SOLUII MODERNE DE ANALIZ

A MICROURMELOR N CHIMIA JUDICIAR

cms. drd. ing. chim. MARIA GEORGETA STOIAN
insp. pr. drd. ing. chim. Galan Elena
I.G.P.R. Institutul de Criminalistic

ABSTRACT
The continuous improvement of equipments and analytical methods in chemistry
field have positive influence on specific criminalistic activities, and allows the experts
and specialists to exceed clasical area, analysing permanently the recent discoveries
and adapt them for forensic chemistry field.
Recent years have seen the development of powerful technologies that have
provided forensic scientists with new analytical capabilities, which were unimaginable
few years ago. Gas chromatography coupled with mass spectrometry (GC-MS), liquid
chromatography with mass spectrometry (LC-MS), inductively coupled plasma mass
spectrometry (ICP-MS), scanning electron microscopy combined with X-ray
fluorescence (SEM-EDS) have become invaluable tools to enable detection and
characterization of minute quantities of analytes in very complex matrices.
In this paper, the remarkable performance and advantages of liquid
chromatography with mass spectrometry (LC-MS) and thermal desorbtion combined
with gas chromatography/mass spectrometry will be presented. These new techniques
can extend the area of forensic expertises regarding to both compound analysis and the
level of detection.
These techniques may solve the identification, quantification and confirmation
problems often encountered in case of volatiles and semivolatiles compounds or in case
of non-volatile, labile and high molecular weight compounds, that cannot be analyzed
by other methods or they have been analyzed with difficulties. They can be applied in
various branches of forensic analyses: toxicology, biological and chemical warfare
agents analysis, arson analysis, dyes, explosives and gunshot residue analysis.
Rezultatul final al muncii unui chimist judiciar, raportul de expertiz
criminalistic, influeneaz ntotdeauna n mod direct destinul unor anumite persoane.
Aceasta este o responsabilitate foarte important, care determin modul de gndire i de
aciune n chimia judiciar, precum i n celelalte domenii ale tiinei criminalistice. De
aceea, metodele aplicate n laboratoarele criminalistice trebuie s asigure un nivel foarte
nalt de ncredere i trebuie s fie supuse unor programe de control al calitii extensive
i riguroase. n acest sens, expertul criminalist trebuie s utilizeze metode tiinifice
adecvate n examinarea cu minuiozitate a faptelor n cauze penale, civile, etc.
Capacitatea spectrometriei de mas de a extrage amprente chimice de la nivel
microscopic al analitului are o valoare inestimabil n aceast examinare a faptelor,
permind identificarea i cuantificarea legal a unui spectru larg de compui.
n ultimii ani, prin evoluia extrem de rapid a tiinei au fost dezvoltate noi
tehnologii, foarte puternice i performante care furnizeaz experilor criminaliti
capabiliti analitice inimaginabile n urm cu civa ani: cromatografia gazoas cu
spectrometrie de mas (GC-MS), cromatografia lichid cuplat cu spectrometrie de
mas (LC-MS), spectrometria de mas cu plasma cuplat inductiv (ICP-MS),
microscopia electronic cu baleiaj. Aceste noi tehnici de analiz se fac utile n special n
analiza unor cantiti infime de analii nglobai n majoritatea cazurilor n matrici
complexe, dificil sau aproape imposibil de soluionat pn acum.
21

n aceast comunicare vom prezenta performanele deosebite i avantajele a

dou tehnici n abordarea cazuisticii ntlnite n laboratoarele de chimie judiciar: lichid
cromatografia cuplat cu spectrometria de mas i desorbia termic aplicat
gazcromatografiei cuplate cu spectrometria de mas. Aceste noi tehnici permit
extinderea spectrului expertizelor criminalistice, att n ceea ce privete compuii
analizai, ct i nivelul pn la care acetia pot fi detectai; prin plusul de sensibilitate pe
care aceste metode l aduc, permit analiza microurmelor, contribuind astfel la mrirea
ncrederii n rezultatele expertizelor criminalistice i la oferirea unor rspunsuri
adecvate i rapide adaptate necesitii procesului de investigare penal.
Lichidcromatografia cuplat cu spectrometria de mas (LC-MS) poate
soluiona probleme de identificare, cuantificare i confirmare n cazul compuilor nonvolatili, a compuilor instabili termic sau a celor foarte polari ori cu mase moleculare
mari, care nu pot fi analizai sau sunt analizai cu dificultate prin alte metode. n cadrul
chimiei judiciare, exist muli compui care prezint una sau mai multe dintre aceste
caracteristici i pentru a cror analiz LC-MS reprezint soluia ideal, i anume
compui din categoria medicamentelor, drogurilor i metaboliilor n fluidele biologice,
agenilor chimici (gaze toxice de lupt) i biologici (bacterii, virusuri, toxine proteice),
din categoria explozivilor, coloranilor din fibrele textile i din materialele scripturale,
din categoria reziduurilor organice rezultate n urma tragerilor cu arme de foc.
Desorbia termic (TD) este o tehnic de extracie n faz gazoas indicat
pentru analiza compuilor volatili i semivolatili n urme (sunt necesare probe de numai
50-100 mg, sau respective 5-10 ul). n expertiza criminalistic desorbia termic poate fi
utilizat cu succes pentru analiza a diverse urme materie, att n stare solid: pulberi
(droguri, cafea, pudr de cacao), fibre textile, fragmente de vopsea, de piele, fragmente
de materiale plastice etc., ct i n stare lichid: solveni, uleiuri, sucuri, ampon etc. sau
sub form de rini, creme, substane grase.
n timpul procesului de desorbie, probele de analizat sunt nclzite sub un
curent de gaz inert (gaz purttor) astfel nct analiii sunt transferai de pe suportul
adsorbant sau din matrice direct n portul de injecie al gazcromatografului i ulterior
spre detector (FID sau MS). Tehnologia de desorbie termic este extrem de versatil,
sensibil i rapid comparativ cu sistemele de extracie n faz lichid. Cele mai
importante avantaje aduse de metoda de desorbie termic sunt: mrirea limitei de
detecie de 1000 ori; eliminarea etapei de preparare a probelor; eliminarea
interferenelor cu solventul de extracie; selectivitatea extraciei compuilor de interes;
creterea randamentului de extracie, desorbia fiind un proces cu o eficien mai mare
de 99%.

22

Produii volatili pot fi

transferai n portul de injecie al GC
fie ntr-o singur etap de desorbie,
fie dup un prealabil proces de
concentrare la un volum ct mai mic
posibil i numai dup aceea
transferai prin coloan, spre analizor.
Concentrarea compuilor desorbii se
poate face fie prin rcirea capilarelor
de conexiune cu azot lichid - un
procedeu costisitor, care poate fi
nsoit de blocarea sistemului n
timpul desorbiei probelor umede, fie,
mai eficient, prin concentrarea
vaporilor pe o trap adsorbant, rcit
electric, urmat apoi de desorbia
acestora prin nclzirea rapid a
trapei n curent invers de gaz purttor.
Astfel, se poate obine un factor de
concentrare de pn la 106.
Aportul deosebit de important adus de aceste dou tehnici n finalizarea ideii de
adevr deriv din profunzimea i acurateea examinrilor probelor n diverse domenii de
expertiz criminalistic:
Toxicologie
n cazul abuzului de medicamente sau a consumului de droguri, n mod
tradiional n laboratoarele de chimie judiciar este utilizat pentru confirmare tehnica
GC-MS. n multe situaii aceast metod necesit o preparare mai laborioas, n care
extracia n faz solid (SPE) i derivatizarea sunt inevitabile. Prin LC-MS, compuii
non-volatili pot fi determinai utiliznd o tehnic de preparare mult mai simpl: extracie
ntr-o singur etap fr hidroliz sau derivatizare, cu o sensibilitate cel puin identic
cu cea a GC-MS-ului. Prin LC-MS (sau LC-MS-MS) se pot analiza majoritatea
drogurilor: cocaina, derivai ai opiului, amfetamine, canabinoizi, halucinogene,
benzodiazepine.
LC-MS face posibil analiza metaboliilor polari ai drogurilor i
medicamentelor, analiz care pn acum reprezenta un exerciiu extrem de dificil prin
utilizarea tehnicii GC-MS, aducnd informaii suplimentare i o interpretare complet a
rezultatelor analitice. n plus, n situaiile n care colectarea i analiza specimenelor
biologice are loc dup cteva ore (zile) dup administrarea drogului, doar metaboliii
acestuia mai pot fi detectai. Recent, Boguzs i colaboratorii au elaborat o metod de
analiz simultan a diacetilmorfinei, morfinei i 6-acetilcodeinei i a metaboliilor lor
(monoacetilmorfin, glucuronidele morfinei, codeina), metod care permite
diferenierea ntre heroina prescris i cea neprescris.
n mod curent pentru detecia drogurilor sunt investigate matricile biologice pe
baz de plasm i urin. n ultimii ani un interes crescnd l prezint analiza fluidelor
orale, o alternativ mai puin invaziv i mai atractiv din punctul de vedere al colectrii
rapide a probelor fr utilizrea unui echipament special. ns, n acest caz, deoarece
volumul fluidelor orale este limitat, este necesar o metoda foarte sensibil de analiz.
Wood i colaboratorii au validat o metod de analiz cantitativ simultan a MDMA,

23

MDA, MDEA, amfetamin, etamfetamin, efedrin, analiz care necesit doar 50 L

plasm sau fluid oral pentru a atinge o limit de detecie LOD de 2 g/L (Fig.1).
n cazul unor instrumente al cror spectrometru de mas deine analizoare de tip
cuadrupol Q i cu msurarea timpului de zbor (TOF), care au posibilitatea realizrii de
fragmentri repetate, precizia determinrilor este foarte mare. n timpul unui analize,
cuadrupolul este setat s transmit iniial toate masele pn cnd ionii ating un anumit
nivel. Instrumentul trece apoi automat n modul MS-MS, n care ionii selectai sunt
fragmentai, iar fragmentele rezultate sunt analizate ulterior de ctre analizorul de tip
TOF (Fig.2).

24

Fig.1 Cromatogramele unor amfetamine n

fluid oral la o concentraie de 5 g/l.
Intensitatea picului este indicat n colul din
stnga sus al fiecrei cromatograme.

Fig.2 (a) Cocaina n modul MS, (b) Ion

specific cu masa 304 al cocainei,
(c)
Spectrul MS al cocainei,
(d)
Spectrul MS MS al cocainei

Pe de alt parte, dei prezint o volatilitate sczut, anumite droguri i

precursorii lor pot fi detectai i n faz de vapori, prin
prelevarea unor probe de aer din apropierea fabricilor de
medicamente sau din containere suspecte. Probele sunt colectate
pe tuburi de adsorbie i analizate prin desorbie termic cuplat
cu GC-MS. Analiza prin TD-GS permite i analiza prin
desorbie termic direct a unor probe "reale", cum ar fi diverse
25

pulberi ridicate de la locul faptei de ctre criminaliti (Fig.3). Ele sunt transferate direct
n tuburile de desorbie i nclzite la temperaturi moderate pentru a evita
descompunerea compuilor de interes.

Fig.3 Desorbia direct a unei pulberi: Amestec de cocain i heroin - impure

Ageni chimici i biologici
Substanele toxice de lupt (SARIN (GB), TABUN (GA), SOMAN (GD), VX,
RVX) sunt compui chimici extrem de toxici, care pot provoca pierderi mari de viei
omeneti ntr-un interval redus de timp. Au fost folosite n mai multe conflicte militare
i ncepnd din anul 1995 i mpotriva populaiei civile de ctre organizaii teroriste.
Agentul neuroleptic sarin (GB) a fost utilizat n atacul terorist din metroul din Tokio,
nanul1995, producnd rnirea grav a mai mult de 5000 de persoane. Toxicitatea lor
impune monitorizarea continu a depozitelor sau a instalaiilor de distrugere a acestora
pentru protecia personalului militar/operaional sau pentru aprarea zonelor civile
mpotriva atacurilor teroriste.
Astfel, n cazul incidentelor chimice este necesar monitorizarea locaiei n
vederea identificrii agentului chimic astfel nct s se poat lua msuri rapide pentru
decontaminarea zonei. Se tie c toxicitatea agenilor neurotoxici de lupt este foarte
mare, chiar la concentraii joase. Limita admis pentru VX de exemplu este de 0,001
gm-3(~ 0.1ppt), limita de expunere n zone publice fiind de 0,0006 gm-3. Aceste
concentraii sunt att de mici nct sistemele analitice convenionale precum GC i GCMS nu le pot detecta cu certitudine. n schimb, tehnica de analiz bazat pe desorbie
termic combinat cu spectrometrie de mas permite analiza substanelor toxice de lupt
n form liber (nederivatizat), la nivel de microurme (sub ppt). Pentru situaii de
securitate se pot utiliza instrumente de monitorizare on-line alctuite dintr-un sistem de
prelevare continu a probelor, conectat la un dispozitiv de desorbie termic cuplat cu
un GC-MS. n acest caz, se folosesc dou trape de desorbie care acioneaz reciproc,
astfel nct prelevarea s se produc pe un canal, iar desorbia i analiza pe cellalt.
Analiza unor probe de aer n vederea punerii n eviden a agenilor chimici de
lupt este uneori dificil de realizat la nivel de microurme datorit prezenei altor vapori
organici (hidrocarburi, solveni). Unul dintre cei mai dificil de analizat din categoria
gazelor toxice de lupt este agentul neurotoxic VX, care are o presiune de vapori
sczut, punct de fierbere ridicat i este foarte reactiv, reacionnd foarte uor cu orice
zon activ de pe traseul parcurs. n mod curent este analizat prin GC-MS, dup
derivatizare la analogul mai stabil "G". ns prin utilizarea desorbiei termice se pot
observa cantiti reduse de VX, de pn la 9 pg. (Fig.4,5).
26

Fig.4 Curba de calibrare pentru VX

ntre 9 pg i 1,5 ng (cu TD)

Fig.5 VX la o concentraie de 9 pg

Pe de alt parte, agenii neuoroleptici pot fii prin analizai i prin LC-MS, care
permite o identificare mai sigur a acestora prin achiziia ionului molecular.

Organizaiile teroriste arat de asemenea un interes deosebit n utilizarea armelor

biologice, deoarece acestea sunt fabricate cu costuri minime, sunt dificil de de
monitorizat i pot produce moartea sau vtmarea unui numr mare de persoane. Pe
lng identificarea viruilor i a bacteriilor, identificarea toxinelor proteice a devenit tot
27

mai important. Prin utilizarea biomarkerilor proteici, toate cele trei clase de ageni de
origine biologic (bacterii, virui, toxine proteice) pot fi detectai prin LC-MS, pe baza
identificrii proteinelor sau peptidelor. Probele sunt supuse ultrasonrii pentru a elibera
celulele proteice, sunt filtrate i apoi sunt injectate ntr-o succesiune de coloane capilare:
o coloan schimbtoare de ioni pentru concentrarea proteinelor, una de enzim
imobilizat pentru digestia proteinelor, o precoloan cu faz invers pentru concentrarea
proteinelor, i o coloan capilar pentru maparea peptidelor. Biomarkerii proteici sunt
detectai ntr-un spectrometru de mas cu trap ionic. Aceasta este o metod rapid i
foarte sensibil de detecie, care permite o vitez de reacie rapid n cazul unui dezastru
biologic.
Analiza produselor de iniiere a incendiilor
n general, decelarea n micromatrice a primerilor care prin specificitate definesc
natura i tipul de produs petrolier utilizat la incendiere reprezint o problem, deoarece
cantitatea de primer care rmne dup producerea incendiului este foarte redus. De
aceea, pentru analiz sunt necesare tehnici foarte sensibile n vederea evidenierii
acestora. Pentru aceasta, se colecteaz probe din reziduurile rmase n urma incendiului
n recipieni de aluminiu sau n pungi speciale de nylon. Pentru prepararea probelor
exist mai multe modaliti:
- se purjeaz recipientul cu un gaz inert i se colecteaz volatilele purjate pe un
material adsorbant solid. Volatilele adsorbite sunt eluate cu un solvent organic (de ex.
sulfur de carbon) sau sunt desorbite termic direct n portul de injecie al GC-MS;
- punga i coninutul ei este uor nclzite i cu ajutorul unei seringi pentru gaze
se msoar un volum care se transfer n tubul de desorbie, pentru a fi analizat direct
prin TD-GC-MS;

Captare: pe Tenax TA, mesh 60/80,

50 mg., 3 mm I.D. GLT
Purjarea tuburilor de desorbie pentru
colectare prob:20mL/min./100C/10
min.
Parametrii de desorbie:
Timp de desorbie: 4 min.
Temperatura de desorbie: 250C
Debit de desorbie: 10 mL/min.
Condiii cromatografice:
Coloan GC: 30 m X 0,75 mm sticl
SPB-1 (grosime film 1,0 um)
Gaz purttor: Heliu 6 mL/min.
Temp. Cuptor: -10 C (5 min.); -10 C
- 250 C (12 C/min.); 250 C (10
min.)
Temp. detector (FID): 250 C

Fig.6 Cromatograma unei haine

mbibate cu petrol

- analiza termic direct : probele ca atare, fibre, lemn, materiale de construcii,

sunt plasate direct n tubul de prelevare, iar volatilele sunt purjate direct n portul de
injecie la GC. Prin acest mod se pot analiza probe cu masa cuprins ntre 1 - 500 mg.
Tehnica este foarte sensibil deoarece proba nu se pierde prin preparare sau n timpul
colectrii, ntreaga cantitate fiind purjat direct n sistemul de injecie.

28

Colorani
n chimia judiciar analiza coloranilor prezint o deosebit importan n
examinarea, mai ales comparativ, a fibrelor textile i a materialelor scripturale. n
general, analiza fibrelor textile implic o serie de analize morfologice prin microscopie
comparativ, microscopie n lumin polarizat, microspectrofotometrie, analize de
compoziie prin spectrometrie FTIR, analiza coloranilor organici prin cromatografie n
strat subire, analiza nuanei de culoare n lumin vizibil i prin absorbie n UV.
Metodele spectroscopice nu sunt suficiente pentru identificarea fr ambiguitate a
coloranilor, deoarece exist colorani care au aceeai culoare, dar au structuri
moleculare diferite, identificabile doar prin LC-MS (Fig. 7).

Fig. 7 Colorani cu aceeai culoare, dar cu structuri moleculare diferite

Pn n prezent, analiza microfibrelor dup nuana de culoare era limitat de
cantitatea redus de colorant impregnat n microfibra textil. Prin reducerea limitei de
detecie LOD, tehnica LC-MS intensific discriminarea fibrelor textile prin compararea
la nivel molecular a coloranilor, astfel nct analiza colorantului s fie realizat pe o
singur fibr.

29

Pe de alt parte, caracterizarea materialelor scripturale constitue un element de

baz n datarea i compararea documentelor pentru stabilirea autenticitii lor.
Materialele scripturale sunt, n general, compuse din colorani, pigmeni, solveni, rini
i alte materiale cu caracteristici speciale. Analiza cernelurilor, spre exemplu, se
limiteaz n mod curent la compararea profilului coloranilor organici. Totui aceasta nu
permite diferenierea ntre cerneluri cu formule similare i nu permite experilor
criminaliti s precizeze de ct timp a fost aplicat cerneala pe un document.
Pentru a diferenia cernelurile este necesar analiza componenilor necolorai ai
acestora i anume: solveni, aditivi, materiale de umplutur. Ei pot fi analizai prin
desorbia termic direct a probelor de hrtie, urmat de analiza chimic a compuilor
volatili desorbii prin gazcromatografie cu spectrometrie de mas. (Fig.8)

Fig.8 Comparaie ntre o cerneal neagr Fig.9 Cromatogramele unui material scriptural (a) la
proaspt (sus) i nvechit (jos), cu albastru timp t = 0, (b) la timpul t =10 zile dup aplicare pe
hrtie martor fr nscrisuri
hrtie. E - etoxietoxietanol, P- 2-fenoxietanol, PEfenoxietoxietanol
Mai mult, vechimea materialelor scripturale, aplicate pe acelai tip de hrtie, cu
acelai material scriptural poate fi investigat cu ajutorul tehnicii LC-MS prin
identificarea cantitativ a componentelor cernelurilor i prin investigarea produilor de
degradare ai acestora (Fig.9)
30

Explozivi
Explozivii sunt compui care au o presiune de vapori sczut, ceea ce complic
colectarea i analiza acestor materiale n faz de vapori.
Probele de explozivi pot consta att n probe de aer prelevate din dispozitive sau
obiecte suspectate c ar transporta explozivi, ct i n particule minuscule ale
compuilor de amorsare a armelor de foc. Desorbia termic este o soluie ideal de
analiz pentru astfel de probe.
Datorit naturii probelor, trapa de concentrare trebuie setat astfel nct compuii
de interes s nu se descompun n timpul procesului analitic. Datorit faptului c
explozivii au puncte de fierbere ridicate i sunt labili termic, se folosesc tuburi de
adsorbie inerte (sticl sau Silco Steel) avnd ca material adsorbant vat de sticl.
Caracteristica acestor tuburi este c elibereaz compuii de interes, fr artefacte sau
alte interferene provenite de la matrice. Compoziia unor microparticule suspectate c
ar proveni de la materialul de amorsare al unei arme de foc poate fi analizat de
asemenea prin desorbie direct dintr-un tub de desorbie tip Silco Steel.
Pe de alt parte, ntruct tipul i originea explozivului sunt dou din cele mai
importante ntrebri n cazul investigrii unui atac cu bomb, analiza explozivilor a
avansat de la faza identificrii materialului exploziv la individualizarea impuritilor de
fabricaie n vederea stabilirii amprentei i a profilului explozivului. Din aceste
semnturi unice ale explozivilor, investigatorii pot identifica productorul i ara de
origine.
Una dintre metodele moderne care faciliteaz astfel de studii o reprezint
lichidcromatografia cuplat cu spectrometria de mas (LC-MS), metod cu ajutorul
creia se pot obine informaii de compoziie pentru toate tipurile de explozivi (Fig.10).
Nitroglicerin (NG)
Dinitrobenzen (DNB)
Dinitrotoluen (DNT)
Trinitrotoluen (TNT)
Trinitrobenzen (TNB)
PETN
RDX
Aminodinitrotoluen (x-A-y,z-DNT)
Dinitronaftalin (DNN)

Fig.10 Lichidcromatograma unui amestec

complex de explozivi
Reziduurile de tragere
Reziduurile de tragere pot fi gsite att pe pielea sau pe hainele persoanei care a
tras, ct i n jurul orificiului de intrare a glonului sau pe alte materiale de la locul faptei
i sunt formate dintr-o varietate de substane organice i anorganice.
Reziduurile de tragere de natur anorganic sunt detectate prin absorbie
atomic, prin spectrometrie de raze X i n special prin microscopie electronic de
baleiaj.
Reziduurile de tragere de natur organic, reprezentate n principal de pulberile
fr fum, pot conine fie numai nitroceluloz, fie combinaii de pulberi, precum:
nitroceluloz cu nitroglicerin sau nitroceluloz cu nitroglicerin i nitroguanidin.
31

Dup un studiu efectuat de FBI, pulberile fr fum moderne mai pot conine ali 23 de
compui care pot fi analizai doar prin LC-MS.
Aadar, perfecionarea continu a metodelor i echipamentelor tehnice din
domeniul chimiei influeneaz n mod pozitiv activitile specifice de criminalistic,
fapt ce permite specialitilor i experilor din acest domeniu s depeasc sfera clasic
prin prelucrarea n mod continuu a noilor descoperiri i adaptarea acestora metodelor i
mijloacelor specifice chimiei judiciare.

Bibliografie
1.
2.
3.
4.
5.

M.J. Boguzs, J. Cromatogr.B. Biomed.Sci. Appl., 748, 3-19,2000.

M. Wood i colaboratorii, J.Anal. Toxicol., 2002.P>A.
DAgustino, C.L.Chenier, J.R. Hancock, J. Chromatogr.A, 950, 149-156, 2002.
M.R.B. Heramb, Forensic Science Communications, 4, 2002.
Joseph A. Crifasi, Michael F. Bruder, Christopher W. Long, and Kimberly Janssen,
Journal of Analytical Toxicology, Volume 30, Number 8, pp.581-592.
6. Gapeev, A., Sigman, M. and Yinon, J. Rapid Comm Mass Spectrom., 2003, 17, 943-948.
7. A.C. Mitchell, I .Tebbet, A.R.Yost, Abstracts of ASMS, 2002

32