als Ms de Parasol 182, VOL. 2,105.4. wp 5 (ULTIVO “IN VITRO” DE HYMENOLEPIS NaWA (CESTODA) INFLUENCIA EN SUI DESARROLLO DE LOS NIVELES HORMONALES DEL. SUERO Y EXTRACTO HEPATICO IMPLEADOS EN EL CULTIVO sou Cuero, A; Suamez Cennitto, LE. Curis Benirez, D. C.; Gamasno Cone, F. Deprments e Paratologie, Pacullaé de Parmacla Hyman see is clas im offerent mecla. (Bivna-topidn “ee wre sites the best evolstion tb {Qe sn6OI with vrum and ‘sto ip eed With serum and Iver extract trem easttnd soars» ui 1008 Mainendo wllsands nuevos exacts bes ‘Selanne ae nines muchos: caredoe normbles tatadoe ‘an epost de eter.en Jos medion que contlenen auerts 7 seats bictigeas pectteni 6 Shumate noemaies. Sin embargo, et geal e erg eh Scum ateioe con extenctar Deane poses de tines Se Palabras Clave: syrcnotete tt ag“ wo INTRODUCTION I problema de 1a influencla de as hormonas sera sre 1 desarrollo de los parésitos, tanto helmsntzs coma prolnocs, fs un tema que en Ios tims acs ha peceupado sls parse sitologos como postbie explcadi, ences ens den espec- fielded parisito-hospedador o de Ia mayor sueptbldad que un sexo u otro de un hospedader deteminado presata frente 8 un parasitisme. i Ia bibliogtiacapulada hemos encntrat hastantes trabajos que indican el efecto 4 vse postive 7 2 ‘veces negative de Ias hormonss sertales street desneralio. vivo" de elertos parasitos, y sobre in suscepti de fs nos pedacores at parasitism. ‘AboIS y CuawoLen (1944), ras infest exeriantalmente & ‘un misme nimero de ratones mathe y hembra con igual mi- mero de elstcercoides de H. dinate, encuentran Un mayer numero de Yermes aduitos én lar ratones mache, EI mismo ‘Anois (1948), tratando ratones de ambos sexes eon btrmonas Sexuates masculinas, determina que estas aumentan el ered ‘lento de H, diminuta, Por ots lado, ablene que el nimezo de Inuevos del pavasito que apareemn en hes, era menor eh rates castradas que en ralas notmales ‘etgo. Resitando, que al fadministear testosterona a esas rtas macho casas, mie mero de huevos en heces vole al alr normal, igaalts con lusiones legan Beck y Cuanaen (100) infetand rtanes ma- tho y hembra con un solo elempar de H. diiauta Howwra (1635) observa que los ratones temara sn ms reentes & e Infestacion eon H. ana alguns das despite cl pare Bs ete ‘sentido, Baruanorn y Lawcwe-Fosakn (172), Sete y «2 (4972), al tratar ratones de ambos sxas con naronds senile rascuiinas, determinan gue el ninezo de vees de H. nana faumenta; sin embargo, al tater lo tones con estrgens, este mimero aismins, Resultados simares encuentran Onsavasts y Sasamoro (1988) on Hetinomerus msltiioowlarig; Fnartny eo). (912) con E. gra sulon Seber (869, 1968) con £. patagonicus; Comsia y col (088) con 7, tcenformis y CanPas. (1939) con Cleticerour crass, Sin embargo, BScK (1987) encuentra que tanto los raloaes muchas smo lo¢ eonesos machos, son mis reiatentes 2 infescion perimental con la tase Intvarin de Taenta rmuiees, que las hembras. Con Schistosoma mansoni, Bere (0883, 105, Bessouurr (1087), Lemans (1063), Sexces (1972) ¥ Captsrs you. (30, 1972), indlcan que las hormonas sexuales nan un ecto eet, Rirenson (1580), Mascand y Gurvana (1077), Mascan6 y col (aMtH, setalen que los machos son més susceptibles aa intes- ‘avon eon T.pvaey que los machos eastrados son menos sis- cepible in infetseion que los machos intactos. Sire culo“ vitro” ae belmintos parasites entre ottos, Comuute (1865) 20 dmnuta, Sita Hopkiw (1967) com H. nana, Su (1085, 19%) con B. gramulosue y Osvitn Canmizto ¥ col (088) con T.mdatigenarconsiguen el cultivo “in vitro” de estos emits, ‘si como el efecto del sexo del nospedador 0 el efecto det teataminto con normonas sexuates del mismo sobre el desarrollo in io" de telnintos pardsttos he sido estudiado por nume~ rows autres, no arueze igual con el efecto de las hotmonas serait ste heiintos cultivados “in vitro". Bn ete sentido ‘abe menconare! empleo de mlerecristales de Vestosterona en medi de eltbo para H. nana realizado por Beswrzex (1900, 1983 MATERIAL ¥ METODOS Se parte de etleercoldes de H. nana, oblenidos tens intes- ‘asin de Trbaim castaneaum. Liverados los elsticercoides, sor sometéos a cferentes acclones enaimatiens con soluelén de pepsina y seluelen desenvaginante (Tripsina, Pancreatina, Bills 4 cane), Guru y 0, (1978), Consequiéa ln desenvaginacién, los esticereoides fueron. enrages metlos de eultivos gue se detallan en el evadro adjnte,— Tratamiento de los animales donantes de sueros. ‘Se prepararon tres lotes de conejos machos de 9 Kg. de peto eada Uno; al primero se le dejo en condlelones normale, Al segundo lote se le sometio @ orguidectomia y al tervero a tosis de testosterone en forma de Testowiron 250 mg Deporte fe inyecclones semanales, siendo las dosis aaministredas de 25 ya/et. de peso. Cada tres dias los eonelos eran sometidos a fextraceion de sangre por canulacién do Ins venas marginsles Ge las orejas, con sistema Venojet sin anticoagulante, De esta forma se obluvieron log siguientes tipos de sueros: Suero pro- cedente dle conejo macho formal, suero procedente de conelo macho tratado con testasterona, sero procedente de conto ‘macho easteado, ‘Los sueres, wna vex preparades y fitrados, serén conserva~ doe a —15°C hasta Bu uizacion. = Preparacion de los diferentes extractos epatieos e prepararon tres lotes de ratas (Wistar) macho de 350 gr. de peso; el primer lote se deJo en condiciones normales, et se frundo tue sometice a orquidectomia y al tercero se le adminis frazon inyecciones alternas (un dia si, otro no) de testosterona, n forma de Testosviron @ 28 mg, (Proplonato de Testosterona}, slendo las dosis administradas ce 25 je/et, de peso. ‘Transourtidos tres meses desde que comendo el tratamiento, tog tres Totes fueron sacriNeados, obteniendose ademas de 108 testiculos y vesieulas seminales que fueron pesados por lots, Jos higados, que ievaimente Tueron pesados por lotes y ultra congelados inmedintamente a 80°C hasta su utllizacion para a preparnelon le Ios extractor (GoevaRA y €OL, 1978), De esta orm se prepararon tes tipos de extractos hepaticos: Bxtracto hepitico ée Tata normal, extracto hepatica de rata tratada con testosterons, extracto hepatico de rata eastrada, RESULTADOS — Medio de euitivo Sinns-Hopkin (1): en este medio, 1a fevoluclon de lot vermes fue muy semejante a la deserita por Sista-Hormin (1961). Desde ef 2° al 4* dia de eultive, aparece Dandeado, Del 4° al 7+ dis, segmentacion, Bel 7° al 10° dla, on- costeras que no lleva a huevo, = Medio de cultivo Sinha-Hopkin (21): 10s resultados ob tenidos son salisfactorios, Ia segmentacidn ocurre del 6° al &° ia y oncosferas en e interior de los anillos entee el 11+ y 16 Gia. Bn este medio el erecimiento sleanzado es inferor al logrado fen 1 medio Sinha-Hopkin (1), pero la actividad mostrada a 10 largo de toda la evolueién fue mucho mayor — Medio de cultivo Sinha-Hopkin (11): ex los medios oot sero y extracto hepatico de animales castrados, el desarrollo fue negative, Bn tan solo un caso se loge un bandendo acisedo ‘a partir del 5° dia, pero nunca lleg® a conseguiree segmentacion fen los vermee, — Medio de cultivo CMRE=1066 Modifcady (1): e medio (OMRE-1065 Moditcado més precipltaciones de exteacto hepatice normal, permite tna evolucién de los vermes que puiede consl- erarse buena, Los vermes se seementaron a partie del 4° dia de cultivo, lograndose anilios sexuaimente madures a pactir de! 8° dia en adelante — Medio de eultivo OMRL-1006 Modifteado (11): cuando se luz este medio mAs precipitaciones de extracto hepatica pro- cedente de rata macho tratada con testosterona, el bande s6 prolongo desde! 6° al 9° dis. A partir de este dla aparece sex~ Imentacion, permanceiendo en este estadio con inlelos de gent tales haste el dia 22° en que se desecnd al eultivo, = Medio CMRL-1086 Modineado (111): en este medio lon vermes no evoluctonan sin aleanzar sigulera el estado de bandeo. — Medio CMRL-1086 Modineado (1¥): 1a evolueton en este medio es semejante a la sufrida en el medio CMRE-1066 (V), los vermes no Hiegan n segmentarse — Medio CMRL-1088 Modineado (WV): euando se uli et medio CMRL-1086 Modiieado més suero de conefo tratado con testosterona en lugar de suero bovino fetal, tos vermes no 5¢ Aesarrolian, tan solo logran un Bandeo mas’ o menos marcado sobre el 5+ dia de cultivo — Medio CMRL-1086 Mosineado (VI): con este medio, 1os vermes se segmentan a partir del 6 ia de cultive, pero no evo: Iueionan masopens = 9 8 uotmiosen uoo oper, = 5, :YOmION = A sofoto ap auong =O “mes ap opEaTY op ODEN = UE . * Boe + wwe s+ + mp uxdon-wuas " . . Fes + an umon-rans onus os WWE OF © sag 9p s9608| ¥ SOpeLE 4 SL =H © EopEENTE SeHO;ENEDH sees op eau 0 ier op connaon HT 28TH eNO aeTD FEI GENK aS os 995 Os seI-TANO som, 1m ft SRENOAINODDISCUSION ‘una ver estudiados oiterentes medios de cultivo para Hnana (Guevana y col, 1978), decidimos utilizar para este estudio Tos Imedios de cultiva Sinna-Hopkin y CMRL-1066 Modifieado. Bt liilzar este altime medio fue con la Idea de comprobar 10s re- sultades obsenidos en los cultivos con el medio Siwta-Torem (198%), al objeto ee estudiar los efectos de los diferentes sueros por un lado y de los diferentes extractos hepatieos por otro, a pesar de que la evolseion mostrada por los vermes en este medio tho era la idonea (Guevara y e01, 1978). Bn el medio descrito por Sinha-Hopkin 10s vermes eran eapaces de mantener un crect~ lento ¥ evolueldn que pedemos considerar optimos. Los re~ Sultados estan muy eereanos @ los obtenidos por Sinha opin, Sin embargo, los medios que contenian suero y extracto hepa tico procecente de animales castrados, eran incapaces de hacer fvolucionar los eisticersoides desenvaginados a més del estadio fae bandeado Fueron sorprendentes los resultados obtentdos utilizando en 1 medio de cultivo suero y extracto hepitico provedente de fnimales lnyeetedes con Proplonato de testosterona, en estos tmedios el creeimienta mosirado fue muy inferior al del medio formal y la evolucion mas lenta. Comprobades estos resultados, esolvimos preparar un medio CMRL-1006 Moditeado por Sar (1956, 1914) y Osuwe Cansuuco y col. (1978). Como se ve en re~ Sultados Ia evoleion fue postiva cuando fue suptementado eon fxtracto hepatica normal, Cuando se utilizd extracto hepatica procedente de animal Ineculado con Propionato de testosterona, Te evolucién de #. nana alcanca estadios superiores a In seg tmentaeion (desarrollo de anillos sexualmente maduros). Sin binbargo, enando se suplementé con extracto hepAtico de animal feastrade, los vermes no evolucionaron. Bsta experiencia nos permitié estidiar et efecto de diferentes ILE. independientemen- te de los sueros de conejo en sus tres varlantes. ‘Con esta tama idea, volvimos a preparar el medio CRIL- 100g Modineado, sustituyendo el SBF, por suero de conejo en sus tres vatlantes, Au! apreclamos en Jos resultados un efecto ontrario al descrito anteriormente, ya que aquellos medios que Hlevaron suero de conejo eastrad dieron los mejores resultados. Iegando ineliso ¢ inielos de segmentacion Por et momento, Ia interpretacion de estos resultados es ited y sélo permiten aventurar que 10s comportamientas ob servados en H. nana en nuestras experiencias, quiza no sean ex- Clusivamente debides « las hormonas esteroldes, sino mis bien ‘cambios hormonales sufrides por los animales donantes tras Jas alteractones fisiologieas a que fueron sometides, Posiblemen= te los efectos observadios se deban a los niveles de FSH y LH ‘ipofisarias del hospedador, REFERENCIAS The out it taper puch Smale Doral Of catty 5: Se som, 6.1, unas, & © 140s oe itis eect i apni of Parag. a8 ‘Sn ne ran of ery Rc wo ets Teueneh of oraitomy on tre parsaams o¢ mice by Mimenotsts ‘eters af Hymerotei tina Iy With Faas With spelt rtee ‘vc, (HSN —tecte of exsetion tn malo mee on Schima mat ton ramaton Re! Soiy of Prana! Medi ana ype, "cinta: Joural of Paratotogy #6 Ie Sec, 2sapye tn ‘of H. nana (Abstract) Journal of Paresttology, 48 (2. Sect, 2: $7 cos, NCH. 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