RECONOCIMIENTO DE LAS PROTENAS

MATERIALES
- HCl concentrado o acido actico
- Alcohol etlico
- Solucin de CuSO4 al 1%
- NaOH al 20%
- Clara de huevo o leche
- Solucin de albmina al 1-2%
- Tubos de ensayo, gradilla
- Mechero
- Vasos de precipitados
- Pipetas
a) COAGULACIN DE LAS PROTENAS (con HCl)
FUNDAMENTO
Las protenas, debido al gran tamao de sus molculas, forman con el
agua soluciones coloidalesque pueden precipitar formndose cogulos al
ser calentadas a temperaturas superiores a 70 C o al ser tratadas con
soluciones salinas, cidos, alcohol, etc.
La coagulacin de las protenas es un proceso irreversible y se debe a
su desnaturalizacin por los agentes indicados que al actuar sobre la protena
la desordenan por destruccin de susestructuras secundaria y terciaria.
PROTOCOLO
1. Colocar en tres tubos de ensayo una pequea cantidad de clara de
huevo (puede diluirse en un poco de agua para obtener una mezcla espesa)
o 2-3 ml de leche.
2. Calentar uno de los tubos al bao Mara, aadir a otro 2-3
ml de HCl concentrado (o bien 5 gotas de cido actico), y al tercero 2-3
ml de alcohol etlico.
Observar los resultados.

b) REACCIONES COLOREADAS ESPECFICAS (BIURET)

FUNDAMENTO
Entre las reacciones coloreadas especficas de las protenas (que sirven para su
identificacin), destaca la reaccin del Biuret. Esta reaccin la producen
los pptidos y las protenas, pero no los aminocidos, ya que se debe a la
presencia del enlace peptdico CO-NH que se destruye al liberarse los
aminocidos. El reactivo del Biuret lleva CuSO 4 [sulfato de Cobre (II)] y
NaOH (sosa).
Cuando una protena se pone en contacto con un medio fuertemente alcalino
(lcali concentrado), se forma una sustancia compleja denominada biuret , de
frmula:

la cual, en contacto con una solucin de CuSO 4 diluda, da una

coloracin violeta caracterstica, cuya intensidad de color depende de la
concentracin de protenas.
PROTOCOLO
1. Colocar en un tubo de ensayo 3 ml de solucin
de albmina al1-2%.
2. Aadir 3 ml de solucin de NaOH al 20%.
3. Aadir 4-5 gotas de solucin de CuSO4 al 1%.
4. Agitar para que se mezcle bien. Observar los
resultados.
CUESTIONES
1. Cmo se manifiesta la desnaturalizacin de la clara de huevo?
2. Cul de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de desnaturalizacin?
3. Cmo podramos saber que una sustancia desconocida es una protena?
4. Qu coloracin da la reaccin del Biuret?
5. Una protena coagulada podra dar la reaccin del Biuret?
6. Si se realiza la reaccin del Biuret sobre un aminocido como la Glicina es
positiva o negativa? Por qu?
c) DESNATURALIZACIN DE LA CATALASA (enzima)

Reconocimiento de Protenas
Coagulacin de Protenas
Las protenas, debido al gran tamao de sus molculas, forman con el agua soluciones
coloidales. Estas soluciones pueden precipitar con formacin de cogulos al ser calentadas a
temperaturas superiores a los 70C o al ser tratadas con soluciones salinas, cidos, alcohol,
entre otras. La coagulacin de las protenas es un proceso irreversible y se debe a
su desnaturalizacin por los agentes indicados, que al actuar sobre la protena la
desordenan por la destruccin de su estructura secundaria, terciaria y cuaternaria.

Tcnica: Para ver la coagulacin de las protenas se puede utilizar clara de huevo, para
conseguir ms volumen puede prepararse para toda la clase una dilucin de clara de huevo
en agua, de forma que quede una mezcla an espesa.
1. Colocar en un tubo de ensayo una pequea cantidad de clara de huevo.
2. Aadir 5 gotas de cido actico y calentar el tubo a la llama del mechero.

Reacciones coloreadas
1. Reaccin xantoproteica: Es debida a la formacin de un compuesto aromtico nitrado de
color amarillo, cuando las protenas son tratadas con cido ntrico concentrado. La prueba da
resultado positivo en aquellas protenas con aminocidos portadores de grupos bencnicos,

especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un

lcali vira a un color anaranjado oscuro.

Tcnica:
1. Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3ml de solucin problema (clara de huevo).
2. Aadir 1ml de HNO3 concentrado.
3. Calentar al bao mara a 100C.
4. Enfriar en bao fra.
5. Aadir gota a gota una disolucin de sosa al 40%.
2. Reaccin del biuret: La producen los pptidos y las protenas, pero no los aminocidos,
ya que se debe a la presencia del enlace peptdico (-CO-NH-) que se destruye al liberarse los
aminocidos. Cuando una protena se pone en contacto con un lcali concentrado, se forma
una sustancia compleja denominada biuret, de frmula:

que en contacto con una solucin de sulfato cprico diluida, da una coloracin violeta
caracterstica.
Tcnica:
1. Tomar un tubo de ensayo y poner unos 3ml de albmina de huevo.
2. Aadir 2ml de solucin de hidrxido sdico al 20%.
3. A continuacin 4 5 gotas de solucin de sulfato cprico diluida al 1%.

4. Debe aparecer una coloracin violeta-roscea caracterstica.

3. Reaccin de los aminocidos azufrados: Se pone de manifiesto por la formacin de un

precipitado negruzco de sulfuro de plomo. Se basa esta reaccin en la separacin mediante
un lcali, del azufre de los aminocidos, el cual al reaccionar con una solucin de acetato de
plomo, forma el sulfuro de plomo.
Tcnica:
1. Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3ml de albmina de huevo (clara de huevo).
2. Aadir 2ml de solucin de hidrxido sdico al 20%.
3. Aadir 10 gotas de solucin de acetato de plomo al 5%.
4. Calentar el tubo hasta ebullicin.
5. Si se forma un precipitado de color negruzco nos indica que se ha formado sulfuro de
plomo, utilizndose el azufre de los aminocidos, lo que nos sirve para identificar
protenas que tienen en su composicin aminocidos con azufre.