DIAGNOSTICUL DE LABORATOR IN INFECTIILE CU COCI G ( + )

Coci G ( + ):
1. Staphylococcus:
- aureus (patogen , responsabil de cele mai multe infectii stafilococice ale
omului)
- epidermidis (comensal, ocazional produce infectii)
- saprophyticus ( poate produce cistite la femei)
2. Streptococcus: unele specii fac parte din flora indigena a orofaringelui, tractului
gastrointestinal, pielii, altele sunt specii patogene, care produc boala la om:
- pyogenes
- faecalis
- agalctiae
- viridans
- pneumoniae ( pneumococul )

Pt studenti - dg de laborator in cazul infectiilor cu coci G + :

- streptococcus
pyogenes,
stafilococcus
pneumococul

aureus

si

Diagnosticul de laborator in infectiile cu STAFILOCOCI

I. Dg. Direct ( bacteriologic ):
1.Recoltare si transport : se tine cont de patologia produsa de stafilococi prin mecanism
de invazivitate si toxinogeneza
- secretii purulente ( foliculite, abcese, celulita, cosuri)
- secretii lichidiene ( punctie sinusala, otica, pleurala, peritoneala)
- exsudat nazo-faringian ( angine, sinuzite)
- sange, urina,secretii vaginale, sputa ( pneumonii,cistite, vaginite,bronho-pneumonii)
Se transporta in maxim 2 h .
2.Examen microscopic : se efectueaza un frotiu direct din prod. patologic, se coloreaza
AM si GRAM si se examineaza la MO:
- coci violeti, sferici, asezati in gramezi ( ciorchine ) sau izolati, necapsulati (exista
totusi si unele tulpini de S. Aureus capsulate),imobili, nesporulati, intra/extracel.
- cel. eucariote
3.Insamantarea + izolarea:
Stafilococii nu sunt pretentiosi, cresc pe medii de cultura obisnuite:
- geloza simpla
- geloza sange
- bulion

In cazul p.p pluribacteriene folosim mediul selectiv CHAPMAN : m. Hiperclorurat

( NaCl 7-10%), inhiba cresterea celorlalte bacterii si stimuleaza cresterea stafilococilor.
4.Identificarea pe baza caracterelor:
a) morfotinctoriale: - coci violeti, sferici, asezati in gramezi ( ciorchine ) sau
izolati, necapsulati,imobili, nesporulati
b) de cultura:
- pe medii cu sange pot prezenta zone de hemoliza sau nu in jurul coloniilor
- colonii de tip S, mari, opace,pigmentate ( auriu S. Aureus; alb S.
Epidermidis; galben citrin S. Saprophyticus )
c) biochimice:
- fermenteaza zaharuri
- catalazo +
- oxidazo - elaboreaza hemolizine ( alfa si beta)
- elaboreaza pigmenti ( alb, auriu, galben )
- coagulazo +
- fibrinolizino +
d) antigenice: nu sunt f. Importante
e) de patogenitate: ne intereseaza sa vedem daca tulpina este patogena sau nu;
- teste ce pun in evidenta f. de invazivitate ai stafilococului ( t. coagulazei,
fibrinolizinei, se repeta testele de la pctul c. )
- cand stafilococul este lizogenizat elaboreaza exotoxine responsabile de:
T.I.A de tip toxic, sdr. de piele oparita.
5. Antibiograma:obligatorie
Stafilococul este rezistent la penicilina( sintetizeaza beta lactamaza care inhiba
penicilina), de aceea se administreaza peniciline de sinteza rezistente la beta lactamaza
AMOXICILINA
AMPICILINA
AUGMENTIN
II. Dg indirect( serologic ): nu se face
Stafilococii stau prea putin in organism sau produc infectii inchistate si de aceea
cantitatea de Ac sintetizata este nesemnificativa.

Diagnosticul de laborator in infectiile cu STREPTOCOCI

I. Dg. Direct ( bacteriologic ):
1.Recoltare si transport : asemeni stafilococilor pot produce o patologie variata: infectii
cutanate ( erizipel, abcese, colectii purulente ), meningite, pneumonii, infectii ORL,
endocardita, scarlatina,etc., iar produsul patologic recoltat difera in functie de boala.

- ne referim strict la Streptococcus pyogenes = streptococul beta hemolitic de gr. A,

responsabil de angina streptococica.
- recoltam secretia purulenta de la nivelul faringelui ( exsudat ),dimineata la prima ora si
inainte ca pacientul sa fi primit antibioterapie.
Se transporta in maxim 2 3 h . Daca se depaseste timpul se poate folosi mediul de
transport STUART (tineti minte soricelul din film!!!! )
2.Examen microscopic : se efectueaza un frotiu direct din prod. patologic, se coloreaza
AM si GRAM si se examineaza la MO:
- coci violeti, ovalari, asezati in lanturi de marimi diferite, necapsulati ( uneori pot
prezenta o capsula, ce exprima o mare virulenta ),imobili, nesporulati, intra/extracel.
- cel eucariote
3.Insamantarea + izolarea:
Spre deosebire de stafilococi, streptococii sunt f. pretentiosi.
- in cazul p.p. monobacteriene se folosesc:
a) mediile agarizate + supliment 5% sg. berbec ( m. solid ) (pt cultura generala : de ce
sg de berbec si nu de epur??? : hematiile de berbec contin o enzima, care inhiba
cresterea speciilor hemolitice de Haemophilus, ale carui colonii pot fi confundate cu cele
ale streptococilor).
b) bulioane nutritive + supliment de glucoza ( m. lichid )
- in cazul p.p pluribacteriene folosim : m. geloza-sg + azida de sodiu + cristal violet,
inhiba cresterea stafilor,strep.viridans, bacili G - si stimuleaza cresterea S. Pyogenes
4.Identificarea pe baza caracterelor:
a) morfotinctoriale: - coci violeti, ovalari, asezati in lanturi de marimi diferite,
necapsulati, imobili, nesporulati.
b) de cultura:
- pe m. geloza - sange pot prezenta zone de hemoliza sau nu in jurul
coloniilor
- colonii de tip S, punctiforme, transparente sau opace pt S pyogenes
- coloniile sunt usor mai mari pt celelalte specii de streptococi
- pot prezenta colonii de tip M, mucoide, filante ( cei cu capsula)
- in medii lichide cresc sub forma de flocoane, care se depun pe pereti sub
forma de fulgi i lasa un sediment pe fundul eprubetei.
c) biochimice:
- fermenteaza cateva zaharuri
- catalazo - oxidazo - elaboreaza hemolizine ( alfa, beta gama): hemoliza partiala, totala, fara
hemoliza
- testul la BACITRACINA: este un test screening de identificare a S. beta
hemolitic gr. A. Se insamanteaza cu colonia ce urmeaza a fi identificata o

placa Petri. Asezam un disc cu bacitracina pe placa, lasam la temostat, iar

a doua zi se face citirea. Daca in jurul discului se formeaza o zona de
inhibitie > 10 mm sigur avem o colonie de S. beta hemolitic gr. A.
d) antigenice: cu ajutorul unor R. de pp in tuburi, de aglutinare pe lama se pot
determina : Ag de grup Lancefield ( carbohidratul C ), Ag M ( se gaseste la
suprafata peretelui bacterian, pe baza lui streptococii sunt impartiti in 65 de tipurideci pot exista 65 de tipuri de Ac anti M), Ag O.
e) de patogenitate: ne intereseaza sa vedem daca tulpina este patogena sau nu;
- teste ce pun in evidenta f. de invazivitate ai stafilococului ( se repeta
testele de la pctul c. )
- cand streptococul este lizogenizat elaboreaza o eritrotoxina responsabila
de aparitia scarlatinei
5. Antibiograma: nu este obligatorie in cazul S. pyogenes, acesta este 90% sensibil
la PENICILINA
- se face doar in cazul recidivelor, care indica instalarea unei rezistente.
II. Dg indirect( serologic ):
1. R. ASLO: pt identificarea titrului Ac antistreptolizina O ( cititi LP-ul cu reactii antigenanticorp)
V.N = 200 U.I
- daca dupa 3 saptamani nu scade val ASLO se repeta tratamentul =>
a) daca tot nu a scazut valoarea ASLO => s-a instalat o r. de hipersensibilitate
b) daca a scazut => vindecare
2. R. de determinare a Ac anti M: nu se det uzual pt ca ei indica doar o protectie de 3-6
luni a pacientului in fata unei infectii cu streptococ de acelasi tip

Diagnosticul de laborator in infectiile cu PNEUMOCOCI

I. Dg direct (dg indirect nu se face)
1. Recoltare si transport:
Streptococcus pneumoniae: produce pneumonie pneumococica sau pn. franca lobara
-se recolteaza : sputa
2. Exm. macro si microscopic:
Macro: sputa ruginie
Micro: se efectueaza frotiu din produs patologic, se coloreaza AM, Gram, ZN si se
examineaza la MO:
-coci G(+), asezati in diplo, inconjurati de o capsula comuna (cps apare doar in
produsul patologic)
-se pot dispune in lanturi sau gramezi

3.Insamantarea + izolarea:
-pretentiosi, cresc pe m. geloza sange cu azida de sodiu si cristal violet + CO2 10%
4. Identificarea pe baza :
a) caracterelor morfotinctoriale:
- coci G(+), asezati in diplo, necapsulati in frotiurile din cultura
-se pot dispune in lanturi sau gramezi
b) caracterelor de cultura:
- cresc sub forma de colonii mici de tip S , de culoare verzuie ( se confunda usor cu
Streptococul Viridans) tulpinile necapsulate
- colonii de tip M tulpinile capsulate
- apare in jurul coloniilor o hemoliza de tip alfa
c) caracterelor biochimice si de patogenitate:
1. testul oxidazei (-)
2. testul catalazei(-)
3. autoliza: dat. elib unor enzime proteolitice lizeaza mediul din jur , dar si pe ei;
4. testul de umflare a capsulei:
- pe o lama: 1pic. ser fiziologic + 1 pic. de Ac anti capsula de pneumococ + 1 pic.
albastru de metilen / la MO se observa capsula mult marita;
Exista trei teste pe care le utilizam pt diferentierea S. Pneumoniae de S. Viridans
5. reactia cu bila: pneumococii se lizeaza in prezenta sarurilor biliare, s.viridans rezista;
6. reactia cu inulina: pneumococul fermenteaza inulina, iar ph-ul solutiei vireaza spre
acid, dar s. Viridans nu fermenteaza inulina;
7. reactia cu optochinul: pneumococul este sensibil la optochin, iar s.viridans nu este
sensibil;
- aceeasi poveste ca si la testul cu bacitracina, doar ca diametrul zonei de inhibitie trebuie
sa fie > 20mm pt a pune dg de S. Pneumoniae
5. Antibiograma: se recomanda deoarece au aparut tulpini rezistente la penicilina

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR IN INFECTIILE CU COCI G ( - )

I. Dg direct
Coci G - : Neisseria meningitides meningococul (M)
Neisseria gonorrhoeae gonococul (G)
1. Recoltare si transport:
M: produce : meningita meningococica sau meningita cerebrospinala epidemica
( transmitere aerogena..localizare in faringeangina..trece in sangemeningita)
- se recolteaza: LCR ( punctie lombara)

G: produce: gonoree(blenoragie) ; la barbati: uretrita gonococica; la femei vaginita

gonococica; la nn: conjunctivita gonococica;
- se recolteaza : secretie uretrala/ vaginala/conjunctivala
Gonococul nu suporta transportul de aceea se recomanda efectuarea frotiului
imediat dupa recoltare!!!
2. Exm. macro si microscopic:
Macro: LCR tulbure (in mod normal lichidul este limpede)
Secretia : galben-verzui
Micro: se efectueaza frotiu din produs patologic, se coloreaza AM, Gram, ZN si se
examineaza la MO:
-coci reniformi dispusi in diplo(fata in fata), G (rosii)
-capsulati/ dispusi intra si extracelular
Exam microscopic are valoare diagnostica pt G (dg se poate opri aici deoarece la MO se
observa PMN ne si coci G( - )dispusi intracelular). Este greu de facut o diferentiere intre
M si G la MO (arata la fel).
3.Insamantarea + izolarea:
M si G sunt pretentiosi, nu cresc pe medii simple si medii lichide.
Se insamanteaza pe m. bogate : m. MULLER-HINTON (m. bogat care sustine cresterea
majoritatii bacteriilor) + sange oparit (tratat la 80-90 grd) +antibiotice (pt selectivitate
distrug ceilalti coci), exp: VANCOMICINA + CO2 10%
4. Identificarea pe baza :
a) caracterelor morfotinctoriale
-coci G -, reniformi, dispusi in diplo,fata in fata (frotiu din cultura)
b)caracterelor de cultura:
- colonii mici, rourate,de tip: S
c) caracterelor biochimice:
- testul oxidazei (+): este valabil pt intregul gen Neisseria si nu se poate face diferenta
intre M si G
- testul de fermentare al zaharurilor: M este glucozo (+) si maltozo(+)
G este doar glucozo (+)
- testul catalazei (-)
5. Antibiograma:
- se recomanda inainte de a incepe tratamentul cu antibiotice
- M: gentamicina/ penicilina
- G: ampicilina/ qinolone/ cefalosporine
II. Dg. Indirect:
-pt M: se face in cazul infectiilor cronice : RFC
- pt G: nu se face ( deoarece G produce o infectie la poarta de intrare si nu determina un
raspuns imun din partea organismului).