MATERIAL Y EQUIPO + Tijeras de punta fina + Pinzas de punta fina * Cucharilla perforata + Gristalizadores| + Parla de calentamiento + Termémetto # Cajas de Pte * Goteros + Matraces Erlenmeyer de 125 ml * Vasos de preipitados de 250 + Pizetas ince + Navajas + Poraobjtos y cubreobjetos + Exereaseopios| MATERIAL BIOLOGICO * 10 Huevos de gallina fecundados. Estos se pueden conseguir en granjas especializadas| en produccidn de aves, REACTIVOS + Solucidn fijadora de Bouin (Picroformol), El cual contiene 75 ml de solucién saturada de Acido Pierico, ml de Formol comercial 5 ml de Acido aeetico glacial Suer fisiologien Balsamo de Canad Alcohol etilico absolute “leoholes al 30,50, 70, 75, 80,85, y 90% CCarmalumbre de P. Mayer -disolveren caliente 10 gramos de alumbre potisico en 200 mi de agua destlada y adicionar un sgramo de seido carminico. Enftiar la Solucin yfiltar;por limo anadir 0.2 saramos de éeido Saeco oT ml de formal *Aleohol aeidulado.~ se mezelan partes iguales de alcohol al 70% y HCl al 1%. * Xileno METODO | INCUBACION [La incubscién de los huevos fecundados debe hacerse en el laboratorio @ una temperatura Figura , Huevos en neubacion 67centre los 365 y 395 °C dentro de un medio con humedad y venila (Figura 4), Para lograr la Ihumedad inrodueir a 1a incubacora un reepiente con agua, Debido a que se van a utilizar huevos con un desurollotemprano no es indispensable la ventilacién. Colocar los hueves en Posicin horizontal y girarlos cada 24 horas siempre en el mismo sentido, esto con la finalidad de evtar que el embrion se pegue al cascaron y que las chalazas se enollen correctamente. 2. OBTENCION Para poder obtener los embriones, es necesario tener va preparado el siguiente material y sus respectivas reactivas 500 mide suerofisiologico a 37 C en un cristalizador Un cristalizador para recibir al embrion (yema), Una cuchara perforada, para pasar el emi del huevo al suero fisiolgieo “Tijeras de corte fino pars cortar alrededor del embricn y poderlo transfer. Pinzas CColocar ef huevo horizontalmente y con las pinzas golpear el huevo suavemente sobre la camara de aire hasta perforarlo (Fig 5). Inroduci las teas y empezar a cortar el cascaron hata formar una ventana en ta parte superior del eascaron, Ientiicar al embrin, este se fencuenta al centro del huevo y presenta un color rojo (el tamato del embridn es variable dependiendo del tiempo de incubaeiin). Ahora con mucho cuidado cortar Is. membrana vitelina (la que cube ala yema) con las tijeras, alrededor del embyién. Ahora con la cuchara sacar al embridn y trasfeniro a una caja de petri con suero fsiolgico con la finalidad de lavarlo y mantenerlo vivo el mayor tiempo posible. Realizar los avados necesarios hasta que ‘quede libre de vitelo el embrion. Observar al estereoscopio e identfiar las_distinias ‘estructura y Grganos del embrion. Mentifier las estructura y drganos y la edad del embrion Por el nimero de somitas (Figura 6) Figura 5. Rompimiento y proceso de obtencidn de embriones. 68Figura 6 Embriones de poll en diferentes estadios del desarrollo 3. FUACION DEL EMBRION El fijador que se utilizart seri el Bouin, que contiene formol, dcido perio y acético, De la ‘aja de per, dande se encuentra el emirion extaer el suero Fisioogieo, de tal manera que {quede solo el embridn, aboracubrr el embridn totalmente con el fijador (Bouin) utilizando un -otero tener cuidado de que elembridn quede suspendido en el fijador Dejar actua el ‘durante 12 horas [Lava los embriones con agua para quitar el exceso de fijador,inroduciéndolos en un vaso de ‘reciitados con agua y una gist esto can la intencién de que no se salgan lo embriones el ‘vaso de pecipitados, hasta que los embriones queden de coor crema, 4. TINCION DEL EMBRION Pasar los embriones a una caja de petri eon carmalumbye diluido 1 (V/V con agua destilads) ¥ dejar atuar al colorant este paso es crucial po lo que se deben revisarconstantemente 10s tembriones hasta que tengan un color rosa de manera uniforme (utilizar la camara translucida), El tiempo de tncion vara entre 30 minutos y una hora aproximadamente, segn el tamafo de los embrionesy la dilucin del colorante 5. DESHIDRATACION DE LOS EMBRIONES. Deshidratar ls embriones realizando tres eambios de alcohol al 50, 70 y 80 % de 10 minutos ‘ea uno de Tos cambios. Agregar alcohol aeidulado con la final de elimina el exces0 de colocante. Deshdratar nuevamente los embriones, para esto se realzaran los siguientes cambios 69Node Cambio | Solus Tiempo T alcohol al 70% | 10 minutos i alcohol al 75% | 10° 1 ‘alcohol al 80% | 10~ i ‘alcohol al 85% [10 1 alcohol al 90% | 10° 2 ‘alcohol absoluto | 10° z Sino 1 Ahora colocar al embrién sobre el portaobjetos y eon la ayuda del estereoscopi y el bisturt recor alrededor de la vena marginal procurando que quede parejo y en forma de oval, (6, MOTAJE DE LOS EMBRIONES Pasar fos embriones a xileno y sobre un portaobjetos limpio colocar una © dos gots de balsam, sobre las gotas y con ayuda de las pinzas montar el embrin cuidando que la vista ‘sea vental (la cabeza del embrion la derecha del cuerpo y para los embriones que no han rotao la cabeza, con el orazén hacia ariba Agregar nuevamente balsamo sobre el embridn de tal manera que quede cubiero ‘completamente, ahora colocar el cubreobjetos de manera que no queden burbujas de aire. Si es rocesario agregar mas balsamo alrededor del embyion. Pasar las preparacones a una estula com a finalidad de que sequen completamente (Figura 7) tee Figura 7. Montaje de embriones en diferentes etapas de desarrollo, 0