Szakmai Gyakorlat

Srajner Pter Ferenc (IUVE92)

Nyri szakmai gyakorlatomat az Orszgos Epidemiolgiai Kzpont

(OEK), Mikolgia rszlegn tltttem el, ahol 6 hetet, jlius 27-tl
augusztus 7-ig voltam. A hat ht alatt azonban tbbszr voltam a
Tptalajkonyhn is, gy

az

ott dolgozk

munkjba

is

betekintst

nyerhettem.
Az OEK egy plet egyttes, amely Budapest IX. kerltet Gyli t 2-6
cmen helyezkedik el. Az intzmnyben a Mikolgia osztlynak egy labor
ad helyet az E. plet els emeletn. Az osztly fleg klnbz orvosi
diagnosztikai vizsglatokkal foglalkozik, de azok mellett mg rengeteg
egyb dologgal is dolgoznak.
Az orvosi diagnosztikai vizsglatokhoz, a betegtl val mintk nagyon sok
formban jhetnek. Pldul lgzszervi vladkok, vizelet s peritonelis
folyadk, emsztszervi vladkok, genitlis vladkok, idegrendszeri
mintk hemokultra, dermatolgiai mintk, kenetek, szvettani metszet s
vr, vrsav. A kapott mintbl tenyszeteket ksztenek, majd ezek s az
gy nyert mintk vizsglatval hatrozzk meg az egyes gombkat.

Candida albicans PLT tptalajon

A klnbz tenyszeteket majd mikroszkpos vizsglatoknak vetik al s

klnbz

jellegzetessgeket

keresnek
2

(klamidospra

kpzs,

pseudomicliumok, a sprk alakja). A hagyomnyos mikroszkp mellett

sztere mikroszkpot is hasznlnak a gombatelepek felleti vizsglatra. A
klnbz mikroszkpok mellett a vizsglatokhoz hasznlnak egyb,
specilis tptalajokat, melyek a bennk lv klnleges anyagok miatt
segtenek a gombk felismersben. Ilyen pldul a ChromAgar, amely a
klnbz Albicans fajok felismersben segt. Az ilyen agaron tenysz
telepek

klnbz

sznt

produklnak,

gy

knnytve

meg

fajok

differencilst.

ChromAgar

Ha a mikroszkpos s ChromAgaros vizsglat eredmnytelenl vgzdik,

akkor klnbz a gombk vizsglatt klnbz kit-ekkel folytatjk. Itt
rendszerint az gynevezett Auxacolor kiteket hasznljk. Ezek a kitek a
gombk anyagcsere folyamataira plnek s gy tudjk meghatrozni az
eredmnyt. Az Auxacolor eredmnyt egy kd adja, amit aztn egy
adatbzissal egyeztetve megtudhatjuk, hogy mely gombrl van sz.
Az azonostson kvl, rezisztencia vizsglatot is vgeznek az
osztlyon. Ilyen mdszerek pldul a korongteszt s az E-teszt. Ezek sorn
antimikotikumot juttatnak a tenyszetbe, s a tenyszet antimikotikumra
3

val reaglsbl tudjk megllaptani az adott gomba faj rezisztencijt

az adott szerre. Minl jobban szegnyedik a tenyszet az anyag hatsra,
a gomba annl kevsb rezisztens az adott szerrel szemben.

E-test

Korongteszt

Korongteszt alkalmval, az elrt inkubls utn kapott krk tmrjnek

leolvassa kapunk adatot a rezisztencirl. Mg az E-teszt folyamn, a
tesztcsk tartalmaz egy sklt, melyen az adott antimikotikum helybeni
koncentrcijt tntetik fel. Azt a helyet megkeresve, ahol mr nem n
gomba s ott leolvasva a koncentrcit, kaphatjuk meg az eredmnyt s
hatrozhatjuk meg a gomba ellenllsgt. A rezisztencia mrtke fontos
adat az orvosoknak, hogy a megfelel gygyszert s a megfelel
mennyisgben

tudjk

felrni

betegeknek.

legfontosabb

antimikotikumok: amphotericin B, voriconazol, fluconazol, itraconazol,

ketoconazol, miconazol, nystatin, econazol, clotrimazol.
Az osztlyon szerolgiai vizsglatokat is vgeznek. A szerolgia
vizsglatok vgzshez hasznlt mdszerek az immundiffzi, Counter
(ellenram) immunelektroforzis (CIE), ELISA, immunfluoreszcencia, latex
agglutinci. Az osztlyon leggyakrabban hasznlt mdszer az ellenram
immunoelektroforzis. A mdszer alapja az a jelensg, hogy az antignek,
amennyiben az izoelektromos pontjuk alacsonyabb, mint a puffer pH-ja, az
and fel, mg az antitestek az endoozmzis rvn a katd fel ramlanak.
A CIE elnye, hogy gyors, gazdasgos s rzkeny. Htrnya viszont, hogy
4

mivel a komponensek nem a koncentrci-gradiensknek megfelelen

ramlanak, precipitci csak akkor kpzdik, ha az antign s az antitest
egyenl mennyisgben van a lyukak kztti trsgben. Szekunder
precipittumok

felhalmozdsra

rvid

futtatsi

id

miatt

nincs

lehetsg. Az antitestekkel egy irnyban raml antignek nem tudnak

precipitcit

adni.

vizsglat

rtkelse

sorn

megvizsgljuk

trgylemezt. Az antign s a szrum kztt megjelen csk egyrtelm

pozitv eredmnyt jelent. A CIE rtkelse nagyban fgg a reakci
krlmnyeitl, ezrt a laboratriumban bels standardizls az egyik
legfontosabb teend.

Festett, pozitv CIE lemez

A CIE rtkelse nagyban fgg a reakci krlmnyeitl, ezrt a

laboratriumban bels standardizls az egyik legfontosabb teend.
A labor rendelkezik egy mintavteli szolgltatssal is, gy gyakran
jrnak oda betegek, hogy mintt vegyenek tlk (a legtbbszr a krm
tjkrl). Ilyenkor ltalban a dermatofiton gombk jelenltt vizsgljk.
Az gy kapott mintt feldolgozzk. Egy rszt elteszik tenysztsre, mg a
msik

rszbl

egy

kliumhidroxidos

kenetet

ksztenek.

Ezt

mikroszkppal megvizsglva tudjk megersteni, hogy a beteg tnyleg

fertztt-e valamely gombval (megtallhat-e a gombafonal a mintban,
vagy sem). Majd az eltett tenyszet inkubcija utn, a kifejldtt

mintbl s annak vizsglatbl tudnak pontos informcit az adott

gombrl.

Onychomycosis, Krmgomba

laborban

vgeznek

mg

klnbz

krnyezethignis

vizsglatokat. Ezek sorn mintt az elrt helyen a kltri s beltri

levegbl, az ott tallhat trgyakrl, felletekrl s vizsgljk azok
gombaszennyezettsgt.
szemikvantitatv

vizsglatok

mdszerekkel

kvalitatv,

trtnnek.

kvantitatv

mintk

klnbz

lakterekbl, zemi s ipari krnyezetbl, krhzakbl, frdkbl s egyb

helyekrl szrmaznak. A vizsglatok sorn informcit kaphatunk az adott
hely gombaszennyezettsgnek mrtkrl.

Rudas frd, folyos

Rudas frd, kupola

Persze a krnyezetnkben mindenhl megtallhatak a gombk, gy egy

adott helyet csak akkor lehet gombaszennyezettnek minsteni, ha a
beltri leveg sprakoncentrcija jval meghaladja a kltri leveg
sprakoncentrcijt.

Az osztlyon egyb tevkenysgeket is vgeznek. Egyik feladatuk

pldul egyes patogn gombkat tartalmaz trzsgyjtemny fenntartsa.
Ms

feladatok,

pldul

felletek

penszllsgnak

vizsglata.

penszllsg vizsglata fontos lehet az ptszetben, azon bell is a

gyorspts hzak gipszkarton bortsban. Ugyanis a gipszkarton
rendkvl

knnyen

felletkialaktsa,

penszedik,

amelyen

nem

ezrt

fontos

tudnak

lenne

megtelepedni

egy
a

olyan

klnbz

penszgombk.
Az osztly egyb feladatai kz tartoznak mg egyes ritka mikzisok
vizsglata,

diagnosztikja,

valamit

az

oktats

tovbbkpzs

akkreditcis minstsek vizsglata s szakmai felgyelet.

A szakmai gyakorlat egy idejt az intzmny tptalajkonyhjn
tltttem el, gy oda is kaptam egy kis betekintst.
A

tptalajkonyha

feladata,

hogy

elksztse

legklnflbb

tptalajokat, melyre az intzmny osztlyainak szksgk lehet. Vannak

olyan tptalajok, melyeket tbb szz literes nagysgrendben ksztenek,
de egyes klnleges tptalajok elksztse rengeteg idt s odafigyelst
ignyel, ezeket a tptalajokat kisebb mennyisgben s ritkbban ksztik
el, mint trsaikat. A konyha manapsg csak az OEK szmra szolgltat
tptalajokat, m rgebben az egsz orszg terletre szlltottk a
termkeiket.
Az osztly tbb helysgbl ll. Az egyik legfontosabb a mregszoba, ahol
tallhatak azok a legklnflbb vegyszerek s egyb anyagok, melyek a
tptalajok kikevershez szksgesek. Minden egyes tptalajhoz tartozik
egy megfelel recept, ami alapjn elkszthet az adott tptalaj. Msik
helyisg a konyha ahol az agart fzik. A fzs utn az agart kintik, s
bekerl a sterilizlba. Onnan a tptalajt tviszik a steril szobba, ahol azt
kintik a megfelel formba, s a csomagoljk ket. Ezek utn a
tptalajokat elszlltjk a megfelel helykre.
Hat
intzmny

hetes

szakmai

mkdsrl

gyakorlatom
az

ott

sorn

dolgoz

sokat

tanulhattam

az

emberek

munkjrl

feladataikrl. Remlem, hogy az ott szerzett tapasztalatok hasznosak

lesznek ksbbi tanulmnyaim, majd a munkavllalsom sorn.
7

Legfontosabb tptalajok
Sabouraud-cycloheximide-chloramphenicolagar
glkz
20,0 g
pepton
10,0 g
agar-agar
20,0 g
chloramphenicol
40,0 mg
cycloheximide (actidion)
0,5 g
deszt. vz
1000 ml
Az antibiotikumokat 5 ml alkoholban oldva
csak kzvetlen lefejts eltt adagoljuk a
tptalajhoz.
Sterilezs: 120C-on, 10 perc, pH=6,6
Maltakivonat-agar
maltakivonat
30,0 g
pepton
5,0 g
agar-agar
15,0 g
Sterilezs: 121C-on, 10 perc, pH=5,6

Sabouraud-dextrz (glkz)-agar SDA

glkz
pepton
10,0 g
agar-agar
20,0 g
deszt. vz
1000 ml
Sterilezs: 120C-on, 10 perc, pH=5,6

Kukoricaliszt-agar
kukoricaliszt
40,0 g
agar-agar
20,0 g
Tween 80
10 ml
deszt. vz
1000 ml
Sterilezs: 121C-on, 15 perc

Dextrz-pepton-agar DPA
glkz
10,0 g
pepton
20,0 g
NaCl
5,0 g
agar-agar
15,0 g
deszt. vz
1000 ml
Sterilezs: 120C-on, 10 perc, pH=7

Burgonya-glkz-agar
burgonyakivonat 200 g burgonybl
glkz
20,0 g
agar-agar
15,0 g
deszt. vz
1000 ml
Sterilezs: 110C-on, 15 perc, pH=5,7

Csillag-fle melaszos-agar
melasz (cukorgyri)
100,0 g
KH2PO4
5,0 g
MgSO4.7H2O
2,0 g
CaHPO4.2H2O
0,5 g
(NH4)2PO4
0,5 g
agar-agar
20,0 g
deszt. vz
800 ml
Sterilezs: 110C-on, 60 perc, pH=5,0
Czapek-Dox-agar (penszgombk
identifiklshoz)
NaNO3
3,0 g
K2HPO4
1,0 g
MgS4.7H2O
0,5 g
KCl
0,5 g
FeSO4
0,01 g
deszt. vz
1000 ml
szaharz
30,0 g
agar-agar
20,0 g
A karamellizci elkerlsre a cukrot csak a
vgs sterilezs eltt adjuk hozz.
Sterilezs: 120C, 20 perc, pH=6,8

Pagano-Levin-Trejo-agar
pepton
10,0 g
glkz
40,0 g
agar-agar
20,0 g
deszt. vz
1000 ml
Az egszet felfzzk, 110C-on autoklvozzuk
30 percig. Utna lehtjk 50C-ra, majd
hozzadjuk a kvetkez anyagokat:
yeast extract
1,0 g
neomycin
0,2 g
TTC
0,013 g
pH=7,2
Nigermagos-agar
dextrz
20,0 g
KH2PO4
1,0 g
MgSO4
0,5 g
Kreatinin
1,0 g
agar-agar
15,0 g
nigermag
50,0 g
deszt. vz
1000 ml
A portott nigermagot keverjk el a vz egy
rszben, a maradk vzben az egyb
komponenseket oldjuk fel, majd a kt rszt

Legfontosabb tptalajok
keverjk ssze.
Autoklvozs (110C, 30 perc) utn 50C-ra
htve adjuk hozz az albbi adalkokat:
Penicillin
20 000 NE

Streptomycin
40 000 NE
Chloramphenicol
0,1 g
Difenil (20 ml absz. alkoholban)1,0 g