Prof. dr. sc.

Sanda Vladimir-Kneevi :

Izolacija saponina
SEMINAR 5

Izolacija escina

Sanda Vladimir-Kneevi : IBPP

Sjemenke divljeg kestena sadravaju smjesu

saponina iz koje se mogu odijeliti dvije frakcije:
1. escin (hemoliti ni u inak)
2. prosapogenin (nema hemoliti no djelovanje)

Escin
Postoje dvije forme ( i ) koje se razlikuju prema to ki taljenja,
specifi noj rotaciji, hemoliti nom indeksu i topljivosti u vodi
-escin je djelotvoran i nalazi se u fitopreparatima
Bioloki u inci: protuupalni,
antiedematozni, venotoni ni

Sanda Vladimir-Kneevi : IBPP

Escin - smjesa triterpenskih saponina

C21- tiglinska ili angeli na-kiselina

C22 - octena kiselina

Aglikoni derivati protoescigenina

glukoza + (glukuronska kiselina + ksiloza)

Sanda Vladimir-Kneevi : IBPP

Izolacija escina iz
sjemenki divljeg kestena
(Hippocastani semen)

PRINCIP
Droga se deoleira predekstrakcijom.
Ekstrakcija se provodi metanolom.
Ukoncentrirani se ekstrakt zakiseli, pri emu se istaloe kiseli
saponinski glikozidi.
Istaloena smjesa saponina pro isti se prekristalizacijom etanolom.
Sanda Vladimir-Kneevi : IBPP

TLC escina
Nepokretna faza: Kieselgel 60 F254
Pokretna faza: kloroform-metanol-voda (64:50:10, V/V/V)
Reagens za detekciju: antimonov (III) klorid

Hippocastani
semen
escin
Sanda Vladimir-Kneevi : IBPP

Hippocastani semen
(150 g grubo samljevene droge)
Droga se deoleira 24 sata u Soxhlet-aparaturi petroleterom
Ostatk droge osui se i macerira tri dana s 750 mL 60 %-tnog
metanola uz esto mijeanje
Metanolni ekstrakt ukoncentrira se u rotavaporu na volumen
oko 150 mL (reguliranjem vakuuma sprije ava se pjenjenje)

Ukoncentrirani
metanolni ekstrakt
Dodatkom 1 M sumporne kiseline podesi se pH na 1,5-2 i
paljivo kratko kuha (nastaje talog )
Ostavi se preko no i pri 4 C
Talog se odsie, a ostatak ispere hladnim 40%-tnim etanolom

sirovi escin

Sanda Vladimir-Kneevi : IBPP

Talog sirovog escina otopi se u 20 mL etanola, doda se 30

mL vode i ostavi preko no i na 4 C (prekristalizacija*)
Nastali kristali se odsiu, isperu hladnim 40%-tnim etanolom i
osue u vakuum-eksikatoru
U slu aju da se kristali tale uz pougljenjivanje, ponovo se
prekristaliziraju*

Kristali escina
(oko 1 g)

Sanda Vladimir-Kneevi : IBPP

Potvrda identiteta i ispitivanje isto e

To ka taljenja (235 C)
Tankoslojna kromatografija
IR spektar
(Usporedi se dobiveni spektar s referentnim spektrom escina)

IR spektar escina
(2 mg/200 mg KBr)

Sanda Vladimir-Kneevi : IBPP