijednosti sadraja
vode, kuhinjske soli, aktivnosti vode
i pH kod razliitih toplinskih obrada
hrenovki i dalje predstavljaju povoljnu sredinu za rast i razmnoavanje
bakterije L.monocytogenes, zbog
ega je njen broj pri temperaturi od
$ UJKFLPN TLMBEJUFOKB WFJ
tog u odnosu na broj nultog dana.
Rezultati su pokazali da opstanak
i dinamika razvoja bakterije L. monocytogenes u hrenovkama poslije
toplinske obrade barenjem na ra-
Utjecaj toplinske obrade barenjem i skladitenja na odrivost bakterije Listeria monocytogenes u hrenovkama
Zakljuci
Na osnovu rezultata ispitivanja
razvoja i odrivosti bakterije L. monocytogenes tijekom tehnolokog
procesa proizvodnje, prerade i skladitenja eksperimentalno proizvedenih mesnih proizvoda hrenovki,
moe se zakljuiti slijedee:
5FNQFSBUVSBTLMBEJUFOKBPE
oC
www.meso.hr
Potvreno je da je bakterija L.
monocytogenes, u usporedbi s veinom patogenih uzronika trovanja
hranom, izuzetno otporna na utjecaje razliitih temperatura toplinske
PCSBEF o$
oC) kod oneienih proizvoda.
Fenlon D.R
-JTUFSJB NPOPDZUPHFOFT
and E.H. Marth, (ed.) Listeria, Listeriosis and Food
4BGFUZ
OE
.BSDFM%FLLFS
/FX:PSL
Fraber J.M. and Brown, B.E.
&FDU
of prior heat shock on heat resistance of Listeria
monocytogenes in meat, Applied Environmental
.JDSPCJPMPHZ
QQ
Gill C.O. and Reichel M.P
(SPXUI
Dobiveni rezultati ukazuju na neophodnost uvoenja HACCP sistema kontrole kod proizvodnje hrenovki, te njegove striktne primjene
u cilju eliminacije rizika oneienja
ovih proizvoda bakterijom L. monocytogenes, zatim uinkovitije zatite zdravlja krajnjeg konzumenta
i spreavanja pojave alimentarne
listerioze.
of
the
cold-tolerant
enterocolitica,
pathogens
Aeromonas
Yersinia
hydrophila
and
;/"/457&/04536/*%*0
Literatura
Bersot, L. S., M. Landgraf, B.D.G.M. Franco,
.&40
153
Utjecaj toplinske obrade barenjem i skladitenja na odrivost bakterije Listeria monocytogenes u hrenovkama
Einuss der Wrmebehandlung durch Abbrhen und Lagerung auf die Erhaltbarkeit
der Bakterie Listeria monocytogenes in Frankfurterwrstchen
Zusammenfassung
Listeria monocytogenes unterscheidet sich mehrfach von anderen pathogenen Bakterien, die durch die Nahrung bertragen werden. In
Bezug auf ihre hohe Ausbreitung und bedeutende Resistenz auf verschiedene ungnstige Wuchs- und Entwicklungsbedingungen, wie z.B.
niedrige pH Werte und hohe Konzentrationen von NaCl, ihre mikroaerophyle und psychrothrope Eigenschaften, ist die Nahrungskontamination mit diesem Pathogen zu einem der fhrenden Probleme des entlichen Gesundheitswesens und der Nahrungsmittelindustrie
geworden. Auerdem besteht die Kontaminationsgefahr der Herstellungsanlage fr Nahrungsmittel. Dies grndet auf ihrer Fhigkeit, eine
lngere Zeit drauen auf niedrigen Temperaturen (0C bis 7 C) zu berleben, sogar auf Tiefkhltemperaturen (>-20C) und auf hohen Temperaturen (60C bis 90C). Mit Bezug auf diese Grundcharakteristiken von Listeria monocytogenes, mit der Absicht der Frderung der hygienischen Richtigkeit von Nahrungsmitteln und Schutz der Verbrauchergesundheit, waren die Ziele dieser Untersuchung darauf gerichtet,
die Einsse verschiedener Temperaturenregime der Wrmebehandlung von Frankfurterwrstchen auf das berleben der experimental
inokkulierten L. monocytogenes zu prfen, sowie die Prfung des Einusses der verschiedenen Initialzahl der experimental inokkulerten L.
monocytogenes und des technologischen Herstellungsprozesses und der Lagerung auf die Dynamik deren berlebens und Wuchses in den
geprften Fleischerzeugnissen. Die bekommenen Resultate unserer Untersuchung haben gezeigt, dass das berleben von L. monocytogenes in Frankfurterwrstchen unter Einuss von verschiedenen Teperaturenregime der thermischen Behandlungund Lagerung mglich ist.
Auf Grund unserer Resultate empfehlen wir eine verpichtende mikrobiologische Nahrungsmittelkontrolle auf Anwesenheit von L. monocytogenes, sowie eine ntige Edukation der Nahrungsmittelhersteller, der Landwirte und der breiteren entlichkeit ber die Grundmanahmen gegen die Kontamination der Nahrung mit diesem Pathogen, sowie Prventionsmanahmen hinsichtlich alimentare Listeriose.
Schlsselwrter: mikrobiologische Kontrolle, Listeria monocytogenes, Frankfurterwrstchen
.JDSPCJPMPHZ QQo
uslovima
pogledu
ivkovi J.
)JHJKFOBJUFIOPMPHJKBNFTB
#J)CSPK
J
F.
Prevalence and challenge tests of Listeria
ivkovi J.
)JHJKFOBJUFIOPMPHJKBNFTB
154
#BDUFSJPMPHZ
metodama
obavljanja
Pravilnik
.&40
%PTUBWMKFOP
1SJIWBFOP